5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-d-глицеро-d- галакто-нон-2- енопиранозоновая кислота в кристаллической форме, способы получения, фармацевтическая композиция и способ ее получения

Формула изобретения

1. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме.

2. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по п.1, кристаллы которой имеют низкое размерное соотношение.

3. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по п.2, кристаллы которой являются пластинчатыми.

4. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.1 - 3, в которой практически вся кристаллизационная вода теряется приблизительно при 80 - 90^oС.

5. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.1 - 4, характеризующаяся следующими рентгеноструктурными данными:

d(A) - 1(%)

10.06 - 30.25

6.77 - 69.81

6.63 - 89.61

6.35 - 12.69

6.05 - 54.56

5.38 - 25.11

5.05 - 98.58

4.61 - 12.58

4.42 - 100.00

4.31 - 8.28

4.17 - 11.67

3.98 - 75.00

3.90 - 52.61

3.77 - 20.33

3.69 - 36.17

3.48 - 26.53

3.41 - 53.25

3.37 - 17.61

3.16 - 18.39

3.02 - 31.08

2.98 - 9.25

2.92 - 6.28

2.87 - 13.58

2.82 - 10.78

2.78 - 6.78

2.74 - 18.03

2.69 - 15.33

2.65 - 6.25

2.63 - 6.44

2.59 - 11.44

2.49 - 14.31

2.45 - 18.81

2.41 - 8.64

2.35 - 11.36

2.19 - 5.42

2.13 - 12.25

2.11 - 6.56

2.02 - 8.33

1.98 - 5.47

6. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по п.1, кристаллы которой имеют высокое размерное соотношение.

7. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по п.6, кристаллы которой имеют игольчатую форму.

8. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.1, 6 или 7, в которой содержание воды является стабильным в широком интервале значений относительной влажности.

9. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.1, 6 - 8, в которой 1 моль кристаллизационной воды теряется приблизительно при 84 - 90^oС и еще 1 моль кристаллизационной воды теряется приблизительно при 135 - 143^oС.

10. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.1, 6 - 9, характеризующаяся следующими рентгеноструктурными данными:

d(A) - 1(%)

16.88 - 66.34

10.38 - 50.60

9.50 - 16.08

8.47 - 40.46

7.12 - 100.00

5.84 - 11.78

5.33 - 18.83

5.21 - 33.99

4.78 - 12.94

4.57 - 75.81

4.32 - 16.37

4.25 - 18.49

4.14 - 43.26

3.96 - 10.33

3.76 - 22.11

3.64 - 25.16

3.57 - 37.04

3.52 - 15.69

3.40 - 16.85

3.34 - 21.20

3.17 - 13.52

3.13 - 17.04

3.06 - 7.48

2.94 - 10.19

2.92 - 8.45

2.86 - 9.17

2.76 - 9.56

2.72 - 9.22

2.67 - 6.81

2.64 - 8.06

2.60 - 5.46

2.58 - 6.52

2.51 - 5.31

2.49 - 6.66

2.45 - 5.55

2.43 - 5.89

2.39 - 15.93

2.38 - 10.38

2.31 - 8.40

2.22 - 5.94

2.16 - 5.36

2.11 - 6.28

2.03 - 7.24

1.91 - 6.57

11. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.2 - 5, практически свободная от кристаллической формы по любому из пп.6 - 10.

12. 5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме по любому из пп.6 - 10, практически свободная от кристаллической формы по любому из пп.2 - 5.

13. Способ получения 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты в кристаллической форме, отличающийся тем, что он включает кристаллизацию 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты из водного раствора.

14. Способ по п.13 получения кристаллической формы по любому из пп.2 - 5.

15. Способ по п.14, в котором температура водного раствора выше чем примерно 50^oС.

16. Способ по п.15, в котором температура водного раствора составляет в интервале от 50 до 55^oС.

17. Способ по любому из пп.14 - 16, в котором в водный раствор вводится затравка кристаллов кристаллической формы по любому из пп.2 - 5.

18. Способ по п.13 получения кристаллической формы по любому из пп.6 - 10.

19. Способ по п.18, в котором температура водного раствора составляет менее чем примерно 40^oС.

20. Способ по п.19, в котором температура водного раствора составляет в интервале от 20 до 30^oС.

21. Способ по любому из пп.18 - 20, в котором в водный раствор вводится затравка кристаллов кристаллической формы по любому из пп.6 - 10.

22. Способ по любому из пп.13 - 21, включающий добавление противорастворителя в водный раствор.

23. Способ по п.22, в котором противорастворителем является кетон или алканол.

24. Способ по п.23, в котором противорастворителем является ацетон.

25. Способ получения кристаллической формы по любому из пп.2 - 5, который включает взаимопревращение кристаллической формы по любому из пп.6 - 10.

26. Способ по п. 25, в котором взаимопревращение осуществляется путем старения водного раствора.

27. Способ по п.25, в котором взаимопревращение осуществляется путем добавления основания к водному раствору.

28. Способ получения кристаллической формы по любому из пп.6 - 10, который включает добавление водного раствора 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты к аналогичному объему противорастворителя.

29. Способ по п.28, в котором противорастворителем является ацетон.

30. Фармацевтическая композиция, обладающая действием противовирусного агента и включающая 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновую кислоту в кристаллической форме и фармацевтически приемлемый носитель для нее.

31. Фармацевтическая композиция по п.30 в форме порошка.

32. Способ получения фармацевтической композиции в виде водного раствора или суспензии, который включает растворение в воде кристаллической 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к производным N-ацетил-нейраминовой кислоты и их использованию в медицине. Более конкретно, изобретение связано с конкретными физическими формами 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (4-гуанидиновый аналог ДАНА; также известен как 5-(ацетиламино)-2,6-ангидро-3,4,5- тридеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-еноновая кислота), их фармацевтическими рецептурами и их использованию в терапии.

В опубликованной заявке PCT/AU 91/00161 (публикация N WO 91/16320) описан ряд производных 5-(ацетиламино)-2,3,5-тридеокси-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (2,3-дидеокси-2,3-дидегидро-N-ацетил-нейраминовая кислота, ДАНА), включая 4-гуанидиновый аналог ДАНА. 4-Гуанидиновый аналог ДАНА получают путем взаимодействия соответствующего О-ацил-защищенного 4-аминового аналога ДАНА с S-метилизомочевиной, с последующим удалением защиты, хроматографической очисткой и сушкой с вымораживанием.

Структура 4-гуанидинового аналога ДАНА показана ниже:



Заявители обнаружили, что соединение формулы (I) может быть получено в кристаллической форме.

Таким образом, согласно первому аспекту изобретения предоставляется 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме.

Далее мы обнаружили, что вещество формулы (I) может быть получено путем кристаллизации при определенных условиях в виде кристаллического гидрата (в последующем Гидрат I). Гидрат I существует в виде кристаллов, имеющих малые размерные соотношения, например пластинчатые кристаллы, которые являются благоприятными для фармацевтических рецептур из-за их физических свойств, например хороших характеристик текучести. Содержание воды в Гидрате I определяется относительной влажностью (RH). Поглощение воды Гидратом 1 изменяется от нуля при нулевой относительной влажности до 10% при относительной влажности 90-100%.

Соединение формулы (I) также может кристаллизоваться в виде дигидрата (в последующем Гидрат II). Гидрат II существует в виде кристаллов, имеющих большие размерные соотношения, например игольчатые кристаллы. Содержание воды в этих кристаллах остается практически постоянным в широком интервале значений относительной влажности (RH примерно 10-90%). Стабильное содержание воды в Гидрате II является преимуществом данной кристаллической формы при использовании в фармацевтике.

Таким образом, согласно дополнительному аспекту изобретения предоставляется 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в форме кристаллов, имеющих малые соразмерные отношения, таких как пластинчатые кристаллы.

Согласно следующему аспекту изобретения предоставляется 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон- 2-енопиранозоновая кислота в форме кристаллов, имеющих большие размерные соотношения, например, игольчатых кристаллов.

Хотя пластинчатые кристаллы считаются типичной формой Гидрата I, а игольчатые кристаллы считаются типичной формой Гидрата II, понятно конечно, что нельзя исключить возможность существования при определенных условиях либо Гидрата I, либо Гидрата II в альтернативных формах или кристаллах. Следует понимать, что все такие альтернативные формы или альтернативный склад кристаллов охватываются объемом настоящего изобретения.

Кроме того, предоставляется 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетра- деокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в форме кристаллов, имеющих стабильное содержание воды в широком интервале значений относительной влажности, например 10-90%.

Гидрат I теряет практически всю свою кристаллизационную воду приблизительно при 80-90^oC. Разложение происходит при 299^oC.

Гидрат II теряет один моль кристаллизационной воды приблизительно при 84-90^oC и еще один моль кристаллизационной воды приблизительно при 135-143^oC.

Согласно дополнительному аспекту изобретения предоставляется 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто- нон-2-енопиранозоновая кислота в форме кристаллогидрата, который теряет практически всю свою кристаллизационную воду приблизительно при 80-90^oC.

Согласно еще одному аспекту изобретения предоставляется 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D- галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в форме кристаллогидрата, который теряет один моль кристаллизационной воды приблизительно при 84-90^oC и еще один моль кристаллизационной воды приблизительно при 135-143^oC.

В предпочтительном аспекте изобретение представляет 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто- нон-2-енопиронозоновую кислоту в форме Гидрата I, как он определен в изобретении, практически не содержащую Гидрата II, как он определен в изобретении.

В дополнительном предпочтительном аспекте изобретение предоставляет 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновую кислоту в форме Гидрата II, как он определен в изобретении, практически не содержащую Гидрата I, как он определен в изобретении.

Термин "практически не содержащая" или "практически свободная от" означает, что содержание альтернативного гидрата составляет менее 5%, как, например, менее 2%, например, менее 1% альтернативного гидрата.

5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D- галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота может быть получена в кристаллической форме путем кристаллизации соединения из водного раствора.

Каждый из Гидратов I или II может быть получен в чистом виде, свободном от альтернативного гидрата, путем регулирования концентрации раствора и температуры, при которых происходит кристаллизация.

Обычно 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота может быть получена в форме Гидрата I путем кристаллизации вещества из водного раствора при температуре выше чем приблизительно 50^oC, предпочтительно при 50-55^oC.

Обычно 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота может быть получена в форме Гидрата II, путем кристаллизации соединения из водного раствора при температуре выше, чем приблизительно 40^oC, предпочтительно при 20-30^oC.

В типичном случае кристаллизация 5-ацетамидо-2,3,4,5- тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиноранозоновой кислоты из водного раствора при температуре в интервале приблизительно 40-50^oC, приводит к образованию снеси кристаллов пластинчатой и игольчатой формы. Такие смеси неблагоприятны для приготовления фармацевтических рецептур из-за различных физических свойств Гидрата I и Гидрата II, в частности свойств их текучести.

Введение в водный раствор 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси- 4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты затравки кристаллов Гидрата 1 или Гидрата II может привести к кристаллизации затравочного гидрата. Поэтому получение Гидрата I или Гидрата II необходимо осуществлять в отсутствии затравки нежелательного гидрата. Наоборот, Гидрат I может быть получен путем введения в водный раствор 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4- гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты затравки кристаллов Гидрата I, а Гидрат II может быть получен путем введения затравки кристаллов Гидрата II в водный раствор 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон- 2-енопиранозоновой кислоты.

Для получения Гидрата II предпочтительно применять относительно разбавленный водный раствор, например, раствор 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто- нон-2-енопиранозоновой кислоты в 15-30 объемах воды, например, в 20 объемах воды. Гидрат I может удобно кристаллизоваться из относительно концентрированного водного раствора, например, раствора 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4- гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты в 12-20 объемах воды, как, например, в 12-15 объемах воды.

Мы обнаружили, что Гидрат II может превращаться в Гидрат I в водной суспензии или насыщенном растворе. Такое взаимное превращение может быть осуществлено путем длительного старения водной суспензии или насыщенного раствора Гидрата II, например, старения в течение ряда дней, например, более 10 суток, например, около 15 суток, альтернативно, взаимное превращение может быть осуществлено в присутствии основания, например, органического основания, такого как имидазол.

Выделение либо Гидрата I, либо Гидрата II из водного раствора может быть усилено путем добавления в раствор подходящего противорастворителя. Подходящими противорастворителями являются смешивающиеся с водой растворители, в которых соединение формулы (I) имеет низкую растворимость. Удобно, чтобы этот противорастворитель был кетоном, таким как ацетон, или алканолом, таким как пропанол-2. Предпочтительным противорастворителем является ацетон.

Мы также обнаружили, что добавление водного раствора 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто- нон-2-енопиранозоновой кислоты к аналогичному объему противорастворителя, который определен выше, приводит к осаждению Гидрата II. Например, добавление водного раствора 5-ацетамидо-2,3,4,5- тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты в 12-15 объемах воды к 12-20 объемам ацетона дает кристаллы Гидрата II.

Описанные здесь способы получения кристаллического материала, и, в частности, способы получения Гидрата I и Гидрата II, составляют дополнительные аспекты настоящего изобретения.

5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D- галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме может применяться в качестве противовирусного агента, как описано в заявке WO 91/16320, ссылка на которую приведена для сведения.

5-Ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D-глицеро-D- галакто-нон-2-енопиранозоновая кислота в кристаллической форме может входить в состав фармацевтической композиции для использования в качестве противовирусного агента, как описано в заявке WO 91/16320.

Предпочтительные фармацевтические рецептуры или готовые препаративные формы 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино -D-глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты включают порошкообразные составы и водные растворы или суспензии. Для приготовления предпочтительных порошкообразных составов требуется микронное измельчение лекарственного вещества. Хорошие свойства текучести Гидрата I делают его особенно пригодным для микронного измельчения. Гидрат II обладает адекватными свойствами текучести, а также особенно быстрой скоростью растворения в воде. Эти свойства Гидрата II делают его особенно благоприятным для приготовления водных растворов или суспензий,

Гидраты I и II подвергались исследованию порошковой дифракции рентгеновских лучей. Дифрактограммы были получены при использовании дифрактометра Сименс D-500 и излучения CuK. Интенсивности рентгеновского излучения измеряли с увеличением на 0,02 градуса с 5 секундными интервалами с использованием сцинтилляционного счетчика в интервале величин между 5 и 55^o2 . В Таблицах 1 и 2 соответственно приведены расстояния d и интенсивности I, полученные для Гидрата I и Гидрата II (см. в конце описания).

Следующие примеры иллюстрируют изобретение, однако они не предназначены для ограничения его. Все температуры даны в ^oC.

Пример 1. Получение Гидрата I

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (5,0 г) и 60 мл воды нагревают до 100^oC, чтобы получить прозрачный раствор. Раствор охлаждают в течение 30 минут до 55^oC и выдерживают между 55 и 50^oC в течение 4 часов, получая суспензию кристаллов. В течение 90 минут добавляют 80 мл ацетона, причем температуру поддерживают между 48 и 55^oC. Образовавшуюся суспензию перемешивают 1 час, давая температуре снизиться примерно до 20^oC; затем суспензию оставляют стоять в течение 17 часов при комнатной температуре. Продукт собирают с помощью вакуумной фильтрации, и осадок на фильтре промывают (5 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 10 мл) и затем 10 мл ацетона. Продукт сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 4,5 г Гидрата I (пластинчатые кристаллы).

Спектр ПМР (D₂O): 2,04 (3H, с.), 3,67 (2H, м.), 4,23 (1H, м.), 4,42 (2H, м.), 5,63 (1H, д., J = 2,5 Гц).

ИК-спектр (Нуйол): 3248, 3338, 3253; NH, OH 1692, 1666, 1646, 1619, 1575; CO (CH₃CONH, CO₂), CN.

Содержание воды - 8,4 вес. % в расчете на C₁₂H₂₀N₄O₇ 1,7H₂O.

Пример 2. Получение Гидрата I

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (15,0 г) и 180 мл воды нагревают до 100^oC, получая прозрачный раствор. Раствор осветляют путем вакуумной фильтрации через фильтровальную бумагу, затем охлаждают приблизительно до 55^oC и выдерживают при температуре между 55 и 50^oC в течение 4 часов, чтобы обеспечить начало кристаллизации. В течение 120 минут добавляют 210 мл ацетона, причем температуру поддерживают между 48 и 55^oC. Образующуюся суспензию перемешивают и охлаждают до 30^oC и затем суспензии дают стоять в течение 17 часов при комнатной температуре. Продукт отфильтровывают и промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 30 мл) и затем 30 мл ацетона. Твердое вещество сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 12,0 г Гидрата I (пластинчатые кристаллы),

Характеристики вещества см. выше.

Пример 3. Получение Гидрата II

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (10,0 г) и 100 мл воды нагревают до 95^oC. Полученный раствор осветляют путем вакуумной фильтрации. Затем раствор охлаждают до 30^oC и добавляют при перемешивании в течение 5 минут 250 мл ацетона. Образовавшейся густой белой суспензии дают стоять в течение 20 час при комнатной температуре. Методом вакуумной фильтрации собирают твердое вещество и промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 20 мл) и затем 20 мл ацетона. Твердое вещество сушат в течение 24 час в вакуумном шкафу при 35^oC и затем доводят до равновесия с атмосферной влагой при комнатной температуре и влажности, получая 8,16 г Гидрата II (игольчатые кристаллы).

Характеристики вещества см. выше.

Содержание воды - 10,6 вес. %; в расчете на C₁₂H₂₀N₄O₇ 2H₂O - 9,8%.

Пример 4. Получение Гидрата II

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (10,0 г) и 400 мл воды нагревают 2 час при 20^oC. Полученный раствор осветляют путем вакуумной фильтрации. Добавляют 110 мл ацетона, и твердое вещество начинает кристаллизоваться. Образовавшуюся суспензию перемешивают в течение 2,5 час при 20^oC. Твердое вещество собирают методом вакуумной фильтрации и промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 20 мл) и затем 20 мл ацетона. Твердое вещество сушат 24 час в вакуумном шкафу при 30^oC и затем доводят до равновесной влажности при комнатной температуре и влажности, получая 7,7 г Гидрата II (игольчатые кристаллы).

Характеристики вещества см. выше.

Содержание воды - 11,1 вес. %; в расчете на C₁₂H₂₀N₄O₇ 2H₂O - 9,8%.

Пример 5. Получение Гидрата II

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (50,0 г) и 1150 мл воды нагревают до 75^oC. Полученный раствор осветляют путем вакуумной фильтрации и промывают его 100 мл воды. Затем раствор охлаждают до 7^oC в течение 1 час и добавляют 500 мл ацетона. Образовавшийся раствор медленно перемешивают 0,5 час, и в течение этого времени начинает кристаллизоваться твердое вещество. Затем добавляют в течение 2 час 750 мл ацетона, поддерживая температуру от 5 до 10^oC. Продукт собирают методом вакуумной фильтрации и промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 100 мл) и затем 100 мл ацетона. Твердое вещество сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 46,0 г Гидрата II (игольчатые кристаллы)

Содержание воды - 9,8 вес.%; в расчете на C₁₂H₂₀N₄O₇ 2H₂O - 9,8%.

Данные рентгеноструктурного анализа согласуются со структурой Гидрата II ( > 99%).

Пример 6. Осаждение Гидрата II

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (50,0 г) и 600 мл воды нагревают до 100^oC. Полученный горячий осветленный раствор добавляют в течение 8 минут к 700 мл ацетона, быстро перемешиваемого при комнатной температуре, что вызывает повышение температуры смеси от 20 до 56^oC и осаждение твердого вещества. Образовавшейся суспензии дают охладиться до 20^oC при перемешивании, затем твердое вещество собирают методом вакуумной фильтрации и промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 100 мл) и затем 100 мл ацетона. Твердое вещество сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 47,9 г Гидрата II (игольчатые кристаллы).

Содержание воды - 10,0 вес.%; в расчете на C₁₂H₂₀N₄O₇ 2H₂O - 9,8%.

Данные рентгеноструктурного анализа согласуются со структурой Гидрата II ( > 99%).

Пример 7. Кристаллизация Гидрата I из воды

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (35,7 г) и 350 мл воды нагревают до 95^oC, получая прозрачный раствор. Значение pH раствора доводят до 7,0 (от pH 6,4) водной уксусной кислотой (100 мкл, 10 об.%). Образовавшемуся раствору дают охладиться до комнатной температуры при перемешивании, получая суспензию кристаллов. Продукт собирают методом вакуумной фильтрации, затем сушат в вакууме при комнатной температуре, получая 28,9 г Гидрата I (пластинчатые кристаллы).

ИК-спектр согласуется со структурой Гидрата I.

Пример 8. Получение Гидрата II путем добавления затравки

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (30,0 г) и 540 мл воды нагревают при 75^oC, получая раствор. Образовавшийся раствор осветляют путем вакуумной фильтрации и промывают его 54 мл воды. Затем раствор нагревают до 100^oC, охлаждают до 40^oC, вводят затравку Гидрата II (0,3 г). При дальнейшем понижении температуры до комнатной происходит кристаллизация. Образовавшуюся суспензию перемешивают 1 час при комнатной температуре, охлаждают до 5^oC; затем в течение 1,5 часов добавляют 600 мл ацетона. Твердое вещество собирают методом вакуумной фильтрации, промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 60 мл) и затем 60 мл ацетона. Твердое вещество сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 26,5 г Гидрата II (игольчатые кристаллы).

Данные рентгеноструктурного анализа согласуются со структурой Гидрата II (90-95%), (5-10% Гидрата I).

Пример 9. Взаимное превращение Гидрата II в Гидрат I при старении

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (10,0 г) и 200 мл воды нагревают при 100^oC, получая раствор. Раствор быстро охлаждают до 30^oC, вносят затравку Гидрата II (0,05 г) и затем выдерживают в течение ночи без перемешивания. В оптическом микроскопе наблюдали исключительно характерные иглы Гидрата II. Суспензию подвергают старению без перемешивания при комнатной температуре в течение 11 суток (когда в оптическом микроскопе наблюдали наличие нескольких кристаллов Гидрата I), затем суспензию перемешивают 3 суток. Добавляют 200 мл ацетона, суспензию перемешивают 1 час Твердое вещество собирают методом вакуумной фильтрации, и промывают 2 раз смесью 4:1 ацетона и воды (по 20 мл) и затем 20 мл ацетона. Продукт сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 9,0 г пластинчатых кристаллов Гидрата I.

Данные рентгеноструктурного анализа согласуются со структурой Гидрата II ( > 99%).

Пример 10. Взаимное превращение Гидрата II в Гидрат I при использовании основания

Суспензию Гидрата II 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4- гуaнидинo-D-глицepo-D-гaлaктo-нoн-2-eнoпиpaнoзoнoвoй кислоты (5,0 г) и 30 мл воды, содержащей 2,96 г имидазола, перемешивают и нагревают при 30^oC в течение 40 часов. Оставшееся твердое вещество собирают методом вакуумной фильтрации, промывают водой (2 раза по 1 мл и 2 раза по 5 мл). Продукт сушат на воздухе при комнатной температуре и влажности, получая 3,98 г Гидрата I (пластинчатые кристаллы).

ИК-спектр согласуется со структурой Гидрата I.

Пример 11. Получение Гидрата I путем добавления затравки

Смесь 5-ацетамидо-2,3,4,5-тетрадеокси-4-гуанидино-D- глицеро-D-галакто-нон-2-енопиранозоновой кислоты (5,0 г) и 60 мл воды нагревают при 100^oC, получая раствор. Образовавшийся раствор осветляют путем вакуумной фильтрации. Затем полученный раствор охлаждают примерно до 50^oC, вводят затравку Гидрата I и оставляют без перемешивания на 1 час при 50-55^oC. Поддерживая температуру при 48-55^oC, добавляют 70 мл ацетона. Суспензию перемешивают 1 час при 50-55^oC, затем подвергают старению в течение ночи при комнатной температуре без перемешивания. Твердое вещество собирают методом вакуумной фильтрации, промывают 2 раза смесью 4:1 ацетона и воды (по 10 мл) и затем 2 раза ацетоном (по 10 мл). Продукт сушат в вакууме, затем доводят до равновесия при комнатной температуре и влажности, получая 3,8 г Гидрата I (пластинчатые кристаллы).

Данные рентгеноструктурного анализа согласуются со структурой Гидрата I (> 99%).

Прилагают графики, показывающие сопоставление данных, полученных методом дифференциальной сканирующей калориметрии и термально-гравиметрическим методом (DSC/TG), которые подтверждают потерю кристаллизационной воды в интервале температур, указанных в пп. 4 и 9.

Фиг., А показывает, что в гидрате 1 вся вода связана аналогичным образом и теряется при температуре примерно 80^oC.

На фиг. , В представлены 2 эндотермы потери воды из гидрата II при температурах примерно 84^oC и 140^oC.

Пики (фиг. , А и В), имеющие место при температуре выше 250^oC, являются следствием разложения образца.