способ диагностики функционального состояния яичников у животных с удлиненным влагалищем

Формула изобретения

Способ диагностики функционального состояния яичников, включающий взятие мазка на верхне-бокового свода влагалища на уровне portio vaginalis, нанесение пробы тонким слоем на предметное стекло, фиксацию клеточного материала, окраску, определение и подсчет разных типов клеток и суждение взаимозависимых от функционального состояния яичника фазах репродуктивного цикла или возможном нарушении воспроизводительной функции, отличающийся тем, что диагностику состояния яичников проводят у животных с удлиненным влагалищем, например коров, пробу на анализ клеточного состава берут путем снятия клеточной массы поверхностного эпителия со стенок краниального отдела влагалища поверхностью пипетки для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом, при этом пипетку вводят через вагинальное зеркало с подсветкой под визуальным контролем, причем длина шероховатости рабочего конца пипетки составляет пять-семь сантиметров, для диагностирования животных определяют процентное содержание собственно поверхностных клеток с четким ядром и "голых" ядер и их "теней", при содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" не более 1,3% диагностируют предовуляторный период полового цикла и судят о благоприятных условиях для оплодотворения коров, а при содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" в пределах 3,1 - 8,5% диагностируют беременность и судят о благоприятных условиях для развития плода, при содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" от 17,8 до 30,0% диагностируют беременность и судят о возможном нарушении нормальных условий для развития плода, при увеличении содержания собственно поверхностных клеток на мазках, взятых у коров в предовуляторном периоде, диагностируют о наличии воспалительного процесса, а при увеличении содержания "голых" ядер и их "теней" судят о возможной персистенции желтого тела в яичнике.

Описание изобретения к патенту

Способ позволяет доступно в условиях животноводческого хозяйства диагностировать функциональное состояние яичников у животных с удлиненным влагалищем. В этом состоит результат, находящийся в причинно-следственной связи с существенными признаками.

Широко известен кольпоцитологический метод клинико-диагностической оценки функционального состояния яичников путем изучения цитологической картины влагалищных мазков. По характеру картины влагалищного мазка можно судить о взаимосвязанных с функциональной активностью яичников фазах менструального цикла у женщин (полового цикла у животных), уточнять время прохождения овуляции или поставить диагноз возможного нарушения воспроизводительной функции.

Известен способ [Арсеньева М.Г. Кольпоцитологические исследования в диагностике и терапии эндокринных гинекологических заболеваний. - М.: Медицина, 1977. - 365 с.] выявления клеточного состава влагалищных мазков с целью диагностики функционального состояния яичников (наличия зрелых фолликулов в яичнике в предовуляторном периоде или желтого тела в яичнике в лютеиновую фазу полового цикла или в ходе прохождения беременности), включающий взятие свободноотделяющейся от стенки пробы (мазка) из верхне-бокового свода влагалища на уровне portiо vaginalis, пробу наносят тонким слоем на предметное стекло, затем подсушивают на воздухе, фиксируют, окрашивают, определяют и подсчитывают количество разных типов клеток поверхностного эпителия и по цитологической картине судят о состоянии яичников.

Вышеприведенный способ не может быть применен для животных, например для коров.

Особенностью репродуктивной системы этих животных является удлиненное влагалище - у коров - от 25 до 40 см и более [Павлов В. А. Физиология воспроизводства крупного рогатого скота.- М.: Россельхозиздат, 1984. - С. 21]. Следовательно, для взятия пробы поверхностного эпителия с боковых стенок краниального отдела влагалища на уровне шейки матки можно теоретически использовать удлиненные палочки, что опасно для подвижных животных, поэтому пластмассовые пипетки для искусственного осеменения крупного рогатого скота с обработанным концом наиболее приемлемы. Кроме того, изменения клеточного состава влагалищной стенки является реакцией влагалища на воздействие гормонов яичника, в частности эстрогенов. Н.Г. Хлопин [Общебиологические и экспериментальные основы гистологии.- Л.: Изд-во АМН СССР, 1946.- 440 с.] показал, что многослойная выстилка влагалища имеет типичный эпидермальный характер и циклически изменяется в течение полового цикла. Циклические изменения, отражающие овариальную функцию яичников во влагалище, наиболее отчетливо выступают в поверхностном эпителии. Эпителий влагалища подвергается различным изменениям, проявляющимся различиями в толщине эпителиального пласта (изменении количества клеточных слоев) и особенно в форме и характере покровных клеток. П. А. Волосков [Основы борьбы с бесплодием крупного рогатого скота. - М.: Гос. Изд-во с.-х. лит-ры, 1960. - 208 с.] считает, что о реакции эстрогенов на влагалище коров можно судить по картине изменений слизистой оболочки в области влагалищной части шейки матки. Результаты этих исследований согласуются с данными Коле [цитр. Техвер Ю.Т. Гистология мочеполовых органов и молочной железы домашних животных. - Тарту, 1968, ч. 1.- 137 с.], который отмечал, что наиболее заметные и характерные изменения на разных стадиях полового цикла проходят в самой начальной части влагалища, на протяжении один-два сантиметра от влагалищной части шейки матки. В каудальных участках влагалища аналогичные изменения происходят намного позже.

Задачей настоящего изобретения является применение известного способа диагностики состояния яичников для определения особенностей прохождения отдельных этапов репродуктивного цикла (половой охоты, овуляции, оплодотворения и т.д.) у домашних продуктивных животных - коров.

Предложенный способ отличается от прототипа тем, что диагностику проводят у животных с удлиненным влагалищем, например коров, пробу на анализ клеточного состава берут путем снятия клеточной массы поверхностного эпителия со стенок краниального отдела влагалища поверхностью пипетки для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом, пипетку вводят через вагинальное зеркало с подсветкой под визуальным контролем, причем длина шероховатости рабочего конца пипетки составляет пять-семь сантиметров.

Существенные признаки изобретения: способ диагностики функционального состояния яичников у животных с удлиненным влагалищем, например коров, включающий взятие мазка из верхнебокового свода влагалища на уровне шейки матки путем снятия клеточной массы со стенок пипеткой для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом (5-7 см), причем пипетку вводят через вагинальное зеркало с подсветкой под визуальным контролем, последующее нанесение пробы тонким слоем на предметное стекло, фиксацию клеточного материала, окраску, определение и подсчет разных типов клеток; для диагностирования животных определяют процентное содержание собственно поверхностных клеток с четким ядром и "голых" ядер и их "теней: при содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" не более 1,3% диагностируют предовуляторный период полового цикла и судят о благоприятных условиях для оплодотворения коров, а при содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" в пределах 3,1-8,5% диагностируют беременность и судят о благоприятных условиях для развития плода, при содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" от 17,8% до 30,0% диагностируют беременность и судят о возможном нарушении нормальных условий для развития плода; при увеличении содержания собственно поверхностных клеток на мазках, взятых у коров в предовуляторном периоде, диагностируют наличие воспалительного процесса, а при увеличении содержания "голых" ядер и их "теней" судят о возможной персистенции желтого тела в яичнике.

Способ осуществляется следующим образом:

у коров забор мазков проводят из наиболее удаленной от вульвы части влагалища с использованием пипетки, применяемой для искусственного осеменения, концом шероховатой поверхности, таким образом чтобы поверхность конца пипетки была негладкой, с мелкими неровностями и бороздками. Шероховатость на конце пипетки делается путем перемещения пяти-семи см от конца пипетки по аброзивному камню.

Выполненные таким образом бороздки и углубления на поверхности пипетки захватывают свободно лежащие на стенках влагалища клетки эпителия.

Для забора мазков нельзя использовать ватный тампон, который впитывая цервико-вагинальную жидкость, намокает и легко соскальзывает с конца пипетки. Практически нельзя использовать длинные палочки, поскольку во время забора животные могут делать резкие движения и возникает опасность травмирования их влагалища или шейки матки.

Материал, взятый с боковых стенок краниального влагалища коров, шероховатым концом пипетки наносят на край предметного стекла и затем его равномерно распределяют по стеклу. Полученные таким образом мазки фиксируют в 70% спирте в течение 10 минут. Затем окрашивают по Романовскому-Гимза. Согласно ранее принятой нами классификации [Василенко Т.Ф., Борисенков М.Ф. Изменения клеточного состава влагалища коров в течение полового цикла // Усвоение питательных веществ у жвачных животных. Труды Коми филиала АН СССР. - Сыктывкар, 1987. - N 85. - С. 98-106] под микроскопом определяют типы клеток поверхностного эпителия, наличие ядер без цитоплазмы и их "теней", отмечают появление лейкоцитов и с помощью клавишного счетчика проводят подсчет 200 клеток в разных участках предметного стекла. Для каждого типа клеток определяли процентное отношение их к общему количеству. При обследовании одного животного делается забор двух-трех мазков.

Для характеристики той или иной стадии репродуктивного цикла, взаимосвязанных с функциональным состоянием яичников, исследовали две группы коров.

Первая группа клинически здоровых животных находилась в состоянии половой охоты. Мазки у коров данной группы были взяты по вышеописанной технологии и исследованы на содержание отдельных типов клеток с целью выявления особенностей клеточного состава влагалищного содержимого и определения оптимальных условий вагинальной среды в предовуляторном периоде перед оплодотворением. Степень созревания влагалищного эпителия под воздействием яичниковых гормонов (общее количество поверхностных эпителиальных клеток) на мазках у коров этой группы составила около 97,9%. Количество собственно-поверхностных оформленных клеток с четким ядром варьировало в пределах от 0,8 до 7,5%, содержание "голых" ядер и их "теней" колебалось от 0,5 до 1,3% (табл. 1).

Вторая группа клинически здоровых животных находилась в состоянии беременности (первый-третий месяцы). Мазки у коров второй группы были взяты с целью определения условий вагинальной среды у животных во время прохождения беременности. На мазках, взятых у коров на первом-третьем месяцах беременности, общее количество поверхностных клеток составило 97,3-100,0% (табл. 2). Содержание собственно поверхностных оформленных клеток с четким ядром колебалось в пределах 0,2-4,8% и может быть выше, т.е. варьировать в тех же границах разброса показателей, что характерно для животных первой группы. В зависимости от количества "голых" ядер и их "теней" можно выделить две подгруппы животных: у коров первой подгруппы содержание "голых" ядер и их "теней" на мазках варьировало в пределах 3,1-8,5%, на мазках у коров второй подгруппы этот показатель изменялся от 17,8 до 30%. Такое увеличение количества "голых" ядер и их "теней" на влагалищных мазках у беременных коров В. П. Кошевий [Оценка состояния плода во время беременности у коров. Оцiнка стану плода пiд час вагiтностi у коpiв. BiCH. сiльскогоспод. науки. - 1987, N 10. - С. 62-63] связывает со снижением секреции половых гормонов, создающих необходимые условия для развития плода. Именно низкий базальный уровень гормонов (в основном эстрогенов) отражается в дегенерации (разрушении) эпителиальных клеток и увеличении количества ядер без цитоплазмы и их "теней" на мазках у беременных коров.

Таким образом, для диагностирования животных в состоянии половой охоты исследуют клеточный состав и по содержанию (собственно-поверхностные клетки с четким ядром не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" не более 1,3%) судят об оптимальном времени осеменения коров или о наличии флюктуирующего фолликула со зрелой яйцеклеткой в яичнике. А для диагностирования животных в состоянии беременности исследуют клеточный состав мазков и по содержанию собственно поверхностных клеток не более 7,5% и "голых" ядер и их "теней" в пределах 3,1-8,5% судят о благополучном исходе беременности и нормальном развитии плода, в то время как при увеличении содержания "голых" ядер и их "теней" до 17,5-30,0% судят о наличии беременности и возможном нарушении течения беременности и изменении условий для нормального развития плода.

С целью подтверждения возможностей использования данного способа исследовали мазки у коровы во время проведения осеменения. Обсчет взятых мазков показал, что общее количество поверхностных клеток равно 99,5%, содержание собственно поверхностных клеток с четким ядром составило 5,3%, а количество свободных от цитоплазмы ядер и их "теней" отмечали в пределах 0,3%. Поскольку полученные величины лежат в пределах границ показателей, характеризующих клеточный состав влагалищных мазков у коров при плодотворном осеменении, можно судить, что у этой коровы условия вагинальной среды являются оптимальными для оплодотворения.

При обследовании мазков у другой коровы получено, что содержание поверхностных клеток составляет 100%, собственно поверхностных - 0,5%, а "голых" ядер и их "теней" - 20,5%. Представленные величины лежат в пределах границ показателей, определенных нами на мазках у животных на первом-третьем месяцах беременности. Следовательно, можно предположить, что эту корову мы обследовали в начале беременности.

При исследовании клеточного состава влагалищных мазков у коров во время половой охоты в ходе проведения осеменения (предовуляторный период) получили, что общее количество клеток поверхностного эпителия составляет 98,2-99,3%, сумма собственно поверхностных оформленных клеток изменяется в пределах 13,8-33,8%, а количество "голых" ядер и их "теней" равняется 2,9-24,5% (табл. 3). Поскольку представленные величины не соответствуют показателям, определенным нами для животных первых двух групп, то можно предположить, что условия вагинальной среды у коров данной группы не соответствуют условиям, необходимым для их оплодотворения или роста и развития зародыша на первых месяцах беременности. Увеличение числа собственно поверхностных клеток с четким ядром на мазках у животных третьей группы может быть связано с процессом преждевременного отторжения данного типа клеток со стенок влагалища. Такой феномен на мазках у коров отмечают при наличии воспалительного процесса или его последствий в органах репродуктивной системы обследованных животных. А увеличение содержания "голых" ядер и их "теней" на мазках у животных в предовуляторном периоде может свидетельствовать о наличии функционально активного желтого тела в яичнике.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет доступно в условиях фермы определять особенности изменения клеточного состава поверхностного эпителия влагалища, способствует отслеживанию зависимых от функционального состояния яичника отдельных этапов репродуктивного цикла - предовуляторного периода, наличие беременности или предоставляет возможность выявления послеродовых осложнений.