способ оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в диске

Формула изобретения

Способ оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в диске, включающий посев тест-культуры на питательную среду, нанесение на нее дисков с антимикробными препаратами, измерение диаметров зон задержки роста (ДЗЗР) микроорганизмов, отличающийся тем, что измерение ведут с помощью приспособления в виде прозрачной пленки с 32 кругами, расположенными на ней, с отличающимися друг от друга на 1 мм диаметрами, указанными в центре, и определение ДЗЗР исследуемой культуры производят по совпадению с диаметром на приспособлении, при этом оценку чувствительности микроорганизмов определяют по коэффициенту чувствительности микроорганизма, рассчитывая его по формуле



где КЧМ - коэффициент чувствительности микроорганизма;

ДЗЗР - диаметр зон задержки роста,

при этом при значении КЧМ=1 и более микроорганизмы относятся к группе чувствительных, при значении КЧМ менее 1 - к умеренно чувствительным и нечувствительным.

Описание изобретения к патенту

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для определения чувствительности микроорганизмов, выделенных от больных и с объектов внутрибольничной среды, к антимикробным препаратам.

Аналогом предлагаемого изобретения является метод серийных разведений в жидких и плотных средах, позволяющий дать количественную характеристику чувствительности микроорганизмов и определить минимальную ингибирующую концентрацию антимикробного препарата ("Медицинская микробиология" под ред. Покровского В.И., Поздеевой O.K. М., 1998, с. 162-163). Однако данный метод трудоемок, требует больших временных затрат, в связи с чем его использование в практике бактериологических лабораторий лечебно-профилактических учреждений ограничено.

Прототипом предлагаемого изобретения является метод стандартных дисков, основанный на диффузии антимикробных препаратов в агар (Инструкция по применению дисков для определения чувствительности к антибиотикам. М., 1986).

Указанный метод прост, удобен, не требует больших временных и материальных затрат. Чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам в диске оценивается по диаметру зон задержки роста (ДЗЗР) микроорганизмов. Для каждого антимикробного препарата в инструкции указаны различные ДЗЗР, в зависимости от величины которых микроорганизмы по чувствительности подразделяются на 3 группы: устойчивые, умеренно-устойчивые и чувствительные. К устойчивым относятся штаммы микроорганизмов, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. К чувствительным относятся штаммы, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотика. Для группы "чувствительные микроорганизмы" даны только минимальные значения ДЗЗР. Однако на практике ДЗЗР могут широко варьировать и, следовательно, в этой группе нельзя выделить наиболее чувствительные микроорганизмы к тому или иному препарату, что может явиться причиной нерационального его выбора и привести к снижению эффективности результатов лечения больного и удлинению периода лечения.

ДЗЗР микроорганизмов определяются линейкой в мм. При этом получаемые результаты не всегда бывают точны. Ошибки могут быть обусловлены отсутствием единого подхода к измерению ДЗЗР, техническими погрешностями. Так, зоны задержки роста не всегда имеют форму круга, и определение может производиться как по наименьшему, так и по наибольшему его размеру. Кроме того, даже если зона задержки роста имеет форму круга, то при измерении диаметра линейка может накладываться не на диаметр зоны.

Таким образом, хотя метод и получил признание и применяется практически во всех бактериологических лабораториях лечебно-профилактических учреждений, его основным недостатком является то, что с его помощью можно получить только качественную характеристику чувствительности микроорганизмов.

Целью предлагаемого изобретения является повышение точности и обеспечение количественной оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в диске.

Данная цель достигается тем, что определяется как в начале, так при необходимости и в процессе лечения критерий чувствительности микроорганизмов (КЧМ), рассчитываемый по формуле:



при этом при значении КЧМ = 1 и более микроорганизмы относятся к группе чувствительных, при значении КЧМ менее 1 - к умеренно-чувствительным и нечувствительным.

Способ оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в диске осуществляется следующим образом. После посева тест-культуры на среду АГВ, предварительно разлитую по 20 мл в стерильные чашки Петри, диаметром 100 мм, наносят диски с антимикробными препаратами промышленного производства. После инкубации в термостате в течение 18-20 часов при 35-37^oC проводят определение ДЗЗР предлагаемым нами приспособлением. Для этого приспособление, включающее 32 круга, расположенных на прозрачной пленке, диаметрами, указанными в центре, соответственно от 9 до 40 мм, отличающимися друг от друга на 1 мм (см. чертеж), прикладывается к наружной поверхности дна чашки Петри и передвигается до совмещения одного из кругов с определяемой зоной задержки роста микроорганизма вокруг диска с препаратом. Цифра в центре круга, совпавшего с определяемой зоной, и является ее диаметром. В случае, когда зона задержки роста не имеет форму круга, на устройстве подбирается круг, в который определяемая зона вписывается своим наибольшим размером. Полученный ДЗЗР микроорганизма к определенному антимикробному препарату и соответствующее ему значение КЧМ находим в предлагаемой нами таблице "Критерий чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в диске в зависимости от диаметров зон задержки роста микроорганизмов", разработанной для практического использования КЧМ и облегчения работы персонала бактериологических лабораторий (см. таблицу 1). В графе 1 таблицы представлены антимикробные препараты в диске, в графах 2 и 3 - ДЗЗР соответственно умеренно-чувствительных и чувствительных микроорганизмов (указаны над чертой) и соответствующие им критерии чувствительности микроорганизмов (указаны под чертой). По наибольшему КЧМ выбирается оптимальный антимикробный препарат.

Пример. Больной Ш., 32 лет, прооперирован 12.01.99 г. по поводу гангренозно-перфоративного аппендицита, разлитого гнойного перитонита. На 4-е сутки после операции общее состояние тяжелое, температура до 39^o, выявлено нагноение послеоперационной раны. ДЗЗР St.aureus, выделенного у больного из раны, вокруг диска с гентамицином на среде АГВ, измеренный с помощью предлагаемого устройства, 24 мм. Соответствующий данному диаметру КЧМ по таблице равен 1,5. Данный микроорганизм относится к группе чувствительных. ДЗЗР вокруг диска с эритромицином 24 мм. Соответствующий данному диаметру КЧМ по таблице - 1,1. Данный микроорганизм также относится к группе чувствительных. Следовательно, выделенный стафилококк чувствителен как к гентамицину, так и эритромицину, однако, чувствительность к гентамицину выше. Поэтому для данного больного был рекомендован гентамицин. Через 7 дней после лечения общее состояние больного улучшилось, температура снизилась до 37,2^o, сохранилось скудное гнойное отделяемое из раны. Повторный бактериологический анализ показал, что ДЗЗР St.aureus вокруг диска с гентамицином 16 мм. КЧМ = 1, микроорганизм также относится к группе чувствительных. Однако чувствительность St. aureus к данному антибиотику в процессе лечения снизилась. Произведена замена гентамицина на другой антибиотик с более высоким КЧМ (цефотаксим, КЧМ= 1,4). В результате антибиотикотерапии данным препаратом состояние больного стало удовлетворительным, выделение гноя из раны прекратилось, послеоперационная рана зажила. Больной выписан через 19 дней после операции. Таким образом, данный способ позволяет проводить сравнение чувствительности микроорганизма к нескольким препаратам, а также сравнение чувствительности микроорганизма к одному препарату в процессе лечения.

Предложенный критерий чувствительности микроорганизмов позволяет: дать количественную характеристику чувствительности микроорганизмов к любому антимикробному препарату, сравнивать КЧМ к двум и более препаратам с целью выбора наиболее оптимального из них для конкретного больного, контролировать чувствительность микроорганизмов к препарату в динамике и при необходимости проводить своевременную его замену на более эффективный, что позволит снизить число послеоперационных осложнений, смертность от внутрибольничных инфекций, уменьшить сроки пребывания больных на койке, а следовательно и уменьшить стоимость лечения.

Предложенное приспособление для измерения ДЗЗР микроорганизмов позволяет унифицировать методику измерения, упростить процесс измерения, быстро и точно получить результат. Разработанная таблица позволяет быстро перевести значения ДЗЗР микроорганизмов в числовой показатель - критерий чувствительности микроорганизмов, что облегчит врачу выбор препарата для эффективной антибактериальной терапии.