агент для лечения состояния тревоги

Формула изобретения

1. Применение (S) - (-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида формулы I



в качестве активного начала лекарственного средства для лечения состояния тревоги.

2. Применение по п.1, в котором указанное состояние тревоги вызвано острым посттравматическим стрессом.

3. Применение по п.1, в котором указанное состояние тревоги вызвано прекращением хронического введения бензодиазепинов.

4. Применение по любому из пп.1-3, в которых эффективное терапевтически количество соединения формулы I составляет 5 - 70 мг/кг в день.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к применению (S)- (-) -- этил- 2-оксо-1-пирролидинацетамида для лечения состояний тревоги.

Применение левовращающего (S) -- этил-2-оксо- 1-пирролидинацетамида в качестве защищающего агента при лечении и профилактике заболеваний гипоксического и ишемического типа центральной нервной системы описано в европейском патенте N162036 на имя заявителя. Это соединение также находит применение для лечения эпилепсии, однако при этом терапевтическом применении было обнаружено, что его правовращающий энантиомер является полностью неактивным (A. J. GOWER et al., Eur. J. Pharmacol., 222 (1992), 193-203). Применение левовращающего (S) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида для лечения состояний тревоги не было описано в литературе.

В европейском патенте N 162036, упомянутом выше, также описаны способы получения (S)- (-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамида, которые предусматривают синтез исходного реагента, полученного разделением соответствующего рацемического соединения. В британском патенте N 2225322, также на имя заявителя, описан способ получения этого соединения, преимуществом которого является использование в качестве исходного продукта природной аминокислоты, уже имеющей желаемую стереохимическую конфигурацию, что позволяет избежать рутинного разделения энантиомеров.

Продолжая работы по исследованию этого соединения, заявитель теперь обнаружил, что (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид обладает анксиолитическими свойствами, имеющими значительный терапевтический интерес.

Кроме того, эта анксиолитическая активность не была обнаружена у правовращающего энантиомера, (R)-(+) -- этил-2- оксо-1-пирролидинацетамида.

Следовательно, объектом настоящего изобретения является применение (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида формулы



в качестве агента для лечения состоянии тревоги.

Анксиолитическая активность (S)-(-) -- этил-2-оксо- 1-пирролидинацетамида наиболее ярко выражена в тестах, когда исходное эмоциональное состояние было обострено, например, у особенно чувствительных или старых животных, или особыми экспериментальными условиями, вызывающими антиципацию отпугивающего раздражителя.

Зависимость между анксиолитической активностью соединения формулы I и интенсивностью исходного эмоционального состояния позволяет предсказать, что терапевтическое применение этого соединения предпочтительно будет ориентировано на лечение патологических состояний тревоги. Эта селективность четко отличает соединение согласно изобретению от существующих анксиолитических лекарств типа бензодиазепина и дает существенное преимущество перед другими классами продуктов этого типа, которые действуют без различия на встревоженных животных и на нормальных животных.

В этом последнем случае анксиолитическая активность сопровождается снятием торможения в обычном нормальном поведении, что вызывает у здорового субъекта неадекватный адаптивный ответ, который желательно избежать. В этом контексте (S)-(-) -- этил- 2-оксо-1-пирролидинацетамид облегчает восстановление и возвращение к более нормальной ситуации после состояния патологической тревоги, вызванного продуктами нейроэндокринного происхождения, при стрессе у старых субъектов, в противоположность бензодиазепинам, которые не благоприятствуют этому восстановлению.

В противоположность бензодиазепинам, которые вызывают хорошо известные и нежелательные побочные эффекты, а именно амнезию и нервнодвигательные нарушения, такие как расстройство координации движений, мышечная релаксация и успокоение (J. H. WOODS et al. , Pharmacol. Rev., 39, (1987), 251- 419), (S)-(-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамид в используемых терапевтических дозах не оказывает ни малейшего вредного воздействия на память и не вызывает вредных нейродвигательных эффектов. Действительно, существует большая зона безопасности между анксиолитическими дозами и нейротоксичными дозами или седативными дозами у животных. (A.J. GOWER et al., выше).

Кроме того, (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид также подавляет тревогу у хроников, вызванную отменой постоянного введения бензодиазепинов.

Результатом такой неожиданной совокупности свойств является то, что использование (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида является особенно интересным для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения состояний тревоги, таких как, общее беспокойство, паника, агорафобия, социальная фобия, навязчивые тревоги, беспокойства из-за острых пост-травматических стрессов, чувства угрожающей опасности, отсутствие тонуса, страх и напряжение, проявления которых иногда сопровождаются такими физиологическими явлениями, как тахикардия, одышка, испарина, дрожь, слабость и усталость. (International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems - Tenth Revision: Volume I. World Health Organisation, Geneva, 1992).

Настоящее изобретение требует введения эффективной дозы соединения формулы I для лечения тревоги. Доза, необходимая согласно настоящему изобретению, будет достаточно высокой, чтобы ослабить тревогу. Фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы I, могут быть введены, например, орально или парентерально, т.е. внутривенно, внутримышечно или подкожно.

Фармацевтические композиции, используемые для орального введения, могут быть твердыми или жидкими и находиться, например, в виде таблеток, пилюль, драже, желатиновых капсул, растворов, сиропов и т.п.

С этой целью активное соединение может быть использовано в смеси с инертным разбавителем или носителем, нетоксичным, фармацевтически приемлемым, таким как, например, крахмал или лактоза. В некоторых случаях эти фармацевтические композиции также могут содержать связующий агент, такой как микрокристаллическая целлюлоза, трагантовая смола или желатин, дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота, смазывающий агент, такой как стеарат магния, агент, придающий текучесть такой как коллоидный диоксид кремния, подслащиватель, например, сахароза или сахарин, красители или ароматизаторы, например, перечная мята или метилсалицилат. Они также включают композиции, которые позволяют обеспечить постепенное выделение активного вещества.

Фармацевтические композиции, используемые для парентерального введения, представляют собой фармацевтические формы, известные для такого типа введения, и находятся в виде водных или масляных растворов или суспензий, обычно находящихся в ампулах, одноразовых шприцах, стеклянных или пластмассовых пузырьках или в сосуде для перфузии.

Помимо активного соединения эти растворы или суспензии могут также в некоторых случаях содержать стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологическая сыворотка, масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители, антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт антиоксиданты, например, аскорбиновую кислоту или бисульфит натрия, хелатирующие агенты, например, этилендиамин-тетрауксусную кислоту, буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для регулирования осмолярности, например, хлорид натрия или декстрозу.

Эти фармацевтические формы готовят в соответствии со способами, обычно используемыми фармацевтами.

Содержание активного продукта в фармацевтических композициях может изменяться в очень широких пределах концентраций и зависит от различных факторов, таких как пол пациента, его возраст, его масса и его состояние, а также способ введения. Так, количество активного материала в композициях, предназначенных для орального введения, составляет по крайней мере 0,5 мас.% и может достигать почти 80 маc.%, по отношению к массе композиции. В предпочтительных оральных композициях единичная доза находится между 50 и 1000 мг активного продукта.

В композициях, предназначенных для введения парентеральным путем, количество активного имеющегося материала составляет по крайней мере 0,5 мас.%, и может достигать 33 мас.%, по отношению к массе композиции. В предпочтительных парентеральных композициях единичная доза находится между 1 и 200 мг активного продукта.

Что касается дневной позологии, она может варьировать в широкой гамме единичных доз активного продукта и обычно составляет от 5 до 70 мг/кг. Средняя доза 250 мг, два раза в день, считается эффективной для человека для снятия тревоги. Однако могут быть подобраны конкретные дозировки для конкретных случаев в зависимости от индивидуальных потребностей по усмотрению врача. Приведенные выше дозировки даны в качестве указания и никоим образом не ограничивают практическое осуществление изобретения.

В качестве неограничивающего примера композиции, содержащей (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид, которая может быть введена оральным путем, ниже приводятся четыре рецептуры для белых и непрозрачных желатиновых капсул:



Эффективность (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида для лечения тревоги показана по его активности в следующих фармакологических опытах, проведенных на животных, с помощью стандартных тестов, признанных по их способности доказать анксиолитическую активность новых соединений.

Тревога может существовать в различных физиологических и патологических формах. Существуют разнообразные клинические формы тревоги и поэтому используют различные тесты их практической оценки на животных, основанные на модификациях поведения и являющиеся чувствительными к различным состояниям тревоги. (S.E. FILE, "Animal Models of anxiety", Biological Psychiatry, vol. 2, Eds. G. Racagui et al., Excerpta Medica, Amsterdam, (1991), 596-599).

Для большей достоверности поведенческого теста и определения анксиолитической активности, она должна быть подтверждена клиническими опытами. Опыт на людях позволил подтвердить терапевтическую эффективность (S)-(-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамида для лечения различных состояний тревоги.

1. Тест на пластине с отверстиями (Обследование).

"Планка с отверстиями" предлагает простой способ изучения поведения грызуна и измерения реакции животного, когда оно помещено в незнакомую обстановку. Эта реакция, называемая "исследовательской реакцией", проявляется одновременно с любопытством и с желанием животного убежать и оказаться под влиянием психоактивных лекарств.

Этот способ, например, был использован для проверки потенциальной анксиолитической активности бензодиазепинов (N. A. NOLAN et М. W. PARKES, Psychophatmacologia (Beri.), 29, (1973), 277-288). Используя методологию J. R. BOISSIER et P. SIMON (Arch. Int. Pharmacodyn. 147, (1964), 372-387), тест состоял в помещении мыши в центр пластины, разделенной на квадраты, и в которой просверлены 16 отверстий, равномерно расположенных, и подсчитывают количество случаев, когда животное просунет голову в отверстие за период испытания в 5 минут.

Для этого теста было использовано три генетически различных вида мышей: один нормальный вид мышей NMRI и два вида мышей, более чувствительных к возбудимости, один, предрасположенный к аудиогенному кризу [порода Dilute Brown Agouti (ДВА)], и другой, у которого нормальный рефлекс убегания блокирован страхом (порода C57 черных мышей).

На этих трех породах сравнивалась активность (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида (соединения 1), его правовращающего энантиомера, (R)-(+) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамида (соединения II), и диазепама. Эти соединения вводили животным путем интраперитонеальной инъекции (10 мл/кг мыши) за 30 минут до исследования с пластиной. Контрольным группам животных вводили носитель.

В таблице 1 приведено среднее из числа отверстий, исследованных группой из 16 животных (XSEM) для каждой породы (контрольные и обработанные животные) при указанных дозах (SEM: стандартное отклонение от среднего). Также приведены отклонения в % от результатов теста по отношению к результатам контрольной группы.

Результаты показывают, что три породы мышей четко различаются базовыми результатами (контроли): намного выше был результат у нормальных мышей NMRI, чем у двух других пород. Известно, что количество обследованных отверстий резко снижается под влиянием анксиогенных агентов, таких как, например, кофеин или иохимбин (R. LISTER., Pharmacol. Ther., 46, (1990), 321-340).

Следовательно, низкие результаты, наблюдаемые у контрольных групп больных мышей пород ДВА и C57 Черная Мышь, корректно отражают высокую степень тревоги, присущую этим двум породам. Как и диазепам, (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид значительно увеличивает показатели у мышей пород ДВА и C57 Черная Мышь, но в противоположность диазепаму соединение I практически не оказывает анксиолитического действия на нормальных мышей породы NMRI. Для этой последней породы диазепам также является очень активным и увеличение результатов хорошо отражает растормаживающее действие, присущее бензодиазепинам.

Зависимость анксиолитического действия соединения 1 от породы и отмеченная селективность этого действия на породы, которым присуще болезненное состояние тревоги, указывает, что соединение I можно особенно рекомендовать как специфический агент для лечения чрезмерных эмоциональных состояний, не зависящий от какого-либо растормаживающего поведение действия. Энантиомер, (R)-(+) -- этил-2- оксо-1-пирролидинацетамид (соединение II) является неактивным на этих породах.

2. Тест с четырьмя пластинками (поведение с наказанием)

Принцип, обычно используемый в этом типе исследования, заключается в том, чтобы вызвать ингибирование специфического ответа с помощью раздражителя, который порождает отвращение в момент этого специфического ответа.

Тест "четырех пластинок" является простым методом, описанным впервые J. R. BOISSIER et al., Eur. J. Pharmacol, 4, (1968), 145-151, для оценки потенциальной анксиолитической активности новых соединений на лабораторных животных. Он заключается в том, что для формирования первой ситуации, помещают мышь в окружающую среду, которая ей незнакома, представляющую собой поверхность, покрытую четырьмя металлическими пластинками, которые могут подключаться к электросети, и подсчитывают число раз, когда животное пересекает поверхность, переходя с одной пластины на другую (безнаказанное пересечение) в течение определенного времени.

Для создания второй ситуации животное "наказывают" электрическим шоком в лапы каждый раз, когда оно пересекает поверхность насквозь (наказываемое пересечение), чтобы вызвать у животного реакцию иммобилизации. В условиях, когда происходит наказание (наказанное пересечение), количество пересечений поверхности для обследования окружающей среды резко сокращается. Напротив, снижение количества пересечений в условиях наказания ингибируется, если животное предварительно обработано анксиолитическим агентом.

Исследуемые соединения, (S)-(-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамид (соединение I) и хлордиазепоксид, вводили животным интаперитонеальной инъекцией (10 мг/кг мыши) за 30 минут до начала испытания. Животные контрольной группы получали только носитель. В таблице 2 указано среднее (XSEM) из числа пересечений в условиях наказания и в условиях отсутствия наказания для групп из 30 мышей NMRI в течение периода времени 1 минута в указанных доха.

Также дана оценка, выраженная в процентах по отношению к оценкам контрольных групп.

Результаты показывают, что в условиях наказания число пересечений менее высокое, чем в условиях отсутствия наказания как для контрольных групп, так и для обработанных групп.

Соединение I и хлордиазепоксид увеличивают количество пересечений в условиях наказания по сравнению с контрольными группами, но в противоположность соединению I хлордиазепоксид проявляет такую же активность также и в условиях отсутствия наказания в результате растормаживания нормального поведения.

Эти результаты показывают, что (S)- (-) -- этил- 2-оксо-1-пирролидинацетамид (соединение I) обладает преимуществом по сравнению с существующими лекарствами, т. к. оно проявляет свою анксиолитическую активность только в тех ситуациях, которые вызывают сильную тревогу, и не проявляет ее в ситуациях, которые являются нормальными.

Эта селективность соединения I позволяет отличить анксиолитический эффект от эффекта, результатом которого будет повышение активности как таковой (per se).

3. Тест с лабиринтом в виде возвышенного креста.

Этот тест представляет собой простой и быстрый метод, широко используемый для определения анксиолитической активности новых соединений. В противоположность большинству тестов на беспокойство (тревожное состояние), в которых прибегают к болевым раздражителям, например, электрошоку, этот опыт опирается только на измерение спонтанной активности животного, сравнивая с ситуацией естественной тревоги, вызываемой конфликтом между двумя противоположными тенденциями: тенденцией обследовать новую окружающую среду и тенденцией убежать с возвышенного и открытого пространства.

Обследование, относящееся к открытым или закрытым разветвлениям лабиринта, является отражением беспокойства животного, причем обследование открытых разветвлений резко снижается у животных, находящихся в состоянии сильного беспокойства (S.PELLOW et al., Neurosci. Methods, 14, (1985), 149-167).

Анксиолитическое соединение увеличивает количество посещений открытых разветвлений и время, посвященное их обследованию, хотя в случае бензодиазепина такое увеличение приписывается частично возникновению стереотипа под действием указанных доз лекарства (U. FALTER et al., Behav. Processes, 29, (1933), 128-129).

Методика, использованная в этом тесте, описана S. PELLOW et al., (см. выше) и модифицирована K. J. KODGERS et al., (Psychopharmacology, 106, (1992), 102-110). Эта модификация заключается в усилении состояния беспокойства у животного, путем предварительного помещения животного в приподнятый лабиринт (предварительный тест), четыре ветви которого являются открытыми, что приводит к сокращению количества обследований открытых ветвей (оценка отсчета), когда животное спустя 24 часа помещают в классический лабиринт с 2 открытыми ветвями и 2 закрытыми ветвями.

В этом тесте исследовали активность (S)-(-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамида (соединения I), его правовращающего изомера (соединения II) и хлордиазопоксида. Соединения вводили крысам породы Спраг-Дейсли интраперитональным путем (10 мл/кг крысы) за 60 минут до начала опыта. Животные контрольных групп получали физиологический раствор (0,9% NaCl).

В таблице 3 приведены средние количества суммарных входов в ветви лабиринта, процент входов в открытые ветви по отношению к суммарному количеству входов и время, посвященное обследованию этих открытых ветвей, для групп из 15 крыс, контрольных или обработанных указанными дозами, в течение 4 минут.

Результаты показывают, что для контрольной группы число входов в открытые ветви составляет только очень малый процент от суммарного числа входов.

Обработка животных соединением I или хлордиазепоксидом значительно повышает количество входов в открытые ветви, так же как и время, которое посвящается их обследованию.

Эти результаты подтверждают интерес к соединению I для лечения состояний патологической тревоги.

4. Тест на усиленный внезапный испуг.

Реакция внезапного испуга от резкого шума (звуковая агрессия) усиливается одновременным наличием светового раздражителя, если предварительно этот световой раздражитель всегда сопровождался электрическим шоком по лапам животного. В этом случае беспокойство, вызванное объединенной агрессией звука и света (усиленный испуг), происходит из предчувствия неприятного и мучительного события (М. DAVIS, Psychopharmacology, 62, (1979), 1-7).

Анксиолитические соединения, такие как бензодиазепины или буспироны, например, снижают амплитуду реакции усиленного внезапного испуга пропорционально использованной дозе (S. GREEN et al., "Animal Models of Anxiety" в Beharioural Models in Psychopharmacology, Ed. P. Willner, Cambridge Univ. Press, (1991), 21-49; M. DAVIS, Trends Pharmacol Sci., 13, (1992), 35-41).

Методика, использованная в этом тесте, является методикой, описанной M. DEVIS (см. выше), и состоит по существу из двух фаз:

1-я фаза: тренировка - животных тренируют реагировать на вспышку света, сопровождающуюся электрошоком по лапам;

2-я фаза: основной тест - измеряют амплитуду реакции испуга у животных при звуковом воздействии, сопровождается вспышкой света без электрошока - 20 опытов - (ответ на усиленный испуг или RSP), и измеряют также амплитуду реакции испуга у животных при звуковом воздействии, не сопровождающемся ни вспышкой света, ни электрошоком - 20 опытов - (ответ на испуг от звука) акустический (или RSA).

Используют группы из 10 неопытных самцов крыс Спраг-Доули. Испытуемыми соединениями являются (S)-(-) -- этил-2- оксо-1-пирролидинацетамид (соединение I) и хлордиазепоксид. Их вводят интраперитонеально (1 мл/кг крысы) за 60 минут до основного теста. Животные контрольной группы получали только физиологический раствор (0,9% NaCl). В момент испытания каждое животное помещают в клетку, связанную с акцелерометрами, которые автоматически регистрируют прыжки животного и выражают амплитуду ответа в произвольных единицах.

В таблице 4 приведены средние амплитуды, полученные для ответов RSA и RSP при указанных дозах.

Результаты показывают, что в группе контрольных животных ответ RSP является более интенсивным, чем ответ RSA, как предполагалось. Соединение I резко снижает амплитуду ответа на усиленный испуг (RSP), но оказывает только малое действие на ответ на акустический испуг (RSA).

Хлордиазепоксид, напротив, снижает амплитуду обоих ответов значительным образом. Влияние бензодиазепинов на RSA иллюстрирует недостаток, присущий этому классу соединений и который приписывается их седативному действию.

Такое соединение, как (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид, которое специфически действует на ответ RSP, может быть лучше показано для специфического лечения состояний патологической тревоги и, следовательно, обладает преимуществом перед существующими методами лечения.

5. Нейроэндокринный ответ при стрессе.

Адаптивные к стрессу ответы, вводящие механизмы ретро-контроля в гипоталамо-слизисто-адренергетическую систему, сильно ухудшаются у взрослых крыс. Эти возрастные ухудшения могут быть доказаны при измерении базального содержания плазматического кортикостерона, которое намного выше у старых субъектов, чем у молодых субъектов (R.M.SAPOLSKY. Neurobiol. Aging, 13, (1991), 171-174).

Стрессовая ситуация быстро повышает количество плазматического кортикостерона как у молодых животных, так и у старых животных, но эти последние, после стресса, приходят в прежнее состояние намного медленнее и менее полно (R. M. SAPOLSKY et al., Exp. GerontoL, 18, (1983), 55-64; A.M. ISSA et al., J. Neurosci., 10, (1990), 3247-3254).

Результаты этих эффектов, связанных с возрастом, являются важными потому, если справедливо, что глюкокортикоиды являются существенными для выживания и адаптации к различным раздражителям, то длительная экспозиция при избыточных уровнях глюкокортикоидов может быть патогенной для организма.

Тест, который был использован здесь, представляет собой тест на иммобилизацию, описанный R.M. SAPOLSKY (1983 г., см. выше). Животное, помещенное в течение 5 минут в огороженное пространство, достаточно узкое, чтобы удержать его полностью неподвижным (иммобилизационный стресс), проявляет реакцию беспокойства, которая вызывает быстрое повышение количества кортикостерона.

В этом эксперименте используют группы от 4 до 8 крыс Спраг-Доули молодых (2 месяца) и старых (20-21 месяц). Обработанные группы получали 17 мг/кг соединения I или 5 мг/кг хлордиазепоксида орально за 60 минут перед тестом на иммобилизацию.

Контрольные группы получали только физиологический раствор (0,9% NaCl). Измеряют количество плазматического кортикостерона перед стрессом, в конце стресса и через 30 минут, чтобы оценить состояние возвращения животного в прежнее состояние. В таблице 5 приведены средние количества плазматического кортикостерона для каждой группы животных, измеренные в этих условиях.

Результаты подтверждают, что в контрольной группе старые крысы имеют намного более высокий базальный уровень кортикостерона, чем молодые крысы. По окончании стресса этот уровень значительно повышается в обоих случаях, но 30 минут спустя после окончания стресса этот уровень всегда остается очень высоким у старых животных/контроля. Возвращение к прежнему состоянию у этих животных является более медленным, чем у молодых крыс.

В группах старых животных, обработанных как соединением I, так и хлордиазепоксидом, базальный уровень кортикостерона является менее высоким, чем в группе старых контрольных животных, однако он превосходит таковой у молодых контрольных животных.

Стресс также значительно увеличивает уровень плазматического кортикостерона у старых животных, однако группа старых животных, обработанных соединением I, быстрее возвращается в исходное состояние, чем животные, обработанные хлордиазепоксидом, как это видно из уровня кортикостерона, измеренного через 30 минут.

Этот результат показывает, что в противоположность хлордиазепоксиду (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид оказывает благоприятное действие на старых субъектов, подвергнутых стрессу, облегчая физиологическую адаптацию к стрессовой ситуации.

6. Синдром отлучения от бензодиазепинов.

Внезапное прекращение продолжительного терапевтического лечения бензодиазепинами часто сопровождается синдромом отлучения, характеризующимся большим разнообразием симптомов, обусловленных физической зависимостью от медикамента, например, дрожью, тошнотой, головокружениями или повышением давления, а также обычными симптомами беспокойства, которые резко выражены у людей. (J.H. WOODS et al., Pharmacol. Rev., 39, (1987) 251- 419; M.H.LADER, "Abuse Potential, Tolerance and Dependance on Chronic Anxiolytic Treatment" в "Target Receptors for Anxiolytic and Hypnotics: From Molecular Pharmacology to Therapeutic", Eds. J. Mendlewicz and G. Racagni, Karger, Bazel, Vol. 3 (1992), p. 46-54).

Основываясь на наблюдении, что отлучение ассоциируется с анксиогенными раздражителями, предложено использовать модели тревоги на животных, чтобы определить признаки отлучения у животного. (M.W. EMMETT-OGLESBY et al., Psychepharmacology, 101, (1990), 292-309).

Анксиогенный ответ на отлучение от диазепама, например, был объектом изучения на крысах с помощью теста на состояние тревоги в крестообразном возвышенном лабиринте и выражается в этом тесте значительным уменьшением исследования открытых ветвей. (S. E. FILE et al., Psychopharmacology, 105 (1991), 578-582).

Ту же самую модель использовали для изучения анксиогенного действия отлучения от хлордиазепоксида у мышей и доказательства анксиолитической активности (S)-(-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамида (соединения I) к этому синдрому.

Использовали группы из 17 мышей (NMRI), разделенных следующим образом:

группа 1: животных обрабатывали интраперитонально, два раза в день в течение 21 дня повышающими дозами хлордиазепоксида от 10 до 40 мг/кг;

группа 2: отлучение от хлордиазепоксида за 24 часа до испытания и отлученные животные получали физиологический раствор;

группа 3: отлученные животные получали соединение 1 в дозе 17 мг/кг интраперитонеальным путем;

группа 4: отлученные животные получали соединение 1 в дозе 54 мг/кг интраперитонеальным путем.

Контрольная группа получала только 10 мл/кг физиологического раствора.

В таблице 6 приведены средние цифры общего количества заходов в ветви лабиринта, процент заходов в открытые ветви по отношению к суммарному количеству заходов, а также среднее время, затраченное на обследование открытых ветвей для каждой группы животных, контрольных и обработанных.

Результаты показывают четко анксиолитическую активность хлордиазепоксида на животных, хронически обрабатываемых этим медикаментом (группа I), по отношению к контрольным; это выражается в увеличении количества заходов в открытые ветви лабиринта и времени, затрачиваемого на их обследование.

Отлучение (группа 2) вызывает беспокойство, которое проявляется как значительное снижение таких заходов, в то, время как (S)- (-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид (соединение I) в дозе 54 мг/кг (группа 4) снимает анксиолитическое действие отлучения от хлордиазепоксида и восстанавливает у отработанных животных поведение, которое подобно поведению контрольных животных.

7. Тест с водным лабиринтом.

Работают согласно методике R. MORRIS"a (J.Neurosci, Methods, 11, (1984), 47-60); тест с водным лабиринтом является тестом на обучение и запоминание, в котором крыс учат выбираться из воды, выплывая на платформу, расположенную в определенном месте, в большом круглом бассейне, заполненном непрозрачной водой.

Когда платформа погружена под поверхностью воды, она не видима и животное должно обучиться устанавливать расстояния для возвращения в убежище. Этот тест является чувствительным к антероградному амнестическому действию некоторых медикаментов, в частности бензодиазенинов, например, хлордиазепоксида.

Обучение выражается во время (в секундах), требующемуся животному, чтобы найти платформу во время сеансов тренировок, повторяющихся 4 дня последовательно. Амнестическое действие лекарства выражается как увеличение времени, необходимого животному для возвращения в убежище. (N.Mc. NAUGHTON et al., Behav. Brain Rev., 24, (1987), 39-46). В этом тесте используют группу из 8 крыс Спраг-Доули. Обработанные животные получали соединение I или хлордиазепоксид при оральном введении за 60 минут до испытания. Контрольная группа получала только 5 мл/кг физиологического раствора.

В таблице 7 приведено среднее время, необходимое животному из групп, обработанных указанными дозами, и контрольной группы, чтобы вернуться на платформу во время 4 последовательных сеансов.

Результаты показывают, что хлордиазепоксид оказывает амнестическое действие на животное, которое проявляется в значительном увеличении времени, необходимого для возвращения на платформу. Несмотря на естественное обучение, которое выражается в уменьшении затрачиваемого времени от сеанса к сеансу, амнезирующее действие хлордиазепоксида у обработанных животных по отношению к контрольным животным всегда хорошо проявляется на 4-й день.

Напротив, (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид (соединение I) даже при наиболее сильной дозе (170 мг/кг) не приводит к существенной разнице во времени, необходимому для возвращения на платформу, по сравнению с контрольными животными. Он лишен амнезирующих свойств хлордиазепоксида, которые представляют собой нежелательное побочное действие во время лечения беспокойства (тревожного состояния) бензодиазепинами (J.H. WOODS et al., Pharmacol Rev.,39, (1987), 251-419).

8. Нейротоксичность.

Нейротоксические эффекты соединения I сравнивали с таковыми у диазепама и хлордиазепоксида с помощью двух практических тестов на мышах: Теста Ирвина и теста Ротарода.

- Тест Ирвина (S. IRWIN, Phychopharmacologia (Beri.), 13, (1968) 222-257) является процессом систематического наблюдения нейротоксических эффектов лекарства на общее поведение и физиологическое состояние грызуна, крысы или мыши.

Отмечают изменения, наблюдаемые в различных параметрах поведения и состояния животного, и оценивают их с помощью произвольной шкалы оценок от 0 до 8 по сравнению с контрольными животными. Соединения вводили мышам возрастающими дозами интраперитонеальным путем и наблюдали животных через 5, 10, 30, 60 и 120 минут после инъекции.

- Тест Ротарода заключается в оценке способности крысы или мыши удерживаться в равновесии в течение 60 секунд на перекладине диаметром 3 см, вращающейся со скоростью 6 оборотов в минуту (N.W. DUNHAM et al., J. Am. Pharm. Assoc., XLVI, (1957), 208-209). Соединения были введены мышам в увеличивающихся дозах интраперитональным путем за 60 минут до теста.

В таблице 8 для теста Ирвина указаны дозы (мг/кг) соединений, которые провоцируют первые заметные изменения наблюдаемых параметров. Для теста Ротарода в таблице 8 приведена доза ED₅₀ (мг/кг) испытуемых соединений, которая является достаточной, чтобы 50% мышей, взятых в опыт, не могло удерживаться на перекладине, вращающейся в течение 60 секунд.

Результаты показывают, что первые нейротоксические эффекты (S)-(-) -- этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида (соединения I) возникают только при очень высоких дозах. При 540 мг/кг появляются первые проявления мышечного расслабления и при 1700 мг/кг, самой высокой испытанной дозе, становится заметным расстройство рефлекса выпрямления. Эта последняя доза почти в 100 раз выше анксиолитической дозы.

Напротив, диазепам и хлордиазепоксид снижают активность, реактивность и бдительность и приводят к мышечному расслаблению и расстройству координации движений при относительно низких дозах, которые только в 2-3 раза выше анксиолитических доз.

У животного соединение I, следовательно, обладает терапевтической границей между анксиолитической дозой и нейротоксическими дозами намного более высокой, чем бензодиазепины.

9. Клиническое испытание

Анксиолитическую активность (S)-(-) -- этил-2-оксо-1- пирролидинацетамида испытывали во время открытого клинического опыта, проведенного на 76 пациентах обоих полов, среднего возраста 39 лет, страдающих от различных тревожных состояний: фобий, панических состояний, общего беспокойства и навязчивых тревожных состояний.

Соединение было введено этим пациентам оральным путем при средней дозе 250 мг, два раза в день, в течение четырех недель. Степень беспокойства пациентов оценивали с помощью шкалы беспокойства Гамильтона (М. HAMILTON, Brit. J. Med. Psychol, 32, (1959), 50-55). Соединение считается активным каждый раз, когда наблюдают снижение степени беспокойства по крайней мере на 30%.

Соединение оказалось достаточно активным на 56 пациентах. Пациенты, которые лучше отвечают на лечение, являются пациентами, которые страдают беспокойством психического происхождения, по сравнению с пациентами, которые поражены беспокойством психосоциального происхождения. У некоторых пациентов отмечалась изредка сонливость, но достаточно легкая, чтобы не рассматривать ее как седативный эффект. Действительно, тесты на умственную способность, бдительность и память не были затронуты проводимым лечением.