штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая
Классы МПК: | A01N63/00 Биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, плесневые грибы, ферменты, сбраживающие материалы или вещества, полученные или экстрагированные из микроорганизмов или животных материалов A01F25/00 Хранение продуктов полеводства и садоводства; подвешивание собранных фруктов C12S3/00 Обработка животных или растительных материалов или микроорганизмов |
Автор(ы): | Карло Лейферт (DE), Гарольд Артур Стортон Иптон (GB), Дэвид Чарльз Сайги (GB) |
Патентообладатель(и): | Министр сельского хозяйства, рыбной и пищевой промышленности объединенного королевства Великобритании и Северной Ирландии (GB) |
Приоритеты: |
подача заявки:
1993-03-24 публикация патента:
20.02.1999 |
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству средств защиты овощей и фруктов от возбудителей грибковых заболеваний после сбора урожая. Для этой цели получены штаммы бактерий Pseudomonas fluorescens NСIМВ 40490, NСIМВ 40495, NCIМВ 40497, Serratia liquefaciens NСIМВ 40492, Serratia plumuthica NCIМВ 40493. Кроме того, получены штаммы бактерий Bacillus pumilis NCIMB 40489 и Bacillus subtilis NCIМВ 40491, используемые не только для вышеуказанной цели, но и для производства антибиотика, ингибирующего возбудителя вышеуказанных заболеваний. На основе вышеуказанных штаммов получена водная суспензия микроорганизма, содержащая штаммы в концентрации 104-109 кое/мл, предпочтительно 105-108 кое/мл. Способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая предусматривает погружение овощей и/или фруктов в водную суспензию, содержащую один из вышеуказанных штаммов бактерий. На основе штаммов бактерий Bacillus 40489 и 40491 получен антибиотик, имеющий Rf около 0,39, или 0,56, или 0,61, проявляющий активность против Botrytis cinerea и Alternaria при рН 3,0 - 9,0. Антибиотик получают путем культивирования штамма бактерии на среде, содержащей капустные листья и воду в пропорции 5 - 100 г листьев на 1 л воды. Выделяют антибиотик из фильтрата культуральной жидкости с использованием силикагелевой колонки или пластины и элюента бутан-1-ол:уксусная кислота:вода в соотношении 3: 1: 1. Антибиотик и предложенные штаммы позволяют сохранить урожай фруктов и овощей в процессе хранения, предотвращая их гниение. 10 с. и 6 з. п.ф-лы, 13 табл., 9 ил.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17
Формула изобретения
1. Штамм бактерий Bacillus pumilis NCIMB 40489 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний. 2. Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIMB 40490 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая. 3. Штамм бактерий Bacillus pumilis NCIMB 40489 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний. 4. Штамм бактерий Serratia liguefaciens NCIMB 40492 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая. 5. Штамм бактерий Serratia plymuthica NCIMB 40493 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая. 6. Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIMB 40495 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая. 7. Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens NCIMB 40497 для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая. 8. Водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, отличающаяся тем, что она содержит штамм микроорганизма по любому из пп.1 - 7, в концентрации (кое/мл), достаточной для ингибирования Alternaria brassicicola и/или Botrytis cinerea на фруктах и/или овощах, обработанных этой суспензией. 9. Суспензия по п.8, отличающаяся тем, что она содержит штамм микроорганизма в концентрации 104 - 109 кое/мл. 10. Суспензия по п.9, отличающаяся тем, что она содержит штамм микроорганизма в концентрации 105 - 108 кое/мл. 11. Способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, предусматривающий погружение указанных продуктов в суспензию микроорганизмов или разбрызгивание ее на продукты, отличающийся тем, что используют суспензию по любому из пп.8 - 10. 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что обработанные продукты затем подвергают холодному хранению. 13. Антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, полученный культивированием штамма микроорганизма, отличающийся тем, что он имеет Rf около 0,39, или 0,56 или 0,61, проявляет активность против Botrytis cinerea или видов Alternaria при pH в диапазоне 3,0 - 9,0, выделен из фильтрата культуральной жидкости штамма микроорганизма по п.1 или 3, выращенного на среде, содержащей капустные листья и воду в пропорции 5 - 100 г листьев на 1 л воды, с использованием силикагелевой колонки или пластины и элюента бутан-1-ол: уксусная кислота : вода в соотношении 3 : 1 : 1. 14. Антибиотик по п.13, отличающийся тем, что среда содержит 10 - 50 г гомогенизированных капустных листьев на 1 л воды. 15. Антибиотик по п.13, отличающийся тем, что он имеет значение Rf около 0,39 или 0,56 при выделении из фильтрата культуральной жидкости штамма Bacillus pumilis NCIMB 40489. 16. Антибиотик по п.13, отличающийся тем, что он имеет значение Rf около 0,61 при выделении из фильтрата культуральной жидкости штамма Bacillus subtilis NCIMB 40491.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к новым бактериальным штаммам и их использованию в качестве средств или источника средств, противодействующих росту микроорганизмов, вызывающих гниль. Конкретно, настоящее изобретение представляет новые изоляты бактерий видов Pseudomonas fluorescens, Serratia liquefaciens, Serratia plimuthica, Bacillus subtilis, Bacillus pumilia, Bacillus polymyxa, которые особенно эффективны для подавления роста микроорганизмов, вызывающих заболевания плодов после сборки урожая, причиной которых являются грибы Botrytis cinerea и Alternaria brassicicola. Кроме того, представлены антибиотики, полученные из видов Bacillus. Потери после сбора урожая во время хранения сельхозпродуктов растительного происхождения вызываются, между прочим, потерей воды, увяданием (старением) листьев, проростом и гниением, последнее, в частности, вызывается грибами и бактериальными возбудителями. Такие потери после сбора урожая могут быть значительно снижены путем хранения при низких температурах (например 1 - 20oC) и высокой относительной влажности (например, 95%) (Robinson et al., 1975). При этих условиях хранения B. cinerea является преобладающим видом грибов, обнаруживаемым на сохраняемой капусте, и главной причиной потерь (Geeson, 1978, Brown et al., 1975); причем он является условно-патогенным возбудителем для широкого ряда листовых овощей, поражающим ослабленные, пораненные или состарившиеся листовые ткани, и также известно, что он поражает различные фрукты (смотрите патент США 5041384). Здоровые листовые ткани, однако, как описано, высокорезистентны к поражению Botrytis (New-hook, 1951). Исходная устойчивость подвергаемых воздействию наружных листьев также, вероятно, является причиной того, что обнаружение гнили капусты, вызванной Botrytis, обычно начинается через 2 - 3 месяца хранения на холоде и часто ограничивается наружными подсохшими, состарившимися листьями капусты (Wale 1980). Для предупреждения грибковой порчи обычной практикой во многих странах является опрыскивание капусты на поле системными фунгицидами и погружение собранных кочанов капусты в растворы фунгицидов перед хранением (Brown et al. , 1975). Так как все больше и больше раскрываются онкогенные свойства многих из наиболее часто используемых фунгицидов и из-за того, что устойчивость большинства фунгицидов повышается при хранении при низких температурах, использование фунгицидов приобретает возрастающее значение. К тому же было сообщено об устойчивости к фунгицидам (Spotts & Cervantes 1986), и подавление главного вызывающего порчу микроорганизма B. cinerea фунгицидами, такими как беномил, как было показано, приводит в результате к повышенному обсеменению (размножению) A. brassicicola, который вызывает более глубокую гниль кочанов капусты, чем B.cinerea (Wale & Epton). Борьба с грибковыми возбудителями после сбора урожая с помощью бактерий и дрожжей-антагонистов, таких как Bacillus subtilis, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas syringae, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae and Debaryomyces hansenii была описана для ряда сохраняемых овощей и фруктов, включая яблоки, абрикосы, вишни, цитрусовые, виноград, нектарины, персики, груши, перец, хурму, сливы, картофель и помидоры (смотрите Wilson & Wisniewski, 1989, по недавнему обзору). Патент США 4,764,271 (кл. A 01 N 63/00, 1988) описывает отдельный штамм Bacillus subtilis, который, как было обнаружено, может использоваться для ингибирования роста коричневой плесени на фруктах. Свободный от клеток фильтрат, полученный из культуральной ростовой среды, проявил антибиотическую активность. Аналогичный штамм Bacillus subtilis известен также из документа SU 1,706,504 (кл. A 01 N 63/00, 1992). Однако в большинстве исследований изучалось антагонистическое действие только при температурах около 20oC, а не при температурах между 1 и 10oC, которые используются при коммерческом хранении большинства фруктов и овощей. К тому же в очень немногих публикаций указывается, что были испытаны персистенция антагонистов на растительных поверхностях или сравниваемых микробных популяций на сохраняемых органах растений с антагонистической микрофлорой. Настоящее изобретение представляет новые бактериальные изоляты видов, которые обладают свойствами подавления роста видов грибов на продуктах после сбора урожая; этими видами являются виды Pseudomonas, Serratia и Bacillus. Наибольшее преимущество в том, что изоляты Pseudomonas и Serratia данного изобретения обладают свойством возможности подавления роста грибков при температурах сохранения на холоде, например, ниже 10oC, обычно от 0 до 4oC. Кроме того, изоляты Bacillus обладают свойством выделения антибиотически активной фракции, также представленной в изобретении, которую саму по себе можно выделить в чистом или полуочищенном виде и использовать для подавления роста таких видов грибов. Нужно осознать, что изоляты данного изобретения были выбраны из исходной популяции из многих тысяч подобных штаммов, которые неэффективны. Однако из представляемого доступа к помещенным на хранение штаммам, упомянутым выше, и данных и протоколов, относящихся к этому, представленных ниже, опытным специалистам будет понятно, что возможно будет выделить дополнительные родственные штаммы со сходными антагонистическими свойствами, и поэтому объем данного изобретения охватывает также родственные штаммы, насколько в таком случае может быть выяснено путем сравнивания с представленными штаммами и данными и протоколами, представленными здесь. Образцы новых бактериальных штаммов данного изобретения были помещены на хранение по Будапештскому договору о международном признании помещения на хранение микроорганизмов в целях патентных процедур в Национальную коллекцию промышленных и морских бактерий (UK National Collection of Industrial and Marine Bacteria) 23 St Machar Drive, Aberden, AB2, IRY, UK, под номерами поступлений, приведенными в конце описания. Настоящее изобретение представляет выделенные бактерии, имеющие идентифицирующие характеристики изолятов, выбираемых из группы, состоящей из NCIMB 40489, NCIMB 40490, NCIMB 40491, NCIMB 40492, NCIMB 40493, NCIMB 40494, NCIMB 40495 и NCIMB 40497. Такие изоляты обладают общими характеристиками подавления роста грибов видов A. brassicicola и/или B.cinerea на тканях капусты: на агаре: в водных смесях. Особенно предпочтительный аспект данного изобретения представляет бактериальный изолят, имеющий идентифицирующие характеристики штамма, выбираемого из группы, состоящей из NCIMB 40490, NCIMB 40492, NCIMB 40493, NCIMB 40495 и NCIMB 40497, причем указанный изолят способен подавлять рост A. brassicicola и/или B. cinerea на листьях капусты при температуре от 20oC или менее, более предпочтительно при 10oC или менее, наиболее предпочтительно при 4oC или менее. Более предпочтительно, чтобы изолят относился к видам, выбираемым из группы, состоящей из Pseudomonas fluorescens, Serratia plymuthica, Serratia liquefaciens. Другой предпочтительный аспект данного изобретения представляет бактериальный изолят, имеющий идентифицирующие характеристики штамма, выбираемого из группы, состоящей из NCIMB 40489 и NCIMB 40491, причем указанный штамм способен подавлять рост A. brassicicola и/или B.cinerea на листьях капусты при температурах около 20oC. Более предпочтительно, что изолят способен к продукции антибиотической фракции при культивировании в бульоне из гомогенизированных листьев капусты с концентрацией 50 г или более на литр воды, причем указанный антибиотик способен подавлять рост указанных A. brassicicola и/или B.cinerea на листьях капусты при температурах около 20oC. Дополнительный аспект этого изобретения представляет водные суспензии бактерий из одного или более бактериальных штаммов этого изобретения, причем предпочтительные суспензии содержат достаточное количество кое/мл для подавления роста грибов, имеющих отношение к вышеперечисленным фруктам и/или овощам, которые погружались в нее, и, кроме того, биологически чистые культуры таких бактерий при высоком числе кое/мл для приготовления суспензий для такого погружения. Данное изобретение тем самым дополнительно представляет способ предупреждения грибковых заболеваний после сбора урожая овощей и/или фруктов, включающий погружение указанных продуктов в суспензию бактерий, которые описаны выше. Предпочтительно суспензия будет содержать от 104 и до 109, более предпочтительно между 105 и 108 кое/мл. При использовании группы не-Bacillus предпочтительным выбором является хранение на холоде. Еще один дополнительный аспект этого изобретения представляет антибиотики, получаемые путем культивирования выделенных бактерий типа NCIMB 40489 и/или NCIMB 40491 в среде, содержащей гомогенизированные капустные листья и воду в соотношении 5 г до 100 г/литр. Кроме того, представлены композиции, отличающиеся тем, что они включают такие антибиотики в качестве активных ингредиентов. Теперь будут приведены примеры штаммов, их эффективность против роста грибов, способы отбора подобных таким изолятов и способы их использования при применении этого способа в производственном масштабе только для иллюстрации путем обращения к следующим чертежам и примерам. Фигура 1. Диаметр зоны подавления (мм) вокруг колоний бактерий на капустном агаре, содержащем различные концентрации тканей капусты, засеянном A.brassicicola и B.cinerea.![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-2t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-3t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-4t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-5t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-6t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-7t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-8t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-9t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-10t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-11t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-12t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-13t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-14t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-15t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-16t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-17t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-18t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-19t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-20t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-21t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-22t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-23t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-24t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-25t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-26t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/2126210-27t.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126210/9642.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
20 мл жидкой CA5 охлаждали до 40oC (споры Botrytis cinerea очень чувствительны к нагреванию) и засевали 0,2 мл суспензии грибков, содержащей 4
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
При изучении персистенции вновь засеянных антагонистов P.fluorescens и Serratia spp. были способны персистировать в большом количестве на поверхности капустных листьев при низких температурах (таблица 6). Пример 4. Основные характеристики Bacillus spp. 30% всех бактерий, проявляющих антагонизм против Botrytis cinerea, как было обнаружено, принадлежат в Bacillus spp. Идентифицировали 40 штаммов Bacillus и обнаружено, что они являлись B. subtilis (8 изолятов), B.pumilus (3 изолята) или B.polymyxa (3 изолята). Продукция антибиотика in vitro (полуколичественная оценка)
Изоляты Bacillus, выделенные с Brassica spp., не росли при 4oC и 10oC (за исключением штаммов Bacillus CL 47, 52, 64 и 67, которые давали очень слабый рост через 4 недели, на 10 и 6 неделю при 4oC. При 20oC большинство штаммов продуцировали большие зоны подавления на среде CA5 (таблица 7). Однако Bacillus не росли или не давали больших зон подавления при более низких концентрациях питательных веществ в среде (таблица 7). Пример 5. Продукция антибиотика в серийной культуре Bacillus spp. В качестве сред роста использовали капустный бульон (50 г (CB 5) или 100 г (CB10) гомогенизированных капустных листьев, 1 литр дистиллированной воды), питательной бульон (NB; Oxoid), питательный бульон + 0,005 г/л MgSO4(NB+Mg), питательный бульон + 1% глюкозы (NB + 1% глюкозы), синтетическую среду (DM: 2 г NH4Cl, 6 г Na2HPO4, 3 г KH2PO4, 3 г NaCl, 0,05 г MgSO4
![штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая и получения антибиотиков для ингибирования возбудителей вышеуказанных заболеваний (варианты), штамм бактерий для предотвращения грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая (варианты), водная суспензия микроорганизма для ингибирования возбудителей грибковых заболеваний фруктов и овощей после сбора урожая, способ предотвращения грибкового заболевания овощей и/или фруктов после сбора урожая, антибиотик, используемый для ингибирования возбудителя грибкового заболевания фруктов или овощей после сбора урожая, патент № 2126210](/images/patents/345/2126001/183.gif)
Антибиотик против Botrytis, продуцируемый CL 27a на капустном бульоне: Предполагаемый не-пептид (отрицательный TDM): активность при pH < 5,6 - 0,39
Антибиотик против Botrytis/Alternaria, продуцируемый CL 27b на капустном бульоне: Предлагаемый пептид (положительный TDM): активность при PH > 5,6 - 0,56
Антибиотик против Alternaria, продуцируемый CL 27c в питательном бульоне: Предположительно пептидной природы (положительный TDM): активность при pH > 5,6 - 0,61
Антибиотик против Botrytis, продуцируемый CL 45a в капустном бульоне. Предлагаемый не-пептид (отрицательный TDM): активность при pH < 5,6 - 0,39
TDM = 4,4"-тетраметилдиаминодифенилметановый реагент: положительный = синий/зеленый. Антибиотики CL 27 образуются в капустном бульоне (CB5), питательном бульоне и питательном бульоне с марганцем: антибиотики CL 45 - только на капустном бульоне (CB5). Спектр активности антибиотиков (испытание на пластинках, как описано выше). Когда пластинки для ТСХ, на которые наносились бесклеточные фильтры культуры со среды CB5, засеянной или CL 27 или CL 45, покрывали засеянной Botrytis cinerea средой, развивались большие зоны подавления роста (30-40 мм) на Rf, равном от 0,38 до 0,40. При излучении фильтратов из среды CB5, засеянной штаммом CL 27, можно было обнаружить дополнительную небольшую полоску (3 мм) без роста гриба в положении со значением Rf, равным 0,56 (не присутствующую, если испытывалась CB5, засеянная CL 45). Когда при исследовании фильтратов из NB и NB+Mn, засеянных CL 45 производили покрытие таким же образом, можно было обнаружить только небольшую полоску подавления со значением Rf, равным 0,567 (не было зон подавления, когда излучались среды NB и NB+Mn, засеянные CL 45). Когда покрытие выполнялось средой, засеянной Alternaria brassicicola, были обнаружены 2 зоны подавления (Rf 0,56 и 0,61) из посевов на среды роста NB, NB+Mn и CB5 CL 27. Таким образом видно, что CL 27 продуцирует, по крайней мере, три антибиотика, один, активный против B.cinerea (Rf 0,39), продуцируемый только на капустном экстракте и активный при pH, меньше 6; второй слабо активный против B.cinerea и активный против A. brassicicola (Rf 0,56), продуцируемый на всех испытуемых средах и активный при pH выше 5,6; и третий, активный только против A.brassicicola (Rf 0,61) тоже продуцируемый на всех испытуемых средах. Сходные значения для антибиотиков из CL 45 и CL 27 наводят на мысль, что они представляют собой одно и то же, но характер активности наводит на мысль о противоположном. Пример 9. Характеристики антагонистических бактериальных штаммов этого изобретения. Все бактериальные штаммы, выделенные с Brassica spp., демонстрирующие in vitro антагонизм против Botrytis cinerea, как было обнаружено, являются видами Pseudomonas fluorescens (группа I), Bacillus или Serratia. Флюоресцирующие псевдомонады и Enterobacteriaceae, как было обнаружено, являются основными обитателями капустных листьев, тогда как Bacillus spp. были обнаружены лишь в очень небольших количествах на листьях Brassica. Флюоресцирующие псевдомонады и Bacillus spp. были описаны ранее, как потенциальные средства биологической борьбы с заболеваниями фруктов и овощей после уборки урожая, тогда как подобная активность у Serratia plymuthica Serratia liquefaciens ранее не была показана (смотрите Wilson & Wisniewski, 1989 по недавнему обзору по биологической борьбе с грибковыми заболеваниями фруктов и овощей после уборки урожая). Pseudomonas fluorescens. Из всех испытанных бактериальных штаммов штаммы флюоресцирующих псевдомонад CL42, CL 66 и CL 82 продемонстрировали самую высокую активность in vivo на дисках из капустных листьев при 4oC, подавляя инфицирование Botrytis при всех испытанных размерах посевных доз гриба. Псевдомонады, такие, как P. сераcia, P. putida и P. syringae были описаны, как средства биологической борьбы с болезнями после сбора урожая для ряда сохраняемых фруктов и овощей, и описывается, что их способ действия состоит или в продукции антибиотика или в создании конкуренции за питательные вещества (Colyer and Mount 1984, James and Gutterson 1986, Gurusiddaiah et al. 1986, Janisiewicz 1987, Janisiewicz and Roitman 1988). Важно отметить, что P.syringae и P.cepacia могут быть патогенными для растений и что некоторые псевдомонады, включая P.Sceptical, были описаны, как условно-патогенные возбудители болезней у человека (Agrios 1988, Bergan 1981). Некоторые антагонистические псевдомонады, выделенные данными изобретениями, как было также обнаружено, являются патогенными для некоторых овощей, например, капусты. Поэтому антагонистические псевдомонады должны идентифицироваться до уровня вида, чтобы исключить использование возможных человеческих возбудителей болезней, и должны испытываться на воздействие на растения перед использованием в качестве средств борьбы с болезнями после уборки урожая. Так как выделенные антагонистические штаммы были способны персистировать на капустных листьях, они оцениваются как идеальные потенциальные кандидаты для биологической борьбы с болезнями во время хранения Brassica spp. Serratia spp. Serratia spp. , выделенные с листьев капусты хорошо росли и проявляли сильный антагонизм in vitro при низких температурах. Однако только штамм CL 42 S. plymuthica продемонстрировал высокий антагонизм in vivo против B.cinerea на дисках из капустных листьев. Все штаммы S.liquefaciens продемонстрировали от среднего до плохого противодействия болезням in vivo. Serratia spp. ранее не были идентифицированы в качестве антагонистов грибкам. Serratia spp. не были описаны как возбудители болезней растений, но S.marcescens была описана как условно-патогенный возбудитель, вызывающий инфекции у человека (Brenner, 1984). Поэтому такие микроорганизмы должны использоваться только, если уже было показано, что они непатогенны для человека. Enterobacteriaceae образуют основную часть естественной микрофлоры капустных листьев, и так как выделенные антагонистические штаммы способны персистировать на листьях капусты, они обладают возможностями служить в качестве средств биологической борьбы с болезнями, конкретно, например, во время хранения Brassica spp. Bacillus spp. Bacillus spp. считались непригодными в качестве потенциальных средств биологической борьбы с болезнями для хранения на холоде, так как они не росли или очень плохо росли при низких температурах. Об этом ранее не сообщалось, так как большинство работавших, описывающих использование видов Bacillus для биологической борьбы с грибковыми возбудителями болезней фруктов и овощей испытывали антагонизм in vitro и in vivo при температурах около 20oC (Pusey and Wilson, 1984, Singh and Deverall, 1984, Utkhede and Sholberg, 1986, Gueldner et al., 1988). Их плохой рост при низких температурах мог, однако, служить объяснением различных результатов, описанных в полевых и предварительных испытаниях с целью коммерческого применения Bacillus subtilis в качестве основы биологических средств борьбы с болезнями (Baker et al., 1985, Pusey et al., 1986 and 1988). Известно, что Bacillus spp. продуцируют пептидные антибиотики с антигрибковой активностью во время спорообразования (смотрите Katz and Demain, 1977 для просмотра) и пептидные антибиотики были идентифицированы как активные вещества при использовании Bacillus subtilis в качестве средства биологической борьбы с грибковыми заболеваниями после сбора урожая (McKeen et al., 1986, Gueldner et al., 1988). Продукция таких антибиотиков путем ферментации и их использование в качестве "биопестицидов" является предпочтительным использованием таких Bacillus, если невозможно выделить устойчивые к холоду антагонистические Bacillus spp. Однако антибиотики и микроорганизмы могли бы также использоваться для продления срока хранения, когда фрукты и овощи изымаются из хладохранилища. Слабая активность неочищенных экстрактов антибиотиков при определении на картофельно-декстрозном агаре (PDA) указывает на то, что обнаруженные антибиотики являются новыми, так как PDA, использовался большинством других авторов для отбора Bacillus spp., которые продуцируют противогрибковые антибиотики (Katz and Demain 1977, Pusey and Wilson, 1984, Singh and Devereal, 1984, McKeen et al., 1986, Utkhede and Sholberg, 1986, Wilson and Wisniewski, 1989). Подробные характеристики всех штаммов этого изобретения представлены в таблицах 11 и 12. Пример 10. Активность in vivo всех штаммов против B. cinerea на поверхности молодых листьев растений. CL 82, CL 80 и CL 27 испытывали на способность сдерживать рост B.cinerea на поверхности листьев in vivo при использовании испытания на молодых растениях в камерах с созданием высокой влажности. Только CL 27 продемонстрировал значительное сдерживание, сходное с результатом, достигаемым с помощью фунгицидов. Применение бесклеточных фильтратов культуры CL 27 в бульоне давало сходное сдерживание с тем, которое обеспечивалось клеточной суспензией, показывая таким образом эффект антибиоза. Этот результат показывает, что CL 27 и его производные могут использоваться в качестве средства биологической борьбы с болезнями, применяемого перед уборкой урожая. Для определения эффективности такого применения после уборки урожая выполняли исследования по персистенции. Микрорастения астильбы высаживали в компостные горшочки 3х3 см и их опрыскивали через недельные интервалы спорами грибков и антагонистами при влажности от 86 до 95%. В течение первых 6 недель все обработки давали сходный успех, но через 10 недель только фунгицид и обработка с использованием CL 27 или его бульона давали значительное сдерживание. CL 27 давал лучшее сдерживание, чем фунгицид при этих испытаниях. Пример 11: Действие штаммов Serratia и Pseudomonas на сохраняемые продукты. Выращивали датскую белую капусту (вар. Морган) и обрабатывали инсектицидом и гербицидами обычным образом, но не обрабатывали фунгицидами. После сбора кочаны погружали или в суспензию фунгицида (1 г/л Роврала и 2 г/л Ридомила) или в бактериальные суспензии 107 - 108 кое/мл. Примерно 14 кг капусты (10 - 12 кочанов) переносили в пластиковые подносы и запечатывали в пластик, чтобы исключить перекрестное обсеменение; на каждую обработку использовали 5 повторностей подносов. Испытания проводились в холодном хранилище при 4-6o и при 1-3oC и влажности, измеряемой через 7-дневные интервалы и, как обнаружено, находившейся на уровне 92-96% во всех случаях. В одном из испытаний после фунгицидов или бактерий наносили 106 спор/мл B.cinerea; на каждый поднос напыляли 5 мл суспензии спор. Состояние капусты оценивалось следующим образом: 0 = нет видимого роста; 1 = 1 - 10%, 2 = 11 - 25%, 3 = 26 - 50%, 4 = 51 - 75%, 5 = 76 - 90%, 6 = 91 - 99%, 7 = 100% поверхности покрыто ростом гриба и измерялось через 6-недельные интервалы. Когда наблюдалось 80% покрытия ростом грибка у необработанных контролей (когда происходит обрезка при коммерческом хранении), производилась оценка деструкции при потере веса при удалении инфицированных листьев. Кочаны снова хранили в течение 10-14 недель и затем обрезали после 42 недель хранения. Испытание при 1-3oC не дает возможности определения деструкции, поэтому проводилось экстраполирование инфицированной площади листьев на потери при обрезке. Использование CL 80 и CL 82 обеспечивало защиту, сходную с защитной фунгицидами во всех случаях, причем CL 82 давал лучшее подавление при обработке с добавлением B.cinerea, чем с A.brassicicola, в противоположность результатами in vitro. CL 82 персистировал на капусте в более высоком количестве, чем другие антагонисты, и таким образом является предпочтительным образцом изобретения. Из других штаммов CL 43 был наиболее эффективным в холодном хранилище.
Класс A01N63/00 Биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, плесневые грибы, ферменты, сбраживающие материалы или вещества, полученные или экстрагированные из микроорганизмов или животных материалов
Класс A01F25/00 Хранение продуктов полеводства и садоводства; подвешивание собранных фруктов
Класс C12S3/00 Обработка животных или растительных материалов или микроорганизмов