соединения, обладающие избирательностью в отношении рецепторов ретиноида, фармацевтическая композиция (варианты) , способ модулирования процессов (варианты), способ подавления патологических состояний

Формула изобретения

1. Соединение общей формулы



где Q может быть выбран из следующих групп a) - g) :







где R₁ и R₂ каждый независимо - водород или низший алкил или ацил, имеющие 1 - 4 атома углерода;

Y - C или O;

R₃ - водород или низший алкил, имеющий 1 - 4 атома углерода, если Y - C;

R₄ - водород или низший алкил, имеющий 1 - 4 атома углерода, где Y - C, но R₄ и R₃ не существуют, если Y - O;

R" и R"" - водород, низший алкил или ацил, имеющие 1 - 4 атома углерода, OH, либо R" или R"", взятые вместе, образуют оксо(кето), метано, эпокси или циклоалкильную группу;

R""" и R"""" - водород, галоген, низший алкил или ацил, имеющие 1 - 4 атома углерода, либо R""" и R"""", взятые вместе, образуют низшую циклоалкильную группу;

R₅ - водород, низший алкил, имеющий 1 - 4 атома углерода, галоген, нитро, OR₇, SR₇, NR₇R₈ или (CF)_nCF₃, но R₅ не может быть водородом, если R" и R"" - водород, OH, или R" и R"", взятые вместе, образуют оксо- или метаногруппу;

R₆, R₁₀ - R₁₃ каждый независимо - водород, низший алкил, имеющий 1 - 4 атома углерода, галоген, нитро, OR₇, SR₇, NR₇R₈ или (CF)_nCF₃ и существуют только, если Z, Z", Z"", Z""", к которым они присоединены, являются C, и где один из R₆, R₁₀ - R₁₃ является X;

R₇ и R₈ - водород или низший алкил, имеющий 1 - 6 атомов углерода;

R₁₄ - водород, низший алкил, имеющий 1 - 4 атома углерода, оксо, гидрокси, C₁ - C₄-ацил, галоген, при условии, что R₁₄ может быть отличен от водорода только в случае, когда Q - группа формулы g);

X - COOH, тетразол, COOR₉, CONHR₉ (где R₉ - низший алкил, имеющий 1 - 4 атома углерода, фенил, ароматический алкил или замещенный в q-положении кольца фенила гидроксифенил, галогенфенил или карбоксифенил, где q - 2 - 4-е положение в фенильном кольце, или COOW, где W может быть связан с любым C или N в кольце, при условии, что X не может быть COOH, COOR₉, CONHR₉ или COOW, когда X присоединен к углероду кольца, находящемуся во 2-м или 6-м положении цикла;

Z, Z", Z"", Z""" каждый независимо - C, S, O, N, или фармацевтически приемлемую соль, но не O или S, если присоединен двойной связью к другому такому Z, который является O или S и не является N, если присоединен одинарной связью к другому такому Z, который является N и не является O или S, если кольцо, его содержащее, является 6-членным;

n = 0 - 3;

пунктирной линией в структурах b) и g) показаны необязательно двойные связи.

2. Соединение по п.1, которое избирательно активирует рецепторы ретиноида X, предпочтительно относительно рецепторов ретиноидной кислоты.

3. Соединение по п.1, которое модулирует процесс, избирательно опосредуемый рецепторами ретиноида X предпочтительно относительно рецепторов ретиноидной кислоты.

4. Соединение по п.1, где указанное соединение является по крайней мере в пять раз более сильным активатором рецепторов ретиноида X, чем рецепторов ретиноидной кислоты.

5. Соединение по п.1, выбранное из группы, в которую входят

4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)карбонил] бензойная кислота;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] -N-(4-карбоксифенил)бензамид;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] -N-(3-карбоксифенил)бензамид;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензойная кислота;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)циклопропил] бензойная кислота;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензолтетразол;

2-[1-(5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота;

2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота;

этил-2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил]пиридин-5-карбоксилат;

5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-2-карбоновая кислота;

2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)циклопропил]пиридин-5-карбоновая кислота;

метил-2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)циклопропил]пиридин-5-карбоксилат;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] -N-(4-гидроксифенил)бензамид.

6. 4-[1-(3,5,5,8,8-Пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензойная кислота по п.5.

7. 2-[1-(3,5,5,8,8-Пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил]пиридин-5-карбоновая кислота по п.5.

8. 2-[1-(3,5,5,8,8-Пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)циклопропил] пиридин-5-карбоновая кислота по п.5.

9. Фармацевтическая композиция, селективно активирующая рецепторы ретиноида X, содержащая активный компонент и фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для энтерального, парентерального или местного применения, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента содержит одно или более соединение по пп.1 - 8 в эффективном количестве.

10. Фармацевтическая композиция по п.9, отличающаяся тем, что эффективное количество соответствует единичной дозе 5 - 500 мг активного компонента.

11. Способ модулирования in vivo процессов, опосредованных рецепторами ретиноида X, таких, как процесс клеточного метаболизма в коже, липидного обмена, развития злокачественных клеток, предмалигнизационных повреждений клетки или запрограммированной гибели клетки, отличающийся тем, что включает введение соединения, которое избирательно активирует рецепторы ретиноида X по п. 1, причем указанная активация по крайней мере в 5 раз превосходит по силе активацию рецепторов ретиноидной кислоты.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что используют по крайней мере одно соединение, указанное в любом из пп.1 - 8 в эффективном количестве, которое составляет 5 - 500 мг.

13. Способ по пп. 11 и 12, отличающийся тем, что рецептор ретиноида X является , - или -рецепторами ретиноида X.

14. Способ по пп.11 и 12, отличающийся тем, что процесс in vivo является развитием и дифференциацией клетки или ветви морфогенеза.

15. Способ подавления патологических состояний в организме млекопитающего, связанных с процессами клеточной пролиферации или дифференциации нуждающегося в терапии рецептора ретиноида X, отличающийся тем, что назначают такому млекопитающему эффективное количество одного или более соединений, указанных в п.1.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что млекопитающему назначают одно или более соединений по пп.1 - 8 в единичной дозе 5 - 500 мг.

17. Фармкомпозиция, селективно активирующая рецепторы ретиноида X, включающая активный компонент и носитель, отличающаяся тем, что содержит первый активный компонент-соединение, избирательно активирующее рецепторы ретиноида X в предпочтении рецепторам ретиноидной кислоты, в сочетании с вторым активным компонентом-соединением, которое избирательно активирует рецепторы ретиноидной кислоты в предпочтении рецепторам ретиноида X.

18. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что в качестве первого активного компонента содержит соединение, избирательно активирующее рецепторы ретиноида X предпочтительно относительно рецепторов ретиноидной кислоты, выбранный из любого соединения по пп.1 - 8.

19. Композиция по п.17 или 18, где физиологическое действие на млекопитающих, вызываемое указанной композицией, при данной концентрации больше, чем дополнительный эффект, достигаемый использованием отдельно каждого одного указанного соединения в указанной концентрации.

20. Фармацевтическая композиция по п.17, отличающаяся тем, что содержит фармацевтически приемлемый носитель для энтерального, парентерального или местного применения.

21. Способ модуляции in vivo процесса, опосредуемого внутриклеточными рецепторами, такого, как липидный метаболизм, кожные процессы, развитие злокачественных клеток, предраковых повреждений либо запрограммированной гибели клетки, отличающийся тем, что указанный процесс проводят в присутствии композиции по п.17, причем физиологическое действие на млекопитающих, вызываемое указанной композицией, приданной концентрации больше, чем эффект, достигаемый использованием отдельно каждого одного указанного соединения в указанной концентрации.

22. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанное второе соединение избирательно предпочтительно активирует рецепторы ретиноидной кислоты относительно рецепторов ретиноида X.

23. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанную композицию используют в концентрации, при которой каждое в отдельности указанное первое или второе соединение не могло бы вызывать значительный терапевтический отклик.

24. Способ по п.21, где указанное второе соединение активирует рецепторы, активируемые пероксисомными пролифераторами.

25. Способ по п.21, где указанное второе соединение активирует рецепторы витамина D.

26. Способ по п.21, где указанное второе соединение активирует рецепторы тироидного гормона, рецепторы HNF4 или рецепторы члены семейства COUP.

Приоритет по пунктам и признакам:

22.04.92 по п.1, где Q - группа (a), в которой R₁ - R₄, Y и R₆; R" и R"" (OH), R" и R"", взятые вместе (оксо и метано), R""" и R"""" (водород, низший алкил или ацил, причем и алкил, и ацил содержат по 1 - 4 атома углерода); R₅ (водород, низший C_1-4 алкил, галоген, нитрогруппа, группа OR₇); R₇ (низший C_1-6алкил); X (COOH, тетразол, COOW); Z, Z"; по пп.2 - 4, 6, 9, 10, 15 и 16, по п. 5, где соединения выбраны из группы: 4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)карбонил] -бензойная кислота; 4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] -бензойная кислота; 4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил]-бензотетразол.

11.09.92 по п.1: общие формулы для Q групп (b - e) / R" и R"" (водород, низший алкил или ацил, причем и алкил, и ацил содержат по 1 - 4 атома углерода); R₆ - ((CF)_nCF₃); R₇ - (водород); R₈ - (водород, низший C_1-6 алкил); X - (COOR₉, CONHR₉) и R₉; соединения по п.5: 2-[1-(5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота; 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота; этил-2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-5-карбоксилат; 5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-2-карбоновая кислота; 4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] -N-(гидроксифенил)бензамид; пп.7, 12 - 14.

11.01.93 по п. 1: общая формула для Q (группа g), R" и R"", взятые вместе, представляют собой эпокси и циклопропил; R""" и R"""" - водород, низший C_1-4алкил или C_1-4ацил; R₅ - SR₇, NR₇R₈ или ((CF)_nCF₃); R_10-13, Z"", Z""" и Z""""; соединения по п.5: 4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)циклопропил] -бензойная кислота; метил-2- [1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)циклопропил]пиридин-5-карбоксилат.

05.03.93 по пп.17 - 26.

21.04.93 по п.1: R""" и R"""" - галоген, а R""" и R"""", взятые вместе, - цикло(низший)алкил, R₇ и R₈ - NR₇R₈, OR₇ и SR₇, R₁₄.

Описание изобретения к патенту

Изобретение касается внутриклеточных рецепторов и их лигандов. Более конкретно, данное изобретение касается соединений, обладающих избирательной активностью в отношении специфических рецепторов ретиновой кислоты и способов применения таких соединений.

Давно известно, что метаболит витамина A - ретиноидная кислота - вызывает широкий спектр биологических эффектов. Было обнаружено, что множество синтезированных структурных аналогов ретиноидной кислоты обладают биологической активностью. Обнаружено, что некоторые, например Retin-A- (зарегистрированная торговая марка Джонсон энд Джонсон Johnson & Johnson) и Accutane (зарегистрированная торговая марка Гоффиан-ЛяРош Hoffmann-LaRoche), полезны в качестве терапевтических агентов при лечении различных патологических состояний. Метаболиты витамина A и их синтетические аналоги называются здесь обобщено "ретиноиды".

Было обнаружено, что синтетические ретиноиды имитируют многие фармакологические действия ретиновой кислоты. Однако широкий спектр фармакологического действия ретиновой кислоты не воспроизводится во всей полноте всеми биоактивными синтетическими ретиноидами.

Специалисты в области медицины проявили большой интерес к медицинским применениям ретиноидов. Среди их применений, одобренных FDA является лечение острых форм воспаления сальной железы (угрях) и псориаза. Существует также большое количество доказательств, что эти соединения могут быть использованы для сдерживания и, в большой степени, обращения эффекта кожного заболевания, вызванного в результате длительного пребывания на солнце. Существует другое доказательство того, что эти соединения могут быть полезными при лечении различных тяжелых раковых заболеваний, включающих меланому, рак шейки матки, некоторые формы лейкемии и базальную и эпителиальную клеточную карциному. Была показана также способность ретиноидов быть эффективными при лечении предраковых клеточных повреждений, таких как оральная лейкоплакия, и для профилактики возникновения злокачественности (магигнизации).

Применение ретиноидов связано с множеством значительных побочных эффектов. Наиболее серьезными из них являются те, что как класс, они известны среди наиболее сильных тератогенов. Тератогены - это соединения, которые вызывают сильные врожденные нарушения при воздействии в период развития плода. Другие побочные эффекты включают раздражение обрабатываемых тканей, подвергающихся лечению, которое может быть настолько сильным, что пациент не может переносить лечение.

Были проведены различные исследования для объяснения связей, управляющих способностью синтетических ретиноидов вызывать различные фармакологические последствия воздействия ретиноидной кислоты. Это было сложной задачей, так как тесты, доступные исследователям, были биотестами, проводимыми либо на животных, либо на изолированных тканях. Технические ограничения часто диктовали использование различных видов небольших животных для различных тестов. Интерпритация результатов усложнялась возможными фармакинетическими и метаболическими эффектами и возможными видовыми отличиями в вовлеченных в процессе рецепторах. Тем не менее, наблюдалось определенное различие фармакологических эффектов различных синтетических ретиноидов.

Основной вклад в понимании молекулярного механизма трансдукции сигнала ретиноидной кислоты было сделано в 1988 г. Для этого времени различные многочисленные белки клеток, связанные с ретиноидами, неправильно относились к сигнальным рецепторам трансдукции рецепторов ретиноидной кислоты. В 1988 было показано, что член суперсемейства стероид/тироид гормональных внутриклеточных рецепторов (Evancs, Science, 240-889-95 (1988)) трансдуцирует сигнал ретиноидной кислоты (Giquere et al., Nature, 330: 624-29 (1987); Petkovichetal, Nature, 330:444-50 (1987)). Это неожиданное обнаружение увязало ретиноидную кислоту с другими непетидными гормонами и объяснило механизм действия ретиноидной кислоты в изменении функции клетки. В данное время известно, что ретиноиды регулируют активность двух различных подсемейств межклеточных рецепторов; рецепторов ретиноидной кислоты (RAR) и рецепторов ретиноидов X (RXR).

Первый идентифицированный рецептор ретиноидной кислоты, определенный как альфа-RAR действует как модулирующий транскрипцию специфических генов-мишеней способом, который является лиганд-зависимым, как это было показано для случая многих членов суперсемейства стероид/тироид гормонального внутриклеточного рецептора. Эндогенный низкомолекулярный лиганд, от которого зависит транскриптор-модулирующая активность альфа-RAR, является полностью-транс-ретиноидной кислотой. Изменения рецептора, определяющего ретиноидную кислоту, при генной экспрессии, приводят к характеристическим изменениям в клеточном фенотипе, вследствие чего во многих тканях проявляется биологический ответ на ретиноидную кислоту. Недавно идентифицированы два дополнительных гена, очень родственные альфа-RAR и обозначенные как бета-RAR и гамма-RAR, и являющиеся очень близкими (Brandetal., Nature, 322-850-53 (1988); Jshikawaet al. , Mol. Endocrin., 4:837-44 (1990). В области ретиноидных рецепторов, на которых может быть показано присоединение лигандов, первичная аминокислотная последовательность среди трех подтипов или изоформ RAR расходится менее чем на 15%, Полностью-транс-ретиноидная кислота является природным лигандом для рецепторов ретиноидной кислоты (RAR) и способна связываться с этими рецепторами с высоким средством, приводя к регуляции генной экспрессии. Недавно обнаруженный региноидный метаболит, 9-цис-ретиноидная кислота, также является активаторон RAR.

Близкое, но неожиданное наблюдение было сделано недавно (Mansgelsrorf et al. , Nature, 345: 224-29 (1990), описан другой член суперсемейства стероид/тироидных рецепторов, откликающийся на рутеноидную кислоту. Этот новый подтип ретиноидного рецептора обозначен как рецептор ретиноидного рецептора обозначен как рецептор ретиноида X (RXR), поскольку некоторые более ранние данные предполагали, что производное полностью-транс-ретиноидной кислоты может являться эндогенным лигандом для RXR. Подобно RAR, известно также, что RXR обладают тремя подтипами или изоформами, называемыми, соответственно, альфа-RXR, бета-RXR и гамма-RXR, с соответствующими уникальными типами экспрессии (Mangelsdorf et al., Genes & Devel., 6:329-44 (1992)).

Несмотря на то, что оба RAR и RXR отвечают на полностью-транс-ретиноидную кислоту, рецепторы отличаются несколькими важными аспектами. Во-первых, RAR и RXR существенно отличаются по первичной структуре (например, домены и RXR связанные с лигандом, имеют только 27%-ную аминокислотную идентичность). Эти структурные различия отражаются в различных относительных степенях откликов RAR и RXR по отношению к различным метаболитам витамина A и синтетическим ретиноидам. Кроме того, для RAR и RXR отчетливо видны различные типы тканевого распределения. Например, в противоположность RAR, который не экспрессируется с высоким уровнем в висцеральных тканях, показано, что RXR и ДНК максимально изобилует в печени, почках, легких, мышцах и кишечнике. Наконец, RAR и RXR имеют различную специфичность относительно целевого гена. Например, элементы ответа недавно идентифицированы в тетинол связывающем типе клеток 11 (CRBPII) и генах аполипопротеина A1, которые соответствуют отвечаемости RXR, но не RAR. Более того, недавно было показано, что RAR подавляет RXR-опосредованную активацию посредством элемента ответа CRBPII RXR (Mengelsdorf et, al., Cell, 66:555-61 (1991)). Эти данные свидетельствуют о том, что два пути отклика на ретиноидную кислоту являются не просто лишними, но напротив, свидетельствуют о комплексном взаимодействии. Недавно, Heyman et al, (Cell, 68:397-406 (1992)) и Levin et al. (Nature, 355-359-61 (1992)) независимо продемонстрировали, что 9-цис-ретиноидная кислота является природным эндогенным лигандом для RXR. Показано, что 9-цис-ретиноидная кислота связывает и трансактивирует как RXR, так и RAR, и поэтому оказывается действует как "бифункциональный" лиганд.

С точки зрения родственной, но не ясно различимой, природы этих рецепторов, лиганды, которые более избирательны по отношению к суперсемейству рецептора ретиноида X, могли бы иметь большое значение для избирательно контролируемых процессов, опосредованных одним или более изофорами RXR, и могли бы обеспечивать способность независимо контроля физиологических процессов, опосредованных RXR. Лиганды, которые предпочтительно взаимодействуют с одним или более, но не всеми изоформами рецепторов, также предполагают возможность повышения терапевтической эффективности, когда применяются в медицинских целях.

Полное описание публикаций и ссылок, представленных выше и далее в настоящем описании включено здесь в качестве ссылки.

Настоящее изобретение касается соединений, композиций и способов модуляции процессов, опосредованных одним или более рецепторами ретиноида X. Более конкретно, изобретение касается соединений, которые избирательно или предпочтительно активирую рецептор ретиноида X по сравнению с рецепторами ретиноидной кислоты. Эти соединения избирательно модулируют процессы, опосредованные рецепторами ретиноида X. Соответственно, изобретение также касается способов модуляции процессов, избирательно опосредованных одним или более рецепторами ретиноида X по сравнению с рецепторами ретиноидной кислоты, путем использования соединений по данному изобретению. Примеры соединений, используемых в изобретении и составляющие часть изобретения, включают бициклические бензил, пиридинил, тиофен, фуранил и пиррол производные. Фармацевтические композиции, содержащие описанные соединения, также входят в объем данного изобретения. Включенными являются также способы идентификации и очистки рецепторов ретиноида X путем использования соединения по данному изобретению.

Настоящее изобретение может быть лучше понято и его преимущества оценены специалистами из прилагаемых рисунков.

Фиг. 1 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающие трансактивацию изоформ RAR и RXR с помощью 3-метил-TTNCB.

Фиг. 2 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающие трансактивацию изоформ RAR и RXR полностью-транс-ретиноидной кислотой.

Фиг. 3 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающие трансактивацию изоформ RAR и RXR 9-цис-ретиноидной кислотой.

Фиг. 4 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающие трансактивацию изоформ RAR и RXR с помощью 3-метил-TTNEB.

Фиг. 5 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающие трансактивацию изоформ RAR и RXR с помощью 3-бром-TTNEB.

Фиг. 6 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающие трансактивацию изоформ RAR и RXR с помощью 3-метил-TTNCBP.

Фиг. 7 представляет профили отклика на стандартизированную дозу, показывающее трансактивацию изоформ RAR и RXR с помощью 3-метил-TTNEHBP.

Фиг. 8 представляет ингибирование трансглутаминазной активности 9-цис-ретиноидной кислотой, полностью-транс-ретиноидной кислотой и 3-метил-TTNCB.

Фиг. 9 представляет точечный отклик на дозу, ответ, основанный на тесте на мышах Rhinc для 9-цис-ретиноидной кислоты, полностью-транс-ретиноидной кислоты, 3-метил-TTNCB, 1,25-дигидроксивитамина D.

Фиг. 10 представляет влияние на крысиный HPL холестерин полностью-транс-ретиноидной кислоты, 9-цис-ретиноидной кислоты, 3-метил-TTNCB и 3-метил-TTNEB.

Фиг. 11 представляет эффект, зависящий от концентрации, индивидуальных 3-метил-TTNEB и TTNPB на включение радиоактивномеченого тинидина в ДНК.

Фиг. 12 представляет эффект, зависящий от концентрации, сочетания 3-метли-TTNEB и TTNPB на включение радиоактивномеченого тинидина в ДНК.

Данное изобретение раскрывает ретиноидподобные соединения или лиганды, которые обладают избирательной активностью в отношении членов подсемейства рецепторов ретиноида X (РРХ) по сравнению с членами подсемейства рецепторов ретиноидной кислоты (РРК). Примерами таких соединений являются бициклические бензил, пиридинил, тиофен, фуранил и пирролпроизводные, которые могут быть представлены формулой:



где Q может быть выбран из следующих групп a) - g):





где R₁ и R₂, каждый независимо, представляют водород или низший алкил или ацил, имеющие 1-4 атома углерода;

Y представляет C или O;

R₃ представляет водород, ацил или низший алкил, имеющие 1-4 атома углерода, если Y является С;

R₄ представляет водород, ацил или низший алкил, имеющие 1-4 атома углерода, где Y является С, но R₃ и R₄ не существуют, если Y является O;

R" и R"" представляет водород, низший алкил или ацил, имеющие 1-4 атома углерода, OH; либо

R" и R"", взятые вместе образуют оксо(кето), метано, эпокси или циклоалкильную группу;

R""" и R"""" представляют водород, галоген, низший алкил или ацил, имеющие 1-4 атома углерода; либо

R""" и R"""", взятые вместе образуют низшую циклоалкильную группу;

R⁵ представляет водород, низший алкил, имеющий 1-4 атома углерода, галоген, нитро, OR₇, SR₇, NR₇R₈ или (CF)_nCF₃, но R⁵ не может быть водородом, если R" и R"" - водород, OH, или R" и R"", взятые вместе, образуют оксо или метаногруппу;

R₆, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, каждый независимо, представляют водород, низший алкил, имеющий 1-4 атома углерода, галоген, нитро, OR₇, SR₇, NR₇R₈ или (CF)_nCF₃ и существуют только, если Z, Z", Z"", Z""", к которым они присоединены, являются C, и где один из R₆, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃ является X;

R₇ и R₈ представляет водород или низший алкил, имеющий 1-6 атомов углерода, NR₇R₈, OR₇, SR₇;

R₁₄ представляет водород, низший алкил, имеющий 1-4 атома углерода, оксо, гидрокси, C₁ - C₄ацил, галоген, при условии, что R₁₄ может быть отличен от водорода только в случае, когда Q - группа формулы g);

X представляет COOH, тетразол, COOR₉, CONHR₉ (где R₉ представляет низший алкил, имеющий 1-4 атома углерода, фенил, ароматический алкил или фенил замещенный в q положении кольца; гидроксигруппой, галогеном или карбоксигруппой где q - 2-4е положение в фенильном кольце; или COOW, где W может быть связан с любым C или N в кольце, при условии, что X не может быть COOH, COOR₉, CONHR₉или COOW, когда X присоединен к углероду кольца, находящемуся во 2 или 6 положении цикла;

Z, Z", Z"", Z""", каждый независимо, представляет C, S, O, N или фармацевтически приемлемую соль, но не O или S, если присоединен двойной связью к другому такому Z, который является O или S и не является N, если присоединен одинарной связью к другому такому Z, который является O или S и не является N, если присоединен одинарной связью к другому такому Z, который является N и не является O или S если кольцо его содержащее является 6-членным,

n = 0 - 3, и

пунктирной линией в структурах b) и g) показаны необязательно двойные связи.

Соединение I избирательно активирует рецепторы ретиноида X, предпочтительно относительно рецепторов ретиноидной кислоты, модулирует процесс избирательно опосредуемый рецепторами ретиноида X предпочтительно относительно рецепторов ретиноидной кислоты, и является по крайней мере в пять раз более сильным активатором рецепторов ретиноида X, чем рецепторов ретиноидной кислоты. Предпочтительны соединения I, выбранные из группы, в которую входят:

4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)карбонил] бензойная кислота,

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил]- N-(4-карбоксифенил)бензамид;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил]- N-(3-карбоксифенил)бензамид,

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил]- бензойная кислота,

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) циклопропил]бензойная кислота,

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] бензолтетразол,

2-[1-(5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] пиридин-5-карбоновая кислота,

2-[1-(5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] пиридин-5-карбоновая кислота,

этил 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил]пиридин-5-карбоксилат,

5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] пиридин-2-карбоновая кислота,

2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) циклопропил]пиридин-5-карбоновая кислота,

метил 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) циклопропил]пиридин-5-карбоксилат,

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] -N-(4-гидроксифенил)бензамид, из которых наиболее предпочтительны 4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил]бензойная кислота,

2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] пиридин-5-карбоновая кислота,

и 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) циклопропил] пиридин-5-карбоновая кислота.

Фармацевтическая композиция селективно активирующая рецепторы ретиноида X, содержащая активный компонент и фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для энтерального, парентерального или местного применения, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента содержит одно или более соединение 1 в эффективном количестве.

Эффективное количество соответствует единичной дозе от 5 до 500 мг активного компонента.

Способ модулирования in vivo процессов опосредованных рецепторами ретиноида X, таких как процесса клеточного метаболизма в коже, липидного обмена; развития злокачественных клеток, предмалигнизационных повреждений клетки или запрограммированной гибели клетки, отличающийся тем, что включает введение соединения, которое избирательно активирует рецепторы ретиноида X по п. 1, причем указанная активация по крайней мере в 5 раз превосходит по силе активацию рецепторов, причем эффективное количество, составляет от 5 до 500 мг, рецептор ретиноида X является рецепторами ретиноида X.

Предпочтительно, что процесс in vivo является развитием и дифференциацией клетки или ветви морфогенеза. Следующим объектом изобретения является способ подавления патологических состояний в организме млекопитающего, связанных с процессами клеточной пролиферации или дифференциации, нуждающегося в терапии рецептора ретиноида X, отличающийся тем, что назначают такому млекопитающему эффективное количество одного или более соединений.

Предпочтительно, млекопитающему назначают одно или более соединений по п. п. 1-8 в единичной дозе от 5 до 500 мг. Еще одним объектом изобретения является фармкомпозиция, селективно активирующая рецепторы ретиноида X, включающая активный компонент и носитель, отличающаяся тем, что содержит первый активный компонент - соединение избирательно активирующее рецепторы ретиноида X в предпочтении рецепторам ретиноидной кислоты, в сочетании со вторым активным компонентом - соединение которое избирательно активирует рецепторы ретиноидной кислоты в предпочтении рецепторам ретиноида X, которая в качестве первого активного компонента содержит соединение избирательно активирующее рецепторы ретиноида X предпочтительно относительно рецепторов ретиноидной кислоты, выбранный из любого соединения 1.

Физиологическое действие на млекопитающих, вызываемое указанной композицией, при данной концентрации больше, чем дополнительный эффект, достигаемый использованием отдельно каждого одного указанного лиганда в указанной концентрации. Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель для энтерального, парентерального или местного применения.

Еще одним объектом изобретения является способ модуляции in vivo процесса, опосредуемого внутриклеточными рецепторами, такого как липидный метаболизм, кожные процессы, развитие злокачественных клеток, предраковых повреждений либо запрограммированной гибели клетки, отличающийся тем, что указанный процесс проводят в присутствии композиции, причем физиологическое действие на млекопитающих, вызываемое указанной композицией, при данной концентрации больше, чем эффект, достигаемый использованием отдельно каждого одного указанного соединения в указанной концентрации.

Предпочтительно указанное второе соединение избирательно предпочтительно активирует рецепторы ретиноидной кислоты относительно рецепторов ретиноида X.

Предпочтительно указанную композицию используют в концентрации, при которой каждое в отдельности указанное первое или второе соединение могло бы вызывать значительный терапевтический отклик.

Предпочтительно указанное второе соединение активирует рецепторы, активируемые пероксисомными пролифераторами.

Предпочтительно указанное второе соединение активирует рецепторы витамина D.

Предпочтителен способ, где указанное второе соединение активирует рецепторы тироидного гормона, рецепторы HNF4 или рецепторы члены семейства COUP.

Как использовано в этом описании, фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются: солями с хлористоводородной, бромистоводородной, иодистоводородной, фтористоводородной, серной, лимонной, малеиновой, уксусной, молочной, никотиновой, янтарной, щавелевой, фосфорной, малоновой, салициловой, фенилуксусной, стеариновой кислотами, соли с пиридином, аммиаком, пиперазином, диэтиламином, никотинамидом, муравьиной кислотой, мочевиной, натрием, калием, кальцием, магнием, цинком, литием, коричной кислотой, метиламином, метансульфоновой кислотой, пировиноградной кислотой, триэтиламином, диметиламином и трис(гидроксиметил)аминометаном. Дополнительными фармацевтически приемлемыми солями являются такие, которые известны специалистам в данной области.

Показательные производные согласно настоящему изобретению включают следующие:

n-[3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафтил- (2-карбонил)] бензойная кислота, известная также как 4-[3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)- (2-карбонил] бензойная кислота и обозначаемая "3-метил-TTNCB";

n-[5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-изопропил-2- нафтил-(2-карбонил)] бензойная кислота, известная также как 4-[3-изопропил-3,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)- карбонил] бензойная кислота и обозначаемая "3-IPR-TTNCB" или соединение 37;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-изопропил-2- нафтил-(2-метано)] бензойная кислота, известная также как 4-[1-(3-изопропилу-3,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)-этенил] бензойная кислота и обозначаемая "3-IPR-TTNEB" или соединение 42;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-этил-2- нафтил-(2-метано)]бензойная кислота, известная также как 4-[1-(3-этил-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] бензойная кислота и обозначаемая "3-этил-TTNEB" или соединение 45;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-бром-2- нафтил-(2-метано)] бензойная кислота, известная также как 4-[1-(3-бром-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензойная кислота и обозначаемая "3-бром-TTNEB" или соединение 46;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-хлор-2- нафтил-(2-метано)] бензойная кислота, известная также как 4-[1-(3-хлор-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензойная кислота и обозначаемая "3-хлор-TTNEB" или соединение 43;

n-[3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафтил-(2- метано)] бензойная кислота, известная также как 4-[1-(3,5,5-8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензойная кислота и обозначаемая "3-метил-TTNEB";

n-[3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафтил-(2- гидроксиметил)] бензойная кислота, известная также как 4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) гидроксиметил] бензойная кислота и обозначаемая "3-метил-TTNHMB";

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-2-нафтил-(2- карбонил]бензойная кислота, известная также как 4-[(3-бром-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) карбонил] бензойная кислота и обозначаемая "3-бром-TTNHMB" или соединение 41;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-хлор-2-нафтил- (2-карбонил)] бензойная кислота, известная также как 4-[(3-хлор-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) карбонил]бензойная кислота и обозначаемая "3-хлор-TTNCB" или соединение 38;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-гидрокси-2- нафтил-(2-карбонил)] бензойная кислота, известная также как 4-[(3-гидрокси-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) карбонил]бензойная кислота и обозначаемая "3-гидрокси-TTNCB" или соединение 39;

n-[5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-3-этил-2- нафтил-(2-карбонил)] бензойная кислота, известная также как 4-[(3-этил-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) карбонил]бензойная кислота и обозначаемая "3-этил-TTNCB" или соединение 40;

n-[3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2- нафтил-(2-тиокето] бензойная кислота, известная также как 4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) тиокето]бензойная кислота и обозначаемая "тиокетон";

n-[3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2- нафтил-(2-карбонил)] -N-(4-гидроксифенил)бензамид, известный также как 4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) карбонил] -N-(4-гидроксифенил)бензамид и обозначаемый "3-метил-TTNCHBP";

n-[3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2- нафтил-(2-метано)]-N-(4-гидроксифенил)бензамид, известный также как 4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил) этенил] -N-(4-гидроксифенил)бензамид и обозначаемый "3-метил-TTNEHBP" или соединение 63;

2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)-этенил)] -5 -карбоновая кислота, обозначаемая "TPNEP" или соединение 58;

этил 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-5-карбоксилат, обозначаемый "TPNEP" или соединение Et-58;

2-[1-(5,5,8,8-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота, обозначаемая "TPNEP" или соединение 56;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)эпокси]бензойная кислота, обозначаемая "TPNEP" или соединение 47;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)циклопропил]бензойная кислота, обозначаемая "TPNCP" или соединение 48;

4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензилтетразол, обозначаемый "3-метил-TTNEBT" или соединение 55;

5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-2-карбоновая кислота, обозначаемая "TTNEPC" или соединение 60;

2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)циклопропил]пиридин-2-карбоновая кислота, обозначаемая "TTNCP" или соединение 62; и

метил 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)циклопропил]пиридин-5-карбоксилат, обозначаемый соединением Me-62.

Показательные структуры для таких соединений являются следующими:



4-[(3-изопропил-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил]бензойная кислота (3-изо-P_r-TTNCB)



4-[(3-хлор-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] бензойная кислота (3-хлор-TTNCB)



4-[(3-гидрокси-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] бензойная кислота (3-гидрокси-TTNCB)



4-[(3-этил-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] бензойная кислота (3-E_t-TTNCB)



4-[(3-бром-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] бензойная кислота (3-бром-TTNCB)



4-[(3-изопропил-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензойная кислота (3-изо-P_r-TTNEB)



4-[(3-хлор-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензойная кислота (3-хлор-TTNEB)



4-[1-(3-гидрокси-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензойная кислота (3-изо-P_r-TTNEB)



4-[1-(3-этил-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензойная кислота (3-E_t-TTNEB)



4-[1-(3-бром-5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензойная кислота (3-бром-TTNEB)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)эпокси]бензойная кислота (3-бром-TPNEB)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)циклопропил] бензойная кислота (TPNCB)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этил] бензойная кислота (TPNEB)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)-метилидинциклопентан]бензойная кислота (PTNCB)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)-2-метилпропенил]бензойная кислота (PTNIB)



2-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил]тиофен-5-карбоновая кислота (TTNCTC)



2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил]тиофен-5-карбоновая кислота (TTNETC)



4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] бензотетразол (3-метил-TTNCBT)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] бензотетразол (TTNEBT)



2-[1-(5,5,8,8-тетраметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота (TTNEP)



2-[3-5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил]пиридин-5-карбоновая кислота



2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновая кислота (TPNEP)



5-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] пиридин-2-карбоновая кислота (TTNCP)



5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-2-карбоновая кислота (TPNEPC)



Этил-5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-2-карбоксилат (3TTNEPE)



2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] пиридин-2-карбоновая кислота (TPNEPC)



Метил-2-[1-(3,5,5-8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)циклопропил]пиридин-5-карбоксилат



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] -N-(4-гидроксифенил)бензамид (3-Me-TTNEHBP)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] -N-(4-фторфенил)бензамид (3-Me-TTNEEFBP)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] -N-(4-карбоксифенил)бензамид (3-Me-TTNECBP)



4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)карбонил] -N-(3-гидроксифенил)бензамид (3-Me-m-TTCHBP)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] -N-(3-гидроксифенил)бензамид (3-Me-m-TTNEHBP)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] -N-(2-гидроксифенил)бензамид (3-Me-u-TTNCHBP)



4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2- нафтил)этенил] -N-(3-карбоксифенил)бензамид (3-Me-m-TTNECBP)



4-[1-(3,5,5,7,7-пентаметил-2-инданил)этенил]бензойная кислота



4-[1-(3,5,5,7,7-гексаметил-2-инданил)этенил]бензойная кислота



4-[1-(3,5,5,7,7-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)- метил]бензойная кислота

В дополнение, группы тиофен, фуранил, пиразин, пиразол, пиридазин, тиадиазол и пиррол действуют как изостеры для

фенильных групп и могут быть замещенными для фенильной группы вышеуказанных бициклических бензильных производных.

Показательные производные настоящего изобретения могут быть получены согласно следующим иллюстративным синтетическим схемам:



Соединения структуры 1, содержащие R₅ - низший алкил, получены в соответствии с патентом США N 2897237. Когда R₅ - галоген, OH, амино или тио, продукты получают в условиях обычной реакции Фриделя-Крафтца путем взаимодействия подходящего замещенного бензола с 2,5-дихлор-2,5-диметилгексаном в присутствии трихлорида алюминия.

Конденсацию 1 с монометилтерефталатом 2 проводят добавлением PCl₅ к 1 или 2 в CH₂Cl₁ с последующим прибавлением AlCl₃ при комнатной температуре.

Полученные метиловые эфиры 3 гидролизуют до карбоновой кислоты 4 путем кипячения с обратным холодильником в водной KOH-MeOH с последующим подкислением.

Обработка кетона 4NHaBH₄ приводит к спирту 5.

Обработка метилового эфира 3 с помощью метилтрифосфоний бромида - амида натрия в ТГФ приводит к метаносоединению 6.

Карбоновая кислота 7 получена добавлением KOH к метаносоединению 6 в MeOH с последующим подкислением.

Обработка метилового эфира 6 с помощью газообразного водорода и 5% палладия на угле в этилацетате приводит к гидрированному соединению 9.

Обработка 9 водным KOH при кипячении с обратным холодильником в MeOH с последующим подкислением приводит к получению соединению карбоновой кислоты 10.

Конденсацию 1 с тиофен-2,5-монометилдикарбоновой кислотой или фуранил-2,5-монометилдикарбоновой кислоты проводят добавлением PCl₃ в CH₂Cl₂ с последующим добавлением AlCl₃ при комнатной температуре с получением эфиров 11 или 12, которые затем гидролизуют KOH с последующим подкислением соответствующих кислот.

Соединения 4,4-диметилхромана и 4,4-диметил-7-алкилхромана типа 13 и 14, такие как и аналоги 4,4-диметилтиохромана, 4,4-диметил-7-алкилтиохромана, 4,4-диметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина и 4,4-диметил-7-алкил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина были синтезированы методами, подобными соединению 3, то есть в условиях реакции Фриделя-Крафтца путем взаимодействия подходящего диметилхромана, диметилтиохромана или диметилтетрагидрохинолина с хлорангидридом монометилтетефталевой кислоты в присутствии AlCl₃ или SnCl₄ с последующим основным гидролизом и подкислением с получением карбоновой кислоты. Для синтеза тетрагидрохинолиновых аналогов было необходимо ацилировать амин перед взаимодействием по Фриделю-Крафтцу с хлорангидридом монометилтерефталевой кислоты. Для синтеза подходящих диметилхроманов, диметилтиохроманов и диметилтетрагидрохинолинов см. патенты США NN 5053523 и 5023341 и Европейский патент N 02842288.

Соединения типа 18 были синтезировы нуклеофильным присоединением реактива Гриньяра 16 к бромтетралону, броминдану или другому производному бициклического кетона. Обработка полученного спирта метанольной HCl дает промежуточный продукт 17. Замещение брома с помощью CuCN в хинолине дает нитрил, который затем гидролизуют до кислоты 18 при кипячении с обратным холодильником в присутствии KOH. Бромистое соединение 15 было синтезировано из 2,5-дихлор-2,5-диметилгексана и 2-бромтолуола с каталитическим количеством AlCl₃.

Обработка соединений 3-метил-TTNCB и 3-метил-TTNEBDCC п-аминофенолом и ДМАР приводит к получению аминоэфиров 19 и 20.

Представленные пиридиновые производные (соединения 21, 23, 26 и 27) могут быть получены согласно иллюстративным синтетическим схемам (см. в конце описания). Синтез соединения 21 подобен синтезу соединения 7. Пентаметилтетрагидронафталин 1, хлорангидрид пиридиновой кислоты 24 и AlCl₃ перемешивают в CH₂Cl₂ с получением кетона 25. Обработка кетона 25 метилтрифосфонийбромидом-амидом натрия в ТГФ приводит к этенильному 26. Гидролиз 26 (КОН, MeOH) с последующим подкислением дает кислоту 21. Циклопропильный аналог 23 был синтезирован обработкой этенильного соединения 26 с помощью CH₂I₂, порошка цинка, CuCl при кипячении с обратным холодильником в эфире (реакция Симмонса-Смита). Гидролиз полученного циклопропилового эфира 27, осуществляемый с помощью метанольного КОН с последующим подкислением, дает соединение 23. Когда R₁-R₅ являются метилом, получают, например, соединение 62 (TPNCP), как показано в примере 33 далее.

Другие циклопропильные производные, какие как TPNCB (соединение 48), могут быть также получены способом, описанным для аналога 23: олефин 6 обрабатывают реагентом Симмонса-Смита, описанным выше, с последующим гидролизом метанольным КОН и подкислением (HCl) с получением желаемого циклопропильного производного, эпоксипроизводные, такие как TPNEB (соединение 47) могут быть синтезированы обработкой соединений 7 п-хлорпербензойной кислотой при комнатной температуре в CH₂Cl₂ в течение нескольких часов.

Альтернативно, пиридиновые аналоги, такие как соединения 58 (TPNEPC), 60 (TPNEPC) и 61 (3TTNEPE), могут быть получены следующим синтетическим путем (см. в конце описания).

Иллюстративные примеры получения некоторых соединений согласно настоящему изобретению следующие:

Пример 1

Получение соединения 3, R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом, R" и R"" являются оксо и X=COOMe;

К 7 г (34,7 ммоль) 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина и 6 г (33,3 ммоль) монометилтерефталата в 200 мл CH₂Cl₂ добавляют 8 г (38,8 ммоль) PCl₃. Реакционная смесь энергично кипит и становится прозрачной через 10 мин. После перемешивания еще в течение 1 ч добавляют 6 г (43,5 ммоль) AlCl₃ порциями по 1 г в течение 15 минут и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Смесь выливают в 300 мл 20% водной HCl и экстрагируют 5% EtOAc-гексаном, высушивают (MgSO₄), концентрируют и кристаллизуют из MeOH с получением 6 г (16,5 ммоль) метилового эфира 3.

¹H ЯМР (CD₃OD₃) 1,20 (с, 2(CH₃)), 1,35 (с, 2(CH₂)), 1,75 (с, 2(CH₃)), 2,31 (с, CH₃), 3,93 (с, COOCH₃, 7,21 (c.Ar-CH), 7,23 (с, Ar-CH), 7,85 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8.18 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 2

Получение соединения 4, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом, R" и R" являются оксо и X=COOH (3-метил-TTNCB):

К 6 г (16,5 ммоль) метилового эфира 3, суспендированного в 100 мл MeOH, добавляют 50 мл 5н водной КОН. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждают, подкисляют (20% водная HCl) и органические соединения экстрагируют EtOAc. После высушивания (MgSO₄) продукт концентрируют и высаживают из

EtOAc-гексана с получением 5 г (14,3 ммоль) кислоты 4.

¹H ЯМР (CD₃OD₃) 1,20 (c, 2(CH₃)), 1,35 (c, 2(CH₃)), 1,75 (с, 2(CH₂)), 2,31 (с, CH₃), 7,21 (с, Ar-CH), 7,23 (с, Ar-CH), 7,91 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,21 (д, J = 8 Гц), Ar-2(CH)).

Пример 3.

Получение соединения 4, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом, R"=H и R""=OH и X=COOH (3-метил-TTNHMB):

К раствору 1:1 ТГФ-MeOH, содержащему 1 г (2,86 ммоль) кетона 4, добавляют 100 мг NaBH₄. Смесь нагревают до 50^oC в течение 10 мин, охлаждают, подкисляют (10% водная HCl) и органические соединения экстрагируют (EtOAc). После высушивания (MgSO₄), продукт концентрируют и высаживают из 1:3 EtOAc-гексана с получением 550 мг (1,56 ммоль) спирта 5.

¹H ЯМР (CD₃OD₃) 1,20 (с, 2(CH₃)), 1,22 (c, 2(CH₃), 1,65 (с, 2(CH₂)), 2,21 (с, CH₃), 6,00 (с, -CHOH-), 7,09 (с, Ar-CH), 7,41 (с, Ar-CH), 7,53 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,01 (д, J = 8 Гц, Ar-21 (CH)).

Пример 4.

Получение соединения 6, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано и X=COOMe:

К 1 г метилового эфира 3 (2,7 ммоль) в 25 мл сухого ТГФ добавляют 1,2 г (3,08 ммоль) метилтрифосфоний бромида-амида натрия. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч или до полного завершения реакции по данным ТСХ (20% EtOAc-гексан). Добавляют воду и органические соединения экстрагируют EtOAc, высушивают (MgSO₄), концентрируют и очищают хроматографией на SiO₂ (5% EtOAc-гексан) с последующей кристаллизацией из MeOH с получением 700 мг (1,93 ммоль) метано соединения 6.

¹H ЯМР (CD₃CD₃) 1,22 (с, 22 (с, 2(CH₃)), 1,30 (с, 2(CH₃)), 1,72 (с, 2(CH₂)), 1,95 (с, CH₃), 3,85 (с, COOCH₃), 5,29 (c, =CH), 5,92 (с, =CH), 7,19 (с, Ar-CH), 7,23 (с, Ar-CH), 7,39 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 7,96 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 5.

Полученные соединения 7, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано и X=COOH (3-метил-TTNEB):

К 500 мг метаносоединения 6 (1,38 ммоль) в 20 мл MeOH добавляют 5 мл 5н водного КОН и суспензию кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. После подкисления (20% водная HCl) органические соединения экстрагируют (EtOAc), высушивают (MgSO₄), концентрируют и твердый продукт перекристаллизовывают из E OAc-гексана 1:5 с получение 350 мг (1,0 ммоль) карбоновой кислоты 7.

¹H ЯМР (CD₃CD₃), 1,22 (с, 2(CH₃)), 1,30 (с, 2(CH₃)), 1,72 (с, 2(CH₂)), 1,95 (с, CH₃), 5,22 (с, =CH), 5,89 (с, =CH), 7,19 (с, Ar-CH), 7,20 (с, Ar-CH), 7,39 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 7,96 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 6.

Получение соединения 37, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются изопропилом, R" и R"" являются оксо и X=COOH (3-IPR-TTNCB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4, за исключением того, что 6-изопропил-1,1,4,4-тетраметил- 1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1 и 2 Т. пл. : 254^oC; ¹H ЯМР (CDCl)₃ 1,19 (д, J = 7 Гц, CH(CH₃)₂), 1,21 (с, 2(CH₃)), 1,33 (с, 2(CH₃)), 1,70 (с, 2(CH₂)), 3,12 (кв, J = 7 Гц, CH(CH₃)₂), 7,14 (c, Ar-CH), 7,37 (с, Ar-CH), 7,92 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 8,19 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH).

Пример 7.

Получение соединения 38, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является хлором, R" и R"" являются оксо и X=COOH (3-хлор-TTNCB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4, за исключением того, что 6-хлор-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1 и 2. Т.пл.: 254^oC; ¹H ЯМР (CDCl₃) 1,26 (с, 2(CH₃)), 1,32 (с, 2(CH₃)), 1,72 (с, 2(CH)), 7,35 (с, Ar-CH), 7,36 (с, Ar-CH), 7,91 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,19 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 8.

Получение соединения 39, где R₁, R₂, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является гидрокси, R" и R"" являются оксо и X= COOH (3-гидрокси- TTNCB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4, за исключением того, что 6-гидрокси-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1 и 2. Т.пл.: 264^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,17 (с, 2(CH₃)), 1,31 (с, 2(CH₃)), 1,68 (с, 2(CH₂)), 7,02 (с, Ar-CH), 7,44 (с, Ar-CH), 7,77 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,27 (д, J=8 гц, Ar-2(CH)), 11,50 (с, -OH).

Пример 9

Получение соединения 40, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является этилом, R" и R"" являются оксо и X=COOH (3-E-TTNCB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4, за исключением того, что 6-этил-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1 и 2.

Т. пл. : 226^oC^o; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,16 (т J = 7,5 Гц, -CH₂CH₃), 1,19 (c, 2(CH₃)), 1,32 (c, 2(CH₃)), 1,69 (c, 2(CH₂)), 2,69 (кв, J = 7,5 Гц, CH₂CH₃)), 7,20 (c, Ar-CH), 7,25 (c, Ar-CH), 7,87 (ушир. д, Ar-2(CH), 8,20 (ушир. д, Ar-2(CH)).

Пример 10

Получение соединения 41, где R₁, R₂, R_3t и R₄ являются метилом, R₅ является бромом, R" и R"" являются оксо и X=COOH (3-бром-TTNCB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4, за исключением того, что 6-бром-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1 и 2. Т.пл.: 275^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,25 (c, 2(CH₃)), 1,32 (c, 2(CH₃)), 1,71 (c, 2(CH₂)), 7,30 (c, Ar-CH), 7,54 (c, Ar-CH), 7,90 (д, J= 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,18 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 11

Получение соединения 42, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является изопропилом, R" и R"" являются метано и X = COOH (3-IPR-TTNEB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того, что 6-изопропил-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5. Т.пл.: 252^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,05 (д, J = 7 Гц, CH(CH₃)₂), 1,27 (c, 2(CH₃)), 1,32 (c, 2(CH₃)), 1,70 (c, 2(CH₂), 2,73 (кв. J =7 Гц, CH(CH₃)₂), 5,32 (c, J = CH), 5,87(c, = CH), 7,06 (c, Ar-CH), 7,23 (c, Ar-CH), 7,40 (д, J =8 Гц, Ar-2(CH)), 8,040 (д, J - 8 Гц, Ar-2(CH).

Пример 12

Получение соединения 43, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является хлором, R" и R"" являются метано и X = COOH (3-хлор-TTNEB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того что 6-хлор-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используемого вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5. Т.пл.: 233^oC ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃), 1,71 (c, 2(CH₂)), 5,42 (c, = CH), 5,89 (c, = CH), 7,23 (c, Ar-CH), 7,28 (c, Ar-CH), 7,37 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,03 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 13

Получение соединения 44, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является гидрокси, R" и R"" являются метано и X=COOH (3-гидрокси-TTNEB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того, что 6-гидрокси-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5. Т.пл.: 216^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,21 (c, 2(CH₃)), 1,30 (c, 2(CH₃)), 1,68 (c, 2(CH₂)), 5,54 (c, = CH), 5,94 (c, = CH), 6,86 (, Ar-CH), 7,00 (c, Ar-CH), 7,48 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH), 8,07 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH).

Пример 14

Получение соединения 45, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является этилом, R" и R"" являются метано и X=COOH (3-Et-TTNEB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того, что 6-этил-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5.

Т. пл. : 236^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 0,99 (т, J = 7,6 Гц, -CH₂CH₃, 1,27 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,70 (c, 2(CH₂)), 2,29 (кв, J = 7,6 Гц, - CH₂CH₃, 5,34 (c, =CH), 5,83 (c, =CH), 7,08 (c, Ar-CH), 7,12 (c, Ar-CH), 7,38 (д, J = 8,4 Гц, Ar-21(CH)), 8,00 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH).

Пример 15

Получение соединения 46, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R₅ является бромом, R" и R"" являются метано и X=COOH (3-бром-TTNEB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того, что 6-бром-1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5. Т. пл.: 235^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,27 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,71 (c, CH₃), 5,40 (c, =CH), 5,90 (c, =CH), (c, =CH), 7,26 (c, Ar-CH), 7,36 (c, Ar-CH), 7,43 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 8,04 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 16

Получение соединения 47, где R₁, R₂, R₃ и R₄ являются метилом, R" и R"" взятые вместе, являются CH₂-O (эпоксид) и X=COOH (TPNEB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 6, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом. К 1 г (2,76 ммоль) олефина 6 в 5 мл CH₂Cl₂ добавляют 600 мг (3,46 ммоль) и CPBA и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавление воду и далее экстрагируют органические соединения эфиром. Эфирный слой промывают водой, 1 н Na₂CO₃, рассолом и высушивают (MgSO₄) фильтруют и концентрируют. Кристаллизация из MeOH дает желаемый эпокси-метиловый эфир. Метиловый эфир гидролизуют при кипячении с обратным холодильником в присутствии метанольного KOH с получением подкислением (1 н HCl) с получением сырой эпоксидной кислоты 47, которую очищают кирсталлизацией из EtOAc-гексана с получением 600 мг (1,64 ммоль) белого порошка (выход 59%). Т.пл.: 168^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,26 (c, CH₃, 1,27 (c, CH₃), 1,30 (c, CH₃), 1,31 (c, CH₃), 1,69 (c, (2CH₂), 2,14 (c, CH₃), 3,15 (д, J = 5,6 Гц, CH-O), 3,41 (д, J= 5,6 Гц, CH-O), 7,09 (c, Ar-OH), 7,28 (д, J = 8,3 Гц, Ar-21(CH)), 7,32 (c, Ar-CH), 8,01 (д, J = 8,3 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 17

Получение соединения 48, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом, R" или R"", взятые вместе, являются CH₂-CH₂ (циклопропил) и X=COOH (TPNCB):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 6, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом. В сухую, трехгорлую круглодонную колбу, снабженную обратным холодильником, капельной воронкой и магнитной мешалкой, добавляют 722 мг (11,65 ммоль) цинкового порошка, 109 мг (1,105 ммоль) хлорида меди (CuCl), 7,5 мл сухого ТГФ и 1,48 г (5,52 ммоль) дииодметана. Через капельную воронку добавляют 1 г (2,76 ммоль) соединения 6 в 5 мл сухого ТГФ. Колбу нагревают до 80^oC, затем по каплям добавляют 6. После завершения добавления 6 реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 30 ч до полного завершения реакции с последующим разбавлением 50 мл эфира и 20 мл насыщенного раствора хлорида аммония. Органический слой промывают 10% NaOH (3X20 мл), рассолом и высушивают над безводным MgSO₄. Продукт концентрируют и очищают препаративный ТСХ (2% EtOAc-гексан) с получением 220 мг (0,59 ммоль) метилового эфира 48. Гидролиз метилового эфира при кипячении с обратным холодильником в присутствии метанольного KOH с последующим подкислением (1н HCl) дает 150 мг (0,41 ммоль) желаемого соединения 48 после кристаллизации из EtOAc-гексана (выход 15%).

Т.пл.: 244^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (c, 4(CH₃)), 1,39 (c, CH₂-CH₂), 1,69 (c, 2(CH₂), 2,1 (c, CH₃), 6,98 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH), 7,06 (c, Ar-CH), 7,29 (c, Ar-CH), 7,91 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH).

Пример 18

Получение соединения 49, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R"=H и R""=CH₃ и X=COOH (PTNEB):

Соединение получают из соединения 7, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом. К 1 г (2,87 ммоль) соединения 7 в 25 мл EtOAc добавляют 10 мг 10% P/C. Смесь дегазируют в вакууме с последующим добавлением H₂ и перемешивают под H₂ в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтруют сквозь целит и продукт кристаллизуют из EtOAc-гексана с получением 750 мг (2,41 ммоль) желаемого продукта 49 (выход 75%). Т.пл.: 208^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,24 (c, CH₃), 1,25 (c, CH₃), 1,26 (c, CH₃), 1,29 (c, CH₃), 1,61 (д, J = 7,2 Гц, CH₃), 1,67 (с, (2CH₂)), 2,12 (c, CH₃), 4,30 (кв., J = 7,2 Гц, CH), 7,02 (c, Ar-CH), 7,20 (c, Ar-CH), 7,24 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH), 7,99 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 19

Получение соединения 50, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" = метилиданциклопентан и X=COOH (PTNCB):

Соединение получают из соединения 4, где R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ являются метилом. К 1 г (2,87 ммоль) 4 в 25 мл ТГФ при 0^oC добавляют 8,6 мл 1М раствора циклопентилмагний хлорида (8,6 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин добавляют воду и подкисляют 5н HCl. Подкисленную смесь нагревают 5 мин, охлаждают и органический продукт экстрагируют EtOAc. ETOAc-ный слой промывают водой и рассолом, сушат (M₉SO₄), фильтруют и концентрируют с получением сырого продукта. Кристаллизация из EtOAc-гексана дает 340 мг (0,85 ммоль) 50 в виде белого порошка (выход 30%). Т.пл.: 201^oC; ¹ H-ЯМР (CDCl₃) 1,27 (с, 4(CH₃)), 1,64 (1 ушир.т, CH₂), 1,68 (с, 2(CH₂)), 1,70 (ушир. т, CH₂), 1,97 (с, CH₃), 2,15 (ушир.т, CH₂), 2,56 (ушир.т, CH₂), 7,04 (с, Ar-CH), 7,05 (с Ar-CH), 7,29 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 7,97 (д, J = 8 Гц, Ar-2(СР)).

Пример 20

Получение соединения 51, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" = изопропилиден и X = COOH (RTNIB):

Соединение получают из соединения 4, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом. К 1 г (2,87 ммоль) 4 в 25 мл ТГФ при 0^oC добавляют 8,6 мл 1М раствора изопропилмагний хлорида (8,6 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин добавляют воду и подкисляют 5 н HCl. Подкисленную смесь нагревают 5 мин, охлаждают и органический продукт экстрагируют EtOAc. EtOAc-ный слой промывают водой и рассолом, сушат (M₉SO₄), фильтруют и концентрируют с получением сырого изопропилиденового продукта. Кристаллизация из EtOAc-гексана дает 550 мг (1,46 ммоль) 51 в виде белого порошка (выход 51%) Т.пл.: 297^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,25 (ушир.с, 4 (CH₃)), 1,64 (с, =CCH₃), 1,66 (с, =CCH₃), 1,87 (с, 2(CH₂)), 1,96 (с, CH₃)), 7,00 (с, Ar-CH), 7,03 (с, Ar-CH), 7,25 (д, J = 8 Гц, Ar-21(CH)), 7,97 (д, J = 8 Гц, Ar-21(CH)).

Пример 21

Получение соединения 52, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ является метилом, R" и R"" = около, Z = S и X = COOH (TTNCTC):

К 1 г (4,9 ммоль) 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидранафталина и 1 г (4,9 ммоль) хлорангидрида ионометилтиофенкарбоновой кислоты в 25 мл CH₂Cl₂ добавляют 1 г (7,5 ммоль) AlCl₃. Реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 15 минут с последующим охлаждением и добавлением 20% водной HCl. Продукт экстрагируют EtOAc, промывают (H₂O, рассол), высушивают (M₉SO₄), фильтруют, концентрируют и очищают кристаллизацией из MeOH с получением 450 мг (1,21 ммоль) метилового эфира 52 (выход 25%). Метиловый эфир гидролизуют в присутствии метанольного KOH с последующим подкислением (20% HCl), экстракцией EtOAc, промывают (H₂O, рассол), высушивают (M₉SO₄), фильтруют, концентрируют и очищают кристаллизацией из EtOAc-гексана с получением 375 мг (1,05 ммоль) 52 (выход 87%). Т.пл.: 206^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,26 (с, 2(CH₃)), 1,31 (с, 2(CH₂)), 1,71 (с, 2(CH₃)), 2,38 (с, CH₃), 7,21 (с, Ar-CH), 7,44 (с, Ar-CH), 7,48 (д, J = 4 Гц, тио Ar-CH), 7,85 (д, J = 7 Гц, тио Ar-CH).

Пример 22

Получение соединения 53, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R"и R"" = метано, Z = S и X = COOH (TTNETC):

Соединение 53 получают из метилового эфира 52 способом, подобным способу по примерам 4 и 5. Т.пл.: 200^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,26 (с, 2(CH₃)), 1,30 (с, 2(CH₃)), 1,69 с, 2(CH₂)), 2,10 (с, CH₃), 5,21 (с, =CH), 5,88 (с, =CH), 6,76 (д, J = 4 Гц, тио Ar-CH), 7,11 (с, Ar-CH), 7,23 (с, Ar-CH), 7,68 (д, J = 4 Гц, тио Ar-CH).

Пример 23

Получение соединения 54, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" = оксо и X = тетразол (3-метил-TTNCBT):

К 500 мг (1,51 ммоль) 4-[(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8- тетрагидро-2-нафтил)-2-карбонил] бензонитрила (синтезированного катализируемой AlCl₃ концентраций 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина с хлорангидридом 4-цианобензойной кислоты в CH₂Cl₂) в толуоле добавляют 342 мг (1,66 ммоль) азида триметилолова. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 23 ч и охлаждают с получением 537 мг (1,44 ммоль) желаемого тетразола 54 в виде белого осадка (выход 96%).

LRMS: 374,15; ¹H-ЯМР (CD₃SOD₃) 1,19 (с, 2(CH₃)), 1,32 (с, 2(СH₃)), 1,70 (с, 2(CH₂)), 2,25 (с, CH₃), 3,19 с, -H), 7,30 (с, Ar-CH), 7,32 (с, Ar-CH), 7,90 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 8,20 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 24

Получение соединения 55, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" = метано и X = тетразол (3-метил-TTNEBT):

К 500 мг (1,52 ммоль) 4-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8- тетрагидро-2-нафтил)этенил] бензонитрила (синтезированного катализируемой AlCl₃ конденсацией 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина с хлорангидридом 4-цианобензойной кислоты в CH₂Cl₂ с последующей обработкой кетона CH₃PPh₃ Br-NaNH₂) в толуоле добавляют 342 мг (1,67 ммоль) азида триметилолова. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 23 ч и охлаждают с получением 535 мг (1,44 ммоль) желаемого тетразола 55 в виде белого осадка (выход 95%). LRMS: 372,25:, ¹H-ЯМР (CD₃SOCD₃) 1,21 (с, 2(СH₃)), 1,24 (с, 2(CH₃)), 1,68 (с, 2(CH₂)), 1,92 (с, CH₃), 2,55 (с, N-H), 5,27 (=CH), 5,97 (с, =CH), 7,10 с, Ar-CH), 7,18 (с Ar-CH), 7,47 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 8,00 (д, J = 8 Гц, Ar-21 (CH)).

Пример 25

Получение соединения 25, где R₁, R₂, R₃, R₄ являются метилом, R" и R"" = оксо и X = COOMe:

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4, за исключением того, что 1,1,4,4-тетраметил-1,2,3,4-тетрагидронафталин используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина и 4-метиловый эфир хлорангидрида пиридин-2 уксусной кислоты используют вместо хлорангидрида монометилтерефталевой кислоты (см. примеры 1 и 2).

Пример 26

Получение соединения 26, где R₁, R₂, R₃, R₄ являются метилом, R" и R"" = метана и X = COOH (TTNEP):

Соединение 25 обрабатывают CH₃PPh₃ Br-NaNH₂ по примеру 4. Гидролиз полученного олефинового метилового эфира метанольным KOH с последующим подкислением (20%HCl) кристаллизация из EtOAc-гексана дает соединение 56. Т.пл.: 173^oC;

¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,26 (с, CH₃), 1,27 (с, CH₃), 1,30 (с, 2(CH₃)), 1,70 (с, CH₂), 5,70 (с, =CH), 6,10 (с, =CH), 7,08 (д, J = 8 Гц, Pyr-CH), 7,27 (с, Ar-CH), 7,19 (д, J = 8 Гц, Ar-CH) 7,39 (д, J = 8 Гц, Ar-CH), 8,28 (д, J = 8 Гц, Pyr-CH), 9,31 (с, Pyr-CH).

Пример 27

Получение соединения 57, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ является метилом, R" и R"" = оксо и X = COOH:

Соединение 57 получают способом, подобным способу для соединения 6 (пример 4), за исключением того, что 4-метиловый эфир хлорангидрида пиридин-2-уксусной кислоты используют вместо хлорангидрида монометилтерефталевой кислоты (см. примеры 1 и 2). Полученный метиловый эфир гидролизуют как в примере 5 с последующим соединением 57. ¹ H-ЯМР (CDCl₃) 1,22 (с, 2(CH₃)), 1,30 (с, 2(CH₃)), 1,69 (с, 2(CH₃)), 1,69 (с, 2(CH₂)), 2,40 (с, CH₃), 7,22 (с, Ar-CH), 7,43 (с, Ar-CH), 8,13 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH), 8,54 (д, J = 8 Гц, Pyr-CH), 9,34 (с, Pyr-CH).

Пример 28

Получение соединения 58, где R₁, R₂, R₃, R₄ являются метилом, R" и R"" = метано и X = COOH (TPNEP):

Метиловый эфир по примеру 26 обрабатывают как по примеру 4 с последующим гидролизом метанольным KOH при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч и подкислением 20% водной HCl и кристаллизацией из EtOAc-гексана с получением соединения 58. Т.пл.: 235^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,27 (с, 2(CH₂)), 1,31 (с, 2(CH₃)), 1,70 (c, 2(CH₂)), 2,00 (c, CH₃), 5,55 (c, =CH), 6,57 (c, =CH), 7,06 (д, J = 8,3 Гц, Pyr-CH), 7,12 (с, Ar-CH), 7,14 (с, Ar-CH), 8,20 (д, J = 8,1 Гц, Pyr-CH), 9,29 (c, Pyr-CH).

Пример 29

Получение метил 2-ацетил-5-пиридинкарбоксилата 32:

К взвеси 2,5-пиридинкарбоновой кислоты 29 (34 г, 0,2 моь) в 120 мл метанола при 0^oC добавляют по каплям 15 мл тионилхлорида и полученную взвесь нагревают при комнатной температуре до получения прозрачного раствора. Затем смесь нагревают с обратным холодильником в течение 12 часов и получают желтую взвесь. Фильтрация реакционной смеси дает диметил-2,5-пиридинкарбоксилат 30 с количественным выходом в виде желтого кристаллического твердого продукта.

Пиридиндикарбоксилат 30 (19,5 г, 0,1 моль) обрабатывают твердым КОН (6,51 г, 0,1 моль) в 300 мл метанола при комнатной температуре в течение 2 ч, что приводит к получению густой беловатой суспензии, которую фильтруют и сушат с получением монокалиевого пиридинкарбоксилата 31 с количественным выходом.

Сырой монокалиевый пиридинкарбоксилат 31 (880 мг, 4 ммоль) обрабатывают 3 мл тионилхлорида при кипячении с обратным холодильником в течение 2 ч и избыток OCl₂ удаляют обычным способом. К сырому хлорангидриду кислоты в 8 мл ТГФ при 78^oC медленно добавляют свежеприготовленный 0,1 М эфирный раствор (5,5 мл, 5,5 ммоль) Me₂CuLi. Полученную темную взвесь медленно перемешивают при -78^oC в течение 60 мин и затем гасят 2% HCl. Стандартная обработка и хроматография сырой смеси дает метил-2-ацетил-5-пиридинкарбоксилат 32 с выходом более 56% в виде желтого твердого продукта.

Пример 30

Получение соединения 56 (TPNEP) (по схеме, альтернативной примеру 28) и соответствующего эфира Et-58, где R₁, R₂, R₃, R₃, R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано и X=COOH:

Раствор 2-бромтолуола (8,5 г, 50 ммоль) и 2,2-дихлор-2,2-диметилгексана (9,15 г, 50 ммоль) в 100 мл дихлорэтана обрабатывают трихлоридом алюминия (0,66 г, 5 ммоль). Полученный темнокоричневый раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин и гасят льдом. Удаление растворителя и перекристаллизации из метанола дает 2-бром-3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидронафталин 33 с выходом 95% в виде твердого продукта. ТГФ-ый (4 мл) раствор, содержащий бромсоединений 33 (141 мг, 0,5 ммоль), обрабатывают при -78^oC 1,6М гексановым раствором (0,4 мл, 0,6 ммоль) н-BuLi и полученную смесь канюлируют в ТГФ-ый раствор (2 мл) 2-ацетил-5-пиридинкарбоксилата 32 (72 мг, 0,4 ммоль) при -78^oC. Смеси дают перемешиваться при -78^oC в течение 60 мин и гасят 2% HCl. Удаление растворителя и хроматографирования сырой смеси дает промежуточное соединение 34, которое затем обрабатывают 5% HCl при кипячении с обратным холодильником с последующей обработкой КОН-MeOH при 70^oC в течение 30 мин. Стандартная обработка и хроматография сырой смеси дает 2-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидр-2-нафтил)этенил] пиридин-5-карбоновую кислоту 58 с выходом более 50% в виде белого твердого продукта.

¹H ЯМР (CDCl₃) 1,27 (с, 2(CH₃)), 1,31 (с, 2(CH₃)), 1,70 (с, 2(CH₂)), 2,00 (с, CH₃), 5,56 (с, =CH), 6,55 (с, =CH), 7,08 (д, J = 8,3 Гц, Pyr-CH), 7,12 (с, Ar-CH), 7,15 (с, Ar-CH), 8,23 (л, J = 8,3 Гц, Pyr-CH) и 9,32 (с, Pyr-CH).

Обработка пиридинкарбоновой кислоты 58 (15 мг, 0,004 ммоль) одной каплей SOCl₂ в 5 мл этанола при кипячении с обратным холодильником в течение 60 мин с последующей фазы хроматографией дает количественный выход этилового эфира Et-58 в виде белого твердого продукта. ₁H-ЯМР (CDCl₃) 1,27 (с, 2(CH)), 1,31 (с, 2(CH₃)), 1,40 (т, J = 7,1 Гц, -CH₂CH₃), 1,70 (с, 2(CH₂)), 1,99 (с, CH₃)), 4,40 (кв. J = 7,1 Гц, -CH₂CH₃), 5,51 (с, =CH), 6,53 (с, =CH), 7,01 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH), 7,12 (с, Ar-CH): 7,14 (с, Ar-CH), 8,15 (д; J = 8,0 Гц, Pyr-CH) и 9,23 (с, Per-CH).

Пример 31.

Получение N, N-диизопропилиамида 3-ацетил-2-пиридинкарбоновой кислоты 36a:

Монокалиевый пиридинкарбоксилат 31 (1,1 г, 5 ммоль) обрабатывают SOCl₂ (5 мл, избыток) при 70^oC в течение 2 ч и избыток тионилхлорида удаляют с получением желтоватого твердого продукта. К раствору диизопропиламина (1 г, 10 ммоль) в 10 мл метиленхлорида при 0^oC добавляют раствор в CH₂Cl₂ (10 мл) вышеуказанного хлорангидрида кислоты. Полученную взвесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч и фильтруют от аммониевых солей. Удаление растворителя и хроматография сырого остатка приводит к продукту 36а с выходом 90% в виде белого твердого продукта.

Пример 32.

Получение соединений 60 (TPNEPC) и 61 (3TTNEPE):

2-Бром-3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидронафталин 33 (620 мг, 2,2 ммоль) и ацетипиридинамид 36а (500 мг, 2 ммоль) преобразуют способом, подобным описанному выше для получения промежуточного продукта 34 с выходом более 80%. К раствору пиридинамида 34 (432 мг, 1 ммоль) в 5 мл ТГФ при -78^oC добавляют 1,5 М DIBAL толуольного раствора (0,7 мл, 1,05 ммоль) и полученный желтый прозрачный раствор подогревают до 20^oC медленно в течение 60 мин и затем гасят водой. Удаление растворителя и хроматография сырой смеси приводит к пиридинальдегиду 35 с выходом 83% в виде белого твердого продукта. ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,25 (с, 2(CH₃)), 1,29 (с, 2(CH₃)), 1,70 (с, 2(CH₂)), 1,96 (с, CH₃), 5,47 (с, =CH), 5,92 (с, =CH), 7,10 (с, Ar-CH), 7,11 (с, Ar-CH), 7,70 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH), 7,88 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH), 8,72 (с, Pyr-CH), 10,06 (с, CHO).

Пиридинальдегид 35 (10 мг, 0,03 ммоль обрабатывают 2,0 мл H₂O₂ в 2 мл смеси метанол-вода 1: 1 при комнатной температуре в течение 10 ч и затем гасят 10% HCL. Экстракция смеси EtOAc (40 мл) и удаление растворителя дает 5-[1-(3,5,5,8,8-пентаметил-5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтил)этенил] пиридин-2-карбоновую кислоту 60 в виде белого твердого продукта с почти количественным выходом. ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,26 (с, 2(CH₃)), 1,30 (с, 2(CH₃)), 1,70 (с, 2(CH₂)), 1,94 (с, CH₃), 5,47 (с, =CH), 5,92 (c,=CH), 7,10 (c, Ar-2(CH), 7,76 (ушир, с, Pyr-CH), 8,65 (с, Pyr-CH).

Обработка пиридинкарбоновой кислоты 60 (5 мг) одной каплей SOCl₂ в 1 мл этанола при кипячении с обратным холодильником в течение 60 мин с последующей фазы хроматографией дает количественный выход этилового эфира 61 в виде белого твердого продукта. ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,26 (с, 2(CH₃)), 1,29 (с, 2(CH₃)), 1,44 (т, J = 7,1 Гц, -CH₂CH₃), 1,69 (с, 2(CH₂)), 1,95 (с, CH₃), 4,46 (кв, J = 7,1 Гц, -CH₂CH₃), 5,43 (с, =CH), 5,88 (с, =CH), 7,09 (с, Ar-CH), 7,64 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH)), 8,03 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH) и 8,68 (с, Pyr-CH).

Пример 33

Получение соединения 62, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом и R" и R"" вместе являются CH₂CH₂ (TPNCP);

К 162 мг (2,48 ммоль) порошка цинка, 25 мг (0,25 ммоль) CuCl и 332 мг (1,24 ммоль) CCH₂I₂ в 3 мл сухого эфира добавляют по каплям 150 мг (0,413 ммоль) олефина 26, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, в 5 мл сухого эфира. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 12 ч до полного завершения реакции по данным H-ЯМР. Добавляют воду и органические соединения экстрагируют эфиром, промывают NH₄Cl и высушивают над MgSO₄. Желаемое циклопропильное соединение очищают кристаллизацией из эфира -MeOH с получением 60 мг (0,159 ммоль) метилового эфира 62 в виде бледно-желтого твердого продукта (выход 39%). Т.пл. 177^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,27 (с, 2(CH₃)), 1,31 (с, 2(CH₃)), 1,35 (с, CH₂), 1,70 (с, 2(CH₂)), 1,85 (с, CH₂), 2,11 (с, CH₃), 3,91 (с, CH₃), 6,75 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH), 7,14 (с, Ar-CH), 7,26 (С, Ar-CH), 7,98 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH) и 9,23 (с, Pyr-CH).

К 60 мг (0,16 ммоль) вышеупомянутого метилового эфира в 10 мг MeOH добавляют 1 мл 6н раствора КОН. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч гидролиз завершается и реакционную смесь подкисляют 1н водной HCl до выпадения твердого осадка. Продукт экстрагируют эфиром, промывают водой, рассолом и высушивают над MgSO₄. Кристаллизация из EtOAc-гексана дает 33 мг (0,094 ммоль) пиридиновой карбоновой кислоты 62 (выход 59%). Т.пл.: 275^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,25 (с, 2(CH₃)), 1,35 (с, 2(CH₃)), 1,40 (с, CH₂), 1,72 (с, 2(CH₂)), 1,85 (с: CH₂), 2,15 (с, CH₃), 6,78 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH), 7,14 (с, Ar-CH), 7,26 (с, Ar-CH), 8,02 (д, J = 8,0 Гц, Pyr-CH) и 9,15 (с, Pyr-CH).

Пример 34

Получение соединения 63, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано, X= CONHR₉ и R₉=4-гидроксифенил (3-метил-TTNEHBP):

К 750 мг (10 ммл) ДМФ в 22 мл безводного эфира добавляют 1,3 г (10 ммоль) оксалилхлорида. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем удаляют растворитель с получением сырого белого твердого продукта (диметилхлорформамидиний хлорида). К диметилхлорформамидиний хлориду добавляют 2,87 г (8,24 ммоль) соединения 7 в 12 мл сухого ДМФ. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре и затем охлаждают до 0^oC. К охлажденному раствору хлорангидрида кислоты 7 добавляют по каплям охлажденный ДМФ-ый раствор (0^oC), содержащий 3,62 г (33 ммоль) 4-аминофенола и 1,68 г (16,3 ммоль) триэтиламина. После перемешивания при 0^oC в течение 30 мин реакционную смесь подогревают до комнатной температуры в течение 12 ч. Добавляют водную 20% HCl и полученный твердый продукт фильтруют и промывают водой, ацетоном и с получением 600 мг (1,36 ммоль) желаемого соединения 63 (выход 17%). ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,29 (с, 2(CH₃)), 1,31 (с, 2(CH₃)), 1,71 (с, (CH₂), 1,99 (с, CH₃), 5,31 (с, =CH), 5,80 (с, = CH), 6,85 (д, Ar-2(CH)), 7,09 (с, Ar-CH), 7,16 (с, Ar-CH), 7,40 (д, Ar-2(CH)), 7,48 (д, Ar-2(CH)), 8,40 (д, Ar-2(CH))

Пример 35

Получение соединения 64, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R" являются метано, X=CONHR₉ и R₉= 4-фторфенил (3-метил-TTNEFBP):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 63, за исключением того, что 4-фторанилин используют вместо 4-аминофенола. Т.пл.: 203^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (с, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,70 (c, 2(CH₂)), 1,96 (c, CH₃), 5,33 (c, =CH), 5,81 (c, =CH), 7,05 (д, J = 9 Гц, Ar-2(CH)), 7,09 (c, Ar-CH), 7,13 (c, Ar-CH), 7,39 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH)), 7,59 (дд, J = 5,9 Гц, Ar-2CH), 7,75 (ушир. с., NH), 7,78 (д, J = 8,5 Гц, Ar-2(CH).

Пример 36

Получение соединения 65, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано, X = CONHR₉ и R₉=4-фенилкарбоновая кислота (3-метил-TTNECBP):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 63, за исключением того, что метил-4-аминофенил-карбоксилат используют вместо 4-аминофенола. Полученный эфир гидролизуют метанольным KOH с последующим подкислением (20% HCl) с получением желаемого соединения 65. Т.пл.. 200^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,71 (c, 2(CH₂)), 1,97 (c, CH₃), 5,34 (c, = CH), 5,85 (c, = CH), 7,09 (c, Ar-CH), 7,14 (c, Ar-CH), 7,40 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 7,87 (ушир. с. Ar-2(CH)), 8,14 (ушир. с, Ar-2(CH)).

Пример 37

Получение соединения 66, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" или R"" являются оксо, X=CONHR₉ и R₉=3-гидроксифенил (3-метил-м-TTNCHBP):

К 750 мг (10 ммл) ДМФ в 22 мл безводного эфира добавляют 1,3 г (10 ммоль) оксалилхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч с последующим удалением растворителя и получением сырого белого твердого продукта (диметилхлороформамидиний хлорида). К диметилхлорформамидиной хлориду добавляют 2,88 г (8,24 ммоль) соединения 4 в 12 мл сухого ДМФ.

Реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре с последующим охлаждением до 0^oC. К охлажденному раствору хлорангидрида кислоты 7 добавляют по каплям охлажденный ДМФ-ый раствор (0^oC, содержащий 3,62 г (33 ммоль) 4-аминофенола и 1,68 г (16,3 ммоль) триэтиламина. После перемешивания при 0^oC в течение 30 мин реакционную смесь подогревают до комнатной температуры в течение 12 ч. Добавляют водную 20% HCl и полученный твердый продукт фильтруют и промывают водой, ацетоном и EtOAc с получением 750 мг (1,70 ммоль) желаемого соединения 66 (выход 21%). Т.пл.: 182^oC. ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,22 (c, 2(CH₃), 1,32 (c, 2(CH₃)), 1,70 (c, 2(CH₂), 2,37 (c, CH₃), 6,58 (м, Ar-2(CH)), 7,20 (д, Ar-CH), 7,22 (c, Ar-CH), 7,28 (c, Ar-CH), 7,91 (д, J = 8,3 Гц, Ar-2(CH), 8,26 (д, J = 8,3 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 38

Получение соединения 67, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано, X=CONHR₃ и R₉ =3-нидроксифенил (3-метил-M-TTNEHBP):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 63, за исключением того, что 3-аминофенол используют вместо 4-аминофенола. Т.пл. 136^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,70 (c, 2(CH₂)), 1,97 (c, CH₃), 5,35 (c, =CH), 5,84 (c, =CH), 6,57 (м, Ar-2(CH)), 7,09 (c, Ar-CH), 7,14 (c, Ar-CH), 7,16 (м, Ar-CH), 7,39 (д, J = 8,3 Гц, Ar-21(CH)), 8,09 (д, J = 8,3 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 39

Получение соединения 68, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано, X=CONHR₉ и R₉ = 3-гидроксифенил (3-метил-o-TTNCHBP):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 63, за исключением того, что 2-аминофенол используют вместо 4-аминофенола. Т.пл. 180^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,71 (c, 2(CH₂)), 1,97 (c, CH₃), 5,35 (c, =CH), 5,84 (c, =CH), 6,9 (м, Ar-CH), 7,08 - 7,2 (м, Ar-CH), 7,09 (c, Ar-CH), 7,13 (c, Ar-CH), 7,42 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH)), 7,83 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH))), 8,03 (ушир. с., Ar-CH), 8,64 (c, NH).

Пример 40

Получение соединения 69, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" или R"" являются метано, X = CONHR₉ и R₉=3-фенилкарбоновая кислота (3-метил-M-TTNECBP):

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 63, за исключением того, что метил-3-аминофенилкарбоксилат используют вместо 4-аминофенола. Полученный эфир гидролизуют метанольным KOH с последующим подкислением (20% HCl) с получением желаемого соединения 69. Т.пл. 250^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,28 (c, 2(CH₃)), 1,31 (c, 2(CH₃)), 1,71 (c, 2(CH₂)), 1,97 (c, CH₃), 5,34 (c, =CH), 5,85 (c, =CH), 7,09 (c, Ar-CH), 7,14 (c, Ar-CH), 7,40 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH)), 7,55 (м, Ar-CH), 7,80 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 7,87 (c, Ar-CH), 8,14 (c, NH).

Пример 41

Получение соединения 70, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" являются метано, n=0, X=COOH:

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того, что 1,1,3,3,5-пентаметилиндан используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5. Т.пл. 145^oC, ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,05 (c, 2(CH₃), 1,28 (c, CH₃), 1,31 (c, CH₃), 1,38 (c, CH₂), 1,98 (c, CH₃)), 5,34 (c, CH), 5,84 (c, CH), 6,90 (c, Ar-CH), 6,92 (c, Ar-CH), 7,36 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH), 8,00 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH)..

Пример 42

Получение соединения 71, где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₁₄ являются метилом, R" и R"" являются метано, n = 0, X = COOH:

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 7, за исключением того, что 1,1,2,3,3,5-пентаментилиндан используют вместо 1,1,4,4,6-пентаметил-1,2,3,4-тетрагидронафталина по примерам 1, 2, 4 и 5. Т. пл. : 217^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,01 (д, J = 7,3 Гц, CH₃), 1,08 (c, CH₃), 1,10 (c, CH₃), 1,27 (c, CH₃), 1,30 (c, CH₃), 1,88 (кв, CH), 2,00 (c, CH₃), 5,35 (c, = CH), 5,85 (c, =CH), 6,95 (c, Ar-CH), 6,98 (c, Ar-CH), 7,38 (д, J = 8,3 Гц, Ar-2(CH)), 8,00 (д, J = 8,3 Гц, Ar-2(CH)).

Пример 43

Получение соединения 72, где R₁, R₂, R₃m R₄, R₅ являются метилом, R" и R"" являются H, X=COOH:

Соединение получают способом, подобным способу для соединения 4 (примеры 1 и 2), за исключением того, что метил-4-(бром-метил)бензоат используют вместо хлорангидрида монометилтерефталевой кислоты. Т.пл.: 237^oC; ¹H-ЯМР (CDCl₃) 1,23 (c, 2(CH₃)), 1,27 (c, 2(CH₃)), 1,67 (c, 2(CH₂)), 2,16 (c, CH₃), 4,06 (c, CH₃), 7,01 (c, Ar-CH), 7,08 (c, Ar-CH), 7,25 (д, J = 8 Гц, Ar-2(CH), 8,01 (д, J = 8,4 Гц, Ar-2(CH).

Оценка подтиповой избирательности ретиноидного рецептора

Представленные синтетические ретиноидные соединения по настоящему изобретению были проанализированы и найдено, что они проявляют подтиповую избирательность в отношении ретиноидных рецепторов и обладают способностью модулировать процессы, избирательно опосредованные рецепторами ретиноида X, как это более полно обсуждается далее.

Как употребляется здесь, фраза "процессы, селективно передаваемые рецепторами ретиноида X" относятся к биологическим, физиологическим, эндокринологическим или другим процессам в организме, которые опосредуются рецепторами или комбинациями рецепторов, ответственных за процессы, к которым избирателен рецептор ретиноида X, например, соединения, которые избирательно активируют один и/или множество членов подсемейства РХР. Модуляция таких процессов может осуществляться in vitro или in vivo. Модуляция in vivo может проводиться на широком спектре субъектов, таких как, например, люди, грызуны, овцы, свиньи, коровы и тому подобное.

Рецепторы, которые реагируют на селективные лиганды рецептора ретиноида X, включают: альфа-рецептор ретиноида X, бета-рецептор ретиноида X, гамма-рецептор ретиноида X и скрещенные варианты, закодированные генами для таких рецепторов, а также различные их сочетания (то есть гомодимеры, гомотримеры, гетеродимеры, гетеротримеры и тому подобное). Сюда дожны быть отнесены также сочетания рецепторов ретиноида X с другими членами стероид/тироидного подсемейства или рецепторы, с которыми рецепторы ретиноида X могут взаимодействовать с образованием гетеродимеров, гетеротримеров и более высоких гетеромультимеров. Например, изоформы альфа-, бета- или гамма-рецепторов ретиноидной кислоты образуют гетеродимер с любым из изоформ рецептора ретиноида X (то есть альфа, бета или гамма, включающие любое сочетание различных изоформ рецептора), и различные рецепторы ретиноида X образуют гетеродимер с тироидным рецептором и образуют гетеродимер с рецептором витамина D. Члены подсемейства рецептора ретиноида X образуют гетеродимер с некоторыми "orphan рецепторами", включающими PPAR (Issemann and Green, Nature, 347: 645-49 (1990)); HNF4 (Sladek et al., Genes & Development 4: 2353-65 (1990); семейство COUP рецепторов (например, Mijajima et al., Nucleic Acids Research 16: 11057-74 (1988), и Wang et al., Nature 340: 163-66 (1989)); COUP-подобные рецепторы и COUP гомологи, такие как описаны Mlodzik et al., (Cell 60: 211-24 (1990)) и Ladias et al., (Science, 251: 5561-65 (1991)); ultraspiracle рецепторы (например, Oro et al., Nature, 347: 298-301 (1990)); и тому подобное.

Как употребляется здесь, фраза "члены стероид/тироидного подсемейства рецепторов" (известные также как "ядерные рецепторы" или "межклеточные рецепторы") относится к гормоносвязывающим белкам, которые работают в качестве лиганзависимых факторов транскрипции. Более того, эта классификация включает идентфицированные члены стероид/тиродиного подсемейства рецепторов, для которых еще не были идентифицированы специфические лиганды (упоминаемые здесь как "orphan рецепторы"). Все члены подсемейства межклеточных рецепторов обладают присущей им способностью привязываться к определенной последовательности ДНК. В результате связывания благодаря действий лиганда, связанного с рецептором изменяется транскрипционная активность целевого гена (то есть гена, ассоциированного с определенной последовательностью ДНК). См. также Heyman et al., Cell, 68: 397-406 (1992) и одновременно рассматриваемый США N 809980, заявл. 18 декабря 1991, полное описание которого включено здесь в качестве ссылки.

Модуляция генной экспрессии лигандой ретиноидной кислоты и ее рецепторами может быть исследована в реконструированной системе клеточной культуры. Такая система была использована для оценки синтетических ретиноидных соединений по данному изобретению по их взаимодействию с подсемейством ретиноидных рецепторов RAR,RAR,RAR,RXR,RXR,RXR.

Система для контроля реконструированной лиганд-зависимой транскрипции, которая была обнаружена Evans et al., Science, 240: 889-95 (1988), была названа "ко-трансфекционным" или "цис-транс" анализом. Этот анализ был описан более детально в патентах США N 4981784 и 5071773, которые включены здесь в качестве ссылки. См. также Heyman et al., Cell, 68: 397-406 (1992). Ко-трансфекционный анализ обеспечивает механизм для оценки способности соединения модулировать транскрипционный ответ, вызванный межклеточным рецептором. Ко-трансфекционный анализ является функциональным, быстрым исследованием, которое осуществляет контроль за активностью гормона или лиганда и является хорошим экстраполятором системы.

Короче говоря, ко-трансфекционный анализ включает введение двух плазмид путем переходной трансфекции ретиноидного рецептора-негатива в клетки млекопитающих определенного фенотипа. Первая плазмида содержит ретиноидный рецептор кДНК и направляет нерегулируемую экспрессию закодированного рецептора. Вторая плазмида содержит кДНК, которая кодирует легкоопределяемый белок, например, люциферазу светляков или хлоранфениколацетилтрансферазу (САТ), под контролем промотора, содержащего элемент ответа ретиноидной кислоты, который сравнивает ретиноидную зависимость при транскрипции репортера. В этом ко-трансфекционном исследовании все ретиноидные рецепторы реагируют на полностью-транс-ретиноидную кислоту подобным образом. Это исследование может быть использовано для тщательного измерения эффективности и способности ретиноидной кислоты и синтетических ретиноидов как лигандов, которые взаимодействуют с индивидуальными подтипами ретиноидного рецептора.

В соответствии с этим, синтетические ретиноидные соединения по настоящему изобретению были оценены по их взаимодействию подтипами ретиноидного рецептора с применением ко-трансфекционного анализа, в котором клетки C-1 были ко-трансфекцированы одним из подтипов ретиноидного рецептора, и внутренним контролем эффективности трансфекции по восстановлению нормального ответа. Следующий пример является иллюстративным.

Пример 44

Ретиноиды: Полностью-транс-ретиноидная кислота (RA) и 13-цис-ретиноидная кислота (13-цис-RA) была получена от Sigma. 9-цис-ретиноидная кислота (8-цис-RA) была синтезирована как описано Heyman et al., Cell, 68: 397-406 (1992). Как установлено высокоэффективной жидкостной хроматографией с обращенной фазой, чистота ретиноида выше чем 99%. Для применения в исследованиях транскрипционной активности ретиноиды растворяют в диметилсульфоксиде.

Плазмиды: Используемые векторы экспрессии рецептора были описаны ранее (pRShRAR -: Giguere et al. (1987); pRShRAR - и pRShRAR -: Ishikawa et al. (1990); pRShRXR -: Mangelsdorf et al., (1990); pRSmRXR - и pRSmRxR -: Mangelsdorf et al., Genes & DeveL., 6: 329-44 (1992)). При трансфекции RAR используется основная плазмида репортера - MTV-LUC (Hollenberg and Evans, Cell, 55: 899-906 (1988)), содержащая две копии элемента TPE-палиндромного ответа 5"-TCAGGTCATGACCTGA-3" (Umesono et al., Nature, 336-262-65 (1988), и при трансфекции RXR был использован CRBPIIFKUC, который содержит RXRE (элемент ответа рецептора ретиноида X (Mangelsdorf et al., Cell, 66: 555-61 (1991)).

Ко-трансфекционное исследование на клетках CV-1: в цис-транс исследованиях была использована линия клеток почки обезьяны, CV-1. Клетки трансфектировались двумя плазмидами. Транс-вектор позволял осуществлять продуцирование ретиноидного рецептора в этих клетках, которые не могут осуществлять нормально экспрессию этого рецепторного белка. Цис-вектор содержит легко исследуемый генный продукт, в данном случае лициферазу светляка, связанный с ретиноид-чувствительным промотором, то есть RARE или RXRE. Добавление ретиноидной кислоты или подходящего синтетического ретиноида приводит к образованию комплекса ретинод-RAR или RXR, что активирует экспрессию гена люциферазы, вызывая свечение, излучаемое экстрактами клеток. Уровень активности люциферазы прямо пропорционален эффективности ретиноид-рецепторного комплекса при активации генной экспрессии. Этот чувствительный и репродуцируемый контрансфекционный подход позволяет осуществлять идентификацию ретиноидов, которые взаимодействуют с различными рецепторами изоформами.

Клетки были культивированы в DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла), дополненной 10% charcoal (древесноугольной) полимер-сшитой сывороткой зародыша быка, и эксперимент проводят на планшете с 96 лунками. Плазмида случайно трансфектируют кальцийфосфатным методом Umesono and Evans, Cell 57: 1139-46 (1989) и Berger et al., J. Steroid Biochem. Molec. Biol., 41: 733-38 (1992) с использованием 10 нг pP S (вирусный промотор саркомы Роуса) рецептор-выраженного плазмидного вектора, 50 нг репортерной люциферазной (LUC) плазмиды, 50 нг pRS -GAL ( - галактозидами) в качестве внутреннего контроля и 90 нг плазмиды носителя, pGEM. Клетки были трансфектированы в течение 6 часов и затем промыты для удаления осадка. Клетки затем были инкубированы в течение 36 ч вместе с или без ретиноида. После трансфекции все последовательные стадии были выполнены на установке Beckman Biomek Automated Workstaton. Были получены клеточные экстракты, затем исследованы на активность люциферазы и - галактозидазы, как описано Berger et al. (1992). Все определения были осуществлены трижды двумя независимыми экспериментами и были нормализованы для эффективности трансфекции с использованием - галактозидазы в качестве внутреннего контроля. Ретиноидная активность была нормализована относительно активности полностью-транс-ретиноидной кислоты и выражена в качестве силы (EC50), которая является концентрацией, необходимой для продуцирования 50% максимально наблюдаемого ответа, и эффективности (%), которая является максимальным ответом, наблюдаемым относительно ответа полностью-транс-ретиноидной кислоты при 10^-5 М. Полученные данные являются средними из по крайней мере четырех независимых экспериментов. Значение эффективности менее чем 5%, не является статистически различными от уровня 0%. Соединения с эффективностью менее чем 20% при концентрации 10^-5 М рассматриваются как неактивные. При более высоких концентрациях соединения, таких как 10^-4 М, эти соединения являются, главным образом, токсичными для клеток, таким образом, максимальная эффективность при 10^-5 М представлена в таблицах и иллюстрациях, содержащихся здесь.

Синтетическое ретиноидное соединение 3-метил-TTNCB, как описано выше, было оценено по его способности регулировать экспрессию генов, опосредованную ретиноидными рецепторами. Как показано на фиг. 1, это соединение способно активировать члены подсемейства RXR, то есть RXR,RXR и RAR, но совсем не проявляет заметной активности в отношении членов подсемейства RAR, то есть RAR,RAR и RAR. Исследования, использующие полностью-транс-ретиноидную кислоту (фиг. 2) и 9-цис-ретиноидную кислоту (фиг. 3), были осуществлены для сравнения и показано, что эти изомеры ретиноидной кислоты активируют члены подсемейств как RAR, так и RXR.

Для 30-метил-TTNCB соединения были рассчитаны сила и эффективность, которые представлены в таблице 1. Для ссылки включены также данные для 9-цис-ретиноидной кислоты.

Как показывают данные таблицы 1, 3-метил-TTNCB легко и при низких концентрациях активирует RXR. Далее, 3-метил-TTNCB является более сильным активатором RXR, чем RAR, и предпочтительно активирует RXR по сравнению с RAR, при этом для активации RAR требуется значительно большая концентрация соединения. Напротив, 9-цис-ретиноидная кислота не активирует предпочтительно RXR, как также показано в таблице 1. Предпочтительно, 9-цис-ретиноидная кислота активирует изоформы RAR и RXR при низких концентрациях и, более легко, чем изоформы RAR и RXR, и обладает практически такой же, в пределах точности измерения, активностью для изоформы RAR по сравнению с изоформой RXR.

Экстракт, содержащий 9-цис-ретиноидную кислоту, ранее описан как по крайней мере в 10 раз более сильный для индуцирования RXR по сравнению с RAR (Heyman et al. , Cell., 68: 397, 399 (24 января 1992). Имеющиеся же сейчас данные свидетельствуют, что 9-цис-ретиноидная кислота не активирует предпочтительно RXR по сравнению с RAR, как показано и обсуждено выше. Соединения по настоящему изобретению предпочтительно активируют RXR по сравнению с RAR и являются, предпочтительно по крайней мере в три раза более сильными как активаторами RXR по сравнению с RAR, и более предпочтительно, в пять раз более сильными как активаторы RXR по сравнению с RAR.

Для 3-метил-TTNEB, 3-бром-TTNEB, 3-метил-TTNCBP, 3-метил-TTNEHBP, TPNEP и TPNCP соединений были также вычислены сила и эффективность, которые сведены в таблицу 3 ниже.

Как показывают данные таблицы 2, 3-метил-TTNEB, 3-бром-TTNEB, 3-метил-TTNCBP, 3-метил-TTNEHBP, TPNEP и TPNCP каждый легко и предпочтительно активирует RXR и являются более сильными активаторами RXR, чем RXR. Уменьшенная активность этих соединений для RAR в сравнении с RXR также показана для некоторых из этих соединений на фиг. 4-7.

Можно было бы ожидать, что синтетические ретиноидные лиганды, такие как представленные в примерах таблиц 1 и 2, которые предпочтительно воздействуют на некоторые, но не на все изоформы рецепторов ретиноидной кислоты, могут, в фармакологических препаратах обеспечивать фармацевтическое действие с повышенными терапевтическими индексами и улучшенным профилем побочных эффектов, чем у обычно используемых ретиноидов. Например, для соединений по настоящему изобретению наблюдается меньшее раздражение кожи, чем для стандартных ретиноидов.

Ретиноидные соединения по настоящему изобретению являются полезными при лечении некоторых дерматологических состояний, таких как заболевания керотинизации, то есть дифференциация/пролиферация. Стандартные исследования по определению активности этих соединений являются измерением ферментной активности трансоглутаминазы; это является измерением антипролиферирующего действия ретиноидов. Показано, что ретиноиды ингибируют пути дифференциации, которые определяются нарушением отдельных биохимических маркеров, что связано с экспрессией фенотипа чешуйчатых клеток, таких как трансглутаминаза. (Yuspa et al., Cancer Research 43: 5707-12 (1983)). Как можно видеть из фиг. 8, 3-метил-TTNCB соединение способно ингибировать активность трансглутаминазы и ингибирует на 50% ферментативную активность при 1 10^-7 М.

Соединения по данному изобретению проявляют также хорошую comedolytic активность в тесте на мышах Rhino, описанной Kligman et al., (J. of Inves. Derm. , 73: 354-58 (1979)) Mezick et al., (J. of Inves. Derm., 83: 110-13 (1984)). Тест на мышах Rhino было модельно для скрининговых comedolytis агентов. Активность 3-метил-TTNCB ретиноидного соединения, а также 9-цис и полностью-транс-ретиноидной кислоты показана на фиг. 9. 0,1% раствор 3-метил-TTNCB способен ингибировать utriculi (пузырьковый) диаметр приблизительно на 50%. Наблюдалось также, что 3-метил-TTNCB меньше раздражает кожу мышей Phino чем 9-цис или полностью-транс-ретиноидная кислота.

Соединения по данному изобретению были также исследованы с применением опытов с замещенными радиолигандами. Изоформы RAR и RXR, сверхпродуцированные в E. coli или палочковидным вирусом, способны к связыванию с радиоактивномеченой 9-цис-ретиноидной кислотой со связывающими параметрами, которые существенно похожи на такие рецепторы, которые сверхпродуцированы в клетках млекопитающих. Исследуя способности различных синтетических ретиноидов конкурировать с радиоактивномеченой ретиноидной кислотой для связывания различных рецепторных изоформ может быть определена относительная константа диссоциации для самого рецептора. Это является важным дополнительным анализом для исследования ко-трансфекции, так как это может обнаружить важные противоречия, могущие быть причиной различных определяющих факторов ретиноидной активности в ко-трансфекционном исследовании. Эти факторы могут включать (1) активацию неактивирующих метаболических изменений в испытуемых соединениях, (2) связывание с сывороточными протеинами, которые изменяют свободную концентрацию, испытуемого соединения, (3) различия в клеточной проницаемости испытуемых соединений, (4) внутренние отличия в сродстве испытуемых соединений по отношению к рецепторным белкам, то есть в K_d, и (5) конформационные изменения, продуцированные в рецепторах после связывания испытуемого соединения, отраженные в действиях на генную экспрессию репортера.

3-метил-TTNCB соединение способно к замещению 3H-9-цис-ретиноидной кислоты, присоединенной к RXR, но не способно к замещению радиоактивномеченого лиганда, который присоединен к RAR. Это свидетельствует о том, что 3-метил-TTNCB соединение предпочтительно присоединяется к RXR по сравнению с RAR, свойство, которое будет определять селективность лиганда для RXR.

Было выявлено, что ко-трансфекционное исследование обеспечивает функциональную оценку лиганда, исследуемого в качестве либо агониста, либо агониста специфического генетического процесса, выбранного для воздействия. Лиганд, который не взаимодействует существенно с другими межклеточными рецепторами, как определено ко-трансфекционным исследованием, как можно было бы ожидать, дает уменьшение побочных фармакологических эффектов. Поскольку ко-трансфекционное исследование проводят на живых клетках, оценка лиганда обеспечивает раннюю индикацию потенциальной токсичности кандидата в концентрации, при которой можно ожидать терапевтическую пользу.

Процессы, способные модулироваться ретиноидными рецепторами, в соответствии с настоящим изобретением, включают клеточную дифференциацию in vitro регулирование морфогенетических процессов, включающих морфогенез конечности, регулирование клеточного ретиноловязанного белка (CRBP) и тому подобное. Как легко обнаружено специалистами, наличие лигандов рецептора ретиноида X делает возможным, в первую очередь, объяснение процессов, контролируемых членами подсемейства рецептора ретиноида X. Кроме того, это позволяет развить исследования по идентификации антагонистов этих рецепторов.

Процессы, которые могут быть модулированы ретиноидными рецепторами, в соответствии с настоящим изобретением, включают далее модуляцию in vivo липидного метаболизма; модуляцию in vivo кожных процессов (например, воспаление сальной железы, псориаз, старение, морщины и тому подобное); модуляцию in vivo программированной клеточной смерти (apoptosis); модуляцию in vivo злокачественного клеточного развития, такого, которое протекает, например, при острой промиелоцитической лейкемии, раке груди, раке простаты, раках дыхательных путей, раке кожи, раке мочевого пузыря и саркоме; модуляцию in vivo злокачественных заболеваний, таких как протекающих при оральной лейкоплакии и тому подобное; модуляцию in vivo аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит; модуляцию in vivo метаболизма жирных кислот; и тому подобное. Можно ожидать, что такое применение позволяет модулировать различные биологические процессы с уменьшенной вероятностью нежелательных побочных эффектов, таких как тератогенные эффекты, раздражение кожи, сухость слизистых, липидные нарушения и тому подобное. Применения in vivo могут быть использованы на широкой области субъектов, таких как, например, люди, грызуны, овцы, свиньи, коровы и тому подобное.

Например, относительно модуляции in vivo липидного метаболизма, упомянутого выше, аполипопротеин A1 является основным протеиновым компонентом холестерина плазмы высокой плотности липопротеина (HDL). Поскольку циркулирующий уровень HDL у людей, как было показано, обратимо коррелирует с риском коронарных везикулярных заболеваний, можно было бы ожидать, что регулирующие синтезы аполипопротеина A1 могли бы быть использованы при лечении коронарных везикулярных заболеваний. Было установлено, что регуляция транскрипции аполипопротеина A1 контролируется членами подсемейства межклеточных рецепторов, и далее, что стартовое место A генной транскрипции аполипопротеина A1 является высоко избирательным элементом ретиноидного ответа (RXRE), который предпочтительно регулирует на RXRa. Rottman et al., Mol. Cell. Biol., 11: 3814-20 (1991)). Кроме того, лиганды, которые избирательно активируют члены семейства RXR рецепторов ретиноидной кислоты, могут управлять транскрипцией аполипопротеина A1. При изучении in vivo нами показано, что лиганды, имеющие избирательную активность в отношении RXR, могут быть использованы для существенного поднятия уровней плазмидного HDL, как продемонстрировано в следующем примере.

Пример 45

Самцы крыс Spraque Dawley (160-200 г) были получены от Harland. Животных кормили по обычной лабораторной диете (Harlan/Teklad) и содержали в помещении для животных с контролируемой средой при световом периоде от 6 утра до 6 вечера. Животных обрабатывали лекарствами, приготовленными в виде суспензий в оливковом масле.

Для подверждения того, что активация RXR может модулировать HDL холестерин, начальное исследование проводилось дозированием крысам в течение 4 дней RAR-избирательного соединения, полностью-транс-ретиноидной кислоты, не избирательного RAR/RXT агониста, 9-цис-ретиноидной кислоты, и любого из двух RXR избирательных агентов, 3-метил-TTNCB или 30-метил-TTNEB. Каждое лекарство вводят в дозе 100 мг/кг, внутрибрюшинно. Чистые контрольные группы получают в качестве раствора оливковое масло. Спустя двадцать четыре часа после последней обработки крыс забивают путем ингаляции CO₂, собирают кровь из нижней полой вены в пробирку, содержащую EDTA, и центрифугируют при 1500 xg в течение 20 мин при 4^oC. Отделяют плазму и хранят при 4^oC для повышения общего холестерина плазмы и холестерина высокой плотности липопротеина (HDL-холестерин).

Общий холестерин плазмы изменяют ферментативным применяя диагностические методы высокого разрешения холестерина Boeringer Manheim (Boeringer Manheim Diagnjstics High Petformance Cholesterol Methods) с бихроматным анализатором ABBOTT VP (ABBOTT VP Bichromatic Analyzer). HDL измеряют после приготовления HDL-содержащей фракции путем высаживания гепаринмарганца из плазмы. HDL-холестерин в этой фракции был оценен как указано ранее. Все HDL вытяжки были проверены на загрязненность липопротеинами путем электрофореза в агарозном геле.

Результаты этого исследования показаны на фиг. 10. Как показано, крысы, получающие RXR избирательные соединения, проявляют достоверное и статистически заметное увеличение уровней, особенно получающие 3-метил-TTNEB. Поскольку RXR-избирательный лиганд 3-метил-TTNEB был наиболее эффективен, последующие 4 дня эксперимента проводят с этим агентом в дозах 0, 3, 1, 3, 6, 10, 30, 100 или 300 мг/кг внутрибрюшинно в 0,5 мл оливкового масла или 1, 3, 10, 30, 100, 300 мг/кг парентерально в 0,5 мл оливкового масла в течение 4 дней. Дополнительно 30 дней парентерального исследования проводились с 10, 30 или 100 мг/кг 3-метил-TTNB для определения того, буте ли развиваться толерантность к их фармацевтическому действию. Для крыс, получающих 3-метил-TTNEB, в различных дозах в течение четырех дней, также наблюдалось что наибольшее увеличение HDL было возможным при относительно низких дозах (менее чем 5 мг/кг) 3-метил-TTNEB. 30-дневное исследование с 3-метил-TTNEB не показало развития толерантности к их фармацевтическому действию.

Дополнительные изучения in vitro также были осуществлены с использованием выше описанного ко-трансфекционного исследования в пределах применения для демонстрации действия RXR-избирательных лигандов на регулирование транскрипции аполипопротеина A1, как описано в следующем примере.

Пример 46:

Эта работа нацелена на изучение транскрипционных свойств ретиноидных рецепторов RAR и RXR на молекуле репортера (например, лициферазы) под контролем основного промотора, содержащего элемент RXR ответа из гена аполипопротеина-A1 ("A" место). Плазмидные конструкции, закодирование для различных рецепторов, были трансфектированы в клеточной линии человеческого гепатоцита (HepG-2) с плазмидой репортера. Плазмиды репортера, содержащие мультимеры аполипопротеин-A1 "A" места (от -214 до -192 относительно стартового места транскрипции), показаны в присоединении RXR. Widom et al., Mol. Cell. Biol. 12: 3380-89 (1992); Ladias & Karathanasis, Science 251: 561-65 (1991). После трансфекции, обработки, сбора и исследования, полученные данные нормализуют в отношении трансфектированной активности бета-галактозидазы для контроля эффективности трансфекции. Полученные результаты демонстрируют активацию в системе с RXR-специфическими лигандами 3-метил-TTNCB, показывающие, что RXR специфические лиганды могли бы регулировать свойства транскрипции через "A" место из гена аполипопротеина A1. Эти соединения не действуют, когда при трансфекции используют RAR, демонстрируя специфичность рецептора. Транскрипционное регулирование с RXR было зависимым от присутствия элемента гормонального ответа.

Неожиданно было обнаружено, что введение соединения, содержащего лиганд, который обладает специфической активностью по отношению к RXR, но практически не активен по отношению к RAR, в сочетании с лигандом, обладающим специфической активностью по отношению к RAR, но не RXR, обеспечивает клеточный ответ при экстремально низких дозировках, дозировках, при которых лиганды индивидуально обладают незначительным ответом. В частности, действие, связанное с концентрацией RXR-специфического лиганда и RAR-специфического лиганда, на пролиферацию клеточной линии миеломы (RPMI 8226) было исследовано in vitro с использованием тимидин включенного исследования. (L. M. Bradley, Selected Metods in Cellular Immunology, Ch. 10.1, pp. 235-38, Mishell & Shiigi (eds.), Freema & Co., New York, (1980). В этом опыте исследуется включение радиоактивномеченого тимидина в ДНК и путем определения способности соединения ингибировать тимидиновое включение в ДНК, что обеспечивает клеточную пролиферацию. Соединения, которые ингибируют клеточную пролиферацию, обладают хорошо известной полезностью при лечении некоторых раковых заболеваний.

Как показано ранее (таблица 2), 3-метил-TTNEB активирует члены подсемейства RXR и не обладает существенной активностью по отношению к членам подсемейства RAR. Исследование действия 3-метил-TTNEB на пролиферацию клеток миеломы показывает зависящее от концентрации ингибирование тимидинового включения. IC 50 (концентрация 3-метил-TTNEB, требуемая для продуцирования 50% ингибирования максимального ответа) составляет 10^-7 М, как показано на фиг. 11. Концентрация менее чем 10^-8 М практически не обуславливает действия на клеточную пролиферацию, что тоже показано на фиг. 11.

Хорошо известно, что соединение TTNBP активирует члены подсемейства RAR и не обладает значительной активностью в отношении членов подсемейства RXR. Соединение TTNPB представлено ниже и его активность показана в таблице 3.

Действие TTNPB на клеточную пролиферацию показано на фиг. 11. Значение IC 50 TTNPB составляет около 5 10^-11 М, и концентрация менее чем 10^-11, не вызывает существенного действия на клеточную пролиферацию.

Однако было установлено, что, когда два соединения (3-метил-TTNEB и TTNPB) присутствуют вместе, каждое при концентрации, при которой соединение индивидуально не вызывает существенного акта-пролиферизующего действия, сочетание двух соединений существенно блокирует клеточную пролиферацию. Кажется, что сочетание двух соединений вызывает больший, чем суммарный, или синергический, эффект.

Например, как показано на фиг. 12, присутствие TTNPB в концентрации 10^-11 М вызывает 9%-ное ингибирование тимидинового включения. Однако объединение его с 3-метил-TTNEB в концентрации 10^-8 М (которая не оказывает действия на клеточную пролиферацию) вызывает сильно увеличенный ингибирующий эффект на 49%. Также было найдено, что ингибирующее действие 3-метил-TTNEB существенно усиливается в присутствии TTNPB в концентрации, при которой индивидуальные продукты не действуют.

В то время, как хорошо известные токсические побочные эффекты соединений, таких как TTNPB, являются зависящими от концентрации, синергическое действие, полученное при соединении таких RAR-специфических соединений с RXR-специфическими соединениями, как можно было бы ожидать, позволяет уменьшить дозировки, которые являются эффективными, и поэтому уменьшить токсические побочные эффекты. Например, при хемиотерапии рака использование двух таких соединений, в сочетании, при относительно низких дозах, как можно было бы ожидать, вызывает желаемый лечебный эффект, достигаемый при более высоких дозах соединений, при минимизации нежелательных побочных эффектов.

Исследования in vitro используемые ко-трансфекционный анализ, также показывают такой же синергический эффект. Например, использование ко-трансфекционного анализа, описанного выше, и применение RXR и RXR и репортера, содержащего элемент ответа ApcA1 места "A" в контексте TKLUC (Ladias & Karathanasis, Sciene 251: 561-65 (1991)), трансфекции осуществляют на клетках HEPG2. При этом исследовании используют 100 нг указанного рецептора и в качестве носителя используют RSVCAT для поддержания постоянного количества промотора RSV. Все соединения добавляют при конечной концентрации 10^-7 М. Были использованы RXR-специфическое соединение, 3-метил-TTNEB (таблица 2 выше) и RAR-специфическое соединение, TTNPB (таблица 3 выше). Как показано в таблице 4 ниже, относительный нормализованный ответ, наблюдаемый при применении ко-трансфекционного анализа, также демонстрирует синергетический эффект при использовании сочетания двух соединений, по сравнению с ответом, достигаемым при индивидуальном использовании соединений.

Как ясно специалисту из описания дальше, биологический ответ RAR избирательное соединение при данной концентрации может быть синергетически усилено при объединении соединения с RXR избирательным соединением. Подобным образом, биологический ответ RXR избирательного соединения может быть усилен сочетанием соединения с RAR избирательным соединением. Таким образом, становится возможным достигнуть желательного биологического ответа, используя RAR и RXR избирательные соединения при более низких концентрациях, чем могло бы быть в случае использования индивидуальных соединений. Среди преимуществ, достигаемых такими сочетаниями RAR и RXR избирательных соединений, являются желательными терапевтические эффекты с уменьшенными побочными эффектами. Кроме того, новые эффекты, которые не получаются при использовании каждого агента в отдельности, могут быть достигнуты сочетанием RAR и RXR избирательных соединений.

Было также показано, что RXR специфические соединения также синергетически усиливают ответ у других горизонтальных систем. Конкретно, пероксисомный пролифератор-активированный рецептор (PPAR) является членом межклеточного рецепторного суперсемейства, которое играет роль в модуляции липидного гомеостаза. Как было показано, PPAR активируется амфипатическими карбоксилатами, такими как клофибриновая кислота, и такие агенты, называемые пероксисомными пролифераторами, были использованы на человеке в качестве гиполипидемических агентов. Прибавление 9-цис-ретиноидной кислоты (ретиноидный лиганд, который активирует как RAR, так и RXR рецепторы) и клофибриной кислоты к HepG2 клетками, трансфектированным плазмидами RXR и PPAR экспрессии, приводит к активации рецепторного гена, большей, чем сумма активаций с каждым лигандом отдельно. (Kliewer et al., Nature (1992)). Таким же образом, когда вышеупомянутые два рецептора были трансфектированы в HepG2 клетках, добавление и RXR-специфического лиганда (3-метил-TTNEB) и клофибриновой кислоты, как было найдено, вызывает больший, чем суммарный, эффект, как определено активацией целевого гена репортера, что показано в таблице 5.

Подобный синергетический эффект наблюдался с RXR и RXR-специфическими лигандами и рецептором витамина D (VDR) и их родственными лигандами. Когда RXR и VD рецепторы были ко-трансфектированы в клетки CV-1, содержащие элементы ответа гормона, добавление RXR избирательного 3-метил-TTNCB и 1,25-дигидро-витамина D (1,25-D) вызывает больший ответ, чем суммированный из наблюдаемых для каждого индивидуального лиганда, как показано ниже в таблице 6.

Как показано, представленные выше результаты свидетельствуют о том, что каждая пара рецепторов (RXR/PPAR и RXR/YDR соответственно), в присутствии известных лигандов, специфически активирующих соответствующие рецепторы, способна вызывать синергетический ответ. Результаты свидетельствуют о том, что ответ единственного агента может быт усилен сочетанием двух агентов, или что сравнимые биологические или терапевтические ответы могут быть достигнуты при более низких дозах таких агентов при сочетании.

Наблюдение того, что RXR-специфичные лиганды способны действовать синергетически с RAR лигандами, PPAR лигандами и лигандами витамина D свидетельствует о том, что RXR-специфические лиганды обладают полезностью не только как самостоятельные терапевтические агенты, но также в комбинированной терапии для получения усиленного биологического или терапевтического ответа путем добавления RXR-специфического лиганда. Такая комбинированная терапия может обеспечить дополнительную полезность путем уменьшения побочных эффектов, вызванных основным агентом, что связано с использованием уменьшенных доз этого агента. Например, применяя витамин D или родственный лиганд витамина D в сочетании с RXR избирательным соединением для лечения различных нарушений, включающих кожные заболевания (воспаление сальной железы, псориаз), гиперпрофилеративные нарушения (доброкачественные и злокачественные опухоли) и нарушения кальциевого гомеостаза, можно уменьшить неблагоприятные побочные эффекты, связанные с терапией только одним витамином D.

Так как известно, что RXR образует гетеродимеры с различными членами суперсемейства межклеточного рецептора, можно было бы ожидать, что синергический эффект, наблюдаемый при использовании RXR-избирательных лигандов, может быть достигнут с другими рецепторами, с которыми образуются гетеродимеры. Они включают PPAR, RAR, витамин D, рецепторы тироидного гормона HNF4, COUP семейство рецепторов, как показано выше, и другие в качестве уже идентифицированных членов межклеточного суперсемейства рецепторов.

Как будет понятно специалисту, соединения, описанные выше, могут быть легко использованы при фармакологических применениях, где желательна избирательная активность ретиноидного рецептора и где желательно максимально уменьшить реакционную способность с другими родственными межклеточными рецепторами. Применение изобретения in vivo включает назначение описанных соединений млекопитающим, и в частности человеку.

Соединения по настоящему изобретению являются небольшими молекулами, которые являются относительно жирорастворимыми и липофильными и проникают в клетку путем пассивной диффузии через плазменную мембрану. Следовательно, эти лиганды являются хорошо подходящими как для орального введения или путем инъекции, так и для наружного. При введении эти лиганды могут избирательно активировать рецепторы ретиноида X и поэтому избирательно модулировать процессы, опосредованные этими рецепторами.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению изготавливают в обычных дозированных единичных формах объединением активного соединения по изобретению или смеси таких соединений с нетоксичным фармацевтическим носителем в соответствии с принятыми способами в нетоксичном количестве, достаточном для получения желаемой фармакодинамической активности на млекопитающих, и в частности на человеке. Предпочтительно, композиция содержит активный ингредиент в активном, но не токсичном, количестве, выбранном в интервале от 5 мг до 500 мг активного ингредиента на дозированную единицу. Это количество зависит от желаемой специфической биологической активности и состояний пациента.

Используемый фармацевтический носитель или растворитель может быть, например, твердым или жидким. Могут быть использованы различны фармацевтические формы. Так, когда используется твердый носитель, препарат может быть измельчен, микронизирован в масле, таблетирован, помещен в твердую желатиновую капсулу или капсулу с внешним покрытием в виде микронизированного порошка или гранул, или форме лепешки, пастилки или суппозитории. Когда используется жидкий носитель, препарат может быть в жидкой форме, такой как ампула, или в качестве водной или неводной жидкой суспензии. Для наружного применения активный ингредиент может входить в составы на мягких увлажняющих основах, таких как мази или кремы. Примерами подходящих мазевых основ являются вазелин, вазелин плюс летучие силиконы, ланолин и эмульсия вода в масле, такая как Euceri (Beiersdofr). Примерами подходящих кремовых основ являются крем Nivea (Beiersdofr) холодный крем (UPS), крем Purpose (Johnson & Johnson) гидрофильная мазь (UPS) и Lubriderm (Warner - Lambert).

Следующие примеры иллюстрируют фармакологические композиционные составы:

Пример 47

Твердые желатиновые капсулы изготовлены с использованием следующих ингредиентов, мг/капсула

3-Метил-TTNCB - 140

Крахмал - 100

Стеарат магния - 10

Всего - 250

Вышеуказанные ингредиенты смешивают и заполняют в желатиновые капсулы в количестве 250 мг.

Пример 48

Таблетки изготовлены с использованием следующих ингредиентов, мг/таблетка

3-Метил-TTNCB - 140

Целлюлоза, микрокристаллическая - 200

Диоксид кремния, тонкоизмельченный - 10

Стеариновая кислота - 10

Всего - 360

Компоненты измельчают и прессуют для образования таблеток, каждая весом 360 мг.

Пример 49

Таблетки, каждая содержащая 60 мг активного ингредиента, изготовлены следующим образом: мг/таблетка

3-Метил-TTNCB - 60

Крахмал - 45

Целлюлоза, микрокристаллическая - 35

Поливинилпирролидон (PVP) (в виде 10% раствора в воде) - 4

Натрий карбоксиметилкрахмал (SCMS) - 4,5

Стеарат магния - 0,5

Тальк - 1,0

Всего - 150

Компоненты измельчают и прессуют для образования таблеток, каждая весом 360 мг.

Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито N 45 меш. U.S. и тщательно перемешивают. Раствор смешивают с полученным порошком, который затем пропускают через сито N 14 меш. U.S. Гранулы, полученные таким образом, сушат при 50^oC и пропускают через сито N 18 меш. U.S. Затем к гранулам добавляют SCMS, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито N 60 меш. U.S. и после перемешивания прессуют в аппарате для изготовления таблеток с получением таблеток, каждая весом 150 мг.

Пример 50

Суппозитории, каждая содержащая 225 мг активного ингредиента, могут быть изготовлены следующим образом:

3-Метил-TTNCB, мг - 225

Глицериды насыщенных жирных кислот, мг - 2000

Всего - 2225

Активный ингредиент пропускают через сито N 60 меш. U.S. и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно измельчив при минимальном необходимом нагревании. Смесь затем выливают в форму для суппозитория нормальной емкости в 2 г и дают остыть.

Пример 51

Внутривенный состав может быть получен следующим образом:

3-Метил-TTNCB, мг - 100

Изотонический раствор, мл - 1000

Глицерин, мл - 100

Соединение растворяют в глицерине и затем раствор медленно разбавляют изотоническим раствором. Раствор вышеуказанных ингредиентов затем вводят внутривенно пациенту при скорости 1 мл в минуту.

Соединения по данному изобретению также полезны, когда мечены как лиганды для использования в исследованиях по определению присутствия RXR. Они являются особенно полезными благодаря их способности селективно связывать член подсемейства RXR и могут поэтому использоваться для определения присутствия изоформ RXR в присуттсвии других родственных рецепторов.

Благодаря селективной специфичности соединений по настоящему изобретению в отношении рецепторов ретиноида X эти соединения могут быть также использованы для очистки образцов рецепторов ретиноида X in vivo. Такая очистка может быть осуществлена смешиванием образцов, содержащих рецепторы ретиноида X с одним или более описанными бициклическими производными соединениями, таким образом, чтобы соединение (лиганд) связывалось с рецептором, и затем отделением связанного сочетания лиганд/рецептор методиками отделения, известными специалистам. Эти методики включают колоночное разделение, фильтрацию, центрифугирование, мечение и физическое отделение, и, среди прочих, комплексообразование с антителами.

Хотя описаны и проиллюстрированы предпочтительные осуществления, тем не менее могут быть осуществлены различные замещения и модификации без выхода за рамки объема изобретения. Соответственно, специалисту понятно, что настоящее изобретение описано с целью иллюстрации, но не ограничения.