способ получения коллагена из костной ткани

Формула изобретения

Способ получения коллагена из костной ткани, включающий очистку, измельчение костной ткани, гидролиз и нейтрализацию, отличающийся тем, что костную ткань измельчают до получения костной крошки размером 700 - 2000 мкм, проводят гидролиз в течение 24 - 48 ч в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, нейтрализуют рН 6,8 - 7,8, центрифугируют при 3000 - 5000 об/мин в течение 20 - 40 мин, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при 37^oC, затем повторно проводят гидролиз в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1: 1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при приготовлении лекарственных форм и изготовлении медицинских изделий для использования в общей хирургии, стоматологии и дерматологии.

Известен способ получения коллагена из костной ткани, включающий очистку, измельчение костной ткани, гидролиз и нейтрализацию (US N 4172128, A 61 K 35/32).

Однако применение коллагена, полученного указанным способом, может привести к аллергическим или воспалительным реакциям, так как он содержит свободные концы коллагеновых волокон.

Задачей изобретения является повышение качества конечного продукта.

Технический результат достигается тем, что в способе получения коллагена из костной ткани, включающем очистку, измельчение костной ткани, гидролиз и нейтрализацию; костную ткань измельчают до получения костной крошки размером от 700 до 2000 мкм, проводят гидролиз в течение 24-48 часов в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, затем нейтрализуют до pH 6,8-7,8, центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при температуре 37^oC, затем повторно проводят гидролиз смесью раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.

Костную ткань измельчают до крошки размером 700-2000 мкм, так как при размере костной крошки менее 700 мкм значительно повреждаются коллагеновые волокна, а при ее размере более 2000 мкм процесс гидролиза удлиняется.

Гидролиз костной крошки проводят в течение 24-48 часов в смеси раствора в 0,4 Н раствора гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, что позволяет полностью выделить и обезжирить весь костный коллаген.

Удаляют надосадок центрифугированием. При 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, так как при центрифугировании менее 3000 об/мин, осаждается менее 50% гидролизата, а при более 5000 об/мин часть основного продукта уходит в осадок.

Обработку 0,125%-ным раствором папаина при 37^oC позволяет провести полный гидролиз свободных неколлагеновых белков кости и удалить свободные концы коллагеновых волокон, так как папаин, являясь протеолитическим ферментом, гидролизует белки животного происхождения (Диксон М. и др. Ферменты, т. 1, М., 1982, с. 20-40).

Повторное проведение гидролиза смесью раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1 позволяет удалить из ткани гидролизированные белки и их остатки.

Способ осуществляется следующим образом.

Кость очищают от мышц, связок и прочего, измельчают до получения костной крошки размером 700-2000 мкм, затем проводят гидролиз в течение 24-48 часов в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, нейтрализуют до pH 6,8-7,8, центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 20-40 минут, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при температуре 37^oC, затем повторно проводят гидролиз в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.

Пример.

1 кг костей быка очищают от мышц, связок и прочего. Распиливают на кусочки, измельчают до получения костной крошки размером 800 мкм. Затем проводят гидролиз в течение 24 часов в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, затем нейтрализуют до pH 6,8, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 40 минут, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125%-ным раствором папаина при температуре не выше 37^oC, затем повторно проводят гидролиз в смеси раствора 0,4 Н гидроксида натрия и этанола в соотношении 1:1, диализуют против воды, замораживают и лиофилизируют.