способ моделирования гломерулонефрита

Формула изобретения

Способ моделирования гломерулонефрита путем внутривенных инъекций сывороточных белковых антигенов, отличающийся тем, что на фоне введения антигенов животных подвергают стрессорному воздействию.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при создании экспериментальной модели почечной патологии для изучения механизмов развития патологических процессов, сопровождающихся иммунокомплексным компонентом, а также апробации лекарственных форм и методических приемов с целью коррекции развившегося состояния.

Хронический гломерулонефрит относится к нозологическим формам, в генезе которых существенную роль играют аутоиммунные процессы. В начале 60-х годов F.J.Dixon et al. была разработана модель экспериментального гломерулонефрита у кроликов, патогенез которого весьма сходен с развитием аналогичного процесса у человека [1]. Кроликам-самцам весом 2,5 - 3,0 кг ежедневно 6 раз в неделю делали внутривенные инъекции одного из сывороточных белковых антигенов: бычий сывороточный альбумин (БСА), человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), свиной гамма-глобулин (СГГ) и человеческий гамма-глобулин (ЧГГ). Дозы вводимых антигенов колебались от 200 до 0,5 мг на инъекцию. Развитие патологического процесса контролировали по уровню специфических антител методом количественной преципитации в геле и по протеинурии. Введение больших доз сывороточных белков (100-200 мг) приводило к развитию летальной анафилактической реакции, что исключало из эксперимента наиболее иммунореактивные особи. Поэтому данные дозы антигена были исключены. Для получения морфологически подтвержденной картины хронического гломерулонефрита требовалось проведение эксперимента в течение 6-12 месяцев. Способ моделирования хронического гломерулонефрита по F.J.Dixon et al рассматривается нами как прототип предлагаемого изобретения.

Существенным недостатком прототипа является медленное развитие патологического процесса в почках - до года.

Цель изобретения - ускорение развития экспериментального гломерулонефрита.

Известно, что стрессорные воздействия оказывают значительное влияние на развитие и течение патологических процессов. В частности, преобладание глюкокортикоидных гормонов над минералокортикоидами при стрессе приводит к подавлению функций защитных систем организма и угнетению воспалительного процесса [2]. Следовало ожидать, что изменение гормонального баланса на фоне интенсивного воздействия антигенного стимула (БСА) приведет к усилению иммунокомплексных повреждений в почках и уменьшит сроки развития патологического процесса.

В наших экспериментах использовали кроликов породы Шиншилла весом 2,5-3,5 кг. Патологический процесс моделировали в/в введением антигена, в качестве которого использовали БСА. На протяжении всей процедуры иммунизации контролировали титр специфических анти-БСА антител методом иммуноферментного анализа и состояние иммунокомплексообразования путем осаждения циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) полиэтиленгликолем с М.м. 6000 D (ПЭГ-6000) по методу Digeon М. et al.[3].

Суть изобретения состоит в том, что для ускорения развития патологического процесса в почках группу иммунизированных животных подвергали стрессорному воздействию путем пятичасовой иммобилизации в положении на спине. При этом контролировали изменение уровня специфических анти-БСА антител и ЦИК в сыворотке крови животных до и после иммобилизационного стресса. С целью морфологического подтверждения гломерулонефрита всех животных оперировали под нембуталовым наркозом, удаляли одну почку и иммуногистохимическими методами регистрировали отложение иммунных комплексов в почечной ткани. Анализировали структуру комплексов путем определения в отложениях иммуноглобулинов кролика и БСА. Результаты исследования в опытной группе сравнивали с контролем (иммунизированные, но нестрессированные животные).

Пример 1. Стрессорное воздействие изменяло динамику образования антител и циркулирующих иммунокомплексов в сыворотке крови животных. Результаты экспериментов представлены в таблице. Как видно из таблицы фиксация кроликов в положении на спине приводила к снижению титра анти-БСА антител и возрастанию ЦИК более чем в 2 раза, что способствовало более интенсивному отложению макроагрегатов в почках.

Пример 2. Характеристика морфологических изменений в почках Иммуногистохимический анализ почечной ткани, при котором оценивалось иммунокомплексоотложение по 4-бальной системе, показал, что степень выраженности фиксации макроагрегатов в группе стрессированных кроликов составила 3,43+0,15, тогда как в группе сравнения (без иммобилизации) - 2,92+0,17 (p < 0,05). Оперативное вмешательство по поводу удаления одной почки (получение материала для иммуногистохимических исследований) не являлось мощным стрессорным воздействием, так как животные находились под наркозом. Титры специфических анти-БСА антител и уровень ЦИК практически не изменились за время операции.

Таким образом, стрессорное воздействие существенно ускоряет процесс иммунокомплексообразования и обостряет течение экспериментального гломерулонефрита у кроликов. Весь эксперимент завершился в течении 4-х месяцев при достижении необходимого результата.

Литература

1. Dixon F.J. et al. // J. Exp. Med. - 1961, vol. 113, p. 899-907.

2. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. - Ростов-на-Дону: 1990, 223 с.

3. Digeon М. , Laver М., Risa J., Bach J.F. // Immunol. Meth. - 1977, vol. 16, p. 165-183.