адъюванты
Классы МПК: | A61K38/05 дипептиды |
Автор(ы): | Парнес З.Н., Романова В.С., Андреев С.М., Петрухина А.О., Вольпин М.Е. |
Патентообладатель(и): | Институт элементоорганических соединений им.А.Н.Несмеянова РАН |
Приоритеты: |
подача заявки:
1997-04-10 публикация патента:
27.04.1999 |
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к использованию аминокислотных и дипептидных производных фуллерена в качестве стимуляторов иммунного ответа - адъювантов, и может быть использовано в биологической промышленности при разработке и производстве вакцин. Изобретение относится к использованию описанных ранее соединений, фуллереновых производных аминокислот и дипептидов общей формулы I в качестве адъювантов: С60-X, где С60 - фуллереновое ядро; X=NH-CHR-COOH, NH-(CH2)n-COOH, NH-CHR-CO-NH-CHR-COOH, где n = 2 - 6; R - боковой радикал природной аминокислоты. Изобретение обеспечивает при экспериментах с эритроцитами человека возможность использовать высокие дозы - 400 мкМ, но даже они не обладают гемолитическими свойствами, клетки в процессе инкубации не агглюцинируют и их морфология не изменяется. Введение мышам высокой дозы этих соединений - 80 мг/кг - не влияет на жизнеспособность и поведение мышей в течение 6 месяцев. 2 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
Формула изобретения
Применение фуллереновых производных аминокислот и дипептидов общей формулыC60-X,
где C60 - фуллереновое ядро,
X = NH - CHR - COOH, NH - (CH2)nCOOH, NH - CHR - CO - NH - CHR - COOH;
n = от 2 до 6;
R - боковой радикал природной аминокислоты,
в качестве адъювантов.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к использованию аминокислотных и дипептидных производных фуллерена в качестве стимуляторов иммунного ответа - адъювантов, и может быть использовано в научно-исследовательской практике, а также в биологической промышленности при разработке и производстве вакцин. Известно, что в качестве адъювантов применяются микроорганизмы, продукты их метаболизма, их суспензии в минеральных маслах (адъювант Фрейнда), гидроокись алюминия, нерастворимые неорганические соли, сапонины, а также экстракты растительного происхождения гидрофобной природы. Однако известно также, что иммунизация с адъювантами, представляющими собой водно-масляные эмульсии и суспензии, часто приводит к нежелательным осложнениям, таким как местные инфильтрации, изъязвления и аллергические реакции [1 - 3]. Описано использование низкомолекулярного растворимого адъюванта, синтетического фрагмента пептидогликана из стенки микобактерий - N-ацетил-мурамил-Л-аланил-Д-изо-глутамина (МДП) [4]. Использование водорастворимого адъюванта, МДП, исключает те нежелательные последствия, которые проявляются при иммунизации адъювантами на основе водно-масляных эмульсий и суспензий, однако имеет ряд недостатков иного характера, а именно наблюдается пирогенность [5] и нейрофармакологический эффект [3], стимулирующая активность проявляется лишь при относительно высоких дозах, причем для некоторых антигенов требуется ковалентное присоединение МДП к молекуле антигена. Кроме того, этот адъювант лишь заменяет бактериальный компонент в адъюванте Фрейнда, но не отменяет применение масляного компонента, и для ряда антигенов его применение неэффективно [6]. Предлагаемое изобретение относится к использованию описанных ранее соединений, фуллереновых производных аминокислот и дипептидов общей формулы I в качестве адъювантовC60-X,
где С60 - фуллереновое ядро;
X = NH-СHR-COOH, NH-(CH2)n-COOH,
NH-CHR-CO-NH-CHR-COOH,
где n = от 2 до 6, R - боковой радикал природной аминокислоты. Производные фуллерена общей формулы I представляют собой относительно новый класс органических соединений. Иx синтезируют непосредственно присоединением остатков аминокислот или дипептидов к фуллереновому ядру [7]. Они представляют собой твердые порошкообразные вещества темно-коричневого цвета, растворимые в воде. Их биологические свойства в настоящее время широко изучаются. Оценку адъювантных свойств соединений I осуществляют в две стадии. На 1-й стадии оценивают их антигенные свойства. Для этого получают гипериммунную сыворотку, иммунизируя кроликов и мышей препаратами различных производных фуллерена совместно с сильным адъювантом Фрейнда. Анализ сывороток проводят по стандартной методике методом ИФА. На 2-й стадии определяют адъювантные свойства соединений I. Для этого одну группу мышей иммунизируют модельным антигеном - яичным альбумином (Ova), другие несколько групп - смесью Ova с различными соединениями I (Ova-I). Для выявления IgG - антител используют меченый пероксидазой анти-IgG мыши (Sigma). За титр принимается величина, обратная разведению образца, оптическая плотность (ОП) которого равна ОП образца нормальной сыворотки (перед иммунизацией), разведенного в 50 раз (ОП нормальной сыворотки
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129139/8773.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129047/949.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129047/949.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
![адъюванты, патент № 2129436](/images/patents/342/2129247/956.gif)
1. Иммунологические адъюванты. Доклад научной группы ВОЗ. М., 1978. 2. Murhay R., Cohen P. and Hardegree M.C.//Ann. Allergy, 1972, 30, 146. 3. Chedid L. //Ann. Inst. Pasteur/Lmmunol., 1985, 136 D, 283 - 291. 4. Merser C. , Sinay P. and Adam A.// Biochem. Biophys. Res. Commun., 1975, 66, 1316 - 1322. 5. Kotani S., Watanabe Y., Shimono T., Harada K., Shiba T., Kusumoto S., Yokogawa K, and Taniguchi M.//Biken J., 1976, 19, 9 - 13. 6. Иванов Б.Б. Создание иммунопотенциирующих систем для пептидных экспериментальных вакцин. Канд. диссертация, 1992. 7. В.С.Романова, В.А.Цыряпкин, Ю.А.Ляховецкий, З.Н.Парнес, М.Е.Вольпин// Изв. РАН, сер. Xим., 1994, 1151.