производные циклоалкилена или гетероциклоалкилена, фармацевтическая композиция, аэрозольное устройство и способ лечения

Формула изобретения

1. Производные циклоалкилена или гетероциклоалкилена общей формулы I

R²-Y-R³,

где R² и R³ независимо - Z-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-, где Z - амино, гуанидино или амидино;

Y - цикло(C_3-14)алкилен или гетероцикло(C_6-8)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий в качестве гетероатома один или два атома азота или кислорода;

X¹ - (C_3-6)алкилен, окса(C_4-6)алкилен или -X⁶-X⁷-X⁸-, где X⁷ - фенилен, цикло(C_3-6)алкилен или гетероцикло(C_3-6)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий в качестве гетероатома один или два атома азота, и X⁶ и X⁸ - (C_n6)алкилен и гетероцикло(C_n8)алкилен соответственно, где сумма n6 + n8 = 1, 2, 3 или 4 при условии, что когда Z - амино, n6 0;

X² и X⁴ независимо - -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)-, -N(R¹)C(O)O-, где каждый R¹ независимо - водород, (C_1-8)алкил;

X³ - (C_1-8)алкилен, -X⁹-X¹⁰- или -X¹⁰-X⁹-, где X⁹ - (C_n9)алкилен, где n9 = 0, 1 или 2, и X¹⁰ - цикло(C_3-8)алкилен или гетероцикло(C_3-8)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий в качестве гетероатома один или два атома азота при условии, что нет ковалентных связей между гетероатомами, содержащимися в X¹⁰, и гетероатомами, содержащимися или в X², или X⁴;

X⁵ - (C_n5)алкилен, где n5 = 0, 1 или 2, при условии, что R² и R³ неодинаковы,

и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, в котором X² - -C(O)NH-, -NHC(O)- или -NHC(O)O-, X⁴ - -C(O)- или -C(O)O-.

3. Соединение по п.2, в котором Y - циклооктилен, циклогексилен, циклопентилен, цис-декагидронафтилен, транс-декагидронафтилен, пергидрофенантрен, бицикло[2,2,1] гептилен, бицикло[2,2,2]октилен, диоксабицикло[3,3,0]октилен или тетрацикло[3,3,1,1^3,7]-децилен.

4. Соединение по п.3, в котором X³ - 1,4-пиперазинилен, 1,4-пиперидилен, 1,4-пергидро-7Н-1,4-диазепинилен или -X⁹-X¹⁰- (где X⁹ - метилен и X¹⁰ - 1,4-пиперидилен), X⁴ - -C(O)- или -C(O)O-; или X³ - (C_1-4)алкилен и X⁴ - -N(R¹)C(O)O- (где R¹ - водород или метил).

5. Соединение по п.4, в котором n8 и n5 независимо равны 0 или 1.

6. Соединение по п.5, в котором n5 = 0 и Y - циклооктилен.

7. Соединение по п. 6, в котором R² - 4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси, R³ - 4-(4-транс-аминометилциклогексилметил-карбамоил)пиперазин-1-илформилокси и Y - цис-1,5-циклооктилен, а именно цис-5-[4-(4-транс-аминометилцикло-гексилметилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси)]циклооктил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат, и его фармацевтически приемлемые соли.

8. Соединение по п.7, выбранное из группы, включающей

цис-5-[4-(5-аминопентилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] циклооктил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазин-карбоксилат;

цис-5-[4-(4-аминобутилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] циклооктил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат;

цис-5-[4-(3-аминопропилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] -циклооктил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат; и

цис-5-[4-(6-аминогексилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] циклооктил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат;

и его фармацевтически приемлемые соли.

9. Соединение по п.1, представленное формулой

[Z-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵]₂Y,

где Z - амино, гуанидино или амидино;

Y - цикло(C_3-14)алкилен или гетероцикло(C_6-8)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий в качестве гетероатома один или два атома азота или кислорода;

X¹ - (C_3-6)алкилен, окса(C_4-6)алкилен или -X⁶-X⁷-X⁸-, где X⁷ - фенилен, цикло(C_3-6)алкилен или гетероцикло(C_3-6)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий в качестве гетероатома один или два атома азота, и X⁶ и X⁸ - (C_n6)алкилен и гетероцикло(C_n8)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий один или два атома азота, соответственно, где n6 + n8 = 1, 2, 3 или 4, при условии, что когда Z - амино, n6 0;

X² и X⁴ независимо - -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)-, -N(R¹)C(O)O-, где каждый R¹ независимо - водород, (C_1-8)алкил;

X³ - (C_1-8)алкилен, -X⁹-X¹⁰- или -X¹⁰-X⁹-, где X⁹ - (C_n9)алкилен, где n9 = 0, 1 или 2, и X¹⁰ - цикло(C_3-8)алкилен или гетероцикло(C_3-8)алкилен, насыщенный или ненасыщенный, содержащий один или два атома азота при условии, что нет ковалентных связей между гетероатомами, содержащимися в X¹⁰, и гетероатомами, содержащимися или в X², или X⁴;

X⁵ - (C_n5)алкилен, где n5 = 0, 1 или 2,

и его фармацевтически приемлемые соли.

10. Соединение по п.9, в котором X² - -C(O)-, -C(O)NH-, -NHC(O)- или -NHC(O)O- и X⁴ представляет -C(O)- или -C(O)O-.

11. Соединение по п. 10, в котором Y - циклооктилен, циклогексилен, циклопентилен, цис-декагидронафтилен, транс-декагидронафтилен, пергидрофенантрен, бицикло[2,2,1]гептилен, бицикло[2,2,2]октилен, диоксабицикло[3,3,0] октилен или тетрацикло[3,3,1,1^3,7]-децилен.

12. Соединение по п.11, в котором X³ - 1,4-пиперазинилен, 1,4-пиперидилен, 1,4-пергидро-7Н-1,4-диазепинилен или -X⁹-X¹⁰- (где X⁹ - метилен и X¹⁰ - 1,4-пиперидилен) и X⁴ - -C(O)- или -C(O)O-; или X³ - (C_1-4)алкилен и X⁴ - -N(R¹)C(O)O- (где R¹ - водород или метил).

13. Соединение по п.12, в котором n8 и n5 равны независимо 0 или 1.

14. Соединение по п.13, в котором n5 = 0 и Y - циклооктилен.

15. Соединение по п.14, в котором Z - гуанидино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - цис-1,5-циклооктилен, а именно цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] , и его фармацевтически приемлемые соли.

16. Соединение по п.14, в котором Z - амино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 1, n8 = 1 и X⁷ - транс-1,4-циклогексилен), X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - цис-1,5-циклооктилен, а именно цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексил-метилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат], и его фармацевтически приемлемые соли.

17. Соединение по п.14, в котором Z - гуанидино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -NHC(O)-, X³ - метилен, X⁴ - -NHC(O)O- и Y - цис-1,5-циклооктилен, а именно, цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат), и его фармацевтически приемлемые соли.

18. Соединение по п.14, в котором Z - гуанидино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -C(O)O-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - цис-циклооктилен, а именно, цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидино-фенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат] , и его фармацевтически приемлемые соли.

19. Соединение по п.14, выбранное из группы, включающей

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)бензилкарбамоил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(5-аминопентилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(аминометил)пиперид-1-илкарбониламино] бутиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(6-аминогексилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(аминометил)пиперид-1-илкарбониламинометил)-1-пиперидинкарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-(пергидро-7Н-1,4-диазепин)карбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-аминометилбицикло[2,2,2] окт-1-илметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(5-амино-2-пентенилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-аминобутилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[2-(2-аминоэтокси)этилкарбамоил]-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексиламиноформилокси)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис{ N-2-(транс-4-аминометилциклогексиламиноформилокси)этил-M-метиламинокарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-аминометилбензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис{ N-2-(транс-4-аминометилциклогексилметиламиноформилокси)этил-N-метиламинокарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметиламиноформилокси)-1-пиперидинкарбоксилат;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[3-(4-гуанидинофенил)пропионил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[2-(1-амидинопиперид-4-ил)этилкарбамоил]-1-пиперазинкарбоксилат;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексил-карбонил)-1-пиперидинкарбоксилат;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)фенилацетил]-1-пиперазинкарбоксилат;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)бензоил] -1-пиперазинкарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[4-(1-аминопроп-2-ил)бензоил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[3-(1-амидинопиперид-4-ил)пропионил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[3-(4-амидинофенил)пропионил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[4-(2-аминоэтил)пиперид-1-ил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[транс-4-(2-аминоэтил)цикло-гексилкарбонил] -1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[транс-4-(2-аминоэтил)цикло-гексилацетил] -1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[2-(4-амидинофенил)-этилкарбамоил]-1-пиперазинкарбоксилат};

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(1-амидинопиперид-4-илацетил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(1-амидинопиперид-4-илметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-амидинофенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-амидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-амидинобензоиламинометил)-1-пиперидинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-амидинопиперид-1-илкарбонил-аминометил)-1-пиперидинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилкарбониламино-метил)-1-пиперидинкарбоксилат];

и их фармацевтически приемлемые соли.

20. Соединение по п.13, в котором n5 = 1 и Y - циклогексилен.

21. Соединение по п.20, в котором Z - гуанидино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -NHC(O)-, X³ - метилен, X⁴ - -NHC(O)O- и Y - транс-1,4-циклогексилендиметилен, а именно транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат), и его фармацевтически приемлемые соли.

22. Соединение по п.20, выбранное из группы, включающей

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис{ 4-[4-(аминометил)-пиперид-1-илкарбониламинометил]-1-пиперидинкарбоксилат};

цис-1,4-циклогексилендиметилен-бис[4-(4-гуанидинобензил-карбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

и их фармацевтически приемлемые соли.

23. Соединение по п.13, в котором n5 = 0 и Y - циклогексилен.

24. Соединение по п.23, выбранное из группы, включающей:

транс-1,4-циклогексилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксальдегид];

транс-1,4-циклогексилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)бензоил] -1-пиперазинкарбоксальдегид};

1,2-циклогексилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксальдегид];

и их фармацевтически приемлемые соли.

25. Соединение по п.13, в котором n5 = 0 и Y - 4,8-диоксабицикло[3,3,0] октилен.

26. Соединение по п.25, в котором Z - гуанидино, -X¹- представляет -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - транс-2,6-(4,8-диоксабицикло[3,3,0] октилен), а именно транс-2,6-(4,8-диоксабицикло-[3,3,0]октилен)-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] , и его фармацевтически приемлемые соли.

27. Соединение по п.13, в котором n5 = 1 и Y - бицикло[2,2,2]окт-5-енилен.

28. Соединение по п.27, в котором Z - гуанидино, -X¹- представляет -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - транс-2,3-бицикло[2,2,2]окт-5-енилендиметилен, а именно транс-2,3-бицикло[2,2,2] окт-5-енилендиметилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат], и его фармацевтически приемлемые соли.

29. Соединение по п.13, в котором n5 = 1 и Y - тетрацикло[3,3,1,1^3,7] децилен.

30. Соединение по п.29, выбранное из группы, включающей

цис-1,5-тетрацикло[3,3,1,1^3,7] децилендецилендиметилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-тетрацикло[3,3,1,1^3,7] децилендиметилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксальдегид];

и его фармацевтически приемлемые соли.

31. Соединение по п.13, в котором n5 = 1 и Y - бицикло[2,2,2]октилен.

32. Соединение по п.31, в котором Z - гуанидино, -X¹- представляет -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен), X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - 1,4-бицикло[2,2,2]октилендиметил, а именно 1,4-бицикло[2,2,2] -октилендиметиленбис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат], и его фармацевтически приемлемые соли.

33. Фармацевтическая композиция, обладающая противоастматической активностью, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит эффективное количество соединение по п.1 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

34. Фармацевтическая композиция по п.33, в которой соединение по п.1 выбрано из группы, включающей

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]; и

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат].

35. Композиция по п. 33, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель для наружного нанесения.

36. Фармацевтическая композиция по п.33, в которой композиция представлена в виде аэрозольной композиции, содержащей соединение по п.1 в фармацевтически приемлемом растворе-носителе или сухом порошке, приготовленных в виде аэрозоля.

37. Аэрозольная композиция по п.36, в которой соединение выбрано из группы, включающей

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

[цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]; и

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат].

38. Аэрозольная композиция по п.36, где указанное соединение представлено в фармацевтически приемлемом растворе-носителе в концентрации от около 0,01 до 30 мг/мл.

39. Фармацевтическая композиция по п.33, которая может быть использована в виде пероральной композиции.

40. Пероральная композиция по п.39, где соединение выбрано из группы, включающей

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]; и

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат].

41. Композиция по п.40, где соединением является цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат].

42. Аэрозольное устройство, содержащее соединение по п.1 в фармацевтически приемлемом растворе-носителе или сухом порошке и приспособление для превращения этого раствора или порошка в аэрозольную форму, пригодную для ингаляции.

43. Аэрозольное устройство по п.42, где соединение выбрано из группы, включающей

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

[цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]; и

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат].

44. Способ лечения иммуноопосредованного воспалительного заболевания дыхательных путей у млекопитающего, отличающийся тем, что указанному млекопитающему вводят терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или композиции, содержащей соединение по п.1 в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе.

45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что композицией является аэрозольная ингалируемая композиция по п.36.

46. Способ по п.45, где соединение выбрано из группы, включающей

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]; и

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1-пиперазинкарбоксилат].

Описание изобретения к патенту

Изобретение касается композиций и способов, эффективных для профилактики и лечения опосредованных тучными клетками (мастоцитами) воспалительных нарушений. Изобретение включает композиции и способы, эффективные для профилактики и лечения воспалительных заболеваний, связанных с дыхательными путями, таких как астма и аллергический ринит. Композиции и способы по данному изобретению применимы, в частности, для профилактики или лечения поздней фазы бронхостеноза и гиперчувствительности, связанной с хронической астмой. Кроме того, композиции и способы по данному изобретению применимы в лечении других типов иммуноопосредованных воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, конъюнктивит и воспалительное заболевание пищеварительного тракта, а также различные дерматологические состояния. Кроме того, композиции и способы по данному изобретению применимы в лечении вызываемых респираторно-синцитиальным вирусом заболеваний.

Астма представляет собой комплексное заболевание, в котором участвуют многочисленные биохимические медиаторы как при остром, так и при хроническом проявлениях. Все чаще астму рассматривают как воспалительное заболевание (см. , например, Hood et al., Immunology 2nd ed., Benjamin-Cummings 1984). Астма часто характеризуется прогрессирующим развитием гиперчувствительности трахеи и бронхов как к иммуноспецифическим аллергенам, так и к генерализованным химическим или физическим стимулам. Считают, что гиперчувствительность астматической бронхиолярной ткани является результатом хронических воспалительных реакций, которые раздражают и повреждают эпителиальную выстилку стенок дыхательных путей и провоцируют патологическое утолщение лежащей ниже ткани. Исследования бронхиальной биопсии показали, что даже больные с легкой астмой имеют признаки воспаления в стенке дыхательных путей.

Одним из инициаторов воспалительного последствия является аллергический ответ на полученные при вдыхании аллергены. Лейкоциты, несущие рецепторы IgE, а именно тучные клетки (мастоциты) и базофилы, но также моноциты, макрофаги и эозинофилы, присутствуют в эпителии и нижележащих тканях гладких мышц бронхов, где они активируются первоначально путем связывания специфических ингалированных антигенов с рецепторами IgE. Активированные мастоциты высвобождают ряд предварительно образованных или первичных химических медиаторов воспалительного ответа и ферментов. Кроме того, многочисленные вторичные медиаторы воспаления образуются in situ посредством ферментативных реакций активированных тучных клеток, в том числе медиаторы, произведенные из супероксидов и липидов. Кроме этого, несколько больших молекул высвобождаются в результате дегрануляции тучных клеток: протеогликаны, пероксидаза, арилсульфатаза B и, в частности, такие протеазы, как триптаза и химотриптическая протеиназа (химаза). См. Drug Therapy of Asthma, pp. 1054-54.

Это химическое выделение из мастоцитов, возможно, ответственно за аллергическую реакцию немедленного типа бронхиолярного сужения (стеноза), которая имеет место у восприимчивых индивидуумов после воздействия на них переносимых воздухом аллергенов. Астматическая аллергическая реакция немедленного типа является максимальной при приблизительно 15 минутах после воздействия аллергенов; возвращение к норме имеет место после одного-двух часов. У 25-35% индивидуумов астматическая реакция немедленного типа сопровождается дальнейшим ухудшением дыхательной функции, которое начинается в диапазоне нескольких часов и является максимальным между 6 и 12 часами последействия. Эта астматическая аллергическая реакция замедленного типа сопровождается заметным увеличением в числе воспалительных клеток, инфильтрирующих бронхиолярную гладкую мышцу и эпителиальные ткани и диссеминирующих в дыхательные пути. Эти клетки включают эозинофилы, нейтрофилы и лимфоциты, причем все они аттрагируются к месту высвобождения производимых мастоцитами хемотактических агентов. Сами инфильтрирующие клетки становятся активированными во время фазы аллергической реакции замедленного типа. Считают, что астматическая аллергическая реакция замедленного типа является вторичной воспалительной реакцией, опосредованной частично секреторной активностью макрофагов.

Триптаза представляет собой основную секреторную протеазу мастоцитов человека, и предполагают, что она участвует в процессинге нейропептидов и воспалении ткани. Зрелая триптаза человека представляет собой гликозилированный связанный с гепарином тетрамер гетерогенных каталитически активных субъединиц. См., например, Vanderslice et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 3811-3815 (1990); Miller et al. J. Clin. Invest. 86:864-870 (1990); Miller et al. J. Clin. Invest. 84:1188-1195 (1989); и Vanderslice et al. Biochemistry 28:4148-4155 (1989).

Триптаза запасается в секреторных гранулах мастоцитов. После активации мастоцитов триптазу человека можно легко измерить во многих биологических жидкостях, где она остается определяемой в течение нескольких часов. См. Schwartz et al., N. Engl. J. Med. 316:1622-1626 (1987). Ее появление обнаруживали в пробах жидкости назального и легочного лаважа из подверженных аллергии субъектов, провоцируемых специфическим антигеном. См. Castells and Schwarz, J. Allerg. Clin. Immunol. 82:348-355 (1988) и Wenzel et al., Am. Rev. Resp. Dis. 141:563-568 (1988). Уровни триптазы в жидкости легочного лаважа, полученной из аллергических астматиков, увеличиваются после провоцирования эндобронхиальным аллергеном. Некоторые курильщики сигарет имеют поразительные увеличения уровней триптазы в жидкости бронхоальвеолярного лаважа по сравнению с контрольными группами некурящих. Это открытие обеспечивает некоторое подтверждение гипотезы, что высвобождение протеиназ из активированных мастоцитов могло бы способствовать деструкции легких в случае эмфиземы курильщиков. См. Kalenderian et al. Chest 94:119-123 (1988). Кроме того, было показано, что триптаза является сильным митогеном для фибробластов, что позволяет предположить ее участие в легочном фиброзе и интерстициальных легочных заболеваниях. См. Ruoss et al., J. Clin. Invest. 88:493-499 (1991).

Считали, что триптаза участвует во многих биологических процессах, в том числе в деградации сосудорасширяющих и бронхорасслабляющих нейропептидов (см. Caughey et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 244:133-137 (1988); Franconi et al. , J. Pharmacol. Exp. Ther. 248:947-951 (1988); и Tam et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 3:27-32 (1990) и модуляции бронхиальной чувствительности к гистамину (см. Sekizawa et al., J. Clin. Invest. 83:175-179 (1989)). Эти исследования предполагают, что триптаза, возможно, увеличивает бронхостеноз в случае астмы посредством разрушения бронхолитических пептидов.

Кроме того, показано, что триптаза расщепляет альфа-цепи фибриногена, а также высокомолекулярного кининогена с возможным высвобождением кининов и, следовательно, может вместе с гепарином играть роль локального антикоагулянта. Способность триптазы активировать простромелизин (про-ММР-3) и проколлагеназу (про-ММР-1) через ММР-3 предполагает, что триптаза может также принимать участие в воспалении и ремоделировании ткани. Это открытие подразумевает также, что триптаза может играть роль в разрушении сосудов в случае ревматоидного артрита. Кроме того, было показано, что триптаза расщепляет относящийся к гену кальцитонина пептид. Поскольку считают, что этот пептид участвует в нейрогенном воспалении, триптаза могла бы быть фактором регуляции реакции прилива крови в кожном нейрогенном воспалении. См. Caughey, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 4:387-394 (1991).

Было также обнаружено, что респираторно-синцитиальный вирус является причиной респираторных нарушений человека. Этот вирус считают главной причиной инфекции дыхательных путей в грудном возрасте и в детстве, такой как бронхиолит (капиллярный бронхит) и бронхопневмония. Было показано, что некоторые соединения, а именно, ароматические амидинопроизводные, обычно считающиеся ингибиторами трипсина, урокиназы и плазмина, являются эффективными в блокировании клеточного слияния, вызываемого респираторно-синцитиальным вирусом, и значительно снижают выход этого вируса. См. R.R. Tidwell et al. , J. Med. Chem. 26(2):294-298 (1983) и Tidwell et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 26:591 (1984).

Опосредованные мастоцитами воспалительные состояния и инфекции респираторно-синцитиального вируса являются предметом растущего беспокойства о здоровье общества. В частности, астма стала обычным хроническим заболеванием в промышленных странах. Поэтому было бы желательно создание усовершенствованных композиций и способов для эффективного лечения этих заболеваний.

Данное изобретение касается симметричных соединений формулы

[Z-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵]₂Y,

где Z обозначает амино, гуанидино или амидино;

Y обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-14)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-14)алкилен;

X¹ обозначает необязательно замещенный (C_3-6)алкилен, необязательно замещенный окса(C_4-6)алкилен или -X⁶-X⁷-X⁸- (где X⁷ обозначает необязательно замещенный фенилен, необязательно замещенный цикло(C_3-6)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-6)алкилен и X⁶ и X⁸ обозначают необязательно замещенный (C_n6)алкилен и необязательно замещенный (C_n8)алкилен, соответственно, причем сумма n6 + n8 = 1, 2, 3 или 4, при условии, что когда Z - амино, n6 0); X² и X⁴ независимо обозначают -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, C(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)-, -OC(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)O-, -N(R¹)C(O)N(R¹)- или -OC(O)O- (где каждый R¹ независимо обозначает водород, необязательно замещенный (C_1-8)алкил или необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкил; X³ обозначает необязательно замещенный (C_1-8)алкилен, -X⁹-X¹⁰- или -X¹⁰-X⁹ (где X⁹ обозначает необязательно замещенный (C_n9)алкилен, где n9 = 0, 1 или 2, и X¹⁰ обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-8)алкилен, при условии, что ковалентные связи не присутствуют между гетероатомами, содержащимися в X¹⁰, и гетероатомами, содержащимися в X² или X⁴); и X⁵ обозначает необязательно замещенный (C_n5)алкилен, где n5 = 0, 1 или 2; и их фармацевтически приемлемых солей и пролекарств.

Данное изобретение касается несимметричных соединений формулы

R²-Y-R³,

где R² и R³ обозначают независимо Z-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵, где

Z обозначает амино, гуанидино или амидино;

Y обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-14)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-14)алкилен;

X¹ обозначает необязательно замещенный (C_3-6)алкилен, необязательно замещенный окса(C_4-6)алкилен или -X⁶-X⁷-X⁸- (где X⁷ обозначает необязательно замещенный фенилен, необязательно замещенный цикло(C_3-6)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-6)алкилен и X⁶ и X⁸ обозначают необязательно замещенный (C_n6)алкилен и необязательно замещенный (C_n8)алкилен, соответственно, причем n6 + n8 = 1, 2, 3 или 4, при условии, что когда Z обозначает амино, n6 0), X² и X⁴, независимо, обозначают -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, C(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)-, -OC(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)O-, -N(R¹)C(O)N(R¹)- или -OC(O)O- (где каждый R¹, независимо, обозначает водород, необязательно замещенный (C_1-8)алкил или необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкил; X³ обозначает необязательно замещенный (C_1-8)алкилен, -X⁹-X¹⁰- или -X¹⁰-X⁹- (где X⁹ обозначает необязательно замещенный (C_n9)алкилен, где n9 = 0, 1 или 2, и X¹⁰ обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-8)алкилен, при условии, что ковалентные связи не присутствуют между гетероатомами, содержащимися в X¹⁰, и гетероатомами, содержащимися в X² или X⁴); и X⁵ обозначает необязательно замещенный (C_n5)алкилен, где n5 = 0, 1 или 2; при условии, что R² и R³ не являются одинаковыми; и их фармацевтически приемлемых солей и пролекарств.

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение по данному изобретению или его фармацевтически приемлемые соль или соли в смеси с одним или несколькими подходящими наполнителями, причем указанные композиции содержат дополнительно -адренергический агонист.

Настоящее изобретение относится к способам лечения иммуноопосредованного воспалительного заболевания дыхательных путей млекопитающего, заключающимся во введении указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по этому изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или солей или фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение, его соль или соли, или композиции, содержащей дополнительно - адренергический агонист.

Настоящее изобретение относится к способу лечения иммуноопосредованных воспалительных кожных состояний, ревматоидного артрита, конъюнктивита или инфекции синцитиального вируса у млекопитающего, заключающемуся во введении указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по этому изобретению или его фармацевтически приемлемых соли или солей или фармацевтической композиции, содержащей указанные соединение, соль или соли.

Фармацевтические композиции по данному изобретению могут быть в различных формах, в том числе в виде пероральных лекарственных форм, ингалируемых форм, а также в виде инъецируемых и инфузируемых растворов. При применении в виде аспирата или аэрозоля соединения по данному изобретению используют в сочетании с фармацевтически приемлемым раствором-носителем или сухим порошком, который может быть превращен в аэрозольную форму. Подобным образом, при применении для перорального введения соединения по данному изобретению используют в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, пригодным для такого перорального введения. При применении для лечения иммуноопосредованных воспалительных кожных состояний соединения по данному изобретению используют в комбинации с нетоксичным фармацевтически приемлемым носителем для местного нанесения. Соединения по данному изобретению можно использовать в комбинации с противовоспалительными средствами или с другими лекарственными средствами против астмы, например, в сочетании с - адренергическими агонистами, противовоспалительными кортикостероидами, антихолинергическими средствами, бронхолитическими средствами, такими как ксантены, и т.п.

Соединения, описанные здесь, применимы для профилактики и лечения иммуноопосредованных воспалительных заболеваний и, в частности, связанных с дыхательными путями, в том числе астмы, и особенно фазы гиперчувствительности, связанной с хронической астмой, и аллергического ринита. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу лечения иммуноопосредованных воспалительных заболеваний, заключающемуся во введении пациенту, имеющему иммуноопосредованное воспалительное заболевание, терапевтически эффективной дозы или количества соединения по данному изобретению. Кроме того, описанные здесь соединения применимы для лечения инфекций синцитиального вируса.

Фиг. 1 - графическое представление Специфической Резистентности Легких (СРЛ) как функции времени (в часах) овцы, стимулированной антигеном, получившей цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4)- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) аэрозольным введением трех доз по 50 мкг, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 2 - диаграмма в виде столбцов, показывающая гиперчувствительность дыхательных путей (измеренную как РС400) овцы, стимулированной антигеном, получившей цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) аэрозольным введением трех доз по 50 мкг, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 3 - графическое представление Специфической Резистентности Легких (СРЛ) как функции времени (в часах) овцы, стимулированной антигеном, получившей цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) посредством перорального введения трех доз по 2 мг, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 4 - диаграмма в виде столбцов, показывающая гиперчувствительность дыхательных путей (измеренную как РС400) овцы, стимулированной антигеном, получившей цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) посредством перорального введения трех доз по 2 мг, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 5 - графическое представление Специфической Резистентности Легких (СРЛ) как функции времени (в часах) овцы, стимулированной антигеном, получившей цис-1,5-циклооктилен-бис-(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (Соединение 2) аэрозольным введением трех доз по 0,1 мг, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 6 - диаграмма в виде столбцов, показывающая гиперчувствительность (измеренную как РС400) овцы, стимулированной антигеном, получившей цис-1,5-циклооктилен-бис-(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (Соединение 2) аэрозольным введением трех доз по 0,1 мг, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 7 - графическое представление Специфической Резистентности Легких (СРЛ) как функции времени (в часах) овцы, стимулированной антигеном, получившей предварительно цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) аэрозольным введением по 0,5 мг в день в течение трех дней с дополнительной дозой 0,5 мг за полчаса перед введением антигена, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Фиг. 8 - диаграмма в виде столбцов, показывающая гиперчувствительность дыхательных путей (измеренную как РС400) овцы, стимулированной антигеном, получившей предварительно цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) аэрозольным введением по 0,5 мг в день в течение трех дней с дополнительной дозой 0,5 мг за полчаса перед введением антигена, по сравнению с овцой, получившей контроль.

Описание предпочтительного варианта

1. Определения

Следующие далее определения представлены для иллюстрации и определения значения и сферы действий различных терминов, используемых здесь для описания изобретения.

"Иммуноопосредованное воспалительное заболевание" включает обычно заболевания, связанные с высвобождением медиатора мастоцитов и восприимчивые к лечению ингибитором триптазы. Примеры таких заболеваний включают в себя заболевания гиперчувствительности немедленного типа, такие как астма, аллергический ринит, крапивница и болезнь Квинке, и экзематозный дерматит (аллергический дерматит) и анафилаксию, а также гиперпролиферативную кожную болезнь, пептические язвы, воспалительное заболевание пищеварительного тракта, глазной и весенний конъюнктивит, ревматоидный артрит, воспалительные кожные состояния и т.п.

"Гиперчувствительность" обозначает фазу замедленного бронхостеноза и повышенной реактивности дыхательных путей, связанных с хронической астмой. Считают, что гиперчувствительность астматической бронхиолярной ткани является результатом хронических воспалительных реакций, которые раздражают и повреждают эпителиальную выстилку стенки дыхательных путей и провоцируют патологическое утолщение лежащей ниже ткани.

Термин "галоген" относится к атомам фтора, брома, хлора и иода.

Термин "гидроксил" относится к группе -OH.

Термин "амино" относится к группе -NH₂.

Термин "окса" в применении здесь относится к двухвалентной кислородной группе -O-.

Термин "тиол" или "меркапто" относится к группе -SH.

Термин "(C_1-8)алкокси" обозначает группу -OR, где R обозначает (C_1-8)алкил, замещенный (C_1-8)алкил, арил, замещенный арил, аралкил или замещенный аралкил, определенные ниже.

"Алкил", как он дан в (C_1-4)алкиле или(C_1-8)алкиле, относится к насыщенному углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, имеющему указанное число атомов углерода. Этот термин иллюстрируется такими группами, как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, изобутил, изопентил, н-пентил, гексил и т.п. "Необязательно замещенный (C_1-8)алкил" относится к алкильному радикалу, определенному выше, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R", независимо, обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто или необязательно замещенная группа, выбранная из (C_1-8)алкила, (C_3-8)циклоалкила, арила, арил(C_1-4)алкила, ацила, (C_1-8)алкокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилокси, (C_1-8)алкилтио, арилтио, цикло(C_3-8)алкилтио, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Циклоалкил", как он дан в цикло(C_3-8)алкиле, относится к насыщенному моноциклическому углеводороду, имеющему указанное число атомов углерода. Этот термин иллюстрируется такими группами, как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и т.п. "Необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкил" относится к циклоалкильному радикалу, определенному выше, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R", независимо, обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто или необязательно замещенная группа, выбранная из (C_1-8)алкила, цикло(C_3-8)алкила, арила, арил(C_1-4)алкила, ацила, (C_1-8)алкилокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилокси, (C_1-8)алкилтио, арилтио, цикло(C_3-8)алкилтио, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Арил" относится к органическому радикалу, производному из ароматического углеводорода, содержащего 6-14 атомов углерода, и включает моноциклические или конденсированные карбоциклические ароматические кольца, такие как фенил, нафтил, антраценил, фенантренил и т.п. "Необязательно замещенный арил" относится к арильному радикалу, описанному выше, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R" независимо, обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто, цикло(C_3-8)алкил, арил, арил(C_1-4)алкил, ацил, (C_1-8)алкилокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилокси, (C_1-8)алкилтио, арилтио, цикло(C_3-8)алкилтио, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Алкилокси", как он дан в (C_1-3)алкилокси или (C_1-8)алкилокси, обозначает группу -OR, где R обозначает необязательно замещенный алкил, определенный выше.

"Арилокси", "циклоалкилокси" и "арил(C_1-4)алкилокси" обозначают группу -OR, где R обозначает необязательно замещенный арил, необязательно замещенный циклоалкил и необязательно замещенный арил(C_1-4)алкил, соответственно, определенные выше.

"Алкилтио" обозначает группу -SR, где R обозначает необязательно замещенный алкил, определенный выше.

"Арилтио", "циклоалкилтио" и "арил(C_1-4)алкилтио" обозначают группу -SR, где R обозначает необязательно замещенный арил, необязательно замещенный циклоалкил или необязательно замещенный арил(C_1-4)алкил, соответственно, определенные выше.

"Ацил" обозначает группу -C(O)R, где R обозначает необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил или необязательно замещенный арил, определенные выше.

"Ацилокси" обозначает группу -OC(O)R, где R обозначает необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил или необязательно замещенный арил, определенные выше.

"Амино(C_1-4)алкил, "амино(C1-4)алкилокси" и "амино(C_1-4)алкенил" относятся к радикалам алкилу, алкилокси или алкенилу, определенным выше, где аминогруппа присоединена к концевому ( -) углероду радикала.

"Алкилен" в данной заявке относится к насыщенному или ненасыщенному двухвалентному радикалу, имеющему указанное число атомов углерода. Этот термин иллюстрируется далее такими группами, как метилен (-CH₂-), этилен (-CH₂CH₂-), триметилен (-CH₂CH₂CH₂-) и т.п. "Необязательно замещенный алкилен" относится к двухвалентному радикалу, определенному выше, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R", независимо, обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто или необязательно замещенная группа, выбранная из (C_1-8)алкила, (C_3-8)циклоалкила, арила, арил(C_1-4)алкила, ацила, (C_1-8)алкилокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Оксаалкилен", как он дан в окса(C_4-6)алкилене, обозначает двухвалентный радикал -R-O-R"-, где R и R", независимо, обозначают алкилен, определенный выше, имеющий указанное число атомов углерода. Этот термин иллюстрируется далее такими группами, как 2-оксатриметилен (-CH₂-O-CH₂-), 2-оксатетраметилен (-CH₂-O-CH₂CH₂-), 3-оксатетраметилен (-CH₂CH₂-O-CH₂-), 3-оксапентаметилен (-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-), 3-оксагексилметилен (-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂CH₂-) и т.п. "Необязательно замещенный оксаалкилен" относится к двухвалентному радикалу, определенному выше, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R", независимо, обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто или необязательно замещенная группа, выбранная из (C_1-8)алкила, цикло(C_1-4)алкила, арила, арил(C_1-4)алкила, ацила, (C_1-8)алкилокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилокси, (C_1-8)алкилтио, арилтио, цикло(C_3-8)алкилтио, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Циклоалкилен", как в цикло(C_3-14)алкилене, в данной заявке относится к циклическому или полициклическому насыщенному или неароматическому ненасыщенному двухвалентному радикалу, имеющему от 3 до указанного числа атомов углерода. Этот термин иллюстрируется далее такими группами, как циклопропилен, циклобутилен, циклопентилен, циклогексилен, циклогексенилен, бициклогексилен, бициклогексенилен, циклооктилен и т.п. "Необязательно замещенный циклоалкилен" относится к двухвалентному радикалу, определенному выше, необязательно замещенному одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R", независимо, обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто или необязательно замещенная группа, выбранная из (C_1-8)алкила, (C_3-8)циклоалкила, арила, арил(C_1-4)алкила, ацила, (C_1-8)алкилокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилокси, (C_1-8)алкилтио, арилтио, цикло(C_3-8)алкилтио, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Гетероциклоалкилен", для целей этой заявки, относится к циклическому или полициклическому насыщенному или неароматическому ненасыщенному двухвалентному радикалу, имеющему от 3 до указанного числа атомов, один или более из которых представляют собой гетероатомы, выбранные из N, O или S. Этот термин иллюстрируется далее такими группами, как 1,5-диоксаоктилен, 4,8-диоксабицикло[3,3,0] октилен и т.п. "Необязательно замещенный гетероциклоалкилен" относится к двухвалентному радикалу, определенному выше, с одной или несколькими функциональными группами, такими как галоген, гидроксил, амино, -NRR" (где R и R" независимо обозначают водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный ацил), меркапто или необязательно замещенная группа, выбранная из (C_1-8)алкила, (C_3-8)циклоалкила, арила, арил(C_1-4)алкила, ацила, (C_1-8)алкилокси, арилокси, цикло(C_3-8)алкилокси, арил(C_1-4)алкилокси, (C_1-8)алкилтио, арилтио, цикло(C_3-8)алкилтио, арил(C_1-4)алкилтио, ацилокси и т.п.

"Фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства исходного соединения и которые не являются биологически или иным образом нежелательными.

Термин "пролекарство" относится к соединению, которое при введении подвергается химическому превращению посредством метаболических процессов in vivo.

Термин "необязательно" относится к событию или обстоятельству, которое может иметь место или может не иметь места, и описание включает в себя случаи, когда такое событие или обстоятельство имеет место и когда не имеет места. Например, фраза "необязательно замещенный (C_1-8)алкил" относится к алкильной группе, которая может содержать дальнейшие замещения или может не содержать дальнейших замещений. Оба обстоятельства входят в сферу действия данного изобретения.

"Фармацевтически или терапевтически приемлемый носитель" относится к среде носителя, которая не препятствует эффективности биологической активности активных ингредиентов и которая нетоксична для хозяина или пациента.

"Стереоизомер" относится к химическому соединению, имеющему одинаковую молекулярную массу, химический состав и строение с другим соединением, но атомы этого соединения сгруппированы по-другому. То есть, определенные идентичные химические части молекул находятся в различных ориентациях в пространстве и, следовательно, в чистом виде способны вращать плоскость поляризованного света. Однако, некоторые чистые стереоизомеры могут иметь такое слабое оптическое вращение, что оно не может быть зарегистрировано существующими приборами. Соединения по данному изобретению могут иметь один или несколько асимметричных атомов углерода и, следовательно, содержать различные стереоизомеры. Все стереоизомеры входят в объем настоящего изобретения.

Термины "лечение" или "терапия" относятся к введению соединения по данному изобретению in vitro или in vivo и включают:

(i) подавление симптомов заболевания; и/или

(ii) ослабление или подавление длительных эффектов заболевания.

Соединения этого по данному изобретению названы в соответствии с правилами принятой номенклатуры, в основном согласующимися с "Chemical Abstracts". Например, соединение, в котором n5 равно 0, Z-X¹- представляет 4-гуанидинобензил, X² представляет -NHC(O)-, X³ представляет 1,4-пиперазинилен, X⁴ представляет -C(O)O- и Y представляет цис-1,5-циклооктилен, названо как цис-1,5-циклооктиленбис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] ; соединение, в котором n5 = 1, Z-X¹- представляет транс-4-аминометилциклогексилметил, X² представляет -NHC(O)-, X³ представляет 1,4-пиперазинилен, X⁴ представляет -C(O)O- и Y представляет транс-1,4-циклогексилен, названо как транс-1,4-циклогексилендиметиленбис[4-(транс-4-амино- метилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] ; соединение, в котором n5 = 0, Z-X¹- представляет 4-(2-аминоэтил)фенил, X² представляет -C(O)-, X³ представляет 1,4-пиперазинилен, X⁴ представляет -C(O)O- и Y представляет цис-1,5-циклооктилен, названо как цис-1,5-циклооктиленбис{ 4-[4-(2-амино-этил)бензоил] -1- пиперазинкарбоксилат}; и соединение, в котором n5 = 0, Z-X¹-, представляет транс-4-аминометилциклогексил, X² представляет -NHC(O)O-, X³ представляет этилен, X⁴ представляет М(CH₃)C(O)O- и Y представляет цис-1,5-циклооктилен, названо как цис-1,5-циклооктиленбис{N-2-(транс-4- аминометилциклогексиламиноформилокси)этил-N-метиламинокарбоксилат.

II. Соединения

Настоящее изобретение касается симметричных соединений формулы

[Z-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵]₂Y,

где Z обозначает амино, гуанидино или амидино;

Y обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-14)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-14)алкилен;

X¹ обозначает необязательно замещенный (C_3-6)алкилен, необязательно замещенный окса(C_4-6)алкилен или -X⁶-X⁷-X⁸- (где X⁷ обозначает необязательно замещенный фенилен, необязательно замещенный цикло(C_3-6)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-6)алкилен и X⁶ и X⁸ обозначают необязательно замещенный (C_n6)алкилен и необязательно замещенный (C_n8)алкилен, соответственно, причем n6 + n8 = 1, 2, 3 или 4, при условии, что когда Z обозначает амино, n6 0); X² и X⁴, независимо, обозначают -C(O)-, - C(O)O-, -OC(O)-, C(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)-, -OC(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)O-, -N(R¹)C(O)N(R¹)- или -OC(O)O- (где каждый R¹, независимо, обозначает водород, необязательно замещенный (C_1-8)алкил или необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкил; X³ обозначает необязательно замещенный (C_1-8)алкилен, -X⁹-X¹⁰- или -X¹⁰-X⁹- (где X⁹ обозначает необязательно замещенный (C_n9)алкилен, где n9 = 0, 1 или 2, и X¹⁰ обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-8)алкилен, при условии, что ковалентные связи не присутствуют между гетероатомами, содержащимися в X¹⁰, и гетероатомами, содержащимися в X² или X⁴); и X⁵ обозначает необязательно замещенный (C_n5)алкилен, где n5 = 0, 1 или 2; и их фармацевтически приемлемых солей.

Хотя самое широкое определение этого изобретения изложено в кратком изложении сущности изобретения, некоторые соединения изобретения являются предпочтительными. Например, в целом предпочтительны соединения, в которых Z обозначает амино, n6 = 1 или 2, n8 = 1 и X⁶ обозначает 1,4-фенилен, 1,4-циклогексилен, 1,4-бицикло[2,2,2]октилен, 1,4-бицикло[2,2,1]гептилен, 1,3-фенилен, 1,3-циклогексилен, 1,3-бицикло(2,2,2] октилен, 1,3-бицикло[2,2,1] гептилен или Z обозначает гуанидино или амидино, n6 = 0, n8 = 1 и X⁶ обозначает 1,4-фенилен или 1,3-фенилен; X² обозначает -C(O)-, -C(O)NH- или -NHC(O)O-; X³ обозначает 1,4-пиперазинилен, 1,4-пиперидилен, 1,4-пергидро-7H-1,4-диазепинилен или -X⁹-X¹⁰- (где X⁹ обозначает метилен и X¹⁰ обозначает 1,4-пиперидилен) и X⁴ обозначает -C(O)- или -C(O)O-; или X³ обозначает (C_1-4)алкилен и X⁴ обозначает -N(R¹)C(O)O- (где R¹ обозначает водород или метил); и Y обозначает циклооктилен, циклогексилен, циклопентилен, цис-декагидронафтилен, транс-декагидронафтилен, пергидрофенантрен, бицикло[2,2,1] гептилен, бицикло[2,2,2]октилен, бицикло[3,3,1]нонилен, диоксабицикло[3,3,0] октилен или тетрацикло[3,3,1,1^3,7]децилен.

Более предпочтительны соединения, в которых Z обозначает амино, каждое из n6 и n8 равно 1 и X¹ обозначает транс-1,4-циклогексилен или Z обозначает гуанидино или амидино, n6 = 0, n8 = 1 и X¹ обозначает 1,4-фенилен; X² обозначает -C(O)- или -NHC(O)-; X³ обозначает 1,4-пиперазинилен; X⁴ обозначает -C(O)O-; и n5 = 0 и Y обозначает цис-1,5-циклооктилен или n5 = 2 и Y обозначает транс-циклогексилен.

Примеры особенно предпочтительных соединений включают:

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат), альтернативно обозначаемый по номенклатуре IUPAC как 1,1"-транс-1,4-бис(4-циклогексилендиметилен-бис[N-(п-гуанидилбензил) глицинамид)-(N) -()- карбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат), альтернативно обозначаемый по номенклатуре IUPAC как 1,1"-цис-1,5-циклооктилен-бис([N-4-(п-гуанидилбензил)глицинамид)-(N) -()- карбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис-[4-(гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат];

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4- аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]; и

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1- пиперазинкарбоксилат].

Обычно соединения по этому изобретению синтезируют при помощи стандартных способов и реагентов. Следует отметить, что связи между различными группами, X¹, X², X³, X⁴ и X⁵, содержат атомы углерода, соединенные с азотом амида или карбамата, кислородом карбамата или мочевины или углеродом карбонила. Специалистам в данной области понятно, что способы и реагенты для образования этих связей хорошо известны и легко доступны. См., например, March, Advanced Organic Chemistry, 4th Ed. (Wiley 1992), Larock, Comprehensive Organic Transformations (VCH 1989); и Furniss et al., Vogel"s Textbook of Practical Organic Chemistry 5th ed. (Longman 1989), включенные здесь в качестве ссылки. Также должно быть понятно, что для любой присутствующей функциональной группы может требоваться защита и удаление защитной группы в различные моменты синтеза соединений по этому изобретению. Специалистам в данной области также ясно, что подобные способы хорошо известны (см., например, Green and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry (Wiley 1991).

Различные группы X¹, X², X³, X⁴ и X⁵, которые содержатся в соединениях по этому изобретению, могут быть введены по отдельности или в виде более длинных их сочетаний. Например, соединения по изобретению, где X³ представляет собой метилен и X⁴ представляет собой -NHC(O)O-, могут быть получены взаимодействием подходящего циклоалкилендиола (например, цис-1,5-циклооктандиола, транс-1,4-циклогексилендиметанола и т.д.) с избытком подходящего изоцианатоацетата с образованием формилоксисвязи между X⁴ и X⁵ или Y, когда n5 = 0, и гидролизом с образованием соответствующей дикарбоновой кислоты с последующим взаимодействием дикарбоновой кислоты с подходящим защищенным амином (например, 4-трет-бутоксикарбониламинобензиламином и т.д.) в присутствии подходящего связующего агента.

Альтернативно, подходящий циклоалкилендиол преобразуют обработкой фосгеном в соответствующий бис-хлорформиат, который взаимодействует с подходящим монозащищенным диамином с образованием формилоксисвязи между X³ и X⁵ или Y, когда n5 = 0, с последующим удалением защитной группы с образованием соответствующего промежуточного продукта с двумя реакционноспособными аминогруппами и последующим взаимодействием незащищенного промежуточного продукта с подходящим защищенным изоцианатом (например, 4-трет-бутоксикарбониламинофенилметилизоцианатом и т.д.), удалением защитной группы и проведением любой необходимой последней стадии реакции (например, преобразования аминофенильной группы в гуанидинофенил). Соединения по этому изобретению, где X² представляет -C(O)-, могут быть получены по вышеописанному способу, но путем взаимодействия незащищенного промежуточного продукта с подходящей карбоновой кислотой (например, 4-аминобензойной кислотой, 4-аминометилбензойной кислотой и т. д. ). Соединения по данному изобретению, где Z замещен гуанидино, могут быть получены из соответствующего бис(амина) реакцией с аминоцианамидом. Соединения по этому изобретению, где Z обозначает амидино, могут быть получены из соответствующего бис(нитрила) путем обработки хлористым водородом и этанолом с последующим воздействием аммиаком. Реакционные стадии, описанные в этом и предшествующем параграфах, могут быть осуществлены способами, известными среднему специалисту в этой области.

Настоящее изобретение касается несимметричных соединений формулы

R²-X-R³,

где R² и R³, независимо, обозначают Z-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-, где

Z обозначает амино, гуанидино или амидино;

Y обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-14)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-14)алкилен;

X¹ обозначает необязательно замещенный (C_3-6)алкилен, необязательно замещенный окса(C_4-6)алкилен или -X⁶-X⁷-X⁸- (где X⁷ обозначает необязательно замещенный фенилен, необязательно замещенный цикло(C_3-6)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-6)алкилен и X⁶ и X⁸ обозначают необязательно замещенный (C_n6)алкилен и необязательно замещенный (C_n8)алкилен, соответственно, причем n6 + n8 = 1, 2, 3 или 4, при условии, что, когда Z обозначает амино, n6 0); X² и X⁴, независимо, обозначают -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)-, -OC(O)N(R¹)-, -N(R¹)C(O)O-, -N(R¹)C(O)N(R¹)- или -OC(O)O- (где каждый R¹, независимо, обозначает водород, необязательно замещенный (C_1-8)алкил или необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкил; X³ обозначает необязательно замещенный (C_1-8)алкилен, -X⁹-X¹⁰- или X¹⁰-X⁹ (где X⁹ обозначает необязательно замещенный (C_n9)алкилен, где n9 = 0, 1 или 2, и X¹⁰ обозначает необязательно замещенный цикло(C_3-8)алкилен или необязательно замещенный гетероцикло(C_3-8)алкилен, при условии, что ковалентные связи не присутствуют между гетероатомами, содержащимися в X¹⁰, и гетероатомами, содержащимися в X² или X⁴); и X⁵ обозначает необязательно замещенный (C_n5)алкилен, где n5 = 0, 1 или 2; при условии, что R² и R³ не являются одинаковыми, и их фармацевтически приемлемых солей.

Несимметричные соединения по этому изобретению могут быть получены по способу, аналогичному описанному выше для получения симметричных соединений по изобретению, но с введением различных групп X¹, X², X³, X⁴ и X⁵ независимо. Например, соединения по изобретению, где -X⁴-X⁵- R² и R³ одинаковы, а Z-X¹-X²-X³- R² и R³ различны, могут быть получены преобразованием подходящего циклоалкилендиола в соответствующий бис-хлорформиат, взаимодействием бис-хлорформиата с одним молярным эквивалентом подходящего монозащищенного диамина с образованием монохлорформиата, взаимодействием монохлорформиата с подходящим монозащищенным диамином с образованием соединения формулы P-X⁴-X⁵-Y-X⁵-X⁴-P", где P и P" представляют химически различные защитные группы (например, трет-бутоксикарбонил и бензил), ортогональным удалением одной или другой защитной группы с проведением далее процесса, как описано выше для получения симметричных соединений изобретения. Подходящие защитные группы и способы избирательного удаления защитных групп известны среднему специалисту в данной области. Специалистам в этой области понятно, что аналогичные способы можно применять для получения других несимметричных соединений по данному изобретению, в которых Z, X¹, X², X³, X⁴ и X⁵ R² и R³ независимо разнятся.

В некоторых случаях X³ будет выбран из группы, включающей гетероциклоалкилен и замещенный гетероциклоалкилен, например пиперазин, гомопиперазин и гидроксипиперидин. Эти группы могут добавляться индивидуально, аналогично описанным выше методикам, или образовываться in situ из имеющих подходящие функциональные группы алкиленов при помощи общепринятых известных способов синтеза, таких как описанные в March, Larock или Furniss, supra.

Специалистам в данной области также понятно, что связующая группа -X¹-X²-X³-X⁴- и ее различные подгруппы могут быть получены согласно способам, хорошо известным в этой области, а также аналогично представленным здесь примерам. Также будет понятно, что аминокислоты обеспечивают удобные строительные элементы для создания различных функциональных групп, которые содержат связующую группу -X¹-X²-X³-X⁴-. Используемыми здесь аминокислотами являются двадцать природных L-аминокислот и их D-энантиомеры, а также их производные. Производные аминокислот включают такие соединения, как норвалин, саркозин, гидроксипролин, N-метил-L-лейцин, аминоизомасляная кислота, статин, - карбоксиглутаминовая кислота, серин-O-фосфат, тирозин-O-фосфат, тирозин-O-сульфат, пироглутаминовая кислота и 4-(E)-бутенил-(R)-метил-N-метил-L-треонин. Другие производные аминокислот включают природные L-аминокислоты и неприродные D-аминокислоты, в которых функциональная группа боковой цепи превращена в производное или защищена обычными защитными группами, например трет-бутоксикарбонилом (БОК). Многочисленные дополнительные не встречающиеся в природе аминокислоты хорошо известны и доступны из коммерческих источников, например, Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI или Sigma Chemical Co. , St. Louis, MO. Эти продукты включают - аланин и гомологи цепи высшего алкила, 1-амино-1-циклопропанкарбоновую кислоту и высшие гомологи алициклического кольца, 2-амино-2-норборненкарбоновую кислоту и изонипекотиновую кислоту. Методы и способы, применяемые для синтеза, очистки и характеристики таких соединений, хорошо известны в этой области и описаны, например, в Synthetic Peptides: A Practical Approach, Atherton et al., Eds. (IRL Press 1989).

Специалистам в этой области понятно, что соединения по данному изобретению могут быть получены несколькими различными стратегиями синтеза. Например, взаимодействие N-трет-бутоксикарбонил-4- аминобензилизоцианата или N, N"-бис-трет-бутоксикарбонил-4-гуанидинобензилизоцианата с подходящим монозащищенным диаминоалкиленом или аминоспиртом дает подходящее промежуточное соединение, которое можно использовать для получения соединений по данному изобретению согласно способам, аналогичным описанным выше.

Специалистам в этой области также понятно, что соединения по данному изобретению могут быть получены из других соединений изобретения при помощи хорошо известных химических преобразований.

Специалистам в этой области будет также понятно, что соединения по этому изобретению могут быть превращены в их производные - пролекарства. Подходящие пролекарства могут быть представлены формулой (T-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵)₂Y, где каждый из X¹, X², X³, X⁴ и X⁵ имеет указанные в кратком изложении сущности изобретения значения, а T обозначает -NHR⁴, -C(NHR⁴)(NR⁴) или -NHC(NHR⁴)(NHR⁴), где R⁴ обозначает -C(O)OCH(R⁵)OC(O)R⁶ и R⁵ и R⁶ независимо обозначают (C_1-10)алкил или цикло(C_3-10)алкил. Подобным образом, подходящие пролекарства представлены формулой R⁷-Y-R⁸, где R⁷ и R⁸, независимо, обозначают T-X²-X²-X³-X⁴-X⁵-, где T, X¹, X², X³, X⁴ и X⁵ имеют указанные выше значения, при условии, что R⁷ и R⁸ не являются одинаковыми. Пролекарства этих соединений могут быть получены способами, известными средним специалистам в этой области (См. Saulnier et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 4: 1985 (1994)). Например, подходящие пролекарства могут быть получены реакцией не являющегося производным соединения по данному изобретению с подходящим карбамоилирующим агентом (например, 1,1-ацилоксикарбонохлоридатом,

паранитрофенилкарбонатом и т.п.).

Соединения по этому изобретению могут, в зависимости от природы их функциональных групп, образовывать соли с различными неорганическими и органическими кислотами и основаниями. Типичные неорганические кислоты включают, например, хлороводородную кислоту, бромоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Типичные органические кислоты включают, например, уксусную кислоту, щавелевую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, п-толуолсульфокислоту, салициловую кислоту и т.п.

Соли могут быть образованы из остатка карбоновой кислоты путем обработки щелочными металлами или основаниями щелочных металлов, такими как гидроксиды щелочных металлов или алкоксиды щелочных металлов, или щелочноземельными металлами или основаниями щелочноземельных металлов, такими как гидроксиды щелочноземельных металлов или алкоксиды щелочноземельных металлов. Кроме того, соли могут быть образованы из карбоновой кислоты и органического основания, такого как триметиламин, диэтиламин, этаноламин, пиперидин, изопропиламин, холин, кофеин и т.п.

Соли могут быть получены обычными способами, например, взаимодействием продукта в виде свободной кислоты или основания продукта с одним или несколькими эквивалентами подходящего основания или кислоты в растворителе или среде, в которых эта соль нерастворима, или в таком растворителе, как вода, которую затем удаляют в вакууме или лиофилизацией, или обменом катионов существующей соли на другой катион на пригодной для этого ионообменной смоле.

III. Испытание in vitro и in vivo

Методы скрининга in vitro потенциальных ингибиторов в отношении их способности ингибировать триптазу известны в этой области. См., например, Sturzebecher et al. (1992) Biol. Chem. Hoppe-Seyler 373:1025-1030. Обычно в этих тестах измеряют индуцированный триптазой гидролиз хромогенных веществ на основе пептидов. Детали приводимой в качестве примера процедуры описаны ниже.

Кроме того, активность соединений по данному изобретению можно оценить in vivo в одной из многочисленных моделей астмы животных. См. Larson, "Experimental models of Reversible Airway Obstruction", в The Lung: Scientific Foundations, Crystal, West et al., Raven press. New York, 1991; Warner et al. (1990) Am. Rev. Respir. Dis. 141:253-257. Идеальной моделью животного была бы копия основных клинических и физиологических признаков астмы человека, включающих: гиперчувствительность дыхательных путей к химическим медиаторам и физическим стимулам; обратимость обструкции дыхательных путей лекарственными средствами, применимыми при астме человека (-адренергическими средствами, метилксантенами, кортикостероидами и т.п.); воспаление дыхательных путей с инфильтрацией активированными лейкоцитами; хронические воспалительные дегенеративные изменения, такие как утолщение базальной мембраны, гипертрофия гладких мышц и повреждения эпителия. Виды, используемые в качестве моделей животных, включают в себя мышей, крыс, морских свинок, кроликов, собак и овец. Все они имеют некоторые недостатки и правильный выбор животного-модели зависит от вопроса, на который должен быть получен ответ.

Первоначальную астматическую реакцию можно оценивать на морских свинках и собаках и, в частности, на гибридном штамме пород собак basenji-борзой, который развивает неспецифическую гиперчувствительность дыхательных путей к многочисленным неаллергенным веществам, таким как метахолин и лимонная кислота. Некоторые выбранные овцы обнаруживают двойной ответ после введения антигена с белками Ascaris. В животных с двойной реакцией исходная астматическая аллергическая реакция немедленного типа (ИАР) сопровождается астматической реакцией замедленного типа (поздней астматической реакцией (ПАР)), наступающей через 6-8 часов после воздействия. Гиперчувствительность к холинергическому агонисту карбахолу увеличивается при 24 часах после введения антигена в животных, которые проявляют ПАР.

Аллергическую модель овцы (см. ниже) использовали для оценки потенциальных противоастматических эффектов соединений по данному изобретению. Введение композиций, содержащих соединения по данному изобретению, овце, проявляющей аллергию, как в виде пероральной готовой формы, так и в виде аспирата или аэрозоля перед введением специфических аллергенов или после их введения показывает, что такие композиции ослабляют или устраняют позднюю астматическую реакцию (ПАР) и вытекающую из нее гиперчувствительность.

Соединения по данному изобретению применимы также для лечения других иммуноопосредованных воспалительных нарушений, в которых триптазная активность способствует развитию патологического состояния. Такие заболевания включают в себя воспалительные заболевания, связанные с мастоцитами, такие как ревматоидный артрит, конъюнктивит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, подагрический артрит и другие артритные состояния, воспалительное заболевание пищеварительного тракта, пептические язвы и различные кожные нарушения. Далее, соединения по данному изобретению можно использовать для лечения инфекций респираторно-синцитиального вируса.

Эффективность соединений по данному изобретению для лечения огромного большинства иммуноопосредованных воспалительных нарушений можно оценивать способами in vitro или in vivo. Так, противовоспалительная эффективность соединений по данному изобретению может быть продемонстрирована тестами, хорошо известными в этой области, например, способ Обращенной Пассивной Реакции Артуса (RPAR)-PAW (см., например, Gandy et al. (1992) U.S. Patent N 5126352). Тесты для определения терапевтического индекса соединений в лечении различных кожных состояний, таких как гиперпролиферативное кожное заболевание, хорошо известны в этой области, например ушной мышиный тест с арахидоновой кислотой. Соединения по данному изобретению можно оценивать по их противоязвенной активности в соответствии с процедурами, описанными в Chiu et al. (1984) Archives Internationales de Therapie 270:128-140.

Эффективность соединений по данному изобретению в блокировании клеточного слияния, вызываемого инфекциями респираторно-синцитиального вируса, можно оценивать при помощи способов, изложенных в Tidwell et al., J. Med. Chem. 26;294-298 (1983).

IV. Введение in vivo

Согласно этому изобретению терапевтически или фармацевтически эффективное количество соединения по изобретению вводят больному, страдающему от иммуноопосредованного воспалительного нарушения. Согласно одному варианту, композиции по данному изобретению применимы для предотвращения или ослабления астмы. В применении композиций по данному изобретению в лечении астмы соединения можно вводить профилактически перед воздействием аллергена или другого преципитирующего фактора или после воздействия. Соединения по данному изобретению применимы, в частности для снижения интенсивности симптомов деструкции тканей в поздней фазе, наблюдаемой как при сезонном рините, так и при круглогодичном рините. Другой аспект данного изобретения касается предотвращения и лечения других иммуноопосредованных воспалительных заболеваний, связанных с мастоцитами, таких как крапивница и болезнь Квинке, и экзематозный дерматит (аллергический дерматит), и анафилаксия, а также гиперпролиферативное заболевание кожи, пептические язвы и т.п. Еще по одному варианту соединения по данному изобретению используют для лечения инфекций синцитиального вируса, в частности, инфекций респираторно-синцитиального вируса.

Композиции, содержащие эти соединения, можно вводить для терапевтического и/или профилактического лечения. При терапевтическом применении композиции вводят больному, уже страдающему от заболевания, описанного выше, в количестве, достаточном для излечивания или, по меньшей мере, частичного купирования симптомов заболевания и его осложнений. Количество, достаточное для выполнения этого, определяется как "терапевтически эффективное количество или терапевтически эффективная доза". Количества, эффективные для такого применения, будут зависеть от тяжести и хода заболевания, предшествующей терапии, состояния здоровья больного и ответной реакции на лекарственные средства, а также от оценки врача.

При профилактических применениях композиции, содержащие соединения по этому изобретению, вводят больному, восприимчивому к конкретному заболеванию или иным образом подверженному опасности развития этого заболевания, в количестве, достаточном для предотвращения или ослабления наступления симптомов заболевания. Такое количество определяется как "профилактически эффективное количество или профилактически эффективная доза". Композиции можно вводить перорально или посредством ингаляции. При этом применении точные количества также зависят от состояния здоровья больного, веса и т.п.

Как только наступает улучшение состояния больного, вводят поддерживающую дозу, если это необходимо. Затем доза или частота введения или и то, и другое могут быть уменьшены, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором сохраняется улучшенное состояние. При смягчении симптомов до желаемого уровня лечение может быть прекращено. Однако больные могут нуждаться в периодическом лечении на долгосрочной основе при любом рецидиве симптомов заболевания.

В общем, подходящей эффективной дозой соединений по данному изобретению является доза в пределах 0,05-1000 мг на реципиента в день, предпочтительно в пределах 0,1-100 мг в день. Желаемую дозу предоставляют в виде одной, двух, трех, четырех или более субдоз, вводимых при подходящих интервалах в течение дня. Эти субдозы можно вводить в виде стандартных доз, например, содержащих 0,01-100 мг, предпочтительно 0,01-100 мг активного ингредиента на форму стандартной дозы.

Композиция, применяемая при этом лечении, может быть в виде различных форм. Они включают, например, твердые, полутвердые и жидкие лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли, порошки, жидкие растворы или суспензии, липосомы, растворы для инъекций или вливаний. Также могут применяться ингалируемые препараты, такие как аэрозоли. Предпочтительными лекарственными готовыми формами являются формы, предназначенные для перорального, интраназального, локального и парентерального введения, но следует учесть, что предпочтительная форма будет зависеть от конкретного терапевтического применения. Способы приготовления и получения препаратов терапевтических композиций, содержащих соединения по этому изобретению, хорошо известны в этой области и описаны, например, в Remington"s Pharmaceutical Sciences и The Merck Index 11^th Ed., (Merck and Co. 1989).

Хотя можно вводить только активный ингредиент по этому изобретению, предпочтительно использовать его как часть фармацевтической композиции. Готовые лекарственные формы по данному изобретению содержат, по меньшей мере, одно описанное в нем соединение в терапевтически или фармацевтически эффективной дозе вместе с фармакологически приемлемым носителем. Фармацевтические композиции будут, следовательно, содержать соединения по данному изобретению в концентрациях, достаточных для доставки подходящей дозы. Например, если подходящая доза равна 0,05 мг в день, концентрация соединения по этому изобретению в фармацевтической композиции будет 0,5 мг на дозу при применении одной дозы в день. Для композиций в виде аспиратов или аэрозолей концентрация соединений по данному изобретению в композиции будет в общем зависеть от количества дозы. Типичные концентрации соединений по данному изобретению в аспиратных или аэрозольных композициях равны приблизительно 0,01-30 мг/мл. Эти готовые формы могут включать в себя другие клинически ценные соединения, такие как -адренергические средства (например, албутерол, тербуталин, формотерол, фенотерол и преналин) и кортикостероиды (например, беклометасом, триамсинолон, флурисолид и дексаметасон).

Следующие примеры даны только для целей иллюстрации и не предназначены для какого-либо ограничения сферы действия данного изобретения.

Общие материалы и способы

Описанные здесь соединения могут быть получены при помощи способов, которые хорошо известны в данной области и описаны в March, Advanced Organic Chemistry (Wiley 1992); Larock, Comprehensive Organic Transformation (VCH 1989); и Furniss et al., Vogel"s Textbook of Practical Organic Chemistry 5th ed. (Longman 1989). Ясно, что описанные здесь синтезы требуют одну или несколько стадий защиты и удаления защитных групп. Поэтому использование подходящих защитных групп обязательно подразумевается описанными здесь процессами, хотя ясно не иллюстрируется. Такие стадии присоединения и удаления защитных групп могут выполняться стандартными способами, кроме описанных здесь, такими как описанные Green and Wuts, Protective Groups In Organic Synthesis (Wiley 1991).

Выделение и очистку описанных здесь соединений и промежуточных продуктов можно выполнять, если желательно, любым подходящим способом разделения и очистки, таким как, например, фильтрование, экстракция, кристаллизация, колоночная хроматография, тонкослойная хроматография или толстослойная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) или комбинация этих способов. Конкретными иллюстрациями применимых способов разделения и выделения могут быть ссылки на следующие далее примеры. Однако можно, разумеется, использовать другие равноценные способы разделения и выделения.

Спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) регистрировали на спектрофотометре General Electric "QE Plus" (300 МГц). Инфракрасные (ИР) спектры регистрировали на Perkin-Elmer 1600 Fourier Transform IR (FTIR). Аналитическую ВЭЖХ выполняли на Ultrafast Microprotein Analyser, Michrom BioResources, Inc., снабженном колонкой PLRP или C₁₈, 1 150 мм. Препаративную ВЭЖХ выполняли на Gilson LC с применением C₁₈ колонки с обращенной фазой (ОФ) VYDAC 1 25 см или системы Waters Prep LC2000 с использованием C₁₈ ОФ колонки 5 25 см VYDAC. Масс-спектры (МС) получали на Finnigan SSQ 710 с источником ESI посредством прямого вливания или при помощи ВЭЖХ МС (Ultrafast Microprotein Analyzer, колонка C₁₈ 2 150 мм).

Если нет других указаний, все реагенты и оборудование либо готовили в соответствии с опубликованными способами, либо приобретали из коммерческих источников, таких как Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI), Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO) и ICN Chemical Co. (Irvine, CA). Способы, используемые для осуществления описанных ниже синтезов, будут ясны специалистам в данной области как общеизвестные (см., например, March, Larock или Furniss, выше).

Следующие далее неограничивающие примеры предназначены для иллюстрации данного изобретения. Специалистам в этой области будет понятно, что некоторые изменения и модификации могут быть предприняты в объеме этого изобретения.

Пример 1. транс-1,4-Циклогексилендиметилен-бис(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (Соединение 1).

В следующем примере описано получение соединения по этому изобретению, где Z - гуанидино, X¹ - X⁶-X⁷-X⁸, где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен, X² - -NHC(O)-, X³ - метилен, X⁴ - -NHC(O)O- и Y - транс-1,4-циклогексилендиметилен.

транс-1,4-Циклогексилендиметилен-бис(этоксикарбонилметиламинокарбоксилат).

К раствору транс-1,4-циклогександиметанола (482 мг, 3,34 ммоль) в ДМФ (5 мл) добавляли хлорид меди (I) (99 мг, 1,0 ммоль), затем этилизоцианатоацетат (800 мкл, 7,13 ммоль) и полученной суспензии давали перемешиваться при комнатной температуре в течение более двенадцати часов. К смеси добавляли воду (25 мл) и дихлорметан (25 мл) и водную фазу экстрагировали дополнительной порцией дихлорметана (25 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2х25 мл), затем насыщенным водным хлоридом натрия и сушили над безводным сульфатом магния. Фильтрование с последующим концентрированием и высушиванием в вакууме давали транс-1,4-циклогексилендиметилен- бис[(этиловый эфир глицина)-(N) -()- карбоксилат] (1,19 г, 89%) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,42 (т, 2H), 4,15 (кв, 4H), 3,75 (д, 4H), 3,70 (д, 4H), 1,80-1,60 (м, 4H), 1,55-1,40 (м, 2H), 1,15 (т, 6H), 1,00-0,80 (м, 4H).

транс-1,4-Циклогексилендиметилен-бис(этоксикарбонилметиламинокарбоксилат).

К раствору транс-1,4-циклогексилен-бис(N-метоксикарбонилглицина) (1,19 г, 2,96 ммоль) в смеси тетрагидрофуран:метанол 3:1 (25 мл) добавляли водный гидроксид натрия (1,6 М, 6 мл, 9,7 ммоль) и смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение более двенадцати часов. Концентрирование, с последующим подкислением водного раствора до pH 1 добавлением по каплям концентрированной водной соляной кислоты давало белый осадок. Фильтрование и высушивание в вакууме давали транс-1,4-циклогексилен-бис(N-метоксикарбонилглицин) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 12,50 (с, 2H), 7,30 (т, 2H), 3,75 (д, 4H), 3,60 (д, 4H), 1,80-1,60 (м, 4H), 1,55-1,50 (м, 2H), 1,00-0,80 (м, 4H).

транс-1,4-Циклогексилендиметилен-бис(4- аминобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат):

транс-1,4-Циклогексилен-бис(N-метоксикарбонилглицин) (306 мг, 0,88 ммоль), гидрат гидроксибензтриазола (260 мг, 1,92 ммоль) и гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (360 мг, 1,88 ммоль) растворяли в ДМФ (5 мл) при 0^oC и полученный раствор оставляли перемешиваться в течение 1 часа. Затем добавляли 4-аминобензиламин (300 мкл, 2,64 ммоль) к смеси, которой давали затем нагреться до комнатной температуры и перемешивали эту смесь еще в течение двенадцати часов. Удаление ДМФ в вакууме с последующим добавлением воды (25 мл), фильтрованием для удаления нерастворимого осадка и высушиванием в вакууме давало желаемый анилин в виде рыжевато-коричневого твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 8,10 (т, 2H), 7,20 (т, 2H), 6,90 (д, 4H), 6,50 (д, 4H), 5,40 (шир. с, 2H), 4,05 (д, 4H), 3,75 (д, 4H), 3,55 (д, 4H), 1,80-1,60 (м, 4H), 1,50-1,40 (м, 2H), 1,00-0,80 (м, 4H).

транс-1,4-Циклогексилендиметилен-бис(4- гуанидииобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (Соединение 1):

транс-1,4-Циклогексилендиметилен-бис(4- аминобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (87 мг, 0,16 ммоль) и цианамид (0,5 г, 11,9 ммоль) нагревали в неразбавленном виде при 60^oC с получением бесцветного раствора, с последующим добавлением хлороводорода (4 М в диоксане, 160 мкл, 0,64 ммоль). Полученную желтую жидкость перемешивали при 60^oC еще в течение 1,5 часов с последующим охлаждением до комнатной температуры. Добавление этилового эфира (25 мл) давало нерастворимое желтое масло, которое несколько раз промывали дополнительно этиловым эфиром (3х25 мл) для удаления оставшегося цианамида с последующим высушиванием в вакууме. Затем желтое масло обрабатывали водой (5 мл) и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением бис-трифторацетата транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилата (Соединения 1) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,80 (с, 2H), 8,40 (т, 2H), 7,20 (т, 2H), 7,40 (с, 8H), 7,30 (д, 4H), 7,10 (д, 4H), 4,25 (д, 4H), 3,75 (д, 4H), 3,60 (д, 4H), 1,80-1,60 (м, 4H), 1,55-1,40 (м, 2H), 1,00-0,85 (м, 4H).

Electrospray LRMS (электрораспылительная HPMC): Вычислено для C₃₀H₄₂N₁₀O₆: MH⁺: 639,7; MH₂⁺²/2: 320,4. Найдено: MH⁺: 639,1; MH₂⁺²/2: 319,8

Способом, аналогичным описанному в примере 1, с заменой различных исходных продуктов были получены следующие соединения по этому изобретению:

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[3-(1-амидинопиперид-4-ил)пропионил] -1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 5); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₆₄N₈O₆: MH⁺: 731; Найдено: MH⁺: 730,7; цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[3-(4-амидинофенил) пропионоил] -1-пиперазинкарбоксилат} (Соединение 6); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₅₂N₈O₆: MH⁺: 716,9; Найдено: MH⁺: 717,9; и цис-1,5-циклооктилен-бис{ [4-(1-амидинопиперид-4-илацетил)-1- пиперазинкарбоксилат]} (Соединение 7);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,2 (м, 8H), 4,6 (с, 2H), 3,8 (д, 8H), 3,4 (м, 16H), 2,9 (т, 4H), 2,3 (с, 4H), 1,9 (м, 2H), 1,6 (м, 10H), 1,1 (м, 4H).

Пример 2.

цис-1,5-Циклооктилен-бис[(N-(4- гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (Соединение 2).

Следующий пример описывает получение соединения по этому изобретению, в котором Z - гуанидино, X¹ - X⁶-X⁷-X⁸, где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен, X² - -NHC(O)-, X³ - метилен, X⁴ - -NHC(O))- и Y - цис-1,5-циклооктилен.

цис-1,5-Циклооктилен-бис(этоксикарбонилметиламинокарбоксилат):

К раствору цис-1,5-циклооктандиола (514 мг, 3,56 ммоль) в ДМФ (5 мл) добавляли хлорид меди (I) (110 мг, 1,1 ммоль) и затем этилизоцианатоацетат (850 мкл, 7,6 ммоль) и полученную суспензию оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение более двенадцати часов. К смеси добавляли воду (25 мл) и дихлорметан (25 мл) и водную фазу экстрагировали с дополнительной порцией дихлорметана (25 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2х25 мл), затем насыщенным водным хлоридом натрия и сушили над безводным сульфатом магния. Фильтрование с последующим концентрированием и высушиванием в вакууме давало цис-1,5-циклооктилен-бис(этоксикарбонилметиламинокарбоксилат) в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,40 (т, 2H), 4,60 (м, 2H), 4,05 (к, 4H), 3,65 (д, 4H), 1,80-1,40 (м, 12H), 1,15 (т, 6H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис(N-метоксикарбонилглицин):

К раствору цис-1,5-циклооктилен- бис(этоксикарбонилметиламинокарбоксилата) (1,26 г, 3,1 ммоль) в смеси тетрагидрофуран: метанол 3:1 (25 мл) добавляли водный гидроксид натрия (1,6 М, 6 мл, 9,4 ммоль) и смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение более 12 часов. Концентрирование с последующим подкислением водного раствора до pH 1 добавлением по каплям концентрированной водной соляной кислоты и экстракцией водного раствора этилацетатом (3х25 мл) дало неочищенную дикислоту. Высушивание объединенных органических слоев над безводным сульфатом магния с последующим фильтрованием и концентрированием в вакууме давало цис-1,5-циклооктилен-бис(N-метоксикарбонилглицин) в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,25 (т, 2H), 4,60 (м, 2H), 3,60 (д, 4H), 1,80-1,40 (м, 12H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилат) (Соединение 2)

цис-1,5-Циклооктилен-бис(N-метоксикарбонилглицин) (64 мг, 0,19 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) охлаждали до 0^oC и добавляли гидроксибензтриазол (61 мг, 0,45 ммоль) и затем гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (76 мг, 0,40 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 0^oC в течение более 1 часа и затем добавляли к суспензии, содержащей бис-трифторацетат 4-гуанидинофенилметиламина (290 мг, 0,74 ммоль) и триэтиламин (500 мкл, 3,6 ммоль), в диметилформамиде (2 мл), охлажденной до 0^oC. Затем этой смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение более 12 часов и концентрировали ее в вакууме. Остаток растворяли в воде (10 мл) и pH раствора доводили до 11-12 добавлением по каплям насыщенного водного карбоната натрия. Нерастворимый продукт собирали декантацией водного раствора и неочищенный материал опять переводили в водный раствор подкислением до pH 1-2 концентрированной водной соляной кислотой. Затем этот материал очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой, получая бис-трифторацетат цис-1,5-циклооктилен-бис(4-гуанидинобензилкарбамоилметиламинокарбоксилата (Соединения 2) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,80 (с, 2H), 8,40 (т, 2H), 7,40 (с, 8H), 7,25 (д, 4H), 7,20 (т, 2H), 7,10 (д, 4H), 4,60 (м, 2H), 4,25 (д, 4H), 3,60 (д, 4H), 1,80-1,40 (м, 12H).

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₀H₄₂N₁₀O₆: MH⁺: 639,7; MH₂⁺²/2: 320,4

Найдено: MH⁺: 639,1; MH₂: 639,1; MH₂⁺²/2: 319,8

бис-Трифторацетат 4-гуанидинобензиламина:

4-Аминобензиламин (11,0 г, 90 ммоль) в дихлорметане (30 мл) охлаждали до 0^oC и к этому раствору добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (18,65 г, 85 ммоль) и смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение более 12 часов. Последующее фильтрование, промывание раствора в дихлорметане насыщенным водным хлоридом аммония и затем насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивание над безводным сульфатом магния, фильтрование и концентрирование давали 4-амино-N-трет-бутоксикарбонилбензиламин в виде желтого масла. Раствор анилина в метаноле подкисляли хлористым водородом в диоксане (1 эквивалент) и гидрохлоридную соль кристаллизовали добавлением этилового эфира до кислого раствора. Фильтрование и высушивание в вакууме давали гидрохлоридную соль в виде желтого кристаллического твердого продукта, которое преобразовывали в гуанидин без дополнительной очистки.

Гидрохлорид 4-амино-N-трет-бутоксикарбонилбензиламина (25,77 г, 99,6 ммоль) и цианамид (55 г, 1,3 моль) нагревали без разбавления при 65^oC в течение более 1,5 часов. Затем смесь охлаждали при комнатной температуре и добавляли эфир (250 мл). Нерастворимое желтое масло несколько раз промывали с дополнительным этиловым эфиром для удаления следов цианамида и сушили в вакууме, получая гидрохлорид 4-гуанидино-N-трет-бутоксикарбонилбензиламина в виде аморфного желтого продукта, который использовали без дополнительной очистки.

Гидрохлорид 4-гуанидино-N-трет-бутоксикарбонилбензиламина (14,4 г, 48 ммоль) растворяли в трифторуксусной кислоте (35 мл) и полученный желтый раствор перемешивали в течение более 30 минут. Концентрирование и высушивание в вакууме давали бис-трифторацетат 4-гуанидинобензиламина в виде желтого масла.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 10,25 (с, 1H), 8,40 (шир. с, 3H), 7,65 (шир. с, 4H), 7,50 (д, 2H), 7,25 (д, 2H), 4,00 (д, 2H).

Пример 3. цис-1,5-Циклооктилеи-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3).

Следующий пример описывает получение соединения изобретения, в котором Z - гуанидино, X¹ - X⁶-X⁷-X⁸-, где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен, X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - цис-1,5-циклооктилен.

Способ A: бис-Хлорформиат цис-1,5-циклооктандиола:

цис-1,5-Циклооктандиол (3,05 г, 21, ммоль) добавляли к раствору фосгена в толуоле (1,9 М, 28,0 мл, 53 ммоль) и смесь охлаждали до 0^oC в атмосфере азота. Затем добавляли пиридин (3,4 мл, 43 ммоль) при помощи шприца и полученной суспензии давали нагреться до комнатной температуры в течение более двенадцати часов. К реакционной смеси добавляли дихлорметан (50 мл) и воду (50 мл) и органический слой промывали 0,1 н. водной соляной кислотой (2х25 мл). Затем раствор в дихлорметане сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного хлорформиата (3,7 г, выход 65%) в виде желтого кристаллического твердого продукта. Дальнейшая очистка флэш-хроматографией на силикагеле с использованием смеси этиловый эфир: гексан 1:10 дает чистый хлорформиат в виде бесцветного кристаллического твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 5,00-4,85 (м, 2H), 2,20-1,60 (м, 12H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-(трет-бутоксикарбонил)-1- пиперазинкарбоксилат]:

Бис-хлорформиат цис-1,5-циклооктандиола (3,69 г, 13,7 ммоль) и диизопропилэтиламин (7,2 мл, 41 ммоль) помещали в ДМФ (25 мл) с последующим добавлением трет-бутил-1-пиперазинкарбоксилата (5,1 г, 27,4 ммоль) и смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 12 часов. Концентрирование в вакууме до полутвердого остатка и добавление дихлорметана (50 мл) и воды (50 мл) с последующим промыванием органического слоя 0,1 н. водной соляной кислотой (2х25 мл) давали неочищенный раствор желаемого карбамата. Раствор в дихлорметане затем сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(трет-бутоксикарбонил)-1-пиперазинкарбоксилата] в виде аморфного твердого продукта, который использовали без дополнительной очистки.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 4,80 (м, 2H), 3,40 (шир. с, 16H), 2,00-1,40 (м, 12H), 1,40 (с, 18H).

Бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис(1-пиперазинкарбоксилата):

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-(трет-бутоксикарбонил)-1- пиперазинкарбоксилат], полученный описанным выше способом, обрабатывали трифторуксусной кислотой (15 мл) при комнатной температуре в течение 15 минут с последующим концентрированием в вакууме. Полученное масло переносили в воду (30 мл) и подщелачивали избытком твердого карбоната калия. Затем диамин экстрагировали дихлорметаном (3х25 мл) и объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом магния. Фильтрование с последующим концентрированием дало цис-1,5-циклооктилен-бис(1-пиперазинкарбоксилат) в виде бесцветного масла. Затем диамин помещали в метанол (15 мл) и обрабатывали раствором хлористого водорода в диоксане (4,0 М, 5,3 мл) с последующим добавлением этилового эфира (250 мл). Осадок собирали фильтрованием и промывали дополнительно этиловым эфиром с последующим высушиванием в вакууме, получая бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис(1-пиперазинкарбоксилата) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,50 (шир. с, 4H), 4,65 (м, 2H), 3,60 (с, 8H), 3,05 (с, 8H), 1,90-1,40 (м, 12H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((п-трет-бутоксикарбониламинобензил) карбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат]:

Бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис(1-пиперазинкарбоксилата) (1,94 г, 4,5 ммоль) растворяли в дихлорметане (75 мл) с последующим добавлением диизопропилэтиламина (2,0 мл, 11,5 ммоль). Затем добавляли 4-аминофенилметилизоцианато-трет-бутилкарбамат (2,2 г, 9,1 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Раствор в дихлорметане промывали 0,5 н. водной соляной кислотой (2х50 мл) с последующим высушиванием над безводным сульфатом магния и фильтрованием. Концентрирование в вакууме и последующая флэш-хроматография на силикагеле с применением этилового эфира и затем смеси этилацетат:этанол 10:1 в качестве элюента давали чистый цис-1,5-циклооктилен-бис[4-((п-трет-бутоксикарбониламинобензил)карбамоил)- 1-пиперазинкарбоксилат] (3,5 г, выход 90%) в виде бесцветной пены.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,25 (дд AB, 8H), 6,70 (с, 2H), 5,00 (т, 2H), 4,80 (м, 2H), 4,30 (д, 4H), 3,45-3,30 (м, 16H), 2,00-1,40 (м, 12H), 1,50 (с, 18H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((п-аминобензил)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат]:

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((п-трет-бутоксикарбониламинобензил) карбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (3,5 г, 4,0 ммоль) обрабатывали раствором хлористого водорода в диоксане (4,0 М, 20 мл) в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим разбавлением этиловым эфиром (100 мл). Растворитель осторожно декантировали от осадка соли гидрохлорида и сушили в вакууме, получая бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-6ис[4-((п-аминобензил)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилата] в виде гигроскопического рыжевато-коричневого твердого продукта, который использовали без дополнительной очистки.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 10,25 (шир. с, 6H), 7,30 (дд AB, 8H), 7,15 (т, 2H), 4,60 (м, 2H), 4,20 (д, 4H), 3,30 (с, 16H), 1,80-1,40 (м, 12H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((4-гуанидинобензил)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3):

Бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис[4-((п-аминобензил)карбамоил)- 1-пиперазинкарбоксилата] , полученный описанным выше способом, нагревали с избытком цианамида (8,0 г, 190 ммоль) при 60-65^oC в течение 1,5 часов. Полученный желтый раствор охлаждали до комнатной температуры и добавляли этиловый эфир (250 мл). Нерастворимый остаток промывали дополнительным этиловым эфиром (3х100 мл) и неочищенную соль (гидрохлорид) сушили в вакууме. Аморфный материал переносили в воду (40 мл) и полученную суспензию фильтровали с применением фильтровальной бумаги Millipore типа GV (0,22 мкм). Полученный водный фильтрат очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с последующей лиофилизацией, получая бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис[4-((4-гуанидинобензил)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилата] (Соединения 3) в виде твердого продукта нечистого белого цвета.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,70 (с, 2H), 7,40 (с, 8H), 7,20 (дд AB, 8H), 7,15 (т, 2H), 4,65 (м, 2H), 4,20 (д, 4H), 3,30 (с, 16H), 1,80-1,40 (м, 12H).

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₅₂N₁₂O₆: MH⁺: 749,9; MH₂⁺²/2: 375,5

Найдено: MH⁺: 749,9; MH₂⁺²/2: 375,3

Гидрохлорид 4-(трет-бутоксикарбониламино)бензиламина:

4-Аминобензиламин (5,56 г, 45,6 ммоль) помещали в воду (45 мл) и к раствору добавляли лимонную кислоту (9,63 г, 50 ммоль). К описанному выше раствору добавляли по каплям ди-трет-бутилдикарбонат (9,9 г, 45,5 ммоль) в диоксане (20 мл) и смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение более 48 часов. Затем желтую суспензию фильтровали и водный раствор подщелачивали избытком твердого карбоната натрия. Экстракция водного раствора этилацетатом (3х35 мл) с последующим промыванием объединенных органических слоев насыщенным водным раствором хлорида натрия и высушиванием над безводным сульфатом натрия давала неочищенный бензиламин. Фильтрование и концентрирование в вакууме давали белый твердый продукт, который растворяли в метаноле (30 мл) и подкисляли раствором хлористого водорода в диоксане (4 М, 8,4 мл, 33,6 ммоль). Добавление этилового эфира (100 мл) с последующим фильтрованием полученной суспензии и высушиванием в вакууме давало гидрохлорид 4-(трет-бутоксикарбониламино)бензиламина (7,2 г, выход 61%) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,43 (с, 1H), 8,20 (шир. с, 3H), 7,40 (дд AB, 4H), 3,92 (м, 2H), 1,50 (с, 9H).

(трет-Бутоксикарбониламино)бензилизоцианат:

Гидрохлорид 4-(трет-бутоксикарбониламино)бензиламина (3,3 г, 13,1 ммоль) растворяли в дихлорметане (120 мл) при 0^oC с последующим добавлением пиридина (4,3 мл, 53 ммоль) и трифосгена (1,3 г, 4,4 ммоль). Смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение более двенадцати часов и затем добавляли водную соляную кислоту (0,5 н., 100 мл). Органический слой сушили над безводным сульфатом магния и фильтровали с последующим концентрированием, получая (трет-бутоксикарбониламино)бензилизоцианат (2,7 г, выход 84%) в виде коричневого твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,29 (дд AB, 4H), 6,55 (шир. с, 1H), 4,40 (с, 2H), 1,55 (с, 9H).

Способ B: трет-Бутил-1-пиперазинкарбоксилат-4-карбонилхлорид:

трет-Бутил-1-пиперазинкарбоксилат (321 мг, 1,7 ммоль) помещали в дихлорметан (3,0 мл) с последующим добавлением пиридина (210 мкл, 2,6 ммоль) и полученный раствор охлаждали до 0^oC. Затем добавляли трифосген (255 мг, 0,86 ммоль) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение более 30 минут. К смеси добавляли водную соляную кислоту (0,1 н., 5,0 мл) и дихлорметан (5 мл) и органический слой сушили над безводным сульфатом магния. Фильтрование и концентрирование в вакууме давали трет-бутил-1-пиперазин-карбоксилат-4-карбонилхлорид (416 мг, 97%) в виде желтого кристаллического твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 3,70 (м, 2H), 3,60 (м, 2H), 3,50 (м, 4H), 1,50 (с, 9H).

Бис-трифторацетат 1-[(4-гуанидинобензил)карбамоил]пиперазина

Бис-трифторацетат 4-гуанидинобензиламина (380 мг, 0,97 ммоль) переносили в ДМФ (2,0 мл) с последующим добавлением диизопропилэтиламина (700 мкл, 4,0 ммоль). Затем к смеси добавляли трет-бутил-1-пиперазинкарбоксилат-4-карбамоилхлорид (241 мг, 0,97 ммоль) и смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение более одного часа. Полученный раствор концентрировали в вакууме и переводили в воду (5 мл). Фильтрование полученной суспензии с последующим подщелачиванием водного раствора избытком твердого карбоната натрия давало нерастворимое желтое масло, которое отделяли от водной фазы декантацией. Высушивание в вакууме с последующей обработкой трифторуксусной кислотой (5 мл) в течение 15 минут давало неочищенный бис-трифторацетат фенилгуанидина в виде оранжевого масла при концентрировании. Затем эту соль переносили в воду (5 мл) и этот материал очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой и лиофилизацией, получая бис-трифторацетат 1-[(4-гуанидинобензил)карбамоил]пиперазина в виде желтого аморфного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 10,15 (с, 1H), 9,10 (шир. с, 2H), 7,65 (с, 4H), 7,40 (т, 1H), 7,25 (дд AB, 4H), 4,25 (д, 2H), 3,55 (м, 4H), 3,10 (с, 4H).

Electrospray LRMS: Вычислено для C₁₃H₂₀N₆O: MH⁺: 277,4; MH₂⁺²/2: 139,2

Найдено: MH⁺: 277,4; MH₂⁺²/2: 139,3

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((4-гуанидинобензил)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3):

Бис-трифторацетат 1-[(4-гуанидинобензил)карбамоил] пиперазина (138 мг, 0,27 ммоль) переносили в ДМФ (1,5 мл) с последующим добавлением диизопропилэтиламина (75,5 мкл, 0,4 ммоль) и бис-хлорформиата цис-1,5-циклооктандиола (36,0 мг, 0,14 ммоль). Реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение более двенадцати часов с последующим концентрированием в вакууме. Аморфный остаток растворяли в воде (5 мл) и материал очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с последующей лиофилизацией, получая цис-1,5-циклооктилен-бис[4-((4-гуанидинобензил)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3) в виде твердого продукта нечистого белого цвета.

Способ C: Гидрохлорид N-трет-бутил-N"-4-аминобензилмочевины:

4-Аминобензиламин (50,34 г, 0,412 моль) в дихлорметане (200 мл) помещали в однолитровую 3-горлую круглодонную колбу, снабженную механической мешалкой и раствор охлаждали до 0^oC. К этому раствору в течение 30 минут добавляли ди-трет-бутил-дикарбонат (89,9 г, 0,412 моль) в дихлорметане (200 мл) и полученной суспензии давали перемешиваться при 0^oC еще два часа, по истечении которых получали почти гомогенный раствор. Затем раствор в дихлорметане промывали водным гидроксидом натрия (1,0 М, 500 мл) и затем водой (500 мл) и органическую фазу сушили над безводным сульфатом магния. Фильтрование с последующим концентрированием в вакууме давало 4-амино-N-трет-бутилкарбамоилбензиламин в виде желтого масла. Этот анилин растворяли в смеси этиловый эфир:метанол (2:1, 225 мл) и раствор охлаждали до 0^oC. Подкисление хлористым водородом в диоксане (4,0 М, 115 мл, 0,412 моль) с последующим добавлением этилового эфира (200 мл) давало густой бледно-желтый осадок. Фильтрование с последующим дополнительным промыванием этиловым эфиром (500 мл) и высушивание в вакууме давали гидрохлорид N-трет-бутил-N"-4-аминобензилмочевины (100,23 г, выход 94%) в виде бледно-желтого твердого продукта, который использовали без дополнительной очистки.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 10,40-10,20 (шир. с, 3H), 7,40 (т, 1H), 7,30 (с, 4H), 4,10 (д, 2H), 1,40 (с, 9H).

N-трет-Бутил-N-4-гуанидинобензилмочевииа:

Цианамид (100 г, 2,4 моль) помещали в круглодонную колбу на 500 мл и нагревали до 60-65^oC до полного расплавления материала. Затем гидрохлорид N-трет-бутил-N"-4-аминобензилмочевины (25,3 г, 97,8 ммоль) добавляли непосредственно к жидкому цианамиду и полученный желтый раствор перемешивали при 60-65^oC еще в течение 2 часов. Затем к раствору добавляли воду (100 мл) с последующим охлаждением его до комнатной температуры. Водный раствор промывали этиловым эфиром (1 л) с последующей обратной экстракцией органической фазы водой (2х100 мл). Объединенные водные слои опять промывали этиловым эфиром (500 мл) и водный раствор охлаждали в бане со льдом с последующим подщелачиванием водным гидроксидом натрия (10 М, 100 мл). Полученное нерастворимое масло медленно кристаллизовали и собирали фильтрованием. Этот материал промывали водой и сушили в вакууме, получая N-трет-бутил-N-4-гуанидинобензилмочевину (18,3 г, 70,8%) в виде бесцветного кристаллического твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,70 (с, 1H), 7,42 (т, 1H), 7,40 (с, 4H), 7,25 (д, 2H), 7,15 (д, 2H), 4,10 (д, 2H), 1,40 (с, 9H).

трет-Бутил-4-хлоркарбонил-1-пиперазинкарбоксилат:

Трифосген (25 г, 84,2 ммоль) растворяли в дихлорметане (200 мл) и полученный раствор охлаждали до 0^oC. Затем добавляли к раствору трифосгена по каплям раствор трет-бутил-1-пиперазинкарбоксилата (40 г, 214,8 ммоль) и пиридин (35 мл, 432,7 ммоль) в дихлорметане (100 мл) и реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение более 30 минут. Затем эту смесь гасили добавлением соляной кислоты (0,1 н., 200 мл), промывали водную фазу дихлорметаном (50 мл) и сушили объединенные органические слои над безводным сульфатом магния. Фильтрование и концентрирование в вакууме давали трет-бутил-4-хлоркарбонил-1-пиперазинкарбоксилат (45,6 г, 85%) в виде желтого твердого продукта, который можно использовать без дополнительной очистки. Этот продукт можно очистить далее кристаллизацией из смеси этиловый эфир/гексан.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 3,70 (м, 2H), 3,60 (м, 2H), 3,50 (м, 4H), 1,50 (с, 9H).

Трифторацетат трет-бутил-4-гуанидинобензилкарбамоил-1- пиперазинкарбоксилата:

N-трет-бутил-N-4-гуанидинобензилмочевину (41,77 г, 0,158 моль) обрабатывали трифторуксусной кислотой (100 мл) в течение 30 минут при комнатной температуре. Полученную почти бесцветную жидкость концентрировали в вакууме при 45^oC, затем растирали с этиловым эфиром (3х400 мл) и сушили в вакууме до бесцветной пены. К остатку добавляли метанол (200 мл) и затем диизопропилэтиламин (55 мл, 0,32 моль, количество, основанное на определенном избытке присутствующей ТФУ) и раствор охлаждали до 0^oC. трет-Бутил-1-пиперазинкарбоксилат- 4-карбамоилхлорид (39,3 г, 0,158 моль) в дихлорметане (120 мл) добавляли к реакционной смеси с последующим добавлением диизопропилэтиламина (30 мл). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали еще в течение 12 часов. Концентрирование в вакууме до оранжевого масла с последующим добавлением воды (200 мл) давало густой осадок, который собирали фильтрованием. Неочищенную соль трифторацетат гуанидина перекристаллизовывали из смеси ацетонитрил/эфир, получая трифторацетат трет-бутил-4-гуанидинобензилкарбамоил-1-пиперазинкарбоксилата (62,0 г, 80%) в виде бледно-желтого твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 10,15 (с, 1H), 9,10 (шир. с, 2H), 7,65 (с, 4H), 7,40 (т, 1H), 7,25 (дд AB, 4H), 4,25 (д, 2H), 3,55 (м, 4H), 3,10 (с, 4H).

Electrospray LRMS: Вычислено для C₁₃H₂₀N₆O: MH⁺: 277,4; MH₂⁺²/2: 139,2. Найдено: MH⁺: 277,4; MH₂⁺²/2: 139,3.

цис-1,5-Циклооктилен-бис-[4-(4-гуанидинобензиламинокарбонил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 3)

Трифторацетат трет-бутил-4-гуанидинобензилкарбамоил-1- пиперазинкарбоксилата (50 г, 0,102 моль) обрабатывали трифторуксусной кислотой (50 мл) при комнатной температуре в течение 15 минут, получая гомогенный раствор. Всю ТФУ удаляли в вакууме, получая водорастворимый аморфный остаток. Затем этот материал переносили в воду (100 мл) и pH доводили до 7,0-7,5 осторожным добавлением 10 М водного гидроксида натрия. Бис-хлорформиат (13,5 г, 0,05 моль) в ТГФ (75 мл) добавляли к указанному выше водному раствору и смесь перемешивали при комнатной температуре. pH этой смеси наблюдали при помощи обычного лабораторного pH-метра и непрерывно корректировали до диапазона 7,0-8,0 добавлением 10 М водного гидроксида натрия. После стабилизации pH (приблизительно в течение одного часа) реакцию считали завершенной, что определяли аналитической ВЭЖХ с обращенной фазой. Затем к почти гомогенному раствору добавляли этиловый эфир (50 мл) с последующим подщелачиванием двухфазной смеси избытком 10 М водного гидроксида натрия, получая белую суспензию свободного основания арилгуанидина. Эту суспензию затем концентрировали на роторном испарителе для удаления объема ТГФ и состоящий из мелких частиц осадок собирали фильтрованием. Затем твердый продукт с консистенцией пасты промывали один раз водой и сушили в вакууме, получая цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4- гуанидинобензиламинокарбонил)-1-пиперазинкарбоксилат (31 г, 81%) в виде белого твердого продукта (чистота >97%, как определено при помощи ВЭЖХ). Это свободное основание растворяли в водной соляной кислоте и фильтровали для удаления следов нерастворимого остатка и лиофилизировали, получая гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4- гуанидинобензиламинокарбонил)-1-пиперазинкарбоксилата].

¹H-ЯМР (соли гидрохлорида) (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,70 (с, 2H), 7,40 (с, 8H), 7,20 (дд AB, 8H), 7,15 (т, 2H), 4,65 (м, 2H), 4,20 (д, 4H), 3,30 (с, 16H), 1,80-1,40 (м, 12H).

Electrospray LRMS (соли (гидрохлорида)): Вычислено для C₃₆H₅₂N₁₂O₆: MH⁺: 749,9; MH₂⁺²/2: 375,5

Найдено: MH⁺: 749,9; MH₂⁺²/2: 375,3.

Аналогично способу, описанному способе A примера 3, и с заменой различных исходных продуктов были получены следующие соединения по этому изобретению:

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[2-(1-амидинопиперид-4-ил)этилкарбамоил] - 1-пиперазинкарбоксилат} (Соединение 8);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,4 (с, 8H), 6,6 (с, 2H), 4,6 (с, 2H), 3,8 (д, 4H), 3,6 (с, 8H), 3,3 (с, 14H), 3,0 (м, 20H), 1,0 (м, 4H);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4-аминометилцикло-гексилкарбонил)- 1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 9); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₆₂N₆O₆: MH⁺: 647,9. Найдено: MH⁺: 648,1;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилацетил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 10); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₅₀N₁₀O₆: MH⁺: 718,9. Найдено: MH⁺: 717,3;

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[3-(4-гуанидинофенил)пропионил]-1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 11); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₅₄N₁₀O₆: MH⁺: 746,9. Найдено: MH⁺: 745,5; цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4- аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-(пергидро-7H-1,4- диазепин)карбоксилат] (Соединение 12); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₆₈N₈O₆: MH⁺: 734; MH₂⁺²/2: 367,5. Найдено: MH₂⁺²/2: 367,7;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-аминометилбензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 13); Electrospray LRMS: Рассчитано для C₃₆H₅₂N₈O₆: MH⁺: 693,9. Найдено: MH⁺: 693,5;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)бензилкарбамоил] -1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 14);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,34, 7,15 (д, 8H), 4,64 (шир. д, 4H), 4,15 (м, 2H), 3,92 (д, 4H), 3,54 (м, 4H), 3,25 (арр д, 16H), 1,73-1,47 (м, 12H); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₆₅N₈O₆: MH⁺: 721. Найдено: MH⁺: 721;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-аминометилбицикло[2,2,2] окт-1- илметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 15);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 4,18 (м, 2H), 3,40 (м, 4H), 3,21 (д, 16H), 2,8 (д, 4H), 1,75-1,39 (м, 36H);

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)фенилацетил] -1- пиперазинкарбоксилат]} (Соединение 16);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,13, 6,93 (д, 8H), 5,8 (д, 4H), 3,68 (м, 4H), 3,56, 3,39 (д, 16H), 4,0 (м, 2H), 2,69 (т, 4H), 2,69 (т, 4H), 1,82-1,50

(м, 12H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₆₅N₆O₆: MH⁺: 691. Найдено: MH⁺: 691;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)бензоил] -1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 17); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₅₀N₆O₆: MH⁺: 662,8. Найдено: MH⁺: 664;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(1-аминопроп-2-ил)бензоил] -1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 18);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,33 (с, 8H), 4,6 (м, 2H), 3,35-3,06 (м, 18H), 2,97 (м, 4H), 1,73-1,5 (м, 12H), 1,22 (д, 6H), 1,82-1,5 (м, 12H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₅₄N₆O₆: MH⁺: 691. Найдено: MH⁺: 692;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(2-аминоэтил)пиперид-1-ил] -1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 19);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 3,62 (д, 8H), 3,42, 3,19 (с, 16H), 2,97 (т, 4H), 2,82 (т, 4H), 1,77-1,55 (м, 24H), 1,13 (м, 4H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₆₀N₈O₆: MH⁺: 676,9. Найдено: MH⁺: 677;

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[4-(2-аминоэтил)циклогексилацетил]-1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 20);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 3,52 (м, 16H), 2,97 (т, 4H), 2,39 (д, 4H), 1,81-1,5 (м, 34H), 1,32 (м, 6H), 0,99 (м, 2H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₆₄N₆O₆: MH⁺: 703. Найдено: MH⁺: 703;

транс-1,4-циклогексилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксальдегид] (Соединение 21); Electrospray LRMS: Рассчитано для C₃₂H₄₄N₁₂O₄: MH⁺: 688,8. Найдено: MH⁺: 689;

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[4-(2-аминоэтил)циклогексилкарбонил]-1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 22);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 3,56, 3,49 (д, 16H), 2,96 (т, 4H), 1,77 (м, 20H), 1,51 (м, 6H), 1,33 (м, 6H), 1,01 (м, 4H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₆₂N₆O₆: MH⁺: 674,9. Найдено: MH⁺: 675;

Аналогично способу, описанному в способе B примера 3, и с заменой различных исходных продуктов были получены следующие соединения по этому изобретению:

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис{ 4-[4-(аминометил)пиперид-1- илкарбониламинометил]-1-пиперидинкарбоксилат} (Соединение 23);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 8,0 (с, 4H), 6,5 (с, 2H), 4,5 (м, 8H), 3,9 (м, 4H), 3,8 (м, 2H), 2,8 (с, 2H), 2,6 (м, 16H), 1,6 (м, 16H), 1,0 (м, 10H);

цис-1,5-циклооктилен-бис-[4-(4-амидинофенилацетил)-1- пиперазинкарбоксилат) (Соединение 24);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₄₈N₈O₆: MH⁺: 688,8. Найдено: MH⁺: 689,6;

цис-1,5-циклооктилен-бис{4-[4-(аминометил)пиперед-1- илкарбониламино]бутиламинокарбоксилат} (Соединение 25);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 8,1 (с, 6H), 7,0 (с, 2H), 4,6 (с, 2H), 4,2 (м, 12H), 3,9 (д, 4H), 2,9 (м, 8H), 2,6 (м, 8H), 1,6 (м, 20H), 1,3 (с, 6H), 1,0 (м, 4H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₁H₆₄N₈O₆: MH⁺: 652,9. Найдено: MH⁺: 653,7;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[4-(аминометил)пиперед-1- илкарбониламинометил)-1-пиперидинкарбоксилат} (Соединение 26);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 8,1 (с, 6H), 6,5 (с, 2H), 4,6 (с, 4H), 4,0 (м, 24H), 2,9 (д, 4H), 2,6 (м, 12H), 1,6 (м, 20H), 0,9 (м, 14H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₆₄N₈O₆: MH⁺: 705. Найдено: MH⁺: 706,6;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(1-амидинопиперед-4-илметилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 27);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 7,2 (с, 8H), 6,6 (м, 2H), 4,6 (м, 4H), 3,8 (д, 6H), 3,4 (м, 31H), 2,9 (м, 8H), 1,7 (м, 16H), 1,1 (м, 4H);

цис-1,5-циклооктилен-бис-[4-(4-амидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 28);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,4 (с, 4H), 7,8 (д, 4H), 7,6 (д, 4H), 7,4 (м, 2H), 4,8 (м, 2H), 4,4 (м, 4H), 3,4 (м, 40H), 1,8 (м, 10H);

транс-2,6-(4,8-диоксабицикло[3,3,0] окстилен)-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 29);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₄₆N₁₂O₈: MH⁺: 751,8; MH₂⁺²/2: 376,4; Найдено: MH⁺: 751,2; MH₂⁺²/2: 376,4;

транс-2,3-бицикло[2,2,2]окт-5-енилендиметилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 30);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₅₂N₁₂O₆: MH⁺: 773,9; MH₂⁺²/2: 387,5; Найдено: MH⁺: 773,2; MH₂⁺²/2: 387,3;

цис-1,5-тетрацикло[3,3,1,1^3,7] децилендиметилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 31);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₄₀H₅₈N₁₂O₄: MH⁺: 768; MH₂⁺²/2: 384,6; Найдено: MH⁺: 769,4; MH₂⁺²/2: 385,4; и цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4- амидинобензоиламинометил)-1-пиперидинкарбоксилат] (Соединение 44); ¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,43 (с, 2H), 9,16 (с, 2H), 8,77 (т, 1H), 8,00 (д, 2H), 7,86 (д, 2H), 4,61 (шир. с, 1H), 3,91 (шир. д, 2H), 3,14 (шир. с, 2H), 2,69 (шир. с, 2H), 1,79-1,54 (м, 8H), 1,51-1,42 (м, 1H), 0,99 (к, 2H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₅₄N₈O₆: MH⁺: 716,9; MH₂⁺²/2: 358,5. Найдено: MH⁺: 717,5; MH₂⁺²/2: 359,5;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-амидинопиперид-1-илкарбониламинометил)- 1-пиперидинкарбоксилат] (Соединение 45);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 8,8 (д, 4H), 6,57 (с, 1H), 4,61 (с, 1H), 4,06 (д, 2H), 3,9 (д, 2H), 2,84 (шир. с, 2H), 2,73-2,5 (м, 4H), 1,77-1,4 (м, 10H), 0,89 (к, 2H);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₆₆N₁₀O₆: MH⁺: 732,9; MH₂⁺²/2: 366,9. Найдено: MH⁺: 731,6; MH₂⁺²/2: 366,5; и

цис-1,5-тетрацикло[3,3,1,1^3,7] децилендиметилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксальдегид] (Соединение 32);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₄₀H₅₈N₁₂O₆: MH⁺: 801,9. Найдено: MH⁺: 802,1;

1,2-циклогексилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксальдегид] (Соединение 46); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₄₈N₁₂O₄: MH⁺²/2: 345,7. Найдено: MH⁺²/2: 345,3;

1,4-бицикло[2,2,2] октилендиметилен-бис[4-(4- гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 47); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₅₄N₁₂O₆: MH⁺²/2: 388,3. Найдено: MH⁺²/2: 388,3;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинофенилкарбониламинометил)-1- пиперидинкарбоксилат] (Соединение 48); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₅₄N₁₀O₆: MH⁺²/2: 374,5. Найдено: MH⁺²/2: 374,6; и

цис-1,4-циклогексилендиметилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 49); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₅₂N₁₂O₆: MH⁺²/2: 375,4. Найдено: MH⁺²/2: 375,1.

Пример 4. цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((транс-4- аминометилциклогексиленметилен)карбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 4)

Следующий пример описывает получение соединения по этому изобретению, в котором Z - амино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸- (где n6 = 1, X⁷ - транс-1,4-циклогексилен), X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O- и Y - цис-1,5-циклооктилен.

Гидрохлорид транс-4-(аминометил)циклогексанметанола

1,0 М раствор борана в тетрагидрофуране (250 мл, 260 ммоль) добавляли медленно по каплям к суспензии транс-4-(аминометил)циклогексанкарбоновой кислоты (10,0 г, 64,0 ммоль) в тетрагидрофуране (250 мл). Наблюдали выделение газа. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 14 часов. Полученный раствор охлаждали до 0^oC и осторожно обрабатывали по каплям 1 н. хлороводородной кислотой в метаноле (250 мл). Наблюдали выделение газа. Полученную белую суспензию перемешивали в течение 1 часа при 23^oC и затем концентрировали. К остатку добавляли метанол и эту суспензию концентрировали. Эту процедуру повторяли дважды, получая гидрохлорид транс-4-(аминометил)циклогексанметанола (10,6 г, выход 93%) в виде белого твердого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 3,38 (д, 2H), 2,71 (д, 2H), 1,88 (д, 4H), 1,48 (м, 2H), 1,01 (м, 2H)

N-трет-Бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметанол:

Карбонат натрия (1,33 г, 12,4 ммоль) добавляли к раствору гидрохлорида транс-4-(аминометил)циклогексанметанола (1,5 г, 8,3 ммоль) в смеси 1:1 диоксан/вода (40 мл). Ди-трет-бутилдикарбонат (2,0 г, 9,13 ммоль) добавляли к реакционной смеси при 0^oC. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов и затем распределяли между 10% метанолом в дихлорметане и водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. N-трет-бутоксикарбонил-транс-4- (аминометил)циклогексанметанол (1,97 г, выход 98%) получали в виде белого твердого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 4,58 (шир, 1H), 3,44 (д, 2H), 2,95 (т, 2H), 1,81 (м, 4H), 1,54 (м, 2H), 1,44 (с, 9H), 0,92 (т, 4H)

N-трет-Бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметилтозилат:

п-Толуолсульфонилхлорид (3,3 г, 17,0 ммоль) добавляли к раствору N-трет-бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметанола (3,5 г, 14,0 ммоль) в пиридине (20 мл), содержащем молекулярное сито 4 A, и реакционную смесь перемешивали при 23^oC в течение 23,5 часов. Полученную белую суспензию концентрировали и полученный остаток распределяли между дихлорметаном и 0,05 н. соляной кислотой. Органический слой сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный N-трет-бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил) циклогексанметилтозилат (5,73 г) получали в виде желтого твердого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,78 (д, 2H), 7,34 (д, 2H), 4,56 (шир, 1H), 3,82 (д, 2H), 2,94 (т, 2H), 2,48 (с, 3H), 1,74 (д, 4H), 1,64 (м, 2H), 1,48 (с, 9H), 0,91 (т, 4H).

N-трет-Бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметилазид:

Азид натрия (4,7 г, 70,0 ммоль) добавляли к раствору N-трет-Бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметилтозилата (5,73 г, 14,0 ммоль) в ДМФ (50 мл), содержащему молекулярное сито 4 A, и полученную суспензию перемешивали при 23^oC в течение 190 часов с последующим концентрированием. Полученный остаток распределяли между дихлорметаном и водой. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. N-трет-бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметилазид (3,22 г, выход 86%) получали в виде желтого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 3,14 (д, 2H), 2,99 (т, 2H), 1,82 (т, 4H), 1,51 (м, 2H), 1,48 (с, 9H), 0,99 (м, 4H)

Гидрохлорид N-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-циклогексан- бис(метиламина):

Этанол (40 мл) добавляли к N-трет-бутоксикарбонил-транс- 4-(аминометил)циклометилазиду (1,79 г, 6,67 ммоль) и 5% палладию на угле (270 мг, 0,15 мас.%) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 6 часов при 23^oC. Черную суспензию фильтровали и фильтрат концентрировали, получая N-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-циклогексан-бис(метиламин) в виде желтого масла. Неочищенный амин переносили в метанол (2,0 мл) с последующим добавлением хлористого водорода в диоксане (4,0 М, 2,0 мл, 8,0 ммоль) и этилового эфира (25 мл). Полученный осадок собирали фильтрованием, получая гидрохлорид N-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4- циклогексан-бис(метиламина) (1,42 г, выход 76%) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (D₂O): 3,00-2,80 (м, 4H), 1,90-1,70 (м, 4H), 1,70-1,50 (м, 2H), 1,40 (с, 9H), 1,10-0,90 (м, 4H)

Electrospray LRMS: Вычислено для C₁₃H₂₇N₂O₂: MH⁺: 243. Найдено: MH⁺: 243.

N-трет-Бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметилизоцианат

Гидрохлорид N-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-бис(метиламина) (1,45, 5,2 ммоль) переносили в дихлорметан (25 мл) с последующим добавлением пиридина (1,75 мл, 21 ммоль) и смесь охлаждали до 0^oC. Затем к этому раствору добавляли трифосген (617 мл, 2,1 ммоль) и смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры в течение более 2 часов. Органический раствор промывали 0,1 н. водной соляной кислотой (2х25 мл) с последующим высушиванием над безводным сульфатом магния и фильтрованием. Концентрирование дало N-трет-бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил)циклогексанметилизоцианат (1,38, выход 99%) в виде кристаллического твердого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 4,60 (шир. с, 1H), 3,15 (д, 2H), 2,95 (т, 2H), 1,85-1,75 (м, 4H), 1,50-1,40 (м, 2H), 1,45 (с, 9H), 1,05-0,90 (м, 4H)

цис-1,5-Циклооктилен-бис[транс-4-трет- бутоксикарбониламинометилциклогексиленметилен)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат]:

Бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис(1-пиперазинкарбоксилата) (229,7 мг, 0,53 ммоль) и диизопропилэтиламин (200 мкл, 2,3 ммоль) растворяли в ДМФ (4,0 мл) и смесь охлаждали до 0^oC. Затем добавляли N-трет-бутоксикарбонил-транс-4-(аминометил) циклогексанметилизоцианат (285 мг, 1,06 ммоль) и смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение более 12 часов. Концентрирование и добавление дихлорметана (25 мл) к остатку и последующее промывание органического раствора 0,1 н. водной соляной кислотой (2х25 мл) с высушиванием над безводным сульфатом магния давали неочищенный продукт. Фильтрование и концентрирование давали цис-1,5-циклооктилен-бис[4-((транс-4-трет- бутоксикарбониламинометилциклогексиленметилен)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат) (534 мг, выход 56%) в виде бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 4,80 (м, 2H), 4,70 (т, 2H), 4,65 (т, 2H), 3,45 (м, 8H), 3,35 (м, 8H), 3,10 (т, 4H), 2,95 (т, 4H), 1,95-1,50 (м, 24H), 1,45 (с, 18H), 1,00-0,90 (м, 8H).

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((транс-4-аминометилциклогексиленметилен) карбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 4):

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-((транс-4-трет- бутоксикарбониламинометилциклогексиленметилен)карбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат) (324 мг, 0,59 ммоль) обрабатывали трифторуксусной кислотой (5 мл) и смесь концентрировали в вакууме до получения красного масла после 15 минут. Этот неочищенный материал переносили в воду (10 мл) и водную суспензию фильтровали через фильтровальную бумагу Millipore типа GV (0,22 мкм), получая желтый раствор. Очистка препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой и лиофилизация давали бис-гидрохлорид цис-1,5-циклооктилен-бис[4-((транс-4-амино- метилциклогексиленметилен)карбамоил)-1-пиперазинкарбоксилата] (Соединения 4) в виде почти бесцветного твердого продукта.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₃): 8,00 (шир. с, 6H), 6,60 (м, 2H), 4,65 (м, 2H), 3,40 (с, 8H), 3,30 (с, 8H), 2,85 (м, 4H), 2,60 (т, 4H), 1,80-1,30 (м, 24H), 0,90-0,70 (м, 8H).

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₆₄N₈O₆: MH⁺: 706,0; MH₂⁺²/2: 353,5. Найдено: MH⁺: 705,7; MH₂⁺²/2: 353,3.

Аналогично способу, описанному в примере 4 и с заменой различных исходных продуктов были получены следующие соединения по этому изобретению:

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[2-(4-амидинофенил)этилкарбамоил] -1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 33);

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₃): 9,3 (с, 4H), 9,0 (с, 4H), 7,7 (д, 4H), 7,4 (д,4H), 6,7 (т, 2H), 4,6 (м, 2H), 3,8 (м, 52H), 2,8 (т, 4H), 1,7 (м, 10H);

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(5-аминопентилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 34); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₀H₅₆N₈O₆: MH⁺: 625,8. Найдено: MH⁺: 625,7;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(6-аминогексилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 35); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₂H₆₀N₈O₆: MH⁺: 653,9. Найдено: MH⁺: 654,2;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(5-амино-2-пентенилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 36); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₀H₅₂N₈O₆: MH⁺: 621,8. Найдено: MH⁺: 621,5;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(4-аминобутилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (Соединение 37); Electrospray LRMS: Вычислено для C₂₈H₅₂N₈O₆: MH⁺: 597,8. Найдено: MH⁺: 596,9;

цис-1,5-циклооктилен-бис{ 4-[2-(2-аминоэтокси)этилкарбамоил] -1- пиперазинкарбоксилат} (Соединение 38); Electrospray LRMS: Вычислено для C₂₈H₅₂N₈O₈: MH⁺: 628,8. Найдено: MH⁺: 628,5;

цис-1,5-циклооктилен-бис[4-(транс-4- аминометилциклогексиламиноформилокси)-1-пиперидинкарбоксилат] (Соединение 39); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₆₂N₆O₈: MH⁺: 706,9. Найдено: MH⁺: 707,7; цис-1,5-циклооктилен бис[N-2-(транс-4-аминометилциклогексиламиноформилокси)этил-N- метиламинокарбоксилат] (Соединение 40); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₂H₅₈N₆O₈: MH⁺: 654,9. Найдено: MH⁺: 655;

цис-1,5-циклооктилен-бис[N-2-(транс-4- аминометилциклогексилметиламиноформилокси)этил-N-метиламинокарбоксилат] (Соединение 41); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₆₂N₆O₈: MH⁺: 683,9. Найдено: MH⁺: 683,5;

транс-1,4-циклогексилендиметилен-бис[4-(транс-4- аминометилциклогексилметилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат] (Соединение 42); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₆₄N₈O₆: MH⁺: 706. Найдено: MH⁺: 704,6; и

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-(транс-4- аминометилциклогексилметиламиноформилокси)-1-пиперидинкарбоксилат] (Соединение 43); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₈H₆₄N₆O₈: MH⁺: 736. Найдено: MH⁺: 735,6.

Пример 5. цис-5-[4-(5-Аминопентилкарбамоил)пиперидин-1- илформилокси] циклооктил-4-(4-гуанидинобеизилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат (Соединение 50)

Следующий пример описывает получение несимметричного соединения по этому изобретению, в котором R² - 4-(4-аминобутилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси, R³ - 4-(4-аминобутилкарбамоил)пиперазин-1-формилокси и Y - цис-1,5-циклооктилен.

Бис-хлорформиат цис-1,5-циклооктилендиола (1,91 г, 7,1 ммоль) переносили в дихлорметан (20 мл) и добавляли по каплям раствор трет-бутил-1-пиперазинкарбоксилата (1,3 г, 7,1 ммоль) и диизопропилэтиламина (1,3 мл, 7,1 ммоль) в дихлорэтане (10 мл). Смесь перемешивали 10 минут при комнатной температуре и затем добавляли водную соляную кислоту (0,1 М, 30 мл). Органический слой отделяли, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Очистка остатка флэш-хроматографией на силикагеле с элюцией смесью этиловый эфир/гексан (1:1) давала цис-5-хлороформилоксициклооктил-4- трет-бутоксикарбонил-1-пиперазинкарбоксилат (663,1 мг, 1,6 ммоль) в виде бесцветного масла.

трет-Бутил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат (383,7 мг, 1,1 ммоль) обрабатывали чистой трифторуксусной кислотой (2 мл) при комнатной температуре до получения гомогенного раствора. Раствор концентрировали в вакууме до густого масла. Масло переносили в воду (10 мл) и добавляли по каплям 5 М гидроксид натрия, пока pH раствора не становился 7,5-8,0. цис-5-Хлороформилоксициклооктил-4- трет-бутоксикарбонил-1-пиперазинкарбоксилат (447,7 мг, 1,1 ммоль) в ТГФ (3 мл) добавляли к раствору при быстром перемешивании и при продолжении перемешивания добавляли 5 М гидроксид натрия для поддержания pH 7,5-8,0. Добавляли 5 М гидроксид натрия для доведения pH до 14 и затем добавляли этиловый эфир (1 мл). Смеси давали стоять в течение 15 минут при комнатной температуре, получая белый твердый продукт. Этот твердый продукт собирали фильтрованием и промывали ледяной водой (1 раз), ацетонитрилом (1 раз) и этиловым эфиром (1 раз) и сушили, получая цис-5-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1- илформилокси)циклооктил-4-гуанидинобензилкарбамоил-1-пиперазинкарбоксилат (527,2 мг, 0,85 ммоль) в виде белого твердого продукта.

Цис-5-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-илформилокси)циклооктил-4- гуанидинобензилкарбамоил-1-пиперазинкарбоксилат (129 мг, 0,196 ммоль) обрабатывали неразбавленной трифторуксусной кислотой (1 мл) до получения гомогенного раствора. Раствор концентрировали в вакууме до бесцветного масла. Масло переносили в N,N-диметилформамид (2 мл) и затем добавляли диизопропилэтиламин (340 мкл, 2 ммоль). К раствору добавляли 5-(трет-бутоксикарбонил)аминопентилизоцианат (44 мг, 0,2 ммоль) в N,N-диметилформамиде (500 мкл) и смесь перемешивали 12 часов при комнатной температуре. Смесь концентрировали в вакууме и остаток соединяли с водой (5 мл) и обрабатывали трифторуксусной кислотой (2 мл) до получения гомогенного раствора. Раствор концентрировали в вакууме и остаток переносили в воду (5 мл). Очистка препаративной ВЭЖХ и последующая лиофилизация давали цис-5-[4-(5-аминопентилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] циклооктил- 4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат в виде бесцветного масла.

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₃H₅₄N₁₀O₆: MH⁺: 687,9. Найдено: MH⁺: 687,6.

Аналогично способу, описанному в примере 5, или другими описанными здесь способами и с заменой различных исходных продуктов получали следующие соединения по этому изобретению:

4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат (Соединение 51);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₂H₅₂N₁₀O₆: MH⁺: 673,8. Найдено: MH⁺: 673,8;

цис-5-[4-(4-транс-аминометилциклогексилметилкарбамоил)пиперазин-1- илформилокси)] циклооктил-4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат (Соединение 52);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₆H₅₇N₁₀O₆: MH⁺: 726,9. Найдено: MH⁺: 727,3;

цис-5-[4-(3-аминопропилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] циклооктил- 4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат (Соединение 53);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₁H₅₀N₁₀O₆: MH⁺: 659,8. Найдено: MH⁺: 659,2; и

цис-5-[4-(6-аминогексилкарбамоил)пиперазин-1-илформилокси] циклооктил- 4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1-пиперазинкарбоксилат (Соединение 54);

Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₄H₅₄N₉O₆: MH⁺: 686,9. Найдено: MH⁺: 686,4.

Пример 6. цис-1,5-Циклооктилен-бис(4-{ 4-[1,2,3-три(1- ацетоксиэтоксикарбонил)гуанидино]бензилкарбамоил}-1-пиперазинкарбоксилат).

Следующий пример описывает получение производного-пролекарства соединения по этому изобретению, в котором Z - гуанидино, X¹ - -X⁶-X⁷-X⁸-, где n6 = 0, n8 = 1 и X⁷ - 1,4-фенилен, X² - -NHC(O)-, X³ - 1,4-пиперазинилен, X⁴ - -C(O)O-, Y - цис-1,5-циклооктилен и R⁴ - 1-ацетоксиэтилкарбонил.

цис-1,5-Циклооктилен-бис[4-(4-гуанидинобензилкарбамоил)-1- пиперазинкарбоксилат] (49 мг, 0,065 ммоль) суспендировали в N,N-диметилформамиде (2 мл) и последовательно добавляли диизопропилэтиламин (50 мл, 0,26 ммоль) и ацетоксиэтил-п-нитрофенилкарбонат (70,4 мг, 0, 26 ммоль). Смесь перемешивали 1 час при комнатной температуре и затем концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане (25 мл) и раствор промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (2 раза) и 0,1 М водной соляной кислотой (1 раз), сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с элюцией этиловым эфиром и затем смесью этилацетат/этанол (20: 1). Концентрирование давало цис-1,5-циклооктилен-бис(4-{4-[1,2,3-три(1- ацетоксиэтоксикарбонил)гуанидино]бензилкарбамоил}-1-пиперазинкарбоксилат] (40 мг, 0,031 ммоль) в виде бесцветного твердого продукта.

Electrospray LRMS: Вычислено для C₅₆H₇₆N₁₂O₂₂: MH⁺: 1269,3. Найдено: MH⁺: 1269,4.

Аналогично способу, описанному в примере 6, или другими описанными здесь способами и с заменой различных исходных продуктов получали следующие производные-пролекарства соединений по этому изобретению:

цис-5-[4-(5-N-ацетилглициламинопентилкарбамоил)пиперазин-1- илформилокси] циклооктил] -4-гуанидинобензилкарбамоил-1- пиперазинкарбоксилат); Electrospray LRMS: Вычислено для C₃₇H₅₉N₁₁O₈: MH⁺: 786,9. Найдено: MH⁺: 786,5; и

цис-1,5-циклооктилен-бис(4-{4-[1,2-ди(1-ацетоксиэтоксикарбонил) амидино] бензилкарбамоил} -1-пиперазинкарбоксилат]); Electrospray LRMS: Вычислено для C₆₄H₉₂N₁₂O₂₂: MH⁺: 1381,7. Найдено: MH⁺: 1403.

VI. Тест ингибирования триптазы in vitro

Испытуемые соединения (приблизительно 1 мг) растворяли в 200 мкл диметилсульфоксида (ДМСО) и разбавляли 1:10 буфером, содержащим 50 мМ Трис-HCl (pH 8,2), 100 мМ хлорид натрия и 0,05% монолаурат полиоксиэтиленсорбитана (Твин-20, доступный в Sigma, St. Louis, MO). Готовили семь дополнительных трехкратных разведений из исходного разведения в том же буфере с добавленным 10% ДМСО. Аликвоты (50 мкл) из каждого из 8 разведений последовательно переносили в отдельные лунки 96-луночного (с U-дном) микротитрационного планшета. 25 мкл исходного раствора триптазы добавляли к каждой лунке и пробы смешивали и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре (триптаза была очищена из препаратов легких и кожной ткани человека, HMC-1 (линия мастоцитов человека) и также была получена из коммерческих источников (ICN Biomedicals, Irvine, California; Athens Research and Technology, Athens, Georgia)). Каждый ингибитор имел одинаковую аффинность в отношении триптазы из всех этих источников. Раствор триптазы готовили помещением 60 мкг/мл триптазы в раствор с 10 мМ МЭС (2-[N-морфолино]этансульфоновая кислота), содержащий 2 мМ CaCl₂, 20% глицерин и 50 мкг/мл гепарина. Ферментативную реакцию инициировали добавлением синтетического трипептидного субстрата, тозил-Gly-Pro-Lys-п-нитроанилида (доступного в Sigma, 25 мкл, конечная концентрация 0,5 мМ). Микротитрационные планшеты немедленно переносили в планшет-ридер (UV/MAX Kinetic Microplate Reader, Molecular Devices) и гидролиз хромогенного субстрата прослеживали спектрофотометрически при 405 нм в течение 5 минут. Эти ферментные тесты давали обычно линейные возрастающие кривые при этих условиях. Измерения начальной скорости, рассчитанные из этих кривых согласно программе кинетического анализа (BatchKi; Petr Kusmic, University of Wisconsin, Madison, WI), использовали для определения видимых констант ингибирования для соединений 1, 2 и 4.

Сильный ингибитор триптазы данного изобретения, Соединение 3, классифицируется как ингибитор прочного связывания, поскольку его видимая аффинность в отношении триптазы (K_i" при расчете согласно программе BatchKi была 200 пМ) сравнима с концентрацией этого фермента, используемой в этом тесте. Однако, K_i" варьирует в зависимости от концентрации фермента, используемой в этом ферментном тесте. Был использован графический способ (Henderson, P.J.F. , Biochem. J. 127, 321 (1972)) для определения K_i" Соединения 3, который не зависит от концентраций триптазы. В этом эксперименте концентрации триптазы (0,25, 0,50, 1,0 и 2,0 нМ) и Соединения 3 (40, 1 10, 340 и 680 пМ) варьировали в предынкубационных смесях в течение 1 часа перед добавлением субстрата (500 мкМ тозил-Gly-Pro-Lys-п-нитроанилида). IC₅₀ Соединения 3 определяли при каждой концентрации триптазы. Отрезок оси у (ординаты) при построении кривой зависимости IC₅₀ (ордината) от концентрации триптазы (абсцисса) дает величину K_i". Истинную константу диссоциации конкурентного ингибитора, K_i, рассчитывают из соотношения (См. Morrison, J.F. Methods in Enzymology 63, 437-467 (1989)):

K_i = K_i"/(1+S/K_m), где S = 500 мкМ и K_m = 300 мкМ.

Константа диссоциации Соединения 3 от триптазы согласно расчету по этому способу равна 60 пМ.

Константу ингибирования (K_i", мкМ) определяли для соединений по данному изобретению. Согласно данному изобретению, соединение называют "активным" или "эффективным" в качестве ингибитора триптазы, когда его K_i" менее 5 мкМ.

В соответствии с описанным выше тестом in vitro соединения по этому изобретению испытывали и получали следующие величины K_i (мкМ): Соединение 1 (0,004), Соединение 2 (0,002), Соединение 3 (0,0002), Соединение 4 (0,0158), Соединение 5 (0,002), Соединение 6 (0,00037), Соединение 7 (0,005), Соединение 8 (0,03), Соединение 9 (0,493), Соединение 10 (0,00047), Соединение 11 (0,207), Соединение 12 (0,26), Соединение 13 (0,00013), Соединение 14 (1,3), Соединение 15 (0,302), Соединение 16 (0,0015), Соединение 17 (0,0049), Соединение 18 (0,713), Соединение 19 (1,51), Соединение 20 (0,00081), Соединение 21 (0,0609), Соединение 22 (0,009), Соединение 23 (0,119), Соединение 24 (0,00016), Соединение 25 (0,734), Соединение 26 (0,332), Соединение 27 (0,614), Соединение 28 (0,0087), Соединение 29 (0,0038), Соединение 30 (0,008), Соединение 31 (0,0266), Соединение 32 (0,0122), Соединение 33 (0,44), Соединение 34 (0,011), Соединение 35 (1,44), Соединение 36 (0,125), Соединение 37 (0,508), Соединение 38 (0,75), Соединение 39 (0,858), Соединение 40 (1,39), Соединение 41 (0,064), Соединение 42 (0,064), Соединение 43 (1,45), Соединение 44 (0,008), Соединение 45 (0,144), Соединение 46 (0,772), Соединение 47 (0,00042), Соединение 48 (2,3), Соединение 49 (0,0034), Соединение 50 (0,00045), Соединение 51 (0,0038), Соединение 52 (0,00048), Соединение 53 (0,044) и Соединение 54 (0,02).

VII. Тестирование in vivo

Модель астмы имеющей аллергию овцы использовали для оценки in vivo соединений по этому изобретению в качестве противоастматических средств. Эти способы были опубликованы ранее (См. Abraham et al. (1983) Am. Rev. Respir. Dis. 128:839-844; Allegra et al. (1983) J. Appl. Physiol. 55:726-730; Russi et al. (1985) J. Appl. Physiol. 59:1416-1422; Soler et al. (1989) J. Appl. Physiol. 67: 407-412. Каждая овца служит как ее собственный контроль. Вес тела этих животных был в пределах 20-50 кг.

В этих исследованиях 50 мкг Соединения 3 этого изобретения растворяли в забуференном солевом растворе и весь раствор предоставляли в виде аэрозоля за 5 часов до, через 4 часа после и через 24 часа после введения антигена (общая доза = 150 мкг; n = 3). Это соединение давало значительное ослабление раннего и позднего ответа на введение антигена, как было измерено по Специфической Резистентности Легких (СРЛ). Это показано в фиг. 5. Пик раннего ответа был принят за средние максимальные величины, имеющие место немедленно после введения антигена. Пики поздних ответов рассчитывали усреднением максимальных величин ответных реакций, полученных для каждого животного в пределах периода 6-8 часов. Этот подход является консервативным и исключает возможное снижение в поздней ответной реакции просто из-за усреднения.

Через 24 часа после провоцирования антигеном как в контроле, так и в тесте с лекарственным средством овца обнаруживала гиперчувствительность дыхательных путей. Гиперчувствительность дыхательных путей выражали в виде РС400, концентрации карбахола, вызывающей 400% увеличение в Специфической Резистентности Легких (СРЛ); следовательно, уменьшение в РС400 указывает на гиперчувствительность. Было обнаружено, что Соединение 3 блокирует наступление гиперчувствительности. Как показано на фиг. 2, это соединение поддерживало РС400 по существу при величине базовой линии (фона) (32 единицы вдыхания). Число дыхательных единиц падает до 12 у животных контрольной группы. Таким образом, лечение Соединением 3 этого изобретения приводило к значительному улучшению функции дыхательных путей в провоцированных антигеном овцах. Соединение 2 также обнаруживает подобные результаты, как показано в фиг 6.

Было обнаружено, что Соединение 3 обладает пероральной активностью. Три дозы этого соединения (2 мг в 10 мл воды) вводили овце через желудочную трубку за 1 час перед введением антигена, через 4 часа после введения и через 24 часа после введения. Как показано в фиг. 5, животные, получавшие это соединение, имели СРЛ ранней фазы приблизительно 175. Не получавшие этого соединения животные обнаружили СРЛ приблизительно 250. В отношении реакции замедленного типа (поздней ответной реакции) животные, получавшие это соединение, обнаружили СРЛ приблизительно 50 по сравнению с СРЛ более 200 для не получавших это соединение животных. Таким образом, это соединение обнаружило значительные противоастматические свойства при пероральной доставке.

Было обнаружено, что аэрозольная доставка Соединения 3 перед введением антигена также эффективна в ослаблении раннего и позднего ответа на введение антигена, как измерено по Специфической Резистентности Легких (СРЛ). Для этих исследований животным давали посредством аэрозольного введения дозы Соединения 3 (0,5 мг/день х 3 дня с дополнительной дозой 0,5 мг за полчаса перед введением антигена). Фиг. 7 показывает значительное ослабление ответов ранней и поздней фазы на введение антигена под влиянием преддозирования Соединения 3. Фиг. 8 также показывает значительное улучшение функции дыхательных путей.

Таким образом, данное изобретение относится к соединениям и композиции, которые применимы для профилактики и лечения иммуноопосредованных воспалительных нарушений, в частности связанных с дыхательными путями, в том числе астмы, и фазы гиперчувствительности, связанной с хронической астмой, в дополнение к аллергическому риниту. Данное изобретение относится также к способу лечения иммуноопосредованных воспалительных заболеваний, которые чувствительны к лечению соединением по данному изобретения.

Описание в этой заявке всех статей и ссылок, в том числе патентов и патентных заявок, дается в качестве ссылки.

Следует учесть, что изложенное выше описание предназначено для иллюстрации, а не для ограничения. Многие варианты будут очевидными для специалистов в этой области при просмотре этого описания. Сфера действия и объем этого изобретения должны, следовательно, определяться не ссылкой на это описание, а ссылкой на прилагаемую формулу изобретения, вместе с полным объемом эквивалентов, на которое дает право эта формула изобретения.