моноэфирные соединения, фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Моноэфирное соединение формулы I

Nu-O-Fa,

где O является кислородом;

Nu является аналогом нуклеозида;

Fa является ацильной группой мононенасыщенной C₁₈ или C₂₀-9 жирной кислоты, причем эта жирная кислота этерифицирует гидроксильную группу в 5"-положении сахарной части нуклеозидного аналога или концевую гидроксильную группу на нециклической группе нуклеозидного аналога,

и причем Nu представляется формулой II

B-S,

где S является моносахаридным производным, выбираемым из: 1--D-рибофуранозы, 1--D-арабинофуранозы, 2-дезокси-1--D-рибофуранозы, 2,3-дидезокси-1--D-рибофуранозы, 4-гидроксиметил-2-циклопентен-1-ила или 2,3-дигидроксипропила;

В является гетероциклической кольцевой системой, выбираемой из следующих формул:



где R₁ - NH₂;

Y - CCH, или



где R₂ - H, OH;

R₃ - H, OH, NH₂, или



где R₄ - NH₂;

R₅ - H;

R₆ - CH₃, F, I;

при условии, что когда S является 1--D-арабинофуранозой, В не может быть



2. Соединение по п.1, где B-S является рибавирином.

3. Соединение по п.1 или 2, где Fa является олеиновой кислотой, элаидиновой кислотой или эйкозеновой кислотой, цис- или транс-.

4. Соединение по п.1, где B-S является рибавирином, а Fa является олеиновой кислотой.

5. Соединение по п.1, где B-S является рибавирином, а Fa является элаидиновой кислотой.

6. Соединение по п.1, где B-S является рибавирином, а Fa является эйкозеновой кислотой.

7. Фармацевтическая композиция для лечения вирусных инфекций, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит эффективное количество соединения по любому из предшествующих пунктов, а также фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

8. Соединение формулы I по п.1 для получения фармацевтической композиции для лечения вирусной инфекции.

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к группе новых соединений общей формулы I:

B-S-O-Fa

где B-S представляет нуклеозидный аналог, в котором B представляет собой произвольно замещенную гетероциклическую кольцевую систему, является моносахаридным производным, O представляет собой кислород, а Fa является ацильной группой мононенасыщенной C18 или C20 жирной кислоты. Изобретение также касается противовирусных фармацевтических и ветеринарных композиций, содержащих соединение с формулой I, одно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Дополнительная часть этого изобретения представляет собой способ лечения больного человека или животного, страдающего вирусной инфекцией, и снижения уровня инфицированности путем введения соединения формулы I.

Подобным образом некоторые соединения формулы I могут использоваться в качестве антибиотика или при лечении раковых заболеваний.

Большое число тяжелых заболеваний, таких как СПИД, гепатит B, герпес и гинекологический рак, как отдаленный результат папилломных выростов, вызываются вирусной инфекцией.

Вирусы - это очень мелкие инфицирующие агенты, которые неспособны к независимой репликации и таким образом в отношении репликации зависят от клетки-хозяина. Генетический материал вируса представляет собой или РНК или ДНК.

При инфицировании организма вирус связывается с определенной клеткой-хозяином. После связывания вирус проникает через цитоплазматическую мембрану, и вирусный геном освобождается из вирусной частицы. Вирусный геном обычно транспортируется в клеточное ядро, где реплицируются новые вирусные геномы. В цитоплазме синтезируется новый вирусный блок, и новые частицы формируются или вблизи цитоплазматической или вблизи ядерной мембраны.

Некоторые вирусы имеют геномный материал, который прямо (ДНК-вируса) или косвенно (обратная транскрипция РНК, ретровирусы) включается в геномы клеток-хозяев.

Внеклеточные вирусы нейтрализуются циркулирующими антителами, а клеточный иммунный аппарат может атаковать и удалять инфицированные клетки. Вирусы внутри инфицированных клеток ускользают от иммунного надзора, если вирусные антигены не представлены на поверхности клеток.

Иммунная атака на инфицированные органы участвует в течение заболевания с помощью механизма, обычно называемого индуцированной вирусом иммунопатологией.

Механизмы, лежащие в основе некоторых из наиболее важных вирусных заболеваний, различны.

При поражении ВИЧ-инфекцией заражаются и разрушаются Т-хелперные клетки больного. Это приводит к состоянию иммунодефицита, что делает больного очень восприимчивым даже к инфекциям, с которыми в норме иммунная система справлялась без каких-либо опасных для больного эффектов.

Вирус гепатита B инфицирует клетки печени, и состояние больного может ухудшиться, когда иммунная система старается освободить организм от этих инфицированных клеток. Если инфекция не преодолевается иммунной системой на ранней стадии, результатом будет хронический гепатит. Больной, таким образом, будет инфицированным в течение всей его жизни. У части больных хронический гепатит перейдет в цирроз или рак печени.

При инфекциях, вызванных вирусом Herpes simplex, вирус проникает сначала в эпидермальные клетки. Вирус Herpes simplex доходит до нервного центра, где он пребывает латентным до того, как вызовет вспышку заболевания через какие-то интервалы времени. Хотя в большинстве случаев нет угрозы жизни, герпесная инфекция болезненна, и больной будет инфекционным каждый раз, когда появляется вспышка заболевания.

У вируса папилломы, особенно в генитальном тракте женщин, вирусный геном локализуется в ядрах эпителиальных клеток, но не интегрируется в клеточные хромосомы. Это является персистентным состоянием, а для некоторых вызывающих опухоли штаммов интеграция наконец происходит, приводя к злокачественному перерождению. Вирусный ген в этом случае обладает определенным инициирующим действием в процессе, приводящем к раку.

Если иммунной системе удается освободить организм от вируса на ранней стадии, это приводит к пожизненному иммунитету. С другой стороны, если вирус слишком агрессивен и избежит действия иммунного аппарата, иммунитет не создается, и результатом является состояние постоянной инфекции.

В результате существования различных механизмов стратегия терапии должна быть различной при этих состояниях. Непременной целью при лечении ВИЧ/СПИД должно быть освобождение организма больного от инфицирующего вируса. На данном этапе до этого, по-видимому, далеко. Однако многого можно достичь путем улучшения общего состояния больного. Снижение уровня инфицированности вирусом (вирусной нагрузки) должно увеличивать продолжительность бессимптомного периода и снижать инфицированность, которая крайне важна в отношении эпидемиологической ситуации. Все используемые в настоящее время противовирусные средства обладают токсическими побочными действиями, что делает сейчас достаточно действенное лечение невозможным.

Предполагается, что по всему миру существует от 250 до 300 миллионов носителей гепатита B. Известно, что у большого числа из них разовьются гепатомы или печеночная недостаточность в результате инфекций. Обещающие результаты при лечении состояния носительства в последние годы были получены путем индукции иммунного ответа интерфероном. Терапия, снижающая вирусную нагрузку, важна при этом режиме, и так как эффективное лечение острого гепатита B должно снижать число больных, у которых развивается состояние носительства. Издавна идентифицированный вирус гепатита C вызывает очень большое число случаев гепатита, из которых у большого числа развивается носительство. Предварительные исследования, по-видимому, показывают, что состояние носительства может быть прекращено с помощью таких же терапевтических режимов, что и для гепатита B. Herpes simplex 1 и 2 часто инфицирует людей, вызывая состояние носительства с рецидивами локальных инфекций.

Генерализованные инфекции, включая энцефалит, редки, но являются катастрофой для больного. Существует большое индивидуальное разнообразие в частоте местных инфекций для тех больных, у которых поражения присутствуют на гениталиях или на лице, что создает серьезную проблему со здоровьем, физически, психически и социально. Ни при одном из терапевтических режимов, разработанных до сих пор, не излечиваются латентные инфекции клеток центральной нервной системы. Цель терапии состоит, таким образом, в том, чтобы свести к минимуму клинические проявления рецидивов как в отношении симптомов, так и продолжительности.

Распространение инфекций, вызванных вирусом генитальной папилломы, очень сильно увеличилось в течение 1980-х годов. В настоящее время установлено, что некоторые генотипы являются онкогенными, то есть они инициируют изменения в клетке, которые после латентного периода приводят к раку. Вирус папилломы генитального тракта дает длительно присутствующие инфекции. Факторы, вызывающие злокачественную трансформацию поражений, еще недостаточно понятны, но предполагается, что большое значение имеет иммунная система. Полагают, что поражения, которые демонстрируют прогрессирующее развитие в течение месяцев и лет, и являются теми, которые дают развитие рака. Генитальные папилломы, называемые кондиломами, в настоящее время лечатся физическими средствами, такими как хирургическое удаление, некротизирующие средства, удаление жидким азотом и тому подобное. Остроконечные кондиломы сначала являются доброкачественными опухолями с измененным набором ферментов, воздействующих, между прочим, на метаболизм нуклеозидных аналогов. Нуклеозидные пролекарства воздействуют на эписомную пролеферацию вируса папилломы, индуцируя тем самым регрессию кондилом.

Профилактическая вакцинация была успешной для острых инфекций, таких как полиомиелит, корь, эпидемический паротит и т.д., но никакой эффективной вакцинации не было разработано для многих других тяжелых вирусных инфекций.

Даже хотя были предприняты интенсивные усилия по получению эффективных противовирусных химиотерапевтических препаратов в течение последних десятилетий, не было предложено удовлетворительного медикаментозного лечения для большинства вирусных заболеваний в настоящее время. Эти усилия были особенно велики из-за появления ВИЧ и родственных вирусных инфекций, которые распространяются по миру с тревожащей скоростью, однако эффекты, полученные с помощью средств, таких как азидотимидин (АЗТ) и ацикловир (АЦВ), при СПИД и герпесе можно охарактеризовать как частично успешные. Эти наиболее обещающие противовирусные средства являются производными природно встречающихся нуклеозидов, которые были модифицированы или в основании или в сахаридной части. Они, однако, не обладали тем терапевтическим потенциалом, на который надеялись, так как они вызывают серьезные побочные эффекты у некоторых больных или демонстрируют слабый эффект или его отсутствие у других. Кроме того, лечение этими средствами чрезвычайно дорого. По этим причинам только больные, страдающие очень тяжелыми вирусными инфекциями, такими как СПИД, получают такое лечение. Пациентов, страдающих менее серьезными, но также очень болезненными вирусными инфекциями, часто оставляют без лечения, чтобы дать инфекции пройти своим путем.

Нелеченный больной несет большую инфекционную нагрузку и создает риск заражения для своего окружения. Если он лечится противовирусным средством, то цель состоит в том, чтобы снизить инфекционную нагрузку так, чтобы дать возможность иммунной системе организма побороть инфекцию. Дополнительная цель состоит в том, чтобы снизить контагиозность и, таким образом, число новых больных и носителей.

Таким образом, потребность в соединениях, обладающих лучшим терапевтическим индексом, очевидна.

Потребность особенно велика при хронических и рецидивируших вирусных инфекциях с опасной острой фазой или длительными болезненными эффектами на здоровье или самочувствие, таких как СПИД, гепатит B и C, инфекций герпесной группы и инфекций, вызванных вирусом папилломы. Аналогично существует также потребность в противовирусных средствах, используемых при лечении животных, страдающих вирусными заболеваниями.

Чтобы улучшить эффект были разработаны производные нуклеозидов, которые или модифицированы в азотном основании или в сахаридной части. В частности, были разработаны эфиры жирных кислот нуклеозидных аналогов, чтобы улучшить липофильность и достичь лучшего проникновения через мембрану.

Так из патента США 3984396 (Witkowski et al) известны эфиры рибавирины с ароматическими и насыщенными жирными кислотами, имеющими 1 - 18 атомов углерода.

В настоящее время неожиданно было обнаружено, что избранная группа эфиров жирных кислот противовирусных нуклеозидных аналогов, где жирная кислота является мононенасыщенной C18 или C20 кислотой, дает намного улучшенный эффект.

Хотя известно, что как нуклеозиды и нуклеозидные аналоги, сами по себе, так и также некоторые ненасыщенные жирные кислоты, сами по себе, проявляют противовирусное действие, величина эффектов, достижимых с помощью соединений данного изобретения, показывает, что это не аддитивное, а скорее синергидное действие, которое специфично для соединений с формулой I. Механизм, стоящий за этими эффектами, в настоящее время неизвестен. Вероятно, нельзя считать, что они возникают только благодаря действию на уровне мембраны или благодаря эффекту доставки к мишени действия.

Кроме того, также ясно, как будет видно из биологических примеров, включенных сюда, что эффективность достигается с помощью этих соединений в системах, где более низкие эффекты могут достигаться с помощью исходных нуклеозидных соединений.

Соединения этого изобретения могут быть представлены общей формулой I:

B-S-O-Fa,

где O является кислородом, B-S является нуклеозидным аналогом, в котором B представляет собой произвольно замещенную гетероциклическую кольцевую систему, а S является моносахаридным производным, и Fa является ацильной группой мононенасыщенной C18 или C20 жирной кислоты.

Природные нуклеозиды, названные так благодаря их присутствию в РНК и ДНК, являются молекулами, содержащими гетероциклическое основание, такое как цитозин, урацил, тимидин, аденин или гуанин, связанное с рибозой или 2-дезоксирибозным элементом. В нуклеозидных аналогах или основание, или рибозный элемент модифицированы. Например, рибозная единица может быть заменена другим сахаридным элементом или нециклической цепью.

Модифицированное основание может относиться или к соединениям, выбираемым из групп пиримидинов или пуринов, замещенных иначе, чем упомянутые здесь природные основания, или произвольно замещенным гетеро-(моно или поли)циклическим кольцевым системам, которые не являются пиримидином или пурином.

Жирная кислота этерифицируется с гидроксильной группой сахаридной части нуклеозидного аналога или с гидроксильной группой на нециклической группе нуклеозидного аналога.

Нуклеозидные аналоги, которые могут быть выбраны в качестве B-S в соединениях с формулой I, могут быть предпочтительно представлены формулой II:

B" - S",

где S" является или моносахаридным производным, выбираемым из:

1- -D-рибофуранозы, 1- -D-арабинофуранозы, 2-дезокси-1- -D-рибофуранозы, 2,3-дидезокси-1- -D- рибофуранозы, 2,3-дидегидро-2,3-дидезокси-1- -D-рибофуранозы, 2-дезокси-2-фтор-1- -D-арабинофуранозы, 2,3-дидезокси-3-азидо-1- -D-рибофуранозы или 4-гидроксиметил-2-циклопентен-1-ила,

или выбирется из группы из 2-гидроксиэтоксиметила, 4-гидрокси-3-(гидроксиметил)-бутила, 2-гидрокси-1-(гидроксиметил)-этоксиметила, 2,3-дигидроксипропокси- или 2,3-дигидроксипропила;

и B" является гетероциклической кольцевой системой, выбираемой из (I)



где X = O, S, NH, R₁ = NH₂, CH₃, CH₃₃O и A = NH, S, Se, CH₃, O.

или

(ii)



где X = NH, S, O, Y = H, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, CH₂CN, CCH

или

(iii)



или

(iv)



где R₄ = H, NH₂, NHOH, NHCOCH₃, NHCH₃, NHNH₂; R₅ = H, F, Cl, Br, I, CH₃, CH₃; R₆ = CH₃, F, I, CH=CHBr, CH₂OH, CH₂NH₂, CCCH

или

(v)



где R₂ = OH, SH, H, Cl, R₃ = H, OH, Cl, SH, NH₂.

Примерами нуклеозидных аналогов являются:



III = 1- -D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид (рибавирин),

IV = 2- -D-рибофуранозилселеназол-4-карбоксамид (селеназол),

V = 4-гидрокси-3- -D-рибофуранозилпиразол-5-карбоксамид (пиразофурин, пиразомицин), VI = 2"-дезоксикоформицин.

Примерами других аналогов нуклеозида являются:



VII = BVAU, VII = FIAC, IX = ddC, X = D4T



XI = Ацикловир XII = Ганцикловир



XIII = Карбовир, XIV = ddI



XV = (S)-DHPA, XVI = ddA

Из перечисленных соединений эфиры жирных кислот VI (2"-дезоксикоформицин) представляют особый интерес при лечении рака, тогда как эфиры жирных кислот V (пиразомицин) могут использоваться в качестве антибиотиков.

Существует несколько систем для обозначения положения двойных связей в жирных кислотах. В данной заявке используется система, в которой положение двойной связи в ненасыщенных жирных кислотах отсчитывается от концевой метильной группы. Эйкозеновая кислота (C20:1 -9 ), например, имеет 20 атомов углерода в цепи, и двойная связь находится между 9 атомом углерода и 10, считая от конца цепи.

Избранная группа жирных кислот, с которыми можно провести реакцию с нуклеозидными аналогами для получения сложных эфиров по этому изобретению с выраженной активностью, как было обнаружено представляет только C18 или C20 мононенасыщенные жирные кислоты. Кроме того, даже хотя наблюдаемый эффект несколько различен для кислот с одной и той же цепи, когда двойная связь находится в цис или транс конфигурации, обе демонстрируют сильную активность.

Те C18 или C20 жирные кислоты, которые связаны с нуклеозидными аналогами, дают удивительно повышенный эффект, являются следующими:

олеиновая кислота (C18:1, цис),

элаидиновая кислота (C18:1, транс),

эйкозеновая кислота (C20:1, цис) и (C20:1, транс).

Предпочтительные представители соединений по этому изобретению перечислены ниже: сложный эфир рибавирина и олеиновой кислоты, эфир рибавирина и элаидиновой кислоты, эфир рибавирина и цис-эйкозеновой кислоты, эфир рибавирина и транс-эйкозеновой кислоты, эфир селеназола и олеиновой кислоты, эфир селеназола и элаидиновой кислоты, эфир селеназола и цис-эйкозеновой кислоты, эфир селеназола и транс-эйкозеновой кислоты, эфир пиразомицина и олеиновой кислоты, эфир пиразомицина и элаидиновой кислоты, эфир пиразомицина и цис-эйкозеиновой кислоты, эфир пиразомицина и транс-эйкозеновой кислоты, эфир 2"-дезоксикоформицина и олеиновой кислоты, эфир 2"-дезоксикоформицина и элаидиновой кислоты, эфир 2"-дезоксикоформицина и цис-эйкозеиновой кислоты, эфир 2"-дезоксикоформицина и транс-эйкозеновой кислоты, эфир d4T и цис-эйкозеиновой кислоты, эфир d4T и олеиновой кислоты, ddC и элаидиновой кислоты, эфир ddC и цис-эйкозеновой кислоты, эфир ddC и транс-эйкозеновой кислоты, эфир ddI и олеиновой кислоты, эфир ddI и элаидиновой кислоты, эфир ddI и цис-эйкозеновой кислоты, эфир ddI и транс-эйкозеновой кислоты, эфир карбовира и олеиновой кислоты, эфир карбовира и элаидиновой кислоты, эфир карбовира и цис-эйкозеновой кислоты, эфир карбовира и транс-эйкозеновой кислоты, эфир (S)-DHPA и олеиновой кислоты, эфир (S)-DHPA и элаидиновой кислоты, эфир (S)-DHPA и цис-экозеновой кислоты, (S)-DHPA и транс-эйкозеновой кислоты, эфир BVARAU и олеиновой кислоты, эфир BVARAU и элаидиновой кислоты, эфир BVARAU и цис-эйкозеновой кислоты, эфир BVARAU и транс-эйкозеновой кислоты, эфир BVDU и олеиновой кислоты, эфир BVDU и элаидиновой кислоты, эфир BVDU и цис-эйкозеновой кислоты, эфир BVDU и транс-эйкозеновой кислоты, эфир FIAC и олеиновой кислоты, эфир FIAC и элаидиновой кислоты, эфир FIAC и цис-эйкозеновой кислоты, эфир FIAC и транс-эйкозеновой кислоты, эфир EICAR и олеиновой кислоты, эфир EICAR и элаидиновой кислоты, эфир EICAR и цис-эйкозеновой кислоты, эфир EICAR и транс-эйкозеновой кислоты, эфир 2"-F"ARA-рибавирина и олеиновой кислоты, эфир 2"-F"ARA-рибавирина и элаидиновой кислоты, эфир 2"-F"ARA-рибавирина и цис-эйкозеновой кислоты, эфир 2"-F"ARA-рибавирина и транс-эйкозеновой кислоты. Их формулы будут ясны из фиг. 4.

Соединения по этому изобретению проявляют противовирусное действие, и данное изобретение, таким образом, включает фармацевтические или ветеринарные композиции, содержащие по крайней мере одно вещество с формулой I, отдельно или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем. В оставшейся части текста и в формуле изобретения фармацевтическая композиция будет использоваться для обозначения композиций, применяемых при лечении как больных людей, так и животных.

Кроме того, по-видимому нуклеозидные аналоги с некоторыми из мононенасыщенных жирных кислот будут особенно подходящими для лечения некоторых вирусных инфекций. Так, очевидно, что эфиры жирных кислот по этому изобретению рибавирина особенно подходят для лечения герпесных инфекций.

Также очевидно, что соединения этого изобретения или композиции их содержащие также применимы при лечении заболеваний у людей, вызываемых аденовирусами, вирусами гриппа A и B, респираторным синцитиальным вирусом (РСВ), цитомегаловирусом (ЦМВ), вирусами папилломы, бунья-вирусами, аренавирусами и ВИЧ.

Как упоминалось, выработка необходимого иммунного ответа для преодоления вирусной инфекции, такой как гепатит, может индуцироваться в некоторых случаях путем совместного введения с интерфероном.

Кроме того, очевидно, что сложные эфиры жирных кислот по этому изобретению или содержащие их композиции также применимы для лечения млекопитающих (не людей), птиц, например, цыплят и индюшек, и холоднокровных животных, например, рыб, страдающих инфекциями, вызываемыми бычьими герпесвирусами 1, 2, 3, 4, лошадиными герпесвирусами 1, 2, 3, свиными герпесвирусами 1, 2, фазаньими герпесвирусами 1,2 (болезнь Марека) и IPN( инфекционный некроз поджелудочной железы) вирус.

В зависимости от того, какую вирусную инфекцию нужно лечить и на какой стадии находится инфекционное заболевание, или является ли больной человеком или животным, может применяться системное или местное введение веществ.

Для местного применения могут быть приготовлены лекарственные формы веществ, известные в данной области технологии, для применения на коже или слизистой в любой подходящей форме.

Для местного применения соединения формулы I могут приготавливаться в виде мази, крема, геля, настойки, аэрозоля, лосьона или тому подобного, содержащего соединения формулы I в смеси с инертными, твердыми или жидкими носителями, которые обычны в препаратах для местного применения. Особенно подходит использование лекарственной формы, которая защищает активный ингредиент от окисления и деградации.

Фармацевтические препараты, содержащие соединения формулы I, могут также вводиться системно, или перорально или парентерально.

При энтеральном введении соединения формулы I могут быть приготовлены в лекарственной форме, например, такой как мягкие или твердые желатиновые капсулы, таблетки, гранулы, крупинки или порошки, драже, сиропы, суспензии или растворы.

Для парентерального введения препараты соединений формулы I пригодны в виде инъекционных или инфузионных растворов, суспензий или эмульсий.

Препараты могут содержать инертные или фармакодинамически активные добавки. Таблетки или гранулы, например, могут содержать ряд связывающих веществ, наполняющих материалов, вещества-носители или разбавители. Жидкие препараты могут быть представлены, например, в форме стерильного раствора. Капсулы могут содержать вещество-наполнитель или загущающее вещество в дополнение к активному ингредиенту. Кроме того, обычно используются улучшающие вкуси запах добавки, а также вещества, применяемые в качестве консервирующих, стабилизирующих, поддерживающих влажность и эмульгирующих средств, соли для изменения осмотического давления, буферы и другие добавки могут также присутствовать.

Дозы, в которых препараты по этому изобретению применяются, будут меняться в соответствии со способом применения и путем введения, а также в соответствии с потребностями больного. В основном, суточная дозировка для системной терапии средних взрослых больных или животных будет около 0,1-100 мг/кг веса тела/сутки, предпочтительно, 1-20 мг/кг/сутки. Для местного применения подходящая мазь может содержать от 0,1 до 10% по весу от фармацевтической рецептуры, предпочтительно 0,5-5% по весу.

Если желательно, фармацевтический препарат соединения формулы I может содержать антиоксидант, например, токоферол, -метил-токоферамин, бутилированный гидроксианизол, аскорбиновую кислоту или бутилированный гидрокситолуол.

В изобретении, кроме того, раскрывается способ лечения вирусных инфекций, который включает введение по крайней мере одного соединения с формулой I больному человеку или животному при необходимости такого лечения.

Кроме того, изобретение также включает способ лечения больного при необходимости такого лечения с помощью комбинации соединения с формулой I и интерферона.

Биологическое действие.

Тканевая культура вирус IPN.

Препаратом вируса IPN (1000 бое) заражают и инкубируют при перемешивании в течение 1 часа при 20^oC монослой клеток CHSE-214. К клеткам добавляют небольшой объем среды для роста, содержащей противовирусное средство. Затем клетки культивируют (48 час) до появления положительных ЦПД в необработанном контроле. Затем клетки помещают в морозильник на ночь. После оттаивания и центрифугирования супернатант в 5 уровнях разведения добавляют к монослою свежеприготовленной клеточной культуры в 96-ячеечной плате. ЦПД регистрируется через 48 часов, и титр вируса рассчитывается как TCI₅₀.

На фиг. 1 показан ингибирующий эффект эфира элаидиновой кислоты и рибавирина при трех уровнях концентрации. Вирус полностью устранялся при двух уровнях дозировки, и снижение титра вируса порядка 10⁴ наблюдалось даже при низкой концентрации.

A. Эксперименты

Бляшечный метод: Тканевая культура вируса HSV 1/2.

Препараты вирусов HSV 1 и HSV 2 (3-й пассаж клинического штамма) разводят до 250 и 100 бое/ячейку соответственно и затем ими заражают клетки и инкубируют в течение 1 часа в культуре тканей различных клеточных линий.

Инфицированные клетки затем культивируют в течение 48 часов с противовирусным средством. Культуры замораживают и оттаивают для выделения совбодного вируса. Готовят разведения или 1/100 или 1/10000 и добавляют к свежим тканевым культурам. После инкубации в течение 1 часа добавляют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ) для предотвращения миграции вируса между клетками через среду. Распространение вируса путем клеточного контакта, однако, остается эффективным, приводя к образованию бляшек.

Одна бляшка будет представлять одну вирусную частицу. Таким образом, подсчет бляшек дает точную оценку числа частиц инфицирующего вируса.

На фиг. 2 показан подавляющий эффект рибавирина и рибавирин-5"-олеилового эфира на штамм HSV 2 (68495) в клеточной линии HL1. Этот штамм вируса относительно устойчив к самому рибавирину, что можно видеть по умеренному снижению титра вируса. Эта резистентность была даже более очевидна с другими линиями клеток, которые использовались при исследовании. Однако с клеточной линией, к которой относится фиг. 2, даже и так видно, что введение эфирной группы ненасыщенной жирной кислоты все же потенцирует активность с помощью фактора 3.

B. Эксперименты

Инфекция, вызванная вирусом FLC у мышей.

Молодых (20 - 25 г) самок мышей NMRI инфицировали в/б препаратом ретровируса синдрома лейкемии Френда (Friend Leukemia Complex FLC). Лечение начиналось на 1-й день после заражения вирусом, и животные получали суточную дозу, равную 200 мкл 20 мкМ липосомной лекарственной формы испытуемых веществ в/б в течение 8 дней. Группы животных забивали через 13 и 20 дней после инфицирования. Регистрировали вес тела и селезенки животных.

Инфекция, вызванная вирусом FLC, приводится за период в 7 - 10 суток к заметному увеличению веса селезенки, по-видимому, из-за высокой концентрации лейкемических клеток.

На фиг. 3 показано сравнение действия АЗТ, главного лекарства для лечения ретровирусных инфекций, ddC-элаидата и соответствующего насыщенного аналога, например, ddC-стеарата. Данные представлены в виде отношения вес тела/вес селезенки, причем большое число отражает высокий антиретровирусный эффект. Через 13 дней эффект АЗТ равен высоте значения для ddC-элаидата. Через 20 дней отношения для животных, леченных АЗТ, падают до уровня контролей, и тогда как у животных, леченных ddC-элаидатом, остается высокое отношение. Зависимость от природы жирной кислоты явна, что можно видеть по низким (~контрольным) значениям для производного стеариновой кислоты.

Противовирусные средства по этому изобретению готовили из исходного стандартного раствора мицелл в воде 1 мг/мл путем смешивания лецитина и активного ингредиента в соотношении 1:1 (вес/вес) в стерильной дистиллированной воде.

Вещества с формулой I можно, в основном, получить по следующему уравнению реакции:



где B, S, C и Fa дано определение выше, а X может быть Cl, Br, O-CO-R¹, где R¹ является Fa, CH₃, CH₂CH₃ или CF₃. X может также быть бензотриазольной частью бензотриазолового эфира жирной кислоты.

Таким образом, реакция протекает путем ацилирования нуклеозидного аналога. Это выполняется с помощью использования подходящих реактивных производных жирных кислот, особенно галогенангидридов кислот или ангидридов кислот. Реактивные производные жирных кислот могут быть предварительно получены или произведены in situ путем применения реагентов, таких как дициклогексилкарбодиимид (DCC) или O-(1H-бензотриазол-1-ил) N,N,N",N",-тетраметилуронийтетрафторборат TBTU). Когда используется галогенангидрид кислоты, такой как хлорангидрид кислоты, к реакционной смеси добавляется третичноаминный катализатор, такой как триэтиламин, N,N-диметиланилин, пиридин или N,N-диметиламинопиридин, для связывания освобождаемой галогенводородной кислоты. Реакции предпочтительно проводятся в нереактивном растворителе, таком как N, N-диметилформамид или галогенированный углеводород, такой как дихлорметан. Если желательно, любой из вышеупомянутых третичноаминных катализаторов может использоваться в качестве растворителя, причем нужно следить, чтобы он был в соответствующем избытке. Температура реакции может меняться в интервале от 0 до 40^oC, но предпочтительно ее поддерживать в интервале от 5 до 25^oC. Через 24 - 60 часов реакция по существу завершится. Ход реакции можно прослеживать, применяя тонкослойную хроматографию (ТСХ) и соответствующие системы растворителей. Когда реакция завершается, что определяется ТСХ, продукт экстрагируется органическим растворителем и очищается с помощью хроматографии и/или перекристаллизации из подходящей системы растворителей. Если в нуклеозидном аналоге присутствуют более, чем одна гидроксильная группа или также аминогруппы, может быть получена смесь ацилированных соединений. Отдельные моно- и полиацилированные соединения могут быть выделены с помощью хроматографии, например.

Изобретение иллюстрируется не лимитирующими примерами, которые следуют ниже.

Пример 1.

1-(5"-O| цис-9""-октадеценоил| - -D-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-3-карбоксамид

К раствору 1- -D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамида (рибавирин) - (0,95 г, 3,9 10^-3 моль) в 10 мл безводного N,N-диметилформамид и 15 мл пиридина добавляли 2 мл концентрированного раствора цис-9-октадеценоилхлорида (1,34 г, 4,7 10^-3 моль) в 6 мл дихлорметана, и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Оставшийся концентрированный раствор добавляли порциями по 2 мл примерно через 8 часовые интервалы. После общего времени реакции (60 ч) растворители выпаривали под высоким вакуумом, и продукт очищали на колонке силикагеля с помощью 15% метанола в хлороформе в качестве системы растворителей. Гомогенные фракции выпаривали с получением 1,25 г (63%) вещества, указанного в заголовке, в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 9,8 (1H, s, H-5) 7,85 и 7,65 (1+1H, s, NH₂), 5,88 (1H, d, H-1), 5,65 (1H, d, OH-2"), 5,35 (1H, d, OH-3"), 5,32 (2H, m, CH=CH), 4,35 - 4,25 (3H, m, H-2", H-3", H-5"₁), 4,15 - 4,0 (2H, m, H-4", H-5"₂), 2,25 (2H, t, CH₂-COO), 1,95 (4H, m, CH₃-CH₂).

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 75 МГц) ? 172,59 (COO), 160, 15 (CONH₂), 157,40 (C-3), 145,27 (C-5), 129,46 (CH=CH), 91,28 (C-1"), 81,51 (C-4"), 73,99 (C-2"), 70-26 (C-3"), 63,55 (C-5"), 33,07, 31,13, 28,94, 28,68, 28,54, 2843, 28,33, 28,24, 26,42, 24,17, 21,95 (CH₂), 13,78 (CH₃-CH₂)

Пример 2.

1-(5"-O-| транc-9""-октадеценоил| -2,3-дидезокси -D-глицеропент-2-енофуранозил)тимин.

К раствору 1-(2,3-дидезокси -D-глицеро-пент-2-енофуранозил)тимина (d4T) (0,83 г, 3,7 10^-3 моля) ч 10 мл безводного N,N-диметилформамида и 10 мл пиридина добавляли 2 мл концентрированного раствора транс-9-октадеценоилхлорида (1,39 г, 4,9 10^-3 моля) в 4 мл дихлорметана, и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Оставшийся концентрированный раствор добавляли порциями по 1 мл через примерно 8 часовые интервалы. После общего времени протекания реакции (60 ч) растворителя выпаривали под высоким вакуумом. Остаток растворяли в хлороформе и промывали водой. Высушенную (MgSO₄) органическую фазу концентрировали, и сырой продукт очищали на колонке силикагеля с 7% метанола в хлороформе в качестве системы элюентов. Гомогенные фракции выпаривали с получением 1,26 г (70%) вещества, указанного в заголовке в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 11,35 (1H, s, NH), 7,25 (1H, s, H-6), 6,81 (1H, m, H-1"), 6,38 (1H, m, H-3"), 6,0 (1H, m, H-2"), 5,35 (2H, m, CH=CH), 4,95 (1H, m, H-4"), 4,2 (2H, m, H-5"), 2,25 (2H, m, CH₂-COO), 1,95 (4H, m, CH₂-C= ), 1,75 (3H, S, CH₃), 1,45 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (2OH, m, CH₂), 0,85 (3H, t, CH₃-CH₂).

Пример 3. 5-0-(9"-транс-октадеценоил)-2,3-дидезоксицитидин.

К суспензии 2,3-дидезоксицитидина (ddc) (1,2 г, 5,7 10^-3 моля) в 40 мл безводного N,N-диметилформамида, содержащего HCl(г) (6,3 10^-3 моля), добавляли 1 мл концентрированного раствора транс-9-октадеценоилхлорида (1,7 г, 6,0 10^-3 моля) в 6 мл дихлорметана, и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Оставшийся концентрированный раствор добавляли порциями по 1 мл через примерно 3 часовые интервалы. После общего 60 часового времени протекания реакции растворители выпаривали под высоким вакуумом. Остаток растворяли в хлороформе и промывали водой. Высушенную (MgSO₄) органическую фазу концентрировали, и остаток растворяли в гептане. Добавление петролейного эфира (40-60 мл) давало белое твердое вещество (0,7 г), которое собирали на холоду. Фильтрат очищали на колонке силикагеля, с которой элюировали метанолом (0-25%) в этилацетате. Гомогенные фракции выпаривали с получением еще 0,8 г вещества, указанного в заголовке (1,5 г, 55%).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,63 (1H, d, H-6), 7,1 (2H, d, NH₂), 5,95 (1H, m, H-1"), 5,7 (1H, d, H-5), 5,35 (2H, m, CH=CH), 4,25 - 4,10 (3H, m, H-4" и H-5"), 2,3 (3H, m, H-2" т CH₂-COO), 2,0 - 1,6 (7H, m, H-2", H-3" т CH₂-C=), 1,45 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (2OH, m, CH₂), 0,85 (3H, t, CH-CH₂).

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 75 МГц) : 172,67 (COO), 165,60 (CNH₂ 4), 155,04 (CO2), 140,45 (CH 6), 130,00 (CH=CH), 93,62 (CH 5), 85,84 (C1"), 77,84 (C 4"), 64,87 (C 5"), 33,38, 31,96, 31,30, 29,02, 28,96, 28,86, 28,74, 28,52, 28,46, 28,36, 24,20, 22,11 (CH₂), 31,76, 25,47 (CH 2" и 3"), 13,90 (CH₃).

Пример 4. 5"-0-(9"-транс-октадеценоил)-5-иод-2"-дезоксиуридин.

К раствору 5-иод-2"-дезоксиуридина (1,0 г, 2,8 10^-3 моля) в 10 мл безводного N, N-диметилформамида и 15 мл пиридина добавляли 1 мл концентрированного раствора транс-9-октадеценоилхлорида (1,12 г, 3,95 10^-3 моля) и 4 мл дихлорметана, и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Остаток концентрированного раствора добавляли порциями по 1 мл через примерно 4 часовые интервалы. После общего 5-часового времени протекания реакции растворители выпаривали под высоким вакуумом, и продукт очищали на колонке силикагеля с использованием 10% метанола в хлороформе в качестве системы элюентов. Фракции, содержащие продукт, концентрировали и остаток перекристаллизовывали из этанола с получением 1,43 г (82%) вещества, указанного в заголовке, в виде твердого белого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 11,71 (1H, s, NH), 7,95 (1H, s, H-6), 6,08 (1H, t, H-1"), 5,4 (1H, d, OH-3"), 5,35 (2H, m, CH=CH), 4,2 (3H, m, H-3" и 5"), 3,95 (1H, m, H-4"), 2,35 (2H, t, CH₂-COO), 2,15 (2H, m, H-2"), 1,95 (4H, m, CH₂-C=), 1,50 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (2OH, m, CH₂), 0,85 (3H, t, CH₂-C).

¹³C ЯМР (ДМО-d₆, 75 МГц) : 172,16 (COO), 159,90 (C=04), 149,50 (C=02), 143,89 (C-6), 129-51 (CH= CH), 84,43 (C-4"), 83,65 (C-1"), 69,66 (C-3"), 69,21 (C-5), 63,06 (C-5"), 38-85 (C-2"), 33,01, 31,45, 30,79, 28,51, 28,34, 28,22, 28,01, 27,92, 27,85, 27,46, 23,93, 21,60 (CH₂), 13,43 (CH₃-C).

Пример 5. 5-0-(9"-транс-октадеценоил)-2,3-дидезоксиинозин.

Раствор транс-9-октадеценоиновой кислоты (0,33 г, 1,17 10^-3 моля), 0-(1H-бензотриазол-1-ил), , , - тетраметилуронийтетрафторбората (TBTU) (0,52 u, 1,6 10^-3 моля) и диизопропилэтиламина (0,5 мл) в 6 мл безводного N,N-диметилформамида перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Добавляли 2,3-дидезоксиинозина (0,19 г, 0,8 10^-3 моля) и реакционную смесь перемешивали в течение 60 часов. Растворитель удаляли под высоким вакуумом и остаток растворяли в хлороформе и промывали водой. Высушенную (MgSO₄) органическую фазу концентрировали и сырой продукт очищали на колонке силикагеля, с которой элюировали с помощью 15% метанола в хлороформе. Гомогенные фракции выпаривали с получением 0,25 г (62%) вещества, указанного в заголовке, в виде слегка коричневатого воскоподобного твердого вещества.

¹ЯМР (ДМСО -d₆), 300 МГц) ; 12,35 (1H, s, H), 8,22 (1H, s, H-2), 8,05 (1H, s, H-8), 6,25 (1H, dd, H-1"), 5,32 (2H, m, CH=CH), 4,35 - 4,10 (3H, m, H-4" и H-5"), 2,45 (2H, m, H-2"), 2,25 (2H, m, CH₂-COO), 2,10 (2H, m, H-3"), 1,95 (4H, m, CH₂-C=), 1,45 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (2OH, m, CH₂), 0,85 (3H, t, CH₃-C).

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆), 75 МГц) : 172,65 (COO), 156,57 (C-6), 147,68 (C-30, 145,62 (C-2), 138,07 (C-8), 129,98 (C=C), 124,38 (C-5), 84,33 (C-1"), 78,54 (C-4"), 64,91 (C-5"), 33,25, 31,94, 31,36, 28,99, 28,93, 28,84, 28,71, 28,50, 8,39, 28,32, 24,34, 22,09 (CH₂), 31,27, 26,00 (CH 2" и 3"), 13,88 (CH₃).

Пример 6.

(S)-9-(2-гидрокси-3-0-|9"-транс-октадеценоил|пропил)-аденин.

К раствору (S)-9-(2,3-дигидроксипропил)аденина (0,8 г, 3,8 10^-3 моля), транс-9-октадеценоиновой кислоты (1,2 г, 4,25 10^-3 моля) и N,N-диметиламинопиридина (50 мг) в 20 мл безводного N,N-диметилформамида добаляли дициклогексилкарбодиимид (0,83 г, 4,0 10^-3 моля) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 40 часов. Растворитель выпаривали под высоким вакуумом и остаток очищали с помощью повторной хроматографии на колонке силикагеля с использованием 5-15% метанола в хлороформе в качестве системы элюентов. Один набор гомогенных фракций концентрировали с получением 0,7 г (38%) вещества, указанного в заголовке в виде твердого белого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 8,12 (1H, s, H-8), 8,05 (1H, s, H-2), 7,20 (2H, brs, NH₂), 5,48 (1H, d, OH 2"), 5,35 (2H, m, CH=CH), 4,3 (1H, m, H-1"), 4,15 (3H, m, H-3" и H-1"), 3,95 (1H, m, H-2"), 2,25 (3H, t, CH₂-COO), 1,95 (4H, m, CH₂-C=), 1,45 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (2OH, m, CH₂), 0,85 (3H, t, CH₃C).

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 75 МГц), : 172,69 (COO), 155,94 (C-6), 152,30 (C-2), 149,65 (C-4), 141,48 (C-8), 130,02 (CH=CH), 118,57 (C-5), 66,52 (C-2"), 65,44 (C-3"), 46,10 (C-1"), 33,48, 31,98, 31,31, 29,02, 28,87, 28,75, 28,60, 28,52, 28,40, 24,37, 22,13 (CH₂), 13,93 (CH₃).

Из другого набора фракций получали 0,35 г (20%) изомерного продукта (з-9-(3-гидрокси-2-O-|9"-транс-октадеценол|-пропил-аденин.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 8,12 (1H, H-8), 8,05 (1H, s, H-2), 7,20 (2H, br s, NH₂), 5,35 (2H, m, CH=CH), 5,12 (1H, t, OH 3"), 4,35 (1H, m, H-2"), 4,3 (1H, m, H-1"), 4,05 (1H, m, H-1), 3,5 (2H, m, H-3"), 2,15 (2H, t, CH₂-COO), 1,95 (4H, m, CH₂-C=), 1,45 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (20H, m, CH₃), 0,85 (3H, t, CH₃-C).

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 75 МГц) : 172,17 (COO), 155,96 (C-6), 152,41 (C-2), 149,78 (C-4), 141,11 (C-8), 130,02 (CH=CH), 118,52 (C-5), 72,26 (C-2), 60,16 (C-3), 43,21 (C-1), 33,49, 31,99, 31,32, 29,02, 28,88, 28,75, 28,53, 28,35, 24,21, 22,13 (CH₂), 13,93 (CH₃).

Пример 7.

5"-O-(-транс-9"-октадеценоил)-5-этенил-1- -D-рибофурано- зилимидазол-4-карбоксамид.

К раствору 5-этенил-1- -D-рибофуранозилимидазол-4- карбоксамида (EICAR) (0,10 г, 0,3710^-3 моля) в 5 мл безводного N,N-диметилформамида и 5 мл пиридина добавляли 1 мл концентрированного раствора транс-9-октадеценоилхлорида (0,13 г, 0,45 10^-3 моля) в 3 мл дихлорметана и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Оставшийся концентрированный раствор добавляли порциями по 1 мл через примерно 3-часовые интервалы. После общего времени реакции, равного 50 часам, растворитель выпаривали под высоким вакуумом и продукт очищали на колонке силикагеля с 15% метанола в хлороформе в качестве системы элюентов. Гомогенные фракции выпаривали с получением 30 мг (15%) вещества, указанного в заголовке в виде твердого белого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 8,05 (1H, s, H-2), 7,35 и 7,25 (2H, s + s, H₂), 5,65 (1H, d, H-1"), 5,6 (1H, br d, OH-2"), 5,35 (3H, m, CH=CH и OH-3"), 4,91 (1H, s, C=CH), 4,3 (1H, m, H-2"), 4,2 (2H, m, H-5"), 4,05 (2H, m, H-3 и H-4"), 2,30 (2H, t, CH₂COO), 1,95 (4H, m, CH₂-C=), 1,45 (2H, m, CH₂-C-COO), 1,25 (20H, m, CH₂), 0,85 (3H, t, CH₃).

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆, 75 МГц) : 172,76 (COO), 162,57 (COH₂), 139,80 (C-5), 135,82 (C-2), 130,08 (CH=CH), 115,51 (C-4), 91,39 (-C), 88,75 (C-1"), 81,78 (C-4"), 73,91 (C-2"), 71,46 (CH) 70,09 (C-3"), 63,57 (C-5"), 33,66, 31,95, 31,29, 29,00, 28,84, 28,72, 28,55, 28,50, 28,42, 28,36 24,49, 22,12 (CH₂), 13,97 (CH₃).

Следуя процедуре, из примеров 1-7 могут быть получены дополнительные соединения формулы I из исходных материалов, указанных далее.

Замечено, что может быть получено больше продуктов по всем возможным перестановкам с помощью реакции соединений, названных в качестве реагента (1), и реагента (2), например, 5"-O-олеил-2"-дезоксикоформицин, 5"-O-(цис-11"-эйкозеноил)-2"-дезоксикоформицин и 5"-O-(транс-11"-эйкозеноил)-2"-дезоксикоформицин.

Пример A.

Мягкие желатиновые капсулы для наполнения жидкостью.

К смеси 5-95% (мас. /мас.) масла (кукурузное масло, арахисовое масло, Capmul MCM, Labrasol, Captex 355 или подобные), 0-50% олеиновой кислоты, 0-50% этилового спирта и 0-50% полисорбата 80 добавляют 5-10% активного ингредиента. Затем смесь гомогенизируют и инкапсулируют.

Пример B.

Технология приготовления лекарственного средства в виде 5% крема.

Фаза A.

5% (мас/мас) Активного ингредиента диспергируют в смесь, состоящую из 5-10% цетостеарилового спирта, 1-2% лаурилсульфата натрия, 5-10% белого мягкого парафина, 5-10% минерального масла, 1-5% полоксамера 407 и 0,1-1% пропилпарабена.

Фаза B.

Пропиленгликоль - 30-50%

Метилпарабен - 0,1-1%

Вода - До 100%

Фазу A эмульгируют в фазу B при 30-50^oC.

Пример C.

Капсулы для наполнения сухим веществом/таблетки.

Активный ингредиент 50% (мас/мас) смешивают с 0-10% Avicel PH 102, 10-15% кукурузным крахмалом, 0-1% коллоидальным кремнием, 0-1% стеаратом магния, 0-1% додецилсульфатом натрия. Смесь пропускают через 500 мкм сито, перемешивают, просеивают второй раз. Смесью наполняют капсулы или смесь прессуют в таблетки.