производное 1,3-дигидро-2h-имидазо/4,5-b/хинолин-2-она в качестве ингибитора фосфодиэстеразы, способ его получения, промежуточные для него, фармацевтическая композиция и способ ее получения

Формула изобретения

1. Производное 1,3-дигидро-2Н-имидазо/4,5-b/-хинолин-2-она общей формулы I



где R - водород, фенил, возможно замещенный 1 - 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, C₁ - C₆-алкила или C₁ - C₆-алкокси; пиридинил; группа

является радикалом формулы



где R¹ - C₁ - С₆-алкил, возможно замещенный СООН, СООC₁ - С₄-алкилом или CONR³R⁴, R³ - C₁ - С₄-алкил, R⁴ - C₃ - С₇-циклоалкил или R³ и R⁴, вместе взятые с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать пиперазиниловый цикл, причем пиперазиниловый цикл возможно замещен у атома азота C₁ - С₄-алкилом или (C₃ - С₇-циклоалкил)- C₁ - С₄-алкилом,

или его фармацевтически приемлемые соли, или его стереоизомерные формы.

2. Соединение по п.1, где R - водород, фенил, возможно замещенный 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, C₁ - С₆-алкила или C₁ - С₆-алкокси, пиридинил и группа является радикалом формулы (a) или (b).

3. Соединение по п.2, где R - водород, фенил, возможно замещенный 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из фтора, хлора, брома, метоксигруппы или метила, пиридинил и группа представляет радикал формулы (a) или (b), где R¹ - C₁ - С₄-алкил, возможно замещенный группой СООН, СООC₁ - С₄-алкилом или CONR³R⁴.

4. Соединение по п.3, где R - водород или фенил, возможно замещенный 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбирают из фтора, метоксигруппы или метила, и группа представляет радикал формулы (a) или (b), где R¹ - C₁ - С₄-алкил, возможно замещенный СООН, COOC₂H₅, CON(CH₃) (цикло C₆H₁₁) или



5. Соединение по п.1, выбранное из группы (Е)-N-циклогексил-2-///(2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазо/4,5-b/-хинолин-7-ил)фенил-метилен/амино/окси/-N-метилацетамида; 7-бензоил-1,3-дигидро-2Н-имидазо(4,5-b)хинолин-2-она; (Е)-1-(циклогексилметил)-4-////(2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазо/4,5-b)хинолин-7-ил/метилен/амино/окси/ацетил/пиперазина или (Е)-N-циклогексил-2-///(2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазо/4,5-b/-хинолин-7-ил/метилен/амино/окси-N-метилацетамида.

6. Соединение по любому из пп.1 - 5 в качестве ингибитора фосфодиэстеразы.

7. Способ получения соединения I по любому из пп.1 - 5, заключающийся в том, что проводят циклизацию промежуточного соединения формулы II



где R и группа имеют значения по п.1,

в растворителе и в присутствии кислоты.

8. Способ получения соединения I по любому из пп.1 - 5, заключающийся в том, что проводят циклизацию и ароматизацию промежуточного соединения формулы III



где R и определены в п.1,

в растворителе, который также выполняет функцию окислителя в процессе ароматизации, и в присутствии кислоты.

9. Соединение общей формулы II



или его соли, или его стереоизомерные формы,

где R и группа имеют значения по п.1.

10. Соединение общей формулы III



или его соли, или его стереоизомерные формы,

где R и группа имеют значения по п.1.

11. Фармацевтическая композиция, ингибирующая фосфодиэстеразу, включающая производное имидазо(4,5-b)хинолин-2-она и носитель, отличающаяся тем, что в качестве действующего средства она содержит соединение формулы I по п. 1 в эффективном количестве.

12. Способ получения фармацевтической композиции путем смешивания действующего средства с носителем, отличающийся тем, что с носителем смешивают в качестве действующего средства соединение по пп.1 - 5.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к новым производным 1,2-дигидро-2Н-имидазо/4,5- b/хинолин-2-она формулы (1)



их фармацевтически приемлемым солям и их стереоизомерным формам,

в которой R представляет водород, фенил, возможно замещенный 1-3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, C₁-C₆-алкоксигруппы; пиридинил;

представляет радикал формулы:



где R¹ представляет C₁-C₆-алкил, возможно замещенный группой СООН, СОО-С₁-С₄-алкил, CONR³R⁴, R³ C₁-С₄-алкил, R⁴ - C₃-C₇-циклоалкил, R³ и R⁴ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать пиперазиниловый цикл, причем пиперазиниловый цикл возможно замещен у атома азота С₁-С₄-алкилом, (С₃-С₇-циклоалкил) - С₁-С₄-алкилом.

В вышеприведенных определениях термин "галоген" включает фтор, бром и йод; C₁-С₄-алкил определяет нормальный или разветвленный, насыщенный углеводородный радикал с 1 - 4 атомами углерода, такой как, например: метил, этил, пропил, 1-метилэтил, бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1- диметилэтил; C₁-C₆-алкил включает в свое определение С₁-С₄-алкил, а также его высшие гомологи, такие как, например: пентил, гексил и т.п.; С₃-С₇-циклоалкил включает циклопропил и циклогептил; три (С₁-С₆-алкил)силил может быть, в частности, представлен триметилсилолом, триэтилсилилом, трет-бутил диметилсилилом и т.п.

Известны замещенные имидазо (4,5-b/хинолин-2-оны/ патент Бельгии BE N 904671, патент ФРГ DE 3717291, патент США 4701459, 4943573, в качестве ингибиторов фосфодиэстеразы и ингибиторов агрегации тромбоцитов, и поэтому они могут быть применимы в качестве инотропных кардиотонических средств и противотромбозных средств.

Известны также производные 3,5-дигидроимидазо /2,1-b/ хиназолин-2(1Н)-она в качестве положительных инотропиков и лизотропиков/Патент США 5043327/.

Соединения согласно изобретению обладают свойствами ингибировать фосфодиэстеразу.

Данные соединения общей формулы I могут существовать в виде солей. Вышеупомянутые фармацевтически приемлемые соли включают терапевтически активные неядовитые соли, которые соединения формулы (I) могут образовывать. Подобные соли, как правило, могут быть получены обработкой соединения формулы (I) в виде основания соответствующей кислотой, такой как неорганическая кислота, например: гидрогалоидная кислота, например: хлористоводородная, бромистоводородная и аналогичные кислоты, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т. п. , или органическая кислота, такая как, например: уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, 2-гидроксипропановая, 2-оксопропановая, этандикарбоновая кислота, пропандидикарбоновая кислота, бутандикарбоновая кислота (Z)-2-бутандикарбоyовая кислота, (Е)-2-бутан-дикарбоновая кислота, 2-гидроксибутандикарбоновая кислота, 2,3-дигидроксибутандикарбоновая кислота, 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоновая, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, 4-метилбензолсульфоновая, циклогексансульфаминовая, 2-гидроксибензойная, 4-амино-2-гидроксибензойная и аналогичные кислоты. И напротив, соль обработкой щелочью может быть превращена в свободное основание.

Соединения формулы (I), содержащие кислотные водороды, обработкой соответствующим органическим или неорганическим основанием могут быть также превращены в терапевтически активные неядовитые соли металлов или аминов. Соответствующие основные соли включают, например; аммониевые соли, соли щелочных и щелочноземельных металлов, напр. , соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли органических оснований, например, бензатином, N-метил-D-глюкамином, гидрабамином и соли с аминокислотами, такие как, например, соли аргинина, лизина и т.п.

Определение соли включает кроме того гидраты и сольваты, которые соединения формулы (I) способны образовывать. Примеры подобных форм включают, например, гидраты, алкоголяты и т.п.

Соединения настоящего изобретения имеют в своей структуре асимметрические атомы углерода. Каждый из таких хиральных центров может быть указан стереохимическим обозначением R и S. Соединения формулы (I), в которой группа _/C=X представляет радикал формулы (b), могут существовать в виде смеси E- и Z - изомеров или в виде чистого E-изомера, или чистого Z - изомера.

Стереохимические чистые изомерные формы соединений формулы (I) могут быть получены использованием хорошо известных методик. Диастереомеры могут быть разделены физическими методами, например: селективной кристаллизацией и методами хроматографии, например, противоточным распределением, жидкостной хроматографией и т. п. , а энантиомеры могут быть разделены использованием известных методов разделения, к примеру, селективной кристаллизацией их диастереомерных солей с хиральными кислотами. Или же энантиомеры могут быть разделены жидкостной хроматографией с применением хиральной неподвижной фазы. Чистые стереоизомерные формы могут быть также получены на основе чистых стереоизомерных форм соответствующих исходных продуктов при условии стереоспецичного протекания реакций. Если хотят получить конкретный стереоизомер, то такое соединение рекомендуют получать стероспецифичными методами синтеза. В подобных методах могут быть с успехом использованы энантимерно чистые исходные продукты. Очевидно, что стереоизомерные формы соединений формулы (I) также являются предметом изобретения.

К представляющим интерес соединениям относятся те соединения формулы (I), в которой R представляет водород, фенил, возможно замещенный 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, C₁-C₆ - алкоксигруппы или C₁-C₆ - алкила, пиридинил и группа _/C=X представляет радикал формулы (a) или (b).

Еще больший интерес представляют те соединения, в которых R представляет водород, фенил, возможно замещенный 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбирают из фтора, хлора, брома, метоксигруппы, циклопентилоксигруппы или метила, или пиридинил, и группа _/C=X представляет радикал формулы (а) или (b), где R¹ представляет С₁-С₄ - алкил, возможно замещенный группой COOH, COO-C₁-С₄ алкил или CONR³R⁴.

Особенно интересны те соединения, в которых R представляет водород или фенил, возможно замещенный 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбирают из фтора, метоксигруппы или метила, и группа _/C=X представлена радикалом формулы (а) или (b), где R¹ представляет С₁-С₄ - алкил, возможно замещенный группой COOH, COOC₂H₅, COH (CH₃) - (цикло. С₆H₁₁) или

Наибольший интерес представляют следующие соединения:

(Е)-N-циклогексил-2-/// (2,3-дигидро-2-оксj имидазо/4,5-b/ - хинолин-7-ил/фенилметилен/амино/окси/ метилацетамид; 7-бензоил 1,3-дигидро имидазо/4,5-b/хинолин-2-он;

(Е)-1-(циклогексилметил)-4-////(2,3-дигидро-2-оксо имидазо/4,5-b хинолин-7-ил)метилен/амино/окси/ацетил/пиперазин и (Е)-N-пиклогексил-2-///(2,3-дигидро-2-оксо имидазо/4,5-b/-хинолин-7-ил)метилен/амино/окси/-N-метилацетамид, их фармацевтически приемлемые соли и их стереоизомерные формы.

С целью упрощения написания формул соединений изобретения и некоторых промежуточных соединений при изложении препаративных методов, следующих ниже, фрагмент 1,3-дигидро-2Н-имидазо /4,5-b/хинолин 2-она далее обозначается символом D



Соединения формулы (I), как правило, могут быть получены циклизацией промежуточных соединений формулы (II):



в приемлемом растворителе. таком как, например, диметилсульфоксид, N, N - диметилацетамид, тетрагидротиофен - 1,1 - диоксид, дифениловый эфир и т.п. , в присутствии кислоты, такой как, например: уксусная кислота, трифторуксусная кислота или сульфоновая кислота, например, метансульфоновая кислота, трифторметансульфоновая кислота, 4-метилбензолсульфоксилота или 4-метилбензолсульфонат пиридиния и т.п. В отдельных случаях может оказаться удобным применять в качестве растворителя избыток кислоты. Кроме того, для повышения скорости реакция циклизация может быть с успехом проведена в температурном интервале 130-160^oC, предпочтительно при 140-150^oC.

Соединения формулы (I) могут быть также получены циклизацией промежуточных соединений формулы (III):



использованием методики, приведенной выше для циклизации промежуточных соединений формулы (II).

Однако превращение промежуточного соединения формулы (III) в соединение формулы (I) включает процесс ароматизации, в котором растворитель может играть роль окислителя. Для наиболее полного протекания ароматизации в реакционную смесь может быть добавлен йод в качестве окислителя, и добавление йода может быть осуществлено в ходе либо, что более предпочтительно, по окончании реакции циклизации. В некоторых случаях в реакции промежуточного соединения формулы (III) с кислотой может быть образовано насыщенное промежуточное соединение следующей формулы:



Такое насыщенное промежуточное соединение может быть известными способами окислено в соединение формулы (I).

Циклизация промежуточного соединения формулы (III) в соединении формулы (I) обладает важным преимуществом по сравнению с ранее указанной методикой циклизации. Дело в том, что в циклизации принимают участие только (Е) - изомеры соединений формулы (II), и поскольку для соединений формулы (III) такие изомеры не характерны, соединение формулы (1) может быть получено с гораздо большим выходом.

Примеры приемлемых для вышеприведенной реакции растворителей включают галогенированные углеводороды, например: дихлорметан, трихлорметан и т.п., ароматические углеводороды, например, бензол, метилбензол и т.п., простые эфиры, например: 1,1" - оксибисэтан, тетрагидрофкран и т.п., диполярные апротонные растворители, например, N, N - диметилформамид, N, 1 - диметилацетамид, ацетонитрил и т.п.

Соединения формул (1-b)



где R¹ представляет C₁-C₆-алкил, замещенный COOH, COO-C₁-С₄- алкилом, CONR³R⁴,

могут быть известными способами превращены друг в друга использованием, например: этерификации, амидирования, переэтерификации, переамидирования, гидролиза сложного эфира и аналогичных методов.

К примеру, соединения, в которых R¹ представляет C₁-C₆ - алкил, замещенный COOH, могут быть превращены в сложный эфир, в котором R¹ представляет С₁-C₆ - алкил, замещенный COO-C₁-С₄ -алкилом, или могут быть превращены в амид, в котором R¹ представляет C₁-C₆ - алкил, замещенный CONR³R⁴, обработкой карбоновой кислоты алканолом формулы С₁-С₄ - алкил - ОН или амином формулы HNR³R⁴ в присутствии соответствующего реагента, способствующего образованию сложного эфира и/или амида. Типичные примеры подобных реагентов включают: дициклогексилкарбодиимид, 2-хлор-1-метилпиридинийодид, пятиокись фосфора, 1,1"-карбонилбис /1H-имидазол/, 1,1"- сульфонилбис-/1H-имидазол/ и аналогичные реагенты. Или же указанные карбоновые кислоты могут быть превращены в их соответствующие реакционноспособные функциональные производные, такие как, например: ацилгалогениды, симметричные или смешанные ангидриды, эфиры, амиды, ацилазиды, циклические ангидриды, лактоны, лактамы и аналогичные производные перед реакцией с алканолом С₁-С₄ - алкил-OH, или амином NHR³R⁴. Подобные реакционноспособные функциональные производные могут быть синтезированы известными способами, например, реакцией карбоновой кислоты с галогенирующим средством, таким как, например: тионилхлорид, треххлористый фосфор, полифосфорная кислота, фосфорилхлорид, оксалилхлорид и т.п. или реакцией карбоновой кислоты с ациллогенидом, таким как ацетилхлорид и т.п. Подобные реакционноспособные производные карбоновых кислот могут быть образованы in situ или при желании могут быть выделены и подвергнуты дополнительной очистке перед их реакцией с алканолом С₁-С₄-алкил-OH, или амином HNR³R⁴.

Указанные реакции этерификации и амидирования обычно провоlят перемешиванием реагентов, возможно в инертном растворителе, таком как, например: галогенированные углеводороды, например: дихлорметан; трихлорметан и т.п., ароматические углеводороды, например: бензол, метилбензол и т.п., простые эфиры, например: 1,1"-оксибисэтан, тетрагидрофуран и т.п., диполярные апротонные растворители, например: N, N - диметилформамид, N, N -диметилацетамид, пиридин и т.п. В некоторых случаях может оказаться удобным применение избытка одного из реагентов в качестве растворителя. Вода, кислота, спирт или амин, которые могут образоваться в ходе реакции, удаляют из реакционной смеси известными способами, такими как, например: азеотропной перегонкой, комплексообразованием, образованием соли и аналогичными методами. В некоторых случаях особенно удобным может оказаться добавление приемлемого основания, такого как, например: амин, например: N, N - диэтилэтанамин, 4-этилморфолин, пиридин или N, N - диметил-4-пиридинамин. Кроме того, для повышения скорости реакции подобная реакция ацилирования может быть с успехом проведена при несколько повышенной температуре, в частности, при температуре кипения реакционной смеси.

Переэтерификация может быть осуществлена реакцией соединения, в котором R¹ представляет C₁-C₆ - алкил, замещенный COO-C₁-С алкилом, с иным алканолом формулы С₁-С₄ - алкил.

Равновесие реакции переэтерификации может быть сдвинуто известными способами, например, использованием избытка указанного спирты или отгонкой образующегося спирта. Аналогичным путем использованием амина HNR³R⁴ может быть осуществлено и переаминирование.

Соединения, в которых R¹ представляет C₁-C₆ - алкил, замещенный COO-C₁-С₄ - алкилом, могут быть гидролизованы в соответствующие соединения, в которых R¹- C₁-C₆ - алкил, замещенный группой COOH, гидролиз обычно проводят перемешиванием при нагревании сложного эфира в водной и/или спиртовой среде, например: воде, метаноле, этаноле и т.п. или в их смеси в присутствии основания, такого как, например: гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат калия и т. п. В отдельных случаях, например, в случае 1,1-диметилэтилового эфира гидролиз может быть также проведен перемешиванием и возможно нагреванием эфира в кислотной водной и/или спиртовой среде, охарактеризованной выше.

Соединения формулы (1-b), в которой R¹ отличен от водорода, т.е. представлен символом R^1-a, а само соединение представлено формулой (1-b-1), могут быть также получены из соединений формулы (1-b), в которой R¹ - водород, т. е. из соединений формулы (1-b-2) 0-алкилированием или 0-силилированием использованием соответствующего алкилирующего или силилирующего агента формулы R^1-a-W¹.

В таком алкилирующем или силилирующем агенте W¹ представляет отходящую группу, такую как, например: галоген, например: хлор, бром или сульфонилоксигруппу, например: 4-метилбензолсульфонилокси-, бензолсульфонилокси-, 2-нафталинсульфонилокси-, метансульфонилокси-, трифторметансульфонилоксигруппу и аналогичные отходящие группы. Подобную реакцию O-алкилирования или O-силилирования обычно проводят перемешиванием реагентов с инертном в условиях реакции растворителя в присутствии основания. Приемлемые растворители включают: галогенированные углеводороды, такие как, например: дихлорметан, трихлорметан и т.п., простые эфиры, например: 1,1"- оксибисэтан, тетрагидрофуран и т.п., диполярные апротонные растворители, например: N, N- диметилформамид, N, N - диметилацетамид, пиридин, ацетонитрил и т.п. К приемлемым основаниям относятся амины, такие как, например: N, N - диэтилэтанамин, 4-метилморфолин, имидазол, пиридин, тетраметилгуанидин и т.п. или гидрид натрия и т.п.

Кроме того, соединения формулы (1-b-2), которые могут существовать в виде Е- или Z- изомера, или в виде их смеси, могут быть изомеризованы установлением равновесия в кислой среде.

Соединения формулы (1-b-1), в которых R^1-a представляет три(С₁-С₆-алкил)силил, могут быть десилилированы в оксимы формулы (1-b-2) обработкой фторид-солью, такой как, например: фторид калия, тетрабутиламмонийфторид или реакцией с хлористоводородной кислотой в растворителе, таком как простой эфир, например: 1,1"- оксибисэтане тетрагидрофуране или их водной смеси. Что касается соединений формулы (1-b-1), в которой R^1-a представляет три (C₁-С₆-алкил)силил, то такие соединения могут быть легко разделены на Е- и Z- стереоизомеры известными способами, например: селективной кристаллизацией и хроматографией, после чего десилилированы вышеприведенным способом. Такая последовательность обеспечивает эффективный метод получения тех стереоизомеров формулы (1-b), которые не могут быть получены вышеупомянутым способом изомеризации.

Или же соединения формулы (1-b-1) могут быть получены из промежуточных соединений формулы (XI), в которой W² представляет подходящую реакционноспособную отходящую группу, такую как, например: галоген, например, хлор или ацетат, реакцией с реагентом формулы (XII )



Большинство ключевых промежуточных соединений на приведенных схемах реакции являются новыми соединения, специально созданными для превращения в соединения настоящего изобретения.

Промежуточные соединения формулы (II) могут быть получены из соответствующих нитропроизводных формулы (XIII) использованием известных методик восстановления.

К примеру, нитропроизводное формулы (XIII) может быть восстановлено каталитическим гидрированием в приемлемом растворителе, таком как, например: спирт, например: метанол, этанол, простой эфир, например: тетрагидрофуран или 2-метоксиэтанол, сложный эфир, например, этилацетат, карбоновая кислота, например, уксусная кислота и аналогичные растворители, в присутствии водорода и соответствующего катализатора, например, палладия на активированном угле, платины на активированном угле, никеля Ренея и т.п., а также соответствующего каталитического яда, например, тиофена, возможно при повышенных температурах и/или давлениях. Или же нитропроизводное формулы (XIII) может быть восстановлено восстановителем, таким как, например: сульфид натрия, гидросульфид натрия, гидросульфат натрия, треххлористый титан, комплекс триалкиламмонийформат - палладий на активированном угле, железо-аммонийхлоридом и т.п.

Промежуточные соединения формулы (III) могут быть получены из промежуточных соединений формулы (XIII) каталитическим восстановлением вышеописанным способом, но без применения каталитического яда. Очевидно, что промежуточные соединения формулы (III) могут быть также получены дополнительным восстановлением промежуточных соединений формулы (II), например, каталитическим гидрированием вышеприведенным способом.

Промежуточное нитропроизводное формулы (XIII) может быть получено реакцией промежуточного соединения формулы (XIV) с илидом фосфора формулы (XV) (реакция Виттига) или с илидом формулы (XIV), полученным из фосфоната (реакция Хорнера-Эммонса), где R⁷ представляет C₁-C₆ - алкил.

Промежуточные соединения формулы (XIII) могут быть также получены конденсацией соединения формулы (XIV) с гидантоином формулы (XVII) использованием известных методик, например, обработкой реагентов ацетатом натрия в уксусном ангидриде или обработкой основанием, таким как, например: алкоксид щелочного металла, например: метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.п. в соответствующем растворителе, таком как спирт, например: метаноле, этаноле, трет-бутаноле и т.п.

Такую реакцию конденсации удобно проводить перемешиванием и осторожным нагреванием реакционной смеси.

Промежуточные соединения формулы (XIV), в которой группа _/C=X представлена радикалом формулы (а), т.е. промежуточные соединения формулы (XIV-а) могут быть получены из промежуточного соединения формулы (XVIII), в которой оба R⁸ радикала представляют алкильную группу, например: метил, этил и т.п. или оба R⁸ совместно образуют алкандиильный радикал, например: 1,2-этандиил, 1,3-пропандиил, 2,2- диметил-1,3-пропандиил и т. п. гидролизом в кислой водной среде.

Промежуточные соединения формулы (XVIII) могут быть получены из цианида формулы (XIX) использованием известных методик окисления, например, обработкой соединения формулы (XIX) воздухом в щелочной среде.

Цианиды формулы (XIX) могут быть легко получены реакцией ароматического нуклеофильного замещения цианидом формулы (XX) нитробензола формулы (XXI).

В формуле (XXI) W³ представляет реакционноспособную отходящую группу, такую как, например: галоген, например: хлор или фтор, нитрогруппа, 4-метилбензолсульфонилоксигруппа, фенилоксигруппа, алкилоксигруппа и аналогичные группы, хорошо проявляющие себя в качестве отходящих групп в известных реакциях ароматического нуклеофильного замещения. Подобные реакции ароматического нуклеофильного замещения удобно проводить перемешиванием реагентов в присутствии основания в инертном в условиях реакции растворителе, таком как, например, диполярный апротонный растворитель, например: N, N - диметилформамид, N, N - диметилацетамид, гексаметилфосфоротриамид, пиридин, 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинон, 1,3-диметилимида- золидинон, 1,1,3,3-тетраметилмочевина, 1-метил-2-пирролидинон, нитробензол и аналогичные растворители или их смеси. Примеры приемлемых оснований включают: гидрид натрия, амид натрия, натриевую соль сульфинилбис-(метана), диизопропиламид лития и аналогичные основания. Благоприятное действие может оказать добавление в реакционную смесь краун эфира, например, 1,4,7,10,13,16 - гексаоксациклооктадекана и т.п. или комплексообразующего агента, такого как, например, трис/2- (2-метоксиэтокси)/этанамин и т.п. Несколько повышенная температура может повысить скорость реакции. Или же указанная реакция ароматического нуклеофильного замещения может быть проведена применением известных условий реакции фазового переноса катализатора. Такие условия включают перемешивание реагентов с соответствующим основанием в присутствии приемлемого катализатора переноса фаз, такого как, например: триалкилфенилметиламмоний, тетраалкиламмоний, тетраалкилфосфоний, тетраарилфосфонийгалогенид, -гидроксид, -гидросульфат и аналогичные катализаторы.

Альдегиды формулы (XIV-а) могут быть также получены гидролизом в водной среде - аминоцианида формулы (XXII).

В формуле (XXII) и далее группа -NR⁹R⁹ представляет диалкиламино-группу или гетероциклический радикал, такой как, например, морфолино-, пиперидиногруппа и аналогичные группы.

Промежуточные соединения формулы (XXII) в свою очередь могут быть получены реакцией ароматического нуклеофильного замещения в нитробензоле формулы (XXI) вышеописанным способом получения промежуточных соединений формулы (XIX).

Реагент формулы (XXIII) может быть легко получен из соответствующего альдегида его реакцией с цианидом натрия, цианидом калия и аналогичными цианидами в присутствии амина HNR⁹R⁹ и гидросульфита натрия. Приемлемые растворители включают, например: воду, алканолы, например: метанол, этанол и т.п. и их смеси.

Или же промежуточные соединения формулы (XIV-а) могут быть получены окислением соответствующих спиртов формулы (XXIV) использованием известных методик окисления.

Подобную реакцию окисления удобно проводить перемешиванием реагента в инертном растворителе, например: диметилсульфоксиде, дихлорметане и т.п. или их смеси в присутствии окислителя, такого как, например: оксид магния (IV), дихромата пиридиния и т. п. Окисление может быть также осуществлено обработкой спирта при низких температурах, предпочтительно при -60^oC реакционноспособным комплексом, приготовленным из диметилсульфоксида и такого реагента, как например: дициклогексилкарбодиимид, хлорсульфонилизоцианат, оксалилхлорид, пероксид молибдена, 4-метилбензолсульфонилхлорид, ангидрид метансульфоновой кислоты. В другом варианте альдегид получают добавлением к реакционной смеси приемлемого основания, такого как, например: N, N - диэтилэтанамина, пиридина, гидрокарбоната натрия.

Промежуточные соединения формулы (XXIV), в свою очередь, могут быть получены окислением промежуточных соединений формулы (XXV).

Подобную реакцию окисления удобно проводить перемешиванием реагентов в воде в присутствии окислителя, такого как, например, перекись водорода и основания, такого как, например, гидроксид калия и т.п.

Промежуточные соединения формулы (XXV), в свою очередь, могут быть синтезированы добавлением промежуточного соединения формулы (XX) к 2-гидроксинитробензолу.

Указанную реакцию присоединения удобно провозить перемешиванием реагентов в инертном в условиях реакции растворителе в присутствии приемлемого основания. Приемлемые растворители включают, например: диполярные апротонные растворители, например: N, N - диметил формамид, N, N-диметилацетамид, диметилсульфоксид, пиридин и т.п. или спирты, например: метанол и т.п. Примеры соответствующих оснований включают: гидроксид натрия, гидроксид калия, гидрид натрия, амид натрия, натриевую соль сульфинилбис(метана) и аналогичные основания. Или же подобная реакция присоединения может быть проведена применением известных условий каталитической реакции переноса фаза. Такие условия включают перемешивание реагентов в присутствии основания и приемлемого катализатора переноса фаз, такого как, например: галогенид, гидроксид, гидросульфат триалкилфенилметиламмония, тетраалкиламмония, тетраалкилфосфония и аналогичные катализаторы.

Промежуточные соединения формулы (XIV), в которой группа представлена радикалом формулы (b), т.е. промежуточные соединения формулы (XIV-b), могут быть получены окислением соответствующих промежуточных спиртов формулы (XXVI-b) по вышеприведенным методикам получения промежуточных соединений формулы (XIV-а) из соответствующего спирта формулы (XXIV).

Получение промежуточных соединений формулы (XXVI-b), в которой R - водород, раскрыто в Европейском патенте EP-A-0406958 с датой публикации 9 января 1991 г.

Промежуточные бензиловые спирты формул (XXVI-b) могут быть получены из защищенных спиртов формулы (XXV-b) использованием известных методик удаления защитных групп (деблокирование).

В формуле (XXVII-b) R представляет приемлемую защитную группу, такую как, например: тетрагидропиранил, 2-метоксиэтоксиметил 2-метоксипропил, 2-ацетоксипропил, 1-этоксиэтил и т. п., триалкилсилильную группу, например: триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил и аналогичные группы. Указанная реакция удаления защитной группы может быть легко осуществлена известными способами гидролиза ацеталей и силиловых эфиров, например, кислотным гидролизом в водной среде.

Промежуточные соединения формул (XXV-b), в которых группа представлена радикалом формулы (b) , могут быть легко получены из промежуточных соединений формулы (XXV-а), в которой X - кислород, использованием методик, приведенных выше для превращения соединений формулы (1-а) в соединения формул (1-b)



Защищенные промежуточные соединения формулы (XXV-а) могут быть получены из алканолов формулы (XXIV) использованием известных методик защиты гидроксигруппы. Обычно такая реакция защиты может включать обработку виниловым эфиром, например, дигидропираном в инертном растворителе и в присутствии кислотного катализатора, или состоять в O-алкилировании или O-силилировании соответствующим алкилирующим агентом, таким как, например, триалкилсилилгалогенид, например: триметилсилилхлорид, трет-бутилдиметилсилилхлорид, а также могут быть использованы аналогичные реакции защиты.

Промежуточные соединения формулы (XXVI-b-1), в которой R- пиридинил и X - группа NOR¹, где R¹ отличен от водорода, т.е. радикал представлен символом R^1-a, могут быть получены из промежуточных соединений формулы (XXVI-6), в которой R - пиридинил и X - группа NOH, т.е. из промежуточных соединений формулы (XXVI-b-2) их O-алкилированием или O-силилированием по методике, приведенной выше для получения соединений формулы (1-b-1).

Промежуточные соединения формулы (XXVI-b-2) могут быть получены восстановлением соответствующих альдегидов формулы (XIV-b), в которой R- пиридинил и X - группа NOH, т.е. промежуточных соединений формулы (XIV-b-2) использованием известных методик восстановления.

Указанную реакцию восстановления удобно проводить перемешиванием реагента или, что предпочтительнее, его соли в алканоле, например, метаноле и т. п. в присутствии восстановителя, такого как, например, боргидрид натрия и т. п. Для образования соли реагента в реакционную смесь добавляют основание, такое как, например, гидроксид натрия и т.п.

Промежуточные соединения формулы (ХIV-b-2), в свою очередь, могут быть получены гидролизом промежуточных соединений формулы (XXVIII) в кислой водной среде.

Промежуточные соединения формулы (XXVIII) могут быть легко получены из промежуточных соединений формулы (XXIX), в которой X - кислород и R - пиридинил, использованием методик, приведенных выше, для превращения соединений формулы (1-а) в соединения формулы (1-b).

Защищенные промежуточные соединения формулы (XXIX) могут быть селективно приготовлены из альдегидов формулы (XIV-а), в которой R- пиридинил, т.е. из промежуточных соединений формулы (ХIV-а-1) по известным методикам.

Обычно подобные реакции защиты состоят в обработке спиртом, например: метанолом, этанолом, 1,2-этандиолом и т.п. в присутствии кислотного катализатора, например, 4-метилбензолсульфокислоты.

Или же промежуточные соединения формулы (ХIV-6-1) могут быть получены непосредственным O-алкилированием промежуточных соединений формулы (XXVIII) использованием методик, приведенных выше для получения соединений формулы (1-b-1), с последующим гидролизом ацетальной группы в альдегид в водной кислой среде.

Промежуточные соединения формулы (IV) могут быть получены восстановлением известными методами промежуточных соединений формулы (XXXI).

Примеры приемлемого восстановителя для вышеприведенной реакции включают хлорид олова (II) в присутствии кислоты, например хлористоводородной кислоты, или водород в присутствии катализатора гидрирования.

Промежуточные соединения формулы (XXXI) могут быть синтезированы реакцией промежуточного соединения формулы (XXXII) с нитроацетонитрилом формулы (XXXIII) в инертном в условиях реакции растворителе, таком как спирт, например: метанол, этанол и т.п.

Или же промежуточные соединения формулы (XXXI) могут быть приготовлены реакцией промежуточных соединений формулы (XXXIV) с NH₃ в инертном в условиях реакции растворителе, таком как спирт, например: этанол, 1-бутанол и т. п. , предпочтительно при повышенной температуре, например при температуре, кипения или реакцией промежуточных соединений формулы (XXXIV) с ацетатом аммония в уксусной кислоте.

Еще один альтернативный способ получения промежуточных соединений формулы (XXXI) можно иллюстрировать следующей схемой реакции (см. в конце описания).

Промежуточные соединения формулы (XXXII) могут быть получены восстановлением известными способами соответствующих нитропроизводных формулы (XIV).

Примеры приемлемых для указанной реакции восстановителей включают: металл, например: железо или цинк в присутствии кислоты, например хлористоводородной кислоты, или водород в присутствии катализатора гидрирования.

Промежуточные соединения формулы (XXXIV) могут быть синтезированы реакцией промежуточных соединений формулы (XXXII) с 1,1-бис(метилтио)-2-нитроэтеном формулы (XXXV) в присутствии кислоты, например, хлористоводородной кислоты, ыетансульфоновой кислоты и т.п.

Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и их стереоизомерные формы являются эффективными ингибиторами как фосфодиэстераз (ФДЭ) типа III (цГМФ - ингибируемый тип), так и типа IV (цАМФ- специфичный тип). Используемое здесь и далее обозначение ФДЭ III и ФДЭ IV соответствует классификации, предложенной J. A. Веаvо и D.Н. Reifsn уоеg, TIPS Reviews, апрель 1990, стр. 150-155.

Ингибирование изоферментов фосфодиэстераз типа III и IV приводит к повышению содержания цАМФ в конкретных клетках, например: сердечной мышце, определенных лимфоцитах, например: базофилах и зозинфилах, а также мастоцитах. цАМФ является ключевым вторичным посредником, концентрация которого влияет на конкретную клеточную активность путем активирования ферментов, например, киназ. Ряд аллергических и атопических заболеваний, как полагают, связан с более высокой, чем в нормальном состоянии, концентрацией ФДЭ, в результате чего снижается содержание цАМФ и создается сверхчувствительность пораженных клеток к возбуждающим стимулам. (Примеры подобной сверхчувствительности включают избыточное выделение базофилами и мастоцитами гистамина или избыточное образование эозинофилами суперксидного анионного радикала). Поскольку соединения настоящего изобретения обладают ярко выраженными ингибирующими фосфодиэстеразу свойствами, можно ожидать, что соединения окажутся полезными средствами облегчения и/или излечивания аллергических и атомических заболеваний. Функциональное действие ингибиторов ФДЭ III и IV состоит, например, в расслаблении гладкой мускулатуры дыхательных путей, ингибировании агрегации тромбоцитов и ингибировании выделения медиатора лейкоцитов.

Особенно важно в таком контексте обнаружение того, что двойственная активность соединений настоящего изобретения по отношению к ФДЭ как типа III, так и типа IV приводит к прекрасному регулированию в сторону снижения таких клеток, как базофилы и мастоциты.

Следовательно, целевые соединения следует рассматривать как ценные лечебные средства для теплокровных животных, в частности людей, страдающих от аллергических нарушений, атонических заболеваний и аналогичных расстройств. Примеры аллергических заболеваний включают: бронхиальную астму, хейлит, конъюктивит, контактный дерматит и экзему, раздражение кишечника, обезвоженную форму экземы, крапивницу, васкулит, вульвит, примеры атопических заболеваний включают: дерматит и экзему, винтерфит, астму, аллергический ринит, а к аналогичным расстройствам относятся, например: псориаз и другие гиперпрофилерирующие заболевания.

Вследствие их полезных свойств по ингибированию фосфодиэстеразы данные соединения могут быть включены в состав разнообразных фармацевтических форм для их последующего введения. Для приготовления фармацевтических препаратов настоящего изобретения эффективное количество конкретного соединения (в виде основания или соли с кислотой) в качестве активного компонента равномерно смешивают с фармацевтически приемлемым носителем, который может принимать самые различные формы в зависимости от целевой формы введения препарата. Желательно иметь такие препараты в единичной дозированной форме, пригодной для введения перорально, ректально, чрескожно или парентеральной инъекцией. К примеру, при получении препаратов в виде пероральных дозированных форм может быть использована любая обычная фармацевтическая среда, такая как, например: вода, гликоли, масла, спирты и т.п. в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензия, сиропы, эликсиры и растворы, или могут быть использованы твердые носители, такие как крахмал, сахара, каоли, смазки, связующие вещества, структурирующие добавки и т.п. в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Вследствие простоты их введения таблетки и капсулы являются наиболее удобными пероральными единичными дозированными формами, для приготовления которых, очевидно, используют твердые фармацевтические носители. В случае парентеральных препаратов носителем обычно служит стерильная вода, хотя бы в основном, но препарат может включать и другие компоненты, например, повышающие растворимость. К примеру, могут быть приготовлены инъектируемые растворы, содержащие в качестве носителя солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Могут быть также приготовлены инжектируемые суспензии, и в этом случае используют соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и аналогичные добавки. В препаратах, пригодных для чрескожного введения, носитель возможно содержит усиливающее проникновение средство и/или приемлемое смачивающее средство, возможно в смеси небольшими количествами приемлемых добавок любой природы, при условии, что такие добавки не оказывают заметного неблагоприятного действия на кожу. Подобные добавки могут облегчать проникновение в кожу и/или могут оказаться полезными при получении препарата. Подобные препараты могут быть введены различными путями, например: в виде трансдермальной бляшки, в виде нанесенного пятна или в виде мази.

При получении водных препаратов соли целевых соединений, очевидно, более пригодны, что связано с их повышенной растворимостью в воде.

Или же соединения формулы (I) могут быть смешаны с приемлемым носителем, например, циклодекстрином (ЦД) или, в частности, производным циклодекстрина, например, раскрытым в патенте США US- 3459731, Европейском патенте EP-A-149197 или Европейском патенте ЕР-А-197571. Обычно такие производные представлены -,--ЦД, в которых одна или несколько гидроксильных групп замещены С₁-С₆ - алкилом, в частности: метилом, этилом или изопропилом; гидрокси-С₁-С₆ - алкилом, в частности: гидроксиэтилом, гидроксипропилом или гидpoкcибутилoм; карбокси- C₁-C₆ - алкилом, в частности: карбоксиметилом или карбоксиэтилом; С₁-С₆ - алкилкарбонилом, в частности, ацетилом, С₁-С₆-алкилоксикарбонил-С₁-С₆-алкилом; карбокси-С₁-С₆-алкилокси-C₁-С₆-алкилом, в частности: карбоксиметоксипропилом, карбоксиэтоксипропилом или С₁-С₆-алкилкарбонилокси-С₁-С₆-алкилом, в частности, 2-ацетилоксипропилом. Особенно примечательны в качестве комплексообразующих и солюбилизирующих добавок - ЦД, 2,6-диметил -- ЦД, 2-гидроксиэтил -- ЦД, 2-гидроксиэтил -- ЦД, 2-гидроксипропил -- ЦД, (2-карбоксиметокси)пропил -- ЦД, в особенности 2-гидроксипропил -- ЦД. В вышеупомянутых производных циклодекстрина СЗ (степень замещения, т.е. среднее число замещенных гидроксифункций на звено глюкозы) предпочтительно составляет 0,125-3, в частности, 0,2-2 или 0,2-1,5. Более предпочтительный интервал значений СЗ составляет 0,2-0,7, в частности, 0,35-0,5, в особенности 0,4. МЗ (молярная степень замещения, т.е. среднее число молей замещающего агента на звено глюкозы) находится в интервале 0,125-10, в частности, 0,3-3 или 0,3-1,5. Более предпочтительный интервал значений МЗ составляет 0,3-0,8, в частности, 0,35/0,5, в особенности 0,4. Для применения в препаратах настоящего изобретения особенно рекомендуются такие производные циклодекстрина, как гидроксипропил -- циклодекстрин со значением МЗ в интервале 0,35-0,5, содержащий менее 1,5% незамещенного - циклодекстрина.

Подобные препараты могут быть приготовлены растворением циклодекстрина или его эфирного производного в воде и добавлением целевого соединения, а также других адъювантов и компонентов, таких как, например: хлорид натрия, нитрат калия, глюкоза, маннит, сорбит, ксилит и буферные смеси, такие как, например: фосфатный, ацетатный или цитратный буфер, возможно с последующим коцентиированием или высушиванием раствора испарением при пониженном давлении или лиофилизацией. Количество циклодекстрина или его простого эфирного производного в конечном препарате обычно находится в интервале 1-40 мас.%, в частности 2,5-15%, в особенности 5-20%.

Наноситься целевые препараты могут, например, в виде аэрозоля, например, с пропеллантом, таким как азот, двуокись углерода, фреон или без пропелланта, например, путем подкачиваемого разбрызгивания, в виде капель или в полутвердом состоянии, например, в виде загущенного препарата, наносимого тампоном. При конкретном типе нанесения обычно будут использоваться полутвердые препараты, например, в виде целебных мазей, кремов, желе, паст и т.п.

Особенно благоприятно приготовление вышеупомянутых фармацевтических препаратов в дозированных единичных формах, облегчающих их введение и унифицирующих дозировку. Дозированная единичная форма относится к физически дискретной единице, пригодной в качестве разовой дозы, при этом каждая единица содержит заданное количество активного компонента, рассчитанное на создание целевого лечебного действия, в смеси с необходимым фармацевтическим носителем. Примеры подобных дозированных единичных форм включают таблетки (включая штрихованные таблетки и таблетки с покрытием), капсулы, пилюли, пакетики с порошками, вафли, инъектируемые растворы или суспензии и т.п., а также их множественные формы.

Поскольку данные соединения пригодны для лечения аллергических и атонических заболеваний, то могут быть использованы для лечения, поэтому предложен также способ лечения теплокровных животных, страдающих аллергическими и атоническими заболеваниями. Такой способ состоит в системном введении животному фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтическим носителем. Специалист в области лечения аллергических и атопических заболеваний на основании представленных здесь результатов легко может определить ежедневное эффективное количество. В целом ежедневное эффективное количество будет составляет от 0,01 мг/кг массы тела до 4 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,04 мг/кг массы тела до 2 мг/кг массы тела.

Очевидно, что указанное эффективное ежедневное количество может быть понижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению объекта и/или соображений лечащего врача, прописывающего соединения настоящего изобретения. Таким образом, вышеприведенные интервалы ежедневных эффективных количеств могут служить лишь общим руководством, и не предназначены для ограничения объема или применения изобретения.

Нижеследующие примеры предназначены для иллюстрации, но не ограничения объема настоящего изобретения.

Экспериментальная часть

А. Получение промежуточных соединений

Пример 1.

а) Смесь 114,5 г гидросульфита натрия и 500 мл воды перемешивают 15 мин при комнатной температуре. После охлаждения в бане со льдом до 5^oC по каплям прибавляют 100 г 2-метоксибензальдегида, перемешивают 15 мин и добавляют 95,8 г морфолина. После этого добавляют раствор 39,2 г цианида натрия в 100 мл воды и смесь перемешивают 24 часа при 50^oC. Продукт экстрагируют дихлорметаном и экстракт сушат, фильтруют и испаряют. Совместным испарением остатка с метилбензолом получают 168,2 г (99,2%) - (3-метоксифенил)-4-морфолинацетонитрила (пром. соед. 1).

b) К перемешиваемой смеси 35 г гидрида натрия в 1000 мл N, N- диметилформамида в атмосфере азота прибавляют по каплям раствор 168,2 г промежуточного соединения (1) в 250 мл N, N - диметилформамида и перемешивание продолжают 3 часа. При 10^oC по каплям прибавляют раствор 152,9 г 3-хлор-2-(диметоксиметил)-1-нитробензола (полученного, как описано в 1 655 и 1 693) в 250 мл N, N - диметилформамида. Смесь перемешивают 1 час при 10^oC и примерно сутки при комнатной температуре. Реакционную смесь переносят в ледяную воду и продукт экстрагируют дихлорметаном. Экстракт сушат, фильтруют и испаряют. Остаток перемешивают в воде, фильтруют и переносят в смесь воды с дихлорметаном. Органический слой отделяют, сушат, фильтруют и испаряют. Промыванием остатка гексаном (3 раза) получают 294,6 г (100%) - 3-диметоксиметил)-4-нитрофенил -- (4-метоксифенил)-4-морфолинацетонитрила (пром. соед. 2).

Аналогичным путем получены также:

- /3-(диметоксиметил)-4-нитрофенил -- (4-фторфенил)-4-морфолинацетонитрил (пром. соед. 3);

- /3-(диметоксиметил)-4-нитрофенил/ -- (3,4-диметоксифенил)-4- морфолинацетонитрил (пром. соед. 4) и

- /3-(диметоксиметил)-4-нитрофенил -- (4-метилфенил)-4-морфолинацетонитрил (пром. соед. 5).

с) К перемешиваемой смеси 1200 мл 2-пропанола, насыщенного НСI, и 500 мл воды прибавляют по каплям раствор 294,6 г промежуточного соединения (2) в 700 мл 1,4-диоксана. Перемешивание продолжают 20 часов при температуре кипения. После охлаждения реакционную смесь испаряют и остаток перемешивают в воде. Смесь целиком нейтрализуют NH₄OH и продукт экстрагируют дихлорметаном. Экстракт сушат, фильтруют и испаряют. Остаток очищают колоночной хроматографией (силикагель, CH₂Cl₂). Элюент целевой фракции испаряют и остаток последовательно перемешивают в диизопропиловом эфире и перекристаллизовывают из 2-пропанола. Продукт отфильтровывают, промывают диизопропиловым эфиром и после сушки получают 56,3 г (28,6%) 5-(3-метоксибензоил)- 2-нитробензальдегида, т.пл. 84^oC (пром. соед. 6).

Аналогичным путем также получены:

5-(4-фторбензоил)-2-нитробензальдегид, т.пл. 105,2^oC (пром. соед. 7);

5-(3,4-диметоксибензоил)-2-нитробензальдегид, т.пл. 169,4^oC (пром. соед. 8) и 5-(4-метилбензоил)-2-нитробензальдегид, т.пл. 131,7^oC (пром. соед. 9)

Пример 2.

а) Раствор 91 г промежуточного соединения (24), 41,6 мл триметоксиметана, 9,9 мл серной кислоты, 0,66 г 4-метилбензолсульфоксилоты, 1000 мл метанола и 50 мл 2,2-диметоксипропана кипятят примерно сутки. Охлажденную реакционную смесь переносят в смесь 53 г Na₂CO₃ в метаноле с одновременным перемешиванием и охлаждением. Смесь целиком фильтруют и остаток ополаскивают дихлорметаном. Объединенные фильтраты испаряют и остаток распределяют между водой и дихлорметаном. Органический слой отделяют, сушат, фильтруют и испаряют с получением 106 г (38,8%) /3-(диметоксиметил)-4-нитрофенил/-(3-пиридинил) метанона (пром. соед. 10).

b) К смеси 106 г промежуточного соединения (10), 700 мл пиридина и 36,9 г гидрокарбоната натрия добавляют 29,26 г моногидрохлорида гидроксиламина. Смесь нагревают примерно сутки при 80-90^oC и затем испаряют. Остаток испаряют совместно с этанолом (3 раза) и затем распределяют между водой и дихлорметаном. Образовавшийся осадок отфильтровывают двумя фракциями соответственно в 32,1 г и 33,8 г продукта. Органический слой фильтрата отделяют, сушат, фильтруют и испаряют с получением третьей фракции продукта (27 г). Вторую и третью фракции продукта объединяют и перекристаллизовывают из ацетонитрила. Продукт отфильтровывают, промывают ацетонитрилом и после сушки в вакууме при 50-60^oC получают 44,7 г (40,1%) (Е/Z 85:15)- /3-(диметоксиметил)-4-нитрофенил/ (3-пиридинил)метанона, оксима (пром. соед. II). Первую фракцию продукта переносят в смесь метанола с дихлорметаном (90:10). Полученный раствор промывают водой, сушат, фильтруют и испаряют. Перекристаллизацией остатка из ацетонитрила получают 10,6 г (9,5%) (Z) -/3-(диметоксиметил)-4- нитрофенил/ (3-пиридинил)метанона, и оксима, т.пл. 183,6^oC (пром. соед. 12).

с) Смесь 177 г промежуточного соединения (II), 400 мл 2 н. соляной кислоты и 400 мл 2-пропанола перемешивают примерно сутки при 50^oC. После охлаждения осадок (HCI соль Z - изомера) отфильтровывают и фильтрат испаряют. Остаток перемешивают в воде, фильтруют и после сушки получают 18,1 г (10,5%) (Е)-5-/(гидроксиимино)(3-пиридинил) метил/-2-1-нитробензальдегида, моногидрохлорида, т.пл. 230,6^oC (пром. соед. 13).

Аналогичным путем получен также:

этиловый эфир (Z)-5-///(3-формил-4-нитрофенил)(3-пиридинил)метилен/амино/окси/ пентановой кислоты (пром. соед. 14).

d) К смеси 13,5 г промежуточного соединения (13) в 150 мл воды по каплям прибавляют 43,9 мл 1 н. гидроксида натрия. После перемешивания 5 мин, продукт отфильтровывают, промывают водой и сушкой в вакууме при 60^oC получают 11,15 г (93,6%) (Е)-5-/(гидроксиимино) (3-пиридинил)метил/-2-нитробензальдегида (пром. соед. 15).

е) К перемешиваемому раствору 9,15 г промежуточного соединения (15) в 100 мл метанола и 35,3 мл 1 н. гидроксида натрия добавляют 0,45 г боргидрида натрия. Перемешивание продолжают при комнатной температуре до завершения реакции, после чего добавляют 2,67 г хлорида аммония. Спустя 15 мин реакционную смесь испаряют и остаток перемешивают в воде. Продукт отфильтровывают, промывают водой и сушкой в вакууме при 60^oC получают 8,75 г (0,7%) оксима (Е)-/3-(гидроксиметил)-4-нитрофенил/(3-пиридинил)метанона (пром. соед. 16).

f) К перемешиваемому раствору 8,75 г промежуточного соединения (16) в 150 мл N, N - диметилформамида добавляют порциями 1,33 г гидрида натрия и спустя 10 мин по каплям прибавляют раствор 5,4 мл этилового эфира 5-бромпентановой кислоты в 20 мл N,N-диметилформамида. Смесь перемешивают примерно сутки при комнатной температуре и затем концентрируют. Остаток переносят в смесь воды (+NaCI) с дихлорметаном. Продукт экстрагируют дихлорметаном и экстракт сушат, фильтруют и испаряют. Остаток очищают колоночной хроматографией (силикагель, CH₂CI₂/C₂H₅OH 97:3). Элюент целевой фракции испаряют и совместным испарением остатка с метилбензолом получают 13 г (100%) этилового эфира (Е)-5-////3-(гидроксиметил)- 4-нитрофенил/(3-пиридинил)метилен/амино/окси/пентановой кислоты (пром. соед. 17).

Аналогичным путем получены также:

этиловый эфир (Е)-2-////3-(гидроксиметил)-4-нитрофенил/метилен/ амино /окси/уксусной кислоты, т.пл. 112,8^oC (пром. соед. 18);

этиловый эфир (Z)-5-////3-(диметоксиметил)-4-нитрофенил-/- (3-пиридинил)метилен/амино/окси/пентановой кислоты (пром. соед. 19);

(Е)-1-(циклогексилметил)-4-/////3-(гидроксиметил)-4-нитрофенил/ метилен/амино/окси/ацетил/пиперазин, т.пл. 185^oC (пром. соед. 54) и

(Е)-11-циклогексил-2-////3-(гидроксиметил)-4-нитрофенил/- метилен/амино/окси/-11-метилацетамид, т.пл. 169,5^oC (пром. соед. 58).

Пример 3.

Колоночной хроматографией (Лихропреп Si60, CH₂CI₂ CH₃OH 98,5 : 1,5) 86,2 г (E + Z)-N-циклогексил-2-////3- (гидроксиметил)-4-нитрофенил/фенилметил/амино/окси/-N-метилацетамида (получен по методике заявки на патент США N 529826) разделяют на его E- и Z-изомер. Элюент первой фракции испаряют и остаток перекристаллизовывают из 2-пропанола. Продукт фильтруют, промывают 2-пропанолом и гексаном и после сушки получают 30,5 г (35,8%) (Z) - изомера, т.пл. 153,8^oC (пром. соед. 20). Испарением элюента второй фракции получают 25,9 г (30,4%) (Е)-изомера (пром. соед. 21).

Пример 4.

а) К раствору 241,3 г гидроксида калия в 1400 мл метанола добавляют 130 г 3-пиридинацетонитрила и раствор 153 г 2-нитробензолметанола в 300 мл метанола. После перемешивания 1,5 часа при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют. К остатку добавляют некоторое количество воды и 300 г уксусной кислоты. Осадок отфильтровывают, кипятят в дихлорметане и дополнительно очищают колоночной хроматографией (силикагель, CHCl₃/CH₃OH 90:10). Элюент целевой фракции испаряют и остаток кристаллизуют из смеси ацетонитрила с метанолом. После испарения метанола продукт фильтруют, промывают диизопропиловым эфиром и сушкой получают 67,9 г (25,9%) (E+Z) - - /4- (гидроксиимино)-3-(гидроксиметил)-2,5- циклогексадиенилиден/-3-пиридина цетонитрила, полугидрата, т.пл. 199,7^oC (пром. соед. 22).

b) К раствору 982 г гидроксида калия в 5140 мл воды добавляют 164,8 г промежуточного соединения (22) и затем прибавляют по каплям раствор 988,8 мл перекиси водорода в 2400 мл воды. После перемешивания 3 часа осадок отфильтровывают и промывают последовательно водой, 2-пропанолом и диизопропиловым эфиром. Продукт очищают колоночной хроматографией (силикагель, CHCl₃/CH₃ОН 90:10). Элюент целевой фракции испаряют и остаток кристаллизуют из смеси ацетонитрила с метанолом. Продукт фильтруют и после сушки получают 53,4 г (31,8%) /3-(гидроксиметил)-4 -нитрофенил/(3-пиридинил)метанона, т.пл. 184,3^oC (пром. соед. 23).

с) К раствору 18 г промежуточного соединения (23) в 1000 мл дихлорметана и 300 мл диметилсульфоксида добавляют 60 г оксида марганца (IV). После перемешивания примерно сутки при комнатной температуре смесь фильтруют через диатомовую землю. Фильтрат вновь перемешивают примерно сутки с новой порцией в 60 г оксида марганца (IV) и затем кипят 2 недели. Реакционную смесь фильтруют через диатомовую землю и фильтрат концентрируют. Остаток дважды очищают колоночной хроматографией (силикагель, CH₂CI₂/CH₃OH 98:2). Испарением элюента первой и второй фракции получают 13,4 г (74,7%) 2-нитро-5-(3- пиридинилкарбонил)бензальдегида (пром. соед. 24).

Аналогичным путем получены также:

(Z)-N-циклогексил-2-//(3-формил-4-нитрофенил)фенилметилен /амино/окси/-N-метилацетамид (пром. соед. 25);

(Е)-N-циклогексил-2-///(3-формил-4-нитрофенил)фенилметилен /амино/ окси/-N-метидацетамид (пром. соед. 26);

этиловый эфир (Е)-2-///(3-формил-4-нитрофенил)метилен/амино/ окси/уксусной кислоты, т. пл. 105^oC (пром. соед. 27) и этиловый эфир (Е)-5-///(3-формил-4-нитрофенил)(3-пиридинил)-метилен/амино/ окси/пентановой кислоты (пром. соед. 28).

d) Раствор этандиоилдихлорида (0,042 моля) перемешивают в токе N₂ в дихлорметане (20 мл) с охлаждением до -70^oC (баня 2-пропанол /СО₂). По каплям прибавляют раствор диметилсульфоксида (0,066 моля) в дихлорметане (7 мл). Смесь разбавляют дихлорметаном (80 мл). Порциями добавляют промежуточное соединение (54) (0,0215 моля) и затем тетрагидрофуран (25 мл). После перемешивания реакционный смеси 15 мин по каплям прибавляют N, N-диэтилэтанамин (0,128 моля). Реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры. Затем реакционную смесь промывают один раз водой и дважды водным раствором NaOCI. Органический слой отделяют, сушат (MgSO₄), фильтруют и растворитель испаряют. К остатку добавляют толуол и после повторного испарения растворителя получают 11,7 г (100%) (Е)-1-(циклогексилметил) -4-////(3-формил-4-нитрофенил)метилен/амино/ окси/ацетил/пиперазина (пром. соед. 55).

Аналогичным путем получен:

(Е)-N-циклогексил-2 -///(3-формил-4-нитрофенил)метилен/амино/ окси/-N-метилацетамид (пром. соед. 59).

е) К перемешиваемому раствору 0,73 г натрия в 200 мл этанола добавляют 7,49 г диэтил-2,5-диоксоимидазолидин-4-фосфата и спустя 5 мин раствор 7,4 г промежуточного соединения (24) в смеси 60 мл этанола и 90 мл дихлорметана. Перемешивание при комнатной температуре продолжают 0,5 часа. Реакционную смесь испаряют и остаток перемешивают в воде. Продукт отфильтровывают, промывают водой и после сушки в вакууме при 60-80^oC получают 6,65 г (66,2%) (E+Z)-5-//2-нитро-5-(3-пиридинилкарбонил)фенил/метилен/-2,4- имидазолидиндиона полугидрата, т.пл. 199,4^oC (пром. соед. 29).

Перечисленные в таблице 1 промежуточные соединения получены аналогичным путем.

f) К суспензии 5,85 г смеси промежуточного соединения (29) и его свободного основания (42:58), 120 мл тетрагидрофурана и 80 мл воды добавляют 15 г дитионата натрия. По окончании реакции реакционную смесь испаряют. Остаток последовательно испаряют со смесью тетрагидрофуран-метилбензол и метанол-метилбензол с получением 5,23 г (98,6%) (E+Z)-5-//2-амино-5-(3-пиридини карбонил)фенил/метилен/- 2,4-имидазолидиндион (пром. соед. 41).

Аналогичным путем получены также:

этиловый эфир /5/Z, 3(E+Z)//-5-////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4- имидазолидинилиден)метил/фенил/(3-пиридинил)метилен/амино/-окси/ пентановой кислоты (пром. соед. 42);

2/Z, 3(E)//-2-////(4-амино-3-/(2,5-диоксо-4-имидазолидинилиден) мeтил/фeнил/фeнилмeтилeн/aминo/oкcи/-N-циклoгeкcил-N-мeтилaцeтaмид (пром. соед. 43);

этиловый эфир /2/E, (E+Z)//-2-////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4-имидазо- лидинилиден)метил/фенил/метилен/амино/окси/уксусной кислоты (пром. соед. 44) и

этиловый эфир /5/E, 3(E+Z)//-5-////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4- имидазолидинилиден)метил/фенил/(3-пиридинил)метилен/амино/окси/ пентановой кислоты (пром. соед. 45).

Пример 5.

Смесь 11,9 г промежуточного соединения (30), 2 мл раствора тиофена в метаноле (4%) и 250 мл 2-метоксиэтанола гидрируют примерно сутки при нормальном давлении и комнатной температуре в присутствии 3 г 5% пластины на активированном угле в качестве катализатора. После поглощения рассчитанного количества водорода катализатор отфильтровывают и фильтрат испаряют. Остаток испаряют совместно с метилбензолом и затем перемешивают в диизопропиловом эфире. Продукт отфильтровывают, промывают диизопропиловым эфиром и после сушки в вакууме при 80^oC получают 10,8 г (99,6%) (E+Z)-5-/(2-амино-5-бензоилфенил) метилен/-2,4-имидазолидиндиона (пром. соед. 46).

Аналогичным путем получен также:

(E+Z)-5-//2-амино-5-(3-метоксибензоил)фенил/метилен/-2,4- имидазолидиндион (пром. соед. 47).

Аналогичным путем, но использованием в качестве растворителя метанола получен также:

-2E, (E+Z)/-1-/////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4-имидазолилдинилиден) метил/фенил/метилен/амино/окси/ацетил/-4-(циклогексил)пиперазин (пром. соед. 57).

Аналогичным путем, но использованием в качестве растворителя тетрагидрофурана получен:

/2E, (E+Z)/-2-////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4-имидазолилдинилиден) метил/фенил/метилен/амино/окси/-N-циклогексил-N-метилацетамид (пром соед. 61).

Пример 6.

Смесь 9,8 г промежуточного соединения (46) и 300 мл 2-метокси- этанола гидрируют 3 дня при нормальном давлении и комнатной температуре в присутствии в качестве катализатора 4 г 5% платины на активированном угле. Катализатор отфильтровывают и фильтрат испаряют. Остаток испаряют совместно с метилбензолом с получением 9,4 г (95,3%) 5-/(2-амино-5-бензоилфенил)метил/-2,4-имидазолидиндион (пром. соед. 48).

Аналогичным путем получен также:

5-//2-амино-5-(3,4-диметоксибензоил)фенил/метил/-2,4- имидазолидиндион (пром. соед. 49).

Пример 7.

Смесь 8,5 г промежуточного соединения (33), 4,94 г порошка железа, 4,73 г хлорида аммония, 150 мл этанола, 75 мл воды и 100 мл тетрагидрофурана кипятят до полного исчезновения промежуточного соединения. Реакционную смесь фильтруют в горячем состоянии через диатомовую землю. Фильтрат испаряют и остаток переносят в 250 мл смеси метанола с дихлорметаном (10:90). Осадок отфильтровывают и промывают смесью метанола с дихлорметаном. Объединенные фильтраты фильтруют через диатомовую землю, после чего промывают водой (+NaCl), сушат, фильтруют и испарением получают 7,9 г (98,8%) этилового эфира /5/ (E+Z)//-5-////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4-имидазолилдинилиден/метил/ фенил/ (3-пиридинил)метилен/-амино/окси/пентановой кислоты (пром. соед. 50).

Аналогичным путем получен также:

/2/Е, 3(E+Z)//-2-////4-амино-3-/(2,5-диоксо-4- имидазолидинилиден)метил/фенил/фенилметилен/амино/окси/-N-циклогексил -N-метилацетамид (пром. соед. 51).

Пример 8.

Смесь 5,3 г промежуточного соединения (38) и 250 мл 2-метокси- этанола гидрируют при нормальном давлении и комнатной температуре в присутствии в качестве катализатора 2 г 5% платины на активированном угле. Спустя некоторое время катализатор отфильтровывают и заменяют свежим количеством катализатора (2 г). По окончании реакции катализатор отфильтровывают и фильтрат испаряют. Совместным испарением остатка с метилбензолом получают 5 г (100%) 5-//2-амино-5-(4-фторбензоил)фенил/метил/-2,4-имидазолидиндион (пром. соед. 52).

Аналогичным путем получен также:

5-//2-амино-5-(4-метилбензоил)фенил/метил/-2,4-имидазолидиндион.

В. Получение конечных соединений

Пример 9.

Раствор 9,4 г промежуточного соединения (48), 7,6 г 4-метилбен- золсульфокислоты и 90 мл диметилсульфоксида нагревают 0,5 часа при 150-160^oC. Затем реакционную смесь переносят в 600 мл ледяной воды. Продукт отфильтровывают и перемешивают в водном растворе NaHCO₃. Продукт фильтруют двумя фракциями соответственно в 6,25 г и 0,28 г. Объединенные фракции очищают колоночной хроматографией (ВЭЖХ, -аминопропил, CH₂CI₂/CH₃OH 95:5). Элюент третьей и четвертой фракции испаряют и остаток переносят в смесь метанола с водой. При перемешивании добавляют 1 н. NaOH и все кипятят несколько минут с активированным углем. Смесь фильтруют в горячем состоянии через диатомовую землю. К фильтрату при перемешивании добавляют 1 н. HCl. Остаток отфильтровывают, промывают последовательно смесью метанола с водой (1:1), водой, метанолом и диизопропиловым эфиром и после сушки в вакууме при 70-80°С получают 1,06 г (12,1%) 7-бензоил-1,3-дигидро-2H-имидазо /4,5-b/хинолин-2-она, т.пл. 300^oC (соед. 1).

Аналогичным путем получены также:

7-(3,4-диметоксибензоил)-1,3-дигидро-2H-имидазо/4,5-b/хинолин-2- он, т. пл. > 300^oC (соед. 2);

7-(4-фторбензоил)-1,3-дигидро-2H-имидазо/4,5-b/хинолин-2-он, т. пл. > 300^oC (соед. 3) и

1,3-дигидро-7-(4-метилбензоил)-2H-имидазо/4,5-b/хинолин-2-он, т. пл. > 300^oC (соед. 4).

Пример 10.

Смесь 5,23 г промежуточного соединения (41), 6,4 г 4-метилбензолсульфокислоты и 100 мл диметилсульфоксида нагревают 40 мин при 150^oC. Реакционную смесь переносят в ледяную воду и при перемешивании по каплям добавляют 10%-ный раствор NaHCO₃ до pH 5. Осадок отфильтровывают, промывают водой и трижды кипятят в смеси этилацетата с метанолом (1:1) (соответственно 100 мл, 75 мл и 50 мл). Каждый раз продукт фильтруют в горячем состоянии и промывают смесью этилацетата с метанолом и диизопропиловым эфиром. Затем продукт переносят в смесь 50 мл метанола и 20 мл воды. Смесь в полном объеме кипятят с 300 мг активированного угля. Смесь в горячем состоянии фильтруют через диатомовую землю и к охлажденному фильтрату при перемешивании добавляют 10 мл 1 н. HCl. Осадок отфильтровывают, промывают последовательно смесью воды с метанолом (1: 1) водой, метанолом и диизопропиловым эфиром и после сушки в вакууме при 70-80^oC получают 0,63 г (12%) моногидрата 1,3-дигидро-7-(3-пиридинилкарбонил- 2H-имидазо- 4,5-b/хинолин-2-она, т.пл. > 300^oC (соед. 5).

Соединения, представленные в таблице 2, получены аналогичным путем.

Аналогичным путем, но использованием 1-/(4-метилфенил)- сульфонил/пиридиния получены:

(Е)-1-(циклогексилметил)-4-////(2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазо /4,5-b/ хинолин-7-ил)метилен/амино/окси/ацетил/пиперазина моногидрат, т.пл. > 260^oC (соед. 15) и

(Е)-В1-циклогексил-2-///(2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазо/4,5-b/- хинолин-7-ил)метилен/амино/окси/-М-метилацетамида полугидрат, т. пл. 263,4^oC (соед. 16).

Пример 11.

Смесь 0,99 г соединения (6) и 6 мл 1 н. гидроксида натрия перемешивают 2,5 часа при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляют 10 мл 1 н. HCl. Осадок отфильтровывают, промывают водой и кипятят в метаноле. Продукт отфильтровывают, промывают метанолом и диихопропиловым эфиром и после сушки в вакууме при 80^oC получают 0,7 г (75,1%) (Z) -5-///(2,3-дигидро-2-оксо-1Н- имидазо/4,5-b/хинолин-7-ил)(3-пиридинил)метилен/амино/окси/пентановую кислоту, т. пл. > 300^oC (разл.) (соед. 13).

Аналогичным путем получен также:

(Е+Z)-5-///(2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазо/4,5-b/хинолин-7-ил( (3-пиридинил)метилен/амино/окси/пентановой кислоты моногидрат, т.пл. 233,5^oC (соед. 14).

С) Фармакологические примеры.

Облегчающее и/или излечивающее действие настоящих соединений при аллергических и атопических заболеваниях выявляют аналитической системой in vitro, позволяющей обнаружить ингибирующее действие на фосфодиэстеразу типа III в человеческих и собачьих мышечных клетках и аналогичное ингибирующее действие на фосфодиэстеразу типа IV в человеческих моноядерных лимфоцитах.

Пример 12.

Ингибирование фосфодиэстеразы типа III (ФДЭ III).

Инкубируемая смесь (рН 7,1 (200 мкл) содержит 40 мМ Трис, 3,75 мМ 2-меркаптоэтанола, 6 мМ хлорида магния, 1,2 мкМ ³H-цаМФ (310 MCi/ммоль) и фосфодиэстеразу типа III, количество которой зависит от ферментативной активности. Концентрацию белка подбирают такой, при которой активность фосфодиэстеразы возрастает линейно в течение инкубационного периода в 10 минут при 37^oC.

При выявлении действия различных соединений на активность фосфодиэстеразы не содержащую цАМФ среду инкубируют 5 мин с соединением-(ями) или его носителем (ДМСО, конечная концентрация 1%). Ферментативную реакцию начинают добавлением ³Н-цАМФ и прекращают 10 мин спустя выдерживанием пробирок 40 сек на водяной бане при 100^oC. После охлаждения до комнатной температуры добавляют щелочную фосфатазу (0,25 мкг/мл) и смесь оставляют на 20 мин при комнатной температуре. Затем смесь наносят пастеровской пипеткой на колонку с 1 мл ДЭАЭ-Сефадексом-А-25 и промывают дважды 3 мл 20 мМ Трис-HCl (рН 7,4). ³H-меченные продукты реакции в элюате определяют количественно жидкостным сцинтилляционным счетчиком.

Ингибирующее действие соединений настоящего изобретения на фосфодиэстеразу ФДЭ III собачьего и человеческого сердца определяют при различных концентрациях соединений. На основе полученных значений ингибирования графически подсчитывают величины ИК₅₀. В Таблице 3 приведены полученные величины ИК₅₀ соединений настоящего изобретения на ФДЭ III собачьего и человеческого сердца.

Пример 13. Ингибирование фосфодиэстеразы типа IV из человеческих моноядерных лимфоцитов (МЯЛ)

Человеческая кровь получена от доноров страдавших ранее, как документально показано, аллергическим или атоническим заболеванием. Венопункцией из пупочной вены отбирают 35 мл крови и собирают в 5 мл 100 мМ К₂ЭДТК (рН 7,1). Добавляют 4 мл 0,6% декстрана в солевом растворе и смесь оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Собирают не содержащую эритроцитов надосадочную жидкость, осторожно расслаивают на Лимфопреп растворе и центрифугируют 15 мин при 18^oC и 750 q. Интерфазу отделяют, разбавляют буфером, содержащим 137 М NaCI, 50 мМ КС1 и 100 мМ ГЕПЕС (рН 7,4), и центрифугируют 10 мин при 10^oC и 900 q. Полученный осадок вновь суспендируют в том же буфере.

В суспензии МЯЛ устанавливают концентрацию в 1% Тритона Х100 и 0,3% Brij 35 и замораживают в жидком N₂. После 3 циклов замораживания-оттаивания суспензию гомогенизируют при 40^oC в гомогенизаторе (РТ-DА 3020/2 TS ) марки Политрон РТ3ООО (Кинематика АГ), работающем при 8000 об/мин 5х10 сек, с последующей обработкой при 4^oC в ультразвуковом аппарате Брансон 250, работающем при выходной частоте 20000 Гц, рабочей мощности 40 Вт, в течение 10x30 ceк. Гомогенат центрифугируют 10 мин при 10000 q. Полученную надосадочную жидкость используют в качестве источника для определения активности ФДЭ IV. Инкубационная смесь (рН 7,1) (200 мкл) содержит 40 мМ Трис, 3,75 мМ 2-меркаптоэтанола, 6 мМ хлорида магния, 1,2 мкМ ³Н-цАМФ (310 мCi/ммоль) и фосфодиэстеразу типа IV, количество которой определяется ферментативной активностью. Концентрацию белка подбирают такой, при которой активность фосфодиэстеразы в ходе инкубирования 10 минут при 37^oC возрастает линейно и при которой менее 10% исходного субстрата подвергается гидролизу. Для блокирования ухудшения активности ФДЭ III активность ФДЭ IV определяют в присутствии 10^-4 М цГМФ.

При выявлении влияния различных соединений на активность фосфодиэстеразы не содержащую цАМФ среду инкубируют 5 мин с соединением (ями) или его носителем (ДМСО, конечная концентрация 1%). Ферментативную реакцию начинают добавлением ³-цАМФ и прекращают спустя 10 мин выдерживанием пробирок 40 сек при 100^oC на водяной бане. После охлаждения до комнатной температуры добавляют щелочную фосфатазу (0,25 мкг/мл) и смесь оставляют на 20 мин при комнатной температуре. После этого смесь переносят пастеровской пипеткой на колонку с 1 мл ДЭАЭ-Сефадекса А-25 и промывают дважды 3 мл 20 мМ Трис-НСI (pH 7,4). ³H-меченные продукты реакции в элюате определяют количественно жидкостным сцинтилляционным счетчиком.

Ингибирующее действие соединений настоящего изобретения на фосфодиэстеразу человеческих моноядерных лимфоцитов (ФДЭ IV) определяют при различных концентрациях соединений. На основе полученных в результате величин ингибирования графически рассчитывают значения ИК₅₀. В таблице 4 приведены полученные значения ИК₅₀ соединений настоящего изобретения на ФДЭ человеческих моноядерных лимфоцитов.

D) Примеры препаратов

Нижеприведенные составы являются примерами типичных фармацевтических препаратов в дозированных единичных формах, пригодных для системного введения животным и человеку в соответствии с настоящим изобретением.

"Активный компонент" (А.К.) в значении, применяемом в примерах, означает соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его стереоизомерную форму.

Пример 14. Пероральные капли

В 0,5 л 2-гидроксипропановой кислоты и 1,5 л полиэтиленгликоля растворяют при 60-80^oC 500 г А.К. После охлаждения до 30-40^oC добавляют 35 л полиэтиленгликоля и смесь тщательно перемешивают. После этого добавляют раствор 1750 л сахарина натрия в 2,5 л очищенной воды и при перемешивании добавляют 2,5 л какао-корригента и полиэтиленгликоль в количестве, необходимом до доведения объема до 50 л. В результате получают раствор пероральных капель, содержащий 10 мг/мл А.К. Полученным раствором заполняют соответствующие контейнера.

Пример 15. Пероральный раствор.

В 4 л кипящей очищенной воды растворяют 9 г метилового эфира 4-гидроксибензойной кислоты и 1 г пропилового эфира 4-гидроксибензойной кислоты. В 3 л полученного раствора сначала растворяют 10 г 2,3-дигидроксибутандикарбоновой кислоты, а затем 20 г А.К. Последний раствор смешивают с оставшейся частью первого раствора и к смеси добавляют 12 л 1,2,3-пропантриола и 3 л 70%-го раствора сорбита. В 0,5 л воды растворяют 40 г сахарина натрия и к раствору добавляют 2 мл малиновой и 2 мл крыжовниковой эссенции. Последний раствор смешивают с первым и добавляют воду в количестве, необходимом для доведения объема до 20 л. В результате получают пероральный раствор, содержащий 5 мг А. К. на чайную ложку (5 мл). Полученным раствором заполняют соответствующие контейнеры.

Пример 16. Капсулы.

Интенсивно перемешивают 20 г А. К. , 6 г лаурилсульфата натрия, 56 г крахмала, 56 г лактозы, 0,8 коллоидной двуокиси кремния и 1,2 стеарата магния. Полученной смесью затем заполняют 1000 подходящих твердых желатиновых капсул, каждая из которых содержит 20 мг А.К.

Пример 17. Таблетки с пленочным покрытием.

Получение центральной части таблетки.

Смесь 100 г А.К., 570 г лактозы и 200 г крахмала тщательно перемешивают, после чего увлажняют раствором 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинилпирролидона (Коллидон-К 90) в 200 мл воды. Влажную порошковую смесь просеивают, сушат и вновь просеивают. Затем добавляют 100 г микрокристаллической целлюлозы ( (Авицель) и 15 г гидрированного растительного масла (Стеротекс). Все тщательно перемешивают и прессуют в таблетки. В результате получают 10000 таблеток, каждая из которых содержит 10 мг активного компонента.

Нанесение покрытия

К раствору 10 г метилцеллюлозы (Метоцель 60 HC) в 75 мл денатурированного этанола добавляют раствор 5 г этилцеллюлозы (Этоцель 22 спз) в 150 мл дихлорметана. Затем добавляют 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантиола. Расплавляют 10 г полиэтиленгликоля и растворяют в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляют к первому, после чего добавляют 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной суспензии красителя (Опаспрей K-1-2109) и все гомогенизируют. В аппарате для нанесения покрытия центральную часть таблеток покрывают полученной смесью.

Пример 18. Инъецируемый раствор.

Примерно в 0,5 л кипящей воды для инъекций растворяют 1,8 г метилового эфира 4-гидроксибензойной кислоты и 0,2 г пропилового эфира 4-гидроксибензойной кислоты. После охлаждения примерно до 50^oC при перемешивании добавляют 4 г молочной кислоты, 0,05 г пропиленгликоля и 4 г А.К. Раствор охлаждают до комнатной температуры и к нему добавляют воду для инъекций в количестве, необходимом для доведения объема до 1 л. В результате получают раствор, содержащий 4 мг/мл А. К. Раствор стерилизуют фильтрованием (U.S.P. XVII, стр. 811), после чего раствором заполняют стерильные контейнера.

Пример 19. Суппозиторий.

В растворе 3 г 2,3-дигидроксибутандиовой кислоты в 25 мл полиэтиленгликоля 400 растворяют 3 г А.К. Получают совместный расплав 12 г поверхностно-активного вещества (Спэн ) и триглицеридов (Витензол 555) в количестве, необходимом для получения общей массы в 300 г. Полученный расплав тщательно смешивают с первым раствором. Полученную в результате смесь при температуре 37-38^oC заливают в форму с получением 100 суппозиториев, каждый из которых содержит 30 мг активного компонента.

Пример 20. 2%-ный крем.

В сосуд с двухстенной рубашкой загружают 75 мг стеарилового спирта, 2 мг цетилового спирта, 20 мг моностеарата сорбита и 10 мг изопропилмиристата и смесь нагревают до полного ее плавления. Полученную смесь в жидкостном гомогенизаторе добавляют к отдельно приготовленной смеси очищенной воды, 200 мг пропиленгликоля и 15 мг полисорбата 60, нагретых до 70-75^oC. Полученную эмульсию при постоянном помешивании оставляют охлаждаться до температуры ниже 25^oC. При непрерывном перемешивании к эмульсии добавляют раствор 20 мг А. К. , 1 мг полисорбата 80 и очищенной воды, а также раствор 2 мг безводного сульфита натрия в очищенной воде. Крем (1 г) с А.К. гомогенизируют и заполняют в соответствующие тюбики.

Пример 21. 2%-ный гель для нанесения местно.

К раствору 200 мг гидроксипропил -- циклодекстрина в очищенной воде при перемешивании добавляют 20 мг А.К. Добавляют соляную кислоту до полного растворения и затем добавляют гидроксид натрия до pH 6. Полученный раствор при перемешивании добавляют к дисперсии 10 мг каррагинан P1 в 50 мг пропиленгликоля. Смесь при медленном помешивании нагревают до 50^oC и затем оставляют охлаждаться примерно до 35^oC с одновременным добавлением 50 мг этилового спирта (95% об./об.). Добавляют остальное количество очищенной воды до общей массы в 1 г и смесь перемешивают до однородного состояния.

Пример 22. 2%-ный крем для местного нанесения.

К раствору 200 мг гидроксипропил -- циклодекстрина в очищенной воде при перемешивании добавляют 20 мг А. К. Добавляют соляную кислоту до полного растворения и затем добавляют гидроксид натрия до pH 6. При перемешивании добавляют 50 мг глицерина и 35 мг полисорбата 60 и смесь нагревают до 70^oC. Полученную смесь при медленном помешивании добавляют к смеси 100 мг минерального масла, 20 мг стеарилового спирта, 20 мг цетилового спирта, 20 мг моностеарата глицерина и 15 мг сорбата 60, нагретых до 70^oC. После охлаждения до температуры ниже 25^oC добавляют остальное количество очищенной воды до полной массы в 1 г и смесь перемешивают до однородного состояния.

Пример 23. 2%-ный липосомный состав.

Смесь 2 г А.К. в виде микрочастиц, 20 г фосфатидилхолина, 5 г холестерина и 10 г этилового спирта перемешивают с нагреванием при 55-60^oC до полного растворения и при перемешивании добавляют к раствору 0,2 г метилпарабена, 0,02 г пропилпарабена, 0,15 г динатрийэдетата и 0,3 г хлорида натрия в очищенной воде. Добавляют 0,15 г гидроксипропилметилцеллюлозы в очищенной воде до полной массы в 100 г и перемешивание продолжают до полного набухания.

Пример 24. 2%-ный липосомный состав. Смесь 10 г фосфатидилхолина и 1 г холестерина в 7,5 этилового спирта перемешивают с нагреванием при 40^oC до полного растворения. Микрочастицы А.К. (2 г) растворяют в очищенной воде перемешиванием с нагреванием при 40^oC. Спиртовой раствор при перемешивании медленно в течение 10 минут добавляют к водному раствору. Добавляют 1,5 г гидроксипропилметилцеллюлозу в очищенной воде при перемешивании до полного набухания. Добавлением 1 н. гидроксида натрия в полученном растворе устанавливают pH 5 и раствор разбавляют остальным количеством очищенной воды до полной массы в 100 г.

Пример 25. Аэрозоли.

а) К раствору 0,1 г гидроксипропил -- циклодекстрина (МЗ = 0,43) в 0,7 мл дистиллированной воды добавляют 730 мкг 0,1 н. раствора соляной кислоты и 2,5 мг А.К. После перемешивания 10 минут при комнатной температуре в полученном растворе добавлением 0,1 н. раствора гидроксида натрия устанавливают pH 5.5. Затем последовательно добавляют 4 мг хлорида натрия и 0,15 мг ацетата фенилртути и смесь перемешивают до полного растворения. Добавляют дистиллированную воду до объема в 1 мл. Полученным заполняют стеклянную бутылочку, закрытую механическим нагнетателем, подающим 0,1 мл за одно нагнетание.

b) К раствору 0,1 г диметил -- циклодекстрина в 0,7 мл дистиллированной воды добавляют 600 мкг 0,1 н. раствора соляной кислоты и 2 мг А.К. После перемешивания 10 минут при комнатной температуре в смеси растворяют 10 мг поливинилового спирта и добавлением 0,1 н. раствора гидроксида натрия в полученном растворе устанавливают pH 5,5. Затем последовательно добавляют 4 мг хлорида натрия и 2 мг фенилэтилового спирта и смесь перемешивают до полного растворения. Добавляют дистиллированную воду до полного объема в 1 мл и полученным заполняют стеклянную бутылочку, закрываемую механическим нагнетателем, подающим 0,1 мл за одно нагнетание.