аналоги витамина d, способ их получения, диастереоизомер, фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Аналоги витамина D общей формулы I



где R представляет группу



где q равно 0, 1;

n равно от 2 до 4;

m равно 0;

Y₁ и Y₂ независимо представляют водород, атом галогена;

R₁ и R₂ независимо представляют водород, низший алкил, необязательно замещенный атомами галогена или азидогруппой;

Х представляет водород или гидроксигруппу,

при этом имеющиеся гидроксигруппы могут быть защищены.

2. Диастереоизомер соединения по п.1 в чистом виде или смесь таких диастереоизомеров.

3. Соединение по п.1, которое представляет собой: 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-этил-4,4-дифтор-5-гидроксигептилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен, 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-4,4-дихлор-5-гидрокси-5-метил-гексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен.

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(4,4-дифтор-5-гидрокси-5-метил-гексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен,

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(4-фтор-4-метилпентилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен,

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(4-этил-4-фторгексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен,

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-фтор-5-метилгексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен,

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-этил-5-фторгептилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен,

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-азидопентилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен или

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(6-азидогексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19)-триен.

4. Соединение по п. 1, в котором q равно 1; m равно 0, а n обозначает целое число от 2 до 4; Y¹ и/или Y² обозначает атом фтора.

5. Способ получения соединений формулы I по п.1, включающий следующие стадии, в которых а) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)20(S)-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19)-триен окисляют кислородом в присутствии основного катализатора с образованием 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19)-триен-20-она; б) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19)-триен-20-он восстанавливают, в частности, боргидридом натрия с образованием 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19)-триен-20(R)-ола, в) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19)-триен-20(R)-ол алкилируют в основных условиях структурным блоком боковой цепи формулы Z-R³, где Z обозначает уходящую группу, такую, как атом галогена, р-толуолсульфонилоксигруппа, метансульфонилоксигруппа или трифторметан-сульфонилоксигруппа, с образованием соединения III



где R³ обозначает R, значение которого указано в п.1; г) указанное выше соединение формулы III подвергают триплетактивированной фотоизомеризации и, в случае необходимости, превращают R³ в R и удаляют защиту с образованием соединения I по п.1.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении пролиферации опухолевых клеток, содержащая активный агент и фармацевтически приемлемые нетоксичные носители и/или вспомогательные агенты, отличающаяся тем, что в качестве активного агента содержит, по крайней мере, одно соединение по п.1 в эффективном количестве.

7. Фармацевтическая композиция по п.5 в форме единичной дозы, содержащая соединение формулы I в количестве от 0,001 до 0,4 вес.%.

8. Соединение по любому из пп.1 - 4, обладающее противовоспалительной, иммуномодулирующей активностью, активностью, ингибирующей аномальную дифференциацию и/или пролиферацию клеток.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ранее неизвестному классу соединений, которые оказывают антивоспалительное и иммуномодифицирующее воздействие, а также проявляют повышенную активность, стимулируя дифференциацию и ингибируя нежелательное разрастание некоторых клеток, в том числе раковых клеток и клеток кожи, фармацевтическим препаратам, содержащим указанные соединения, к стандартным дозам указанных препаратов и к их использованию для лечения и профилактики синдрома гиперфункции паращитовидной железы, в частности вторичного синдрома гиперфункции паращитовидной железы, вызванного почечной недостаточностью, ряда болезненных состояний, включая сахарный диабет, гипертонию, угри, облысение, старение кожи, нарушения баланса иммунной системы, воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и астма, заболеваний, характеризующихся ненормальной дифференциацией клеток и/или разрастанием клеток, таких как, например, псориаз и рак, для предотвращения и/или лечения атрофии кожи, вызываемой стероидами, и для стимулирования костеобразования и лечения остеопороза.

Соединения по настоящему изобретению представлены общей формулой I



где R обозначает насыщенную или ненасыщенную алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 4 до 12 атомов углерода, которая необязательно замещена гидроксильной группой и, возможно, содержит кольцевые структуры и в которой по крайней мере один атом углерода, не содержащий гидроксильной группы, замещен одним или большим количеством атомов галогена или азидо-групп.

R предпочтительно обозначает группу формулы II



где q равно 0 или 1, а n и m независимо обозначают 0 или целое число от 1 до 6, Y¹ и Y² независимо обозначают атом водорода, атом галогена или азидо-группу; R¹ и R², которые могут совпадать или различаться, обозначают атом водорода, низший алкил, низший циклоалкил или совместно с атомом (помечен звездочкой в формуле II), содержащим группу X, R¹ и R² могут образовывать C₃-C₈ карбоцикл, R¹ и R² необязательно могут быть замещены азидо-группой или одним или большим количеством атомов галогена, X обозначает атом водорода или гидроксил.

В контексте настоящего изобретения выражение "низший алкил" означает насыщенную или ненасыщенную алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, а выражение "низший циклоалкил" обозначает насыщенный или ненасыщенный C₃-C₇ карбоцикл. Галоген обозначает фтор, хлор, бром или иод.

В частности, R¹ и R² независимо выбирают из группы, включающей атом водорода, метил, этил, пропил, изо-пропил, бутил, изо-бутил, трет-бутил, втор-бутил, пентил, фторметил, дифторметил, трифторметил, пентафторметил, 2,2,2-трифторэтил, 2-фторпропил-2, 3-фторпропил-3, хлорметил, трихлорметил, 2-хлорпропил-2, 3-хлорпропил-3, бромметил, 2-бромпропил-2, 3-бромпропил-3, иодметил, 2-иодпропил-2, 3-иодпентил-3, азидометил, 2-азидопропил-2 и 3-азидопропил-3.

Как видно из формул I и II, в зависимости от значений R, Y¹, Y², X, R¹ и R², соединения по изобретению образуют несколько диастереоизомерных форм. Изобретение включает все указанные диастереоизомерные формы в чистом виде, а также смеси указанных диастереоизомеров. Далее, предшественники лекарственных средств соединения I, в которых одна или большее количество гидроксильных групп маскируются группами, которые можно вновь превратить в гидроксильные группы в условиях in vivo, также входят в объем притязаний по изобретению.

Соединения формулы I, в которых R не замещен гидроксильной группой, составляют другую группу предшественников лекарственного средства. Указанные соединения относительно не активны in vitro, однако превращаются в активные соединения формулы I под влиянием ферментативного гидроксилирования после назначения пациенту.

Показано, что 1, 25-дигидрокси-витамин D₃ (1,25(OH)₂D₃) оказывает влияние на воздействие и/или воспроизводство интерлейкинов (Muller et al., Immunol. Lett., 1988, Vol. 17, pp. 361-366), что указывает на потенциальную полезность этого соединения при лечении болезней, характеризующихся дисфункцией иммунной системы, в частности аутоиммунных заболеваний, СПИДа, реакции "трансплантант против хозяина", отторжения трансплантантов или других состояний, характеризующихся ненормальным воспроизводством интерлейкина-1, в частности воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и астма.

Показано также, что 1,25(OH)₂D₃ способен стимулировать дифференциацию клеток и ингибировать избыточное разрастание клеток (E. Abe et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1981, Vol. 78, pp. 4990-4994) и было высказано предположение, что это соединение может быть полезным при лечении заболеваний, характеризующихся ненормальным разрастанием клеток и/или дифференциацией клеток, таких как лейкемия, миелофиброз и псориаз.

Далее, предложено использовать 1,25(OH)₂D₃ или его предшественник 1 -OH-D₃ при лечении гипертонии (L. Lind et al., Acta Med. Scand., 1987, Vol. 222, pp. 423-427) и сахарного диабета (S. Inomata et al., Bone Mineral, 1986, Vol. 1, pp. 187-192). Другое показание 1,25(OH)₂D₃ следует из недавнего открытия взаимозависимости наследственной невосприимчивости к витамину D и облысением: лечение с использованием 1,25(OH)₂D₃ может способствовать росту волос (Колонка редактора, Lancet, March 4, 1989, p. 478). Тот факт, что местное применение 1,25(OH)₂D₃ уменьшает размер сальных желез в ушах сирийских хомяков, позволяет также предположить, что указанное соединение может быть полезно для лечения угрей (V.L. Malloy et al., The Tricontinental Meeting for Investgative Dermatologym, Washington, 1989).

Тем не менее терапевтические возможности в таких показаниях 1,25(OH)₂D₃ значительно ограничены по причине хорошо известного потенциального воздействия указанного гормона на обмен кальция: повышенное содержание его в крови приводят к быстрому росту содержания кальция в крови. Таким образом, указанное соединение и его потенциальные синтетические аналоги не являются вполне удовлетворительными для использования в качестве лекарственных средств при лечении, например, псориаза, рака или иммунных заболеваний, которые могут потребовать продолжительного назначения лекарственного средства в сравнительно больших дозах.

Известен ряд окса-производных витамина D₃ 1, 25-дигидрокси-2-окса-21-норвитамин D₃ и 1-гидрокси-20-окса-21-норвитамин D₃ описаны в статье N. Kubodera et al., Chem. Pharm. Bull. Vol. 34, p. 2286 (1986). 1. 25-дигидрокси-22-оксавитамин D₃ и 25-гидрокси-22-оксавитамин D₃ описаны в публикациях E. Murayamd et al., Chem. Pharm. Bull. Vol. 34, p. 4410 (1986), J. Abe et al., FEBS Lett., Vol. 226, p. 58 (1987) и Европейской патентной заявки с номером публикации 184112, 1, 25-дигидрокси-23-оксавитамин D₃ описан в Европейской патентной заявке с номером публикации 78704, а ряд 22-окса-производных витамина D₃ приводится в Международной патентной заявке с номером PCT/DK90/00037 и Международной патентной заявке с номером PCT/DK90/00036.

Эксперименты в условиях in vitro показывают, что некоторые из указанных соединений могут обладать преимуществами перед 1,25(OH)₂D₃. Так, 1, 25-дигидрокси-22-оксавитамин D₃ обладает лишь одной четырнадцатой от величины сродства 1,25(OH)₂D₃ по отношению к кишечному цитозольному рецептору цыпленка, меньшим сродством по отношению к лейкемийной клеточной линии костного мозга человека (HL-60) и большей активностью в качестве инициатора дифференциации в клетках HL-60.

Полезность аналогов витамина D в приведенных выше показаниях зависит не только от благоприятного соотношения сродства связывания к соответствующим рецепторам, по сравнению с кишечным рецептором, но и от дальнейшей судьбы соединения в организме.

Нами обнаружено, что соединения по настоящему изобретению, содержащие атом галогена в соответствующем положении в боковой цепи, проявляют благоприятную селективность по отношению к связыванию рецептора и в то же время обладают высокой биологической доступностью и метаболической устойчивостью по сравнению с 1,25(OH)₂D₃.

Селективность соединений подтверждает тот факт, что они, обладая высоким сродством к рецептору раковых клеток (аналогичной или же значительно лучшей, чем у 1,25(OH)₂D₃, характеризуются той же или значительно меньшей концентрацией, чем 1,25(OH)₂D₃, необходимой для инициирования дифференциации моноцитарной линии опухолевых клеток, чтобы вызывать тот же эффект, что и 1,25(OH)₂D₃, при этом их сродство связывания по отношению к кишечному рецептору меньше, чем у 1,25(OH)₂D₃. У крыс в условиях in vivo соединения менее активны, чем 1,25(OH)₂D₃, и вызывают повышение содержания кальция в моче и в крови.

По этой причине соединения по изобретению особенно удобны как для местного, так и для системного лечения и профилактики болезней человека и ветеринарных болезней, которые характеризуются ненормальным разрастанием клеток и/или дифференциацией клеток, таких как некоторые дерматологические заболевания, в том числе псориаз и определенные формы рака, в частности лейкемия и миелофиброз, и заболеваний, которые характеризуются нарушением баланса в иммунной системе, в частности аутоиммунных заболеваний или СПИДа, и для осуществления необходимой иммунодепрессии при операциях трансплантации, а также при лечении угрей, сахарного диабета и гипертонии и воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и астма. Поскольку соединения по настоящему изобретению могут ускорять дифференциацию клеток волосяных фолликул, то указанные соединения могут быть полезны при лечении облысения. Предварительные испытания показывают, что соединения по настоящему изобретению способны устранять нежелательные последствия, вызываемые старением кожи, в частности кожи, старение которой происходит под воздействием света.

Соединения формулы I удобно получать из производного I витамина D (или его 20R изомера) (Tetrahedron, 1987, Vol. 43, p. 4609) по способам, приведенным на схеме 2. Окисление соединения I с использованием, например, методики ван Риинена (Tetrahedron Lett. 1969, p. 985) приводит к кетону 2, который восстанавливают в 20R-спирт 3. Если использовать подходящий хиральный восстановительный агент, то можно получить соединение 3 с высокой стереоселективностью, однако соединение 3 удобно получать, восстанавливая соединение 2 с помощью боргидрида натрия и удаляя небольшое количество соответствующего 20S-спирта хроматографически. O-Алкилирование соединения 3 с получением соединения III проводится в щелочных условиях с использованием структурных блоков в боковой цепи общей формулы Z-R³, где Z обозначает уходящую группу, такую как атом брома, атом иода, п-толуолсульфонилокси-группа, метансульфонилокси-группа или трифторметансульфонилокси-группа, а R³ обозначает группу R (формулы I) или необязательно радикал, который может быть превращен в группу R на любой подходящей последующей стадии (или через несколько стадий). Так, R³ в соединениях III, IV, V и VI необязательно имеет то же самое значение по всей конкретной цепочке синтетических превращений. Превращение R³ в R может потребовать нескольких стадий и возможно потребует временной защиты чувствительной триеновой системы молекулы. Помимо необходимых изменений в боковой цепи (R³), превращение соединения III в соединение I включает стадию фотоизомеризации и стадию десилилирования, аналогичную стадиям, которые применяются на последних этапах синтеза другого аналога витамина D (см. Европейский патент 0227826).

В общем случае фрагмент боковой цепи R³-Z имеет структуру

-(CH₂)_n-(C(Y¹)(Y²))_q- (CH₂)_m-C(R¹)(R²)-OR⁵,

где обычно подразумевается, что R³ имеет то же значение, что и в формуле II, где X обозначает защищенную гидроксильную группу (например R⁵ = тетрагидропиранил или триалкилсилил). Уходящая группа Z должна выбираться таким образом, чтобы она была более реакционноспособной, чем заместители Y¹ и Y² или соответствующие гетероатомы в R¹ и R².

Боковые структурные блоки являются либо известными соединениями (например, (R)- и (S)-4-(1-этоксиэтокси)-3-фтор-1-иодо-4-метилпентаном, приведенным в статье S.-J. Shiney et al., J. Org. Chem., 1988, Vol. 53, p. 1040, и 4-(1-этоксиэтокси)-3,3-дифтор-1-иодо-4-метилпентаном, приведенным в патенте США 4421690, выданном на имя Дж.Дж. Патриджа и др.) или же могут быть получены по способам, представленным на схеме 1. Очевидно, что синтезы конкретных фрагментов могут сильно различаться, однако, с целью пояснения описания в разделе Препараты приводятся синтезы конкретных соединений, которые представлены в таблице 1.

В настоящем описании используются следующие обычные сокращения: Me = метил, Et = этил, n-Pr = н-пропил, i-Pr = изо-пропил, t-Bu = трет-бутил, MOM = метоксиметил, EE = 1-этоксиэтил, THP = тетрагидро-4H-пиран-2-ил, ТГФ = тетрагидрофуран, Ts = п-толуолсульфонил, ТБА = тетра-(н-бутил)аммоний, TMS = триметилсилил, TBDMS = трет-бутилдиметилсилил, ДМФА = диметилформамид.

Пояснения к схеме 1

a) Взаимодействие с металлоорганическим реагентом (в частности, R²MgBr, R²MgI или R²Li).

b) Превращение группы OH в уходящую группу (в частности, тозилированием в случае Z = OTs или бромированием в случае Z = Br).

c) Селективная защита первичной спиртовой группы (R⁴ обычно обозначает ацетатную или бензоатную группу).

d) Защита гидроксильной группы (в частности, с помощью три(низший алкил)силила, MOM или THP).

e) Селективное удаление защиты у спиртовой группы (например, с помощью карбоната калия или литийалюмогидрида).

f) Снятие защиты со спиртовой группы (в частности, с использованием тетра-(н-бутил)аммонийфторида или HF).

g) Гидроборирование-окисление (борановый комплекс + перекись щелочного металла).

h) Реакция Гриньяра с кетоном формулы R¹-CO-R².

Пояснения к схеме 2

a) Окисление, например, кислородом в присутствии Cu(AcO)₂, 2,2"-бипиридила и 1,4-диазобицикло(2.2.2)октана в качестве катализатора.

b) Восстановление (например, с помощью боргидрида натрия).

c) Алкилирование боковым фрагментом R³-Z в присутствии основания (в частности, KOH, t-BuOK или KH) в присутствии или в отсутствии катализатора (например, 18-краун-6) в растворителе, например ТГФ.

d) Необязательная модификация функциональной группы в боковой цепи.

e) Изомеризация с помощью h-триплетного сенсибилизатора, например антрацена.

f) Удаление защиты с помощью тетра-(н-бутил)аммонийфторида или HF.

Следует отметить, что хотя приведенные промежуточные соединения могут содержать гидроксильные группы, защищенные в виде трет-бутилметилсилиловых эфиров, объем притязаний по настоящему изобретению не исключает использования альтернативных гидроксильных защитных групп, хорошо известных в области техники (таких как приведенные в монографии T.W.Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, N.V. 1981), а также альтернативных реакций для удаления защиты.

Настоящие соединения предназначены для использования в фармацевтических композициях, которые полезны при лечении болезней человека и ветеринарных болезней, как указано ранее.

Необходимое количество соединения формулы I (далее обозначается как активный ингредиент) для достижения терапевтического воздействия будет, естественно, изменяться как в зависимости от конкретного соединения, так и от пути назначения и вида млекопитающего, лечение которого проводится. Соединения по изобретению могут назначаться парентерально, внутрисуставно, энтерально или местно. Они хорошо усваиваются при энтеральном введении и этот путь является предпочтительным способом назначения при лечении системных заболеваний. При лечении дерматологических заболеваний, таких как псориаз, предпочтительными формами являются местное или энтеральное назначение.

При лечении респираторных заболеваний, таких как астма, предпочтительны аэрозоли.

Хотя активный ингредиент можно назначать сам по себе в виде чистого вещества, предпочтительнее назначать его в виде фармацевтических составов. Удобное количество активного ингредиента составляет от 1 промиле до 0,1% по отношению к весу композиции.

Под термином "единичная доза" понимается однократная доза, которая может быть назначена пациенту и которую легко можно упаковать и транспортировать, сохраняющаяся как физически и химически стабильная однократная доза, содержащая активное соединение в чистом виде или в виде его смеси с твердым или жидким фармацевтическими разбавителями или носителями.

Составы как для ветеринарного использования, так и для лечения людей по настоящему изобретению содержат активный ингредиент вместе с фармацевтически приемлемым для этого носителем и необязательно другими терапевтическими ингредиентами. Носители должны быть "приемлемыми" в том смысле, что они должны быть совместимыми с другими ингредиентами композиции и не должны оказывать вредного воздействия на самого пациента.

Композиции включают, например, составы в форме, пригодной для орального, ректального, парентерального (в том числе подкожного, внутримышечного и внутривенного), внутрисуставного, местного и внутриглазного назначения.

Составы могут быть представлены в удобном виде в форме единичной дозы и могут быть получены любыми способами, хорошо известными из области фармации. Все эти методы включают стадию смешения активного ингредиента с носителем, который включает один или несколько вспомогательных ингредиентов. В общем случае композиции готовят путем тщательного и однородного смешения активного ингредиента с жидким носителем или тщательно измельченным твердым носителем или же с обоими указанными носителями, а затем, если необходимо, придания композиции нужной формы.

Составы по настоящему изобретению, пригодные для орального назначения, могут быть в форме дискретных доз, таких как капсулы, бляшки, таблетки или лепешки, каждая из которых содержит определенное количество активного ингредиента: в форме порошка или гранул, в форме раствора или суспензии в водной или неводной среде или в форме водно-масляной эмульсии. Активный ингредиент можно также назначать в форме болюсов, лекарственной кашки или пасты.

Таблетки могут готовиться путем прессования или заливки активного ингредиента в пресс-форму, необязательно вместе с одним или большим количеством вспомогательных ингредиентов. Таблетки можно приготовить, спрессовывая в соответствующей машине активный ингредиент в виде порошка или гранул, необязательно смешанного со связующим, смазывающим средством, инертным разбавителем, поверхностно-активным веществом и диспергирующим средством. Таблетки, полученные с помощью пресс-формы, можно приготовить прессованием в соответствующей машине смеси порошкообразного активного ингредиента и подходящего носителя, увлажненного инертным жидким разбавителем.

Составы для ректального назначения могут быть в форме суппозиторий, содержащих активный ингредиент и носитель, такой как шоколадное масло, или в форме клизмы.

Составы, пригодные для парентерального назначения, удобно готовить с использованием стерильной масляной или водной композиции активного ингредиента, которая предпочтительно изотонична с кровью пациента.

Составы, пригодные для внутрисуставного назначения, могут быть в форме стерильных водных составов активного ингредиента, которые могут быть в микрокристаллической форме, например в виде жидкой микрокристаллической суспензии. Липосомные составы и системы на основе биоразлагаемых полимеров также могут использоваться как для внутрисуставного, так и для внутриглазного назначения активного ингредиента.

Составы, пригодные для местного назначения, в том числе глазные композиции, включают жидкие или полужидкие композиции, такие как линименты, лосьоны, аппликации, эмульсии масла в жидкости и жидкости в масле, такие как кремы, мази, в том числе глазные мази, пасты, или растворы, или суспензии, такие как капли, в том числе глазные капли.

Для лечения астмы могут использоваться ингаляции порошка, самораспыляющиеся или пульверизующиеся композиции, распыляемые с помощью баллончика, пульверизатора или распылителя. Распыляемые составы преимущественно содержат частицы с размерами от 10 до 100 мкм.

Указанные составы наиболее предпочтительно готовятся в виде тонко измельченного порошка для внутрилегочного назначения с помощью порошкового ингалятора или самораспыляющихся составов на основе порошковых дисперсий. В случае самораспыляющихся растворов и распыляемых композиций эффект достигается либо за счет подбора вентиля, имеющего требуемые параметры (т.е. способного генерировать аэрозоль с нужными размерами частиц), либо путем включения активного ингредиента в форме суспендированного порошка с контролируемым размером частиц. Указанные самораспыляющиеся композиции могут представлять собой как порошковые диспергирующиеся композиции, так и композиции, в которых активный ингредиент диспергирован в виде капель раствора или суспензии.

Составы на основе самораспыляющихся порошковых дисперсий предпочтительно содержат диспергированные частицы или твердые активные ингредиенты и жидкий газ-вытеснитель с температурой кипения ниже 18^oC при атмосферном давлении. Жидким газом-вытеснителем может быть любой газ-вытеснитель, для которого известно, что он подходит для медицинского использования и может содержат одно или большее количество C₁-C₆ углеводородов или их смесей или галоидированных (C₁-C₆) углеводородов или их смесей, особенно предпочтительными являются хлорированные и фторированные (C₁-C₆) углеводороды. В общем случае газ-вытеснитель составляет от 45 до 99% от веса состава, в то время как активный ингредиент составляет от 1 промиле до 0,1% вес. от состава композиции.

Помимо уже указанных ингредиентов составы по изобретению могут включать один или несколько дополнительных ингредиентов, таких как разбавители, буферные добавки, ароматизирующие соединения, связующие, поверхностно-активные вещества, загустители, смазывающие средства, консерванты, в частности метилгидроксибензоат (в том числе антиоксиданты), эмульгирующие средства и т.п.

Композиции могут содержат также другие терапевтически активные соединения, которые обычно используют при лечении указанных ранее патологических состояний.

В настоящем изобретении также рассматривается способ лечения пациентов, при этом указанный способ заключается в назначении пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества одного или большего количества соединений формулы I в чистом виде или в сочетании с одним или большим количеством терапевтически активного соединения, которое обычно используют при лечении указанных патологических состояний. Лечение с использованием заявляемых соединений и/или других терапевтически активных соединений может быть непрерывным или проводится через определенные промежутки времени.

При лечении системных заболеваний назначаются дневные дозы, включающие 0,1-100 мкг, предпочтительно 0,2-25 мкг соединения формулы I. При местном лечении кожных заболеваний назначаются мази, кремы или лосьоны, содержащие 0,1-500 мкг, преимущественно 1-100 мкг соединения I. Составы для орального назначения готовятся преимущественно в виде таблеток, капсул или капель, содержащих 0,05-50 мкг, преимущественно в виде таблеток, капсул или капель, содержащих 0,05-50 мкг, преимущественно 0,1-25 мкг соединения формулы I на одну единичную дозу.

Изобретение далее поясняется следующими неограничивающими его Препаратами и Примерами:

Препараты и Примеры

Выборочные соединения формулы I представлены в таблице 1. Фрагменты в боковой цепи по схеме 1 и промежуточные соединения по схеме 2, приведенные в Препаратах, идентифицируются с помощью номеров соответствующих формул в таблицах 2 и 3 соответственно. Они используются для пояснения типичных синтезов выборочных соединений формулы I.

Для спектров ядерного магнитного резонанса (300 МГц) величины химических сдвигов () приводятся для растворов в дейтерохлороформе относительно тетраметилсилана ( = 0) или хлороформа ( = 7,25), используемых в качестве внутреннего стандарта. Значения для мультиплета, как разрешенного (дублет (д), триплет (т), квартет (кв)), так и неразрешенного (м), приведены приблизительно для средней точки, за исключением того случая, когда приводится интервал (с = синглет, ш = широкий). Константы взаимодействия (J) приведены в герцах и иногда округлены до целого значения.

Эфир обозначает диэтиловый эфир, который сушат над натрием. ТГФ сушат над смесью натрий-бензофенон. Петролейный эфир обозначает пентановую фракцию. Реакции, если специально не оговаривается, проводят при комнатной температуре. Выделение продуктов реакций включает разбавление указанным растворителем (в противном случае органическим растворителем, используемым в реакции), промывку водой и насыщенным раствором соли, сушку над сульфатом магния и упаривание в вакууме с получением остатка.

Препарат 1: Соединение 2

К раствору 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20(S)- формил-9,10-секопрегна-5(E), 7(E), 10(19)-триена (3,44 г, 6 ммол) (1) в N,N-диметилформамиде (150 мл) добавляют 1,4-диазабицикло(2.2.2)октан (600 мг, 5,3 ммол), моногидрат ацетата меди (90 мг, 0,45 ммол) и 2.2"-бипиридил (72 мг, 0,45 ммол). Через раствор при интенсивном перемешивании при температуре 40^oC барботируют воздух в течение 6 дней.

Реакционную смесь разбавляют этилацетатом (500 мл), промывают водой (2 х 100 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (3 х 50 мл) и сушат над сульфатом магния. Этилацетат упаривают и твердый остаток очищают хроматографически (силикагель, элюент - 10% эфира в петролейном эфире) и получают целевое соединение.

Спектр ЯМР: 0,037 (с, 3H), 0,043 (с, 3H), 0,056 (с, 6H), 0,49 (с, 3H), 0,84 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,5-2,30 (м, 13H), 2,13 (с, 3H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,70 (т, 1H), 2,89 (широкий д, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,94 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,83 (д, 1H), 6,43 (д, 1H) м.д.

Препарат 2: Соединение 3 и его 20S-изомер

Соединение 2 (Препарат 1) (3,10 г, 5,5 мол) растворяют в тетрагидрофуране (140 мл) и добавляют боргидрид натрия (0,35 г, 3,3 мол). Затем по каплям в течение 15 минут добавляют метанол. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 минут, разбавляют этилацетатом (560 мл). Промывают водой (5 х 150 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл), сушат над сульфатом магния и упаривают, получая бесцветное масло. Маслянистый остаток очищают хроматографически (силикагель, элюент - 15% этилацетата в петролейном эфире) и перекристаллизовывают из метанола, получая соединение 3.

Спектр ЯМР: 0,05 (м, 12H), 0,62 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,10 - 2,10 (м, 14H), 1,15 (д, 3H), 2,30 (широкий д, 1H), 2,53 (дублет д, 1H), 2,89 (м, 1H), 3,71 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,93 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,81 (д, 1H), 6,45 (д, 1H) м.д.

Фракции, содержащие более полярный 20S-изомер, упаривают и получают бесцветный остаток, который перекристаллизовывают из метанола.

Спектр ЯМР: 0,052 (широкий д, 12H), 0,54 (с, 3H), 0,85 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,22 (д, 3H), 1,20-2,10 (м, 14H), 2,30 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (м, 1H), 3,72 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,94 (широкий с, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,82 (д, 1H), 6,44 (д, 1H) м.д.

Препарат 3: 3,3-дифтор-2-метил-5-гексен-2-ол (Соединение 4)

К раствору этилового эфира 2,2-дифтор-4-пентановой кислоты (5,0 г, 30,5 ммол) в сухом эфире (50 мл) при температуре минус 25^oC по каплям добавляют раствор метилмагнийбромида (3,0 М раствор, 30,5 мл). Смесь перемешивают при температуре минус 25^oC в течение получаса, а затем в течение 1 ч при температуре ^oC. Выливают реакционную смесь в насыщенный раствор хлорида аммония (25 мл). Органическую фазу отделяют, а водную фазу дополнительно экстрагируют эфиром (2 х 25 мл). Органические вытяжки объединяют, сушат над сульфатом магния и упаривают. После испарительной хроматографии (50 г силикагеля, элюент - 5% эфира в петролейном эфире) получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 1,32 (т, 6H), 1,97 (широкий с, 1H), 2,74 (м, 2H), 5,20 (м, 2H), 5,92 (м, 1H) м.д.

Препарат 4: 3,3-дифтор-2-метил-5-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]-5-гексан (Соединение 5)

Раствор Соединения 4 (3,8 г, 25,3 ммол) и свежеперегнанного 3,4-дигидро-2H-пирана (4,59 мл, 50,6 ммол) в дихлорметане (50 мл) перемешивают при комнатной температуре в присутствии кислого силикагеля (150 мг). После перемешивания в течение 1 ч катализатор удаляют фильтрованием и добавляют 1-2 капли триэтиламина. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и остаток очищают колоночной хроматографией (50 г силикагеля, элюент - 5% эфира в петролейном эфире) и получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 1,35 (т, 6H), 1,53 (м, 4H), 1,69 (м, 1H), 1,84 (м, 1H), 2,74 (м, 2H), 3,48 (м, 1H), 3,94 (м, 1H), 4,90 (м, 1H), 5,19 (м, 2H), 5,91 (м, 1H) м.д.

Препарат 5: 4,4-дифтор-5-метил-5-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]-1-гексанол (Соединение 6)

Комплекс боран-метилсульфид (21,3 мл, 0,213 мол) добавляют при 0^oC в атмосфере аргона к перемешиваемому раствору Соединения 5 (5,0 г, 21,3 ммол) в сухом ТГФ (100 мл). Реакционную смесь перемешивают при 0^oC в течение 2 ч, а затем последовательно обрабатывают водой (20 мл), раствором едкого натра (3М, 55 мл) и перекисью водорода (30%-ный раствор в воде, 30 мл). Полученную смесь перемешивают в течение 1 ч при температуре 25^oC, разбавляют водой (150 мл), экстрагируют эфиром и промывают насыщенными растворами бикарбоната натрия и соли. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, растворитель отгоняют в вакууме и сырой продукт анализируют методом ПМР спектроскопии, который показывает, что соотношение между целевым соединением и соответствующим продуктом по правилу Марковникова составляет 71:29. Смесь очищают методом испарительной хроматографии (50 г силикагеля, элюент - от 10% до 20% этилацетата в петролейном эфире) и получают чистый первичный спирт в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 1,34 (широкий с, 6H), 1,53 (м, 4H), 1,68 (м, 1H), 1,82 (м, 4H), 1,92-2,17 (м, 2H), 3,48 (м, 1H), 3,70 (широкий т, 2H), 3,93 (м, 1H), 4,89 (м, 1H) м.д.

Препарат 6: 4,4-дифтор-5-метил-5-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]- 1-(4-толуолсульфонилокси)гексан (Соединение 7)

Соединение 6 (2,85 г, 11,3 ммол) растворяют в дихлорметане (75 мл) и пиридине (10 мл) и к полученному раствору при перемешивании и охлаждении льдом добавляют п-толуолсульфонилхлорид (7,11 г, 37,3 ммол). Оставляют реакционную смесь на ночь при комнатной температуре, а затем выливают в смесь этилацетата и воды. Органический слой последовательно промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, насыщенным раствором соли, сушат и упаривают в вакууме. После испарительной хроматографии (50 г силикагеля, элюент - 5% этилацетата в петролейном эфире) получают целевой тозилат в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 1,30 (широкий с, 6H), 1,40-2,12 (м, 10H), 2,45 (с, 3H), 3,47 (м, 1H), 3,90 (м, 1H), 4,10 (т, 2H), 4,85 (м, 1H), 7,35 (д, 2H), 7,79 (д, 2H) м.д.

Препарат 7: 3-этил-4,4-дифтор-6-гептен-3-ол (Соединение 8)

К раствору этилового эфира 2,2-дифтор-4-пентановой кислоты (5,0 г, 30,5 ммол) в сухом эфире (50 мл) при температуре минус 78^oC по каплям добавляют раствор этиллития (1,7 М раствор, 35,9 мл). После перемешивания в течение 30 минут при температуре минус 78^oC добавляют насыщенный водный раствор хлорида аммония (25 мл). Органическую фазу отделяют, а водную фазу дважды экстрагируют эфиром (по 25 мл). Органические вытяжки объединяют, последовательно промывают водой (2 х 50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл), сушат и упаривают в вакууме. После испарительной хроматографии (75 г силикагеля, элюент - от 5% до 10% этилацетата в петролейном эфире) получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 0,94 (м, 6H), 1,68 (м, 4H), 1,76 (с, 1H), 2,73 (м, 2H), 5,20 (м, 2H), 5,93 (м, 1H) м.д.

Препарат 8: 3-этил-4,4-дифтор-3-O-метоксиметил-6-гептен (Соединение 9)

К перемешиваемому раствору Соединения 8 (2,83 г, 15,9 ммол) в сухом хлороформе (100 мл) добавляют метилаль (75 мл) и пентоксид фосфора (25 г). После перемешивания в течение 2 ч смесь выливают в охлажденный льдом раствор бикарбоната натрия. Органическую фазу отделяют и промывают насыщенным раствором соли, сушат над хлоридом кальция и упаривают в вакууме. Остаток очищают хроматографически (75 г силикагеля, элюент - от 5% до 10% этилацетата в петролейном эфире) и получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 0,95 (м, 6H), 1,79 (м, 4H), 2,71 (м, 2H), 3,40 (с, 3H), 4,76 (с, 2H), 5,20 (м, 2H), 5,90 (м, 1H) м.д.

Препарат 9: 5-этил-4,4-дифтор-5-метил-5-O-метоксиметил-1-гептанол (Соединение 10)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 5, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 9, а не Соединение 5.

Спектр ЯМР: 0,94 (широкий т, 6H), 1,60-2,13 (м, 8H), 2,56 (широкий с, 1H), 3,40 (м, 3H), 3,67 (т, 2H), 4,75 (с, 2H) м.д.

Препарат 10: 5-этил-4,4-дифтор-5-метил-5-O-метоксиметил-1-(4- толуолсульфонилокси)гептан (Соединение 11)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 6, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 10, а не Соединение 6.

Спектр ЯМР: 0,92 (широкий т, 6H), 1,60-2,10 (м, 8H), 2,45 (широкий с, 3H), 3,38 (с, 3H), 4,09 (т, 2H), 4,70 (с, 2H), 7,35 (д, 2H), 7,79 (д, 2H) м. д.

Препарат 11: 3,3-дихлор-2-метил-5-гексен-2-ол (Соединение 12)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 3, за исключением того, что в качестве исходного берут метиловый эфир 2,2-дихлор-4-пентановой кислоты, а не этиловый эфир 2,2-дифтор-4-пентановой кислоты.

Спектр ЯМР: 1,54 (с, 6H), 2,27 (широкий с, 1H), 3,02 (м, 2H), 5,27 (м, 2H), 6,11 (м, 1H) м.д.

Препарат 12: 3,3-дихлор-2-метил-5-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]-5-гексен (Соединение 13)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 4, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 12, а не Соединение 4.

Спектр ЯМР: 1,57 (с, 3H), 1,60 (с, 3H), 1,50-1,90 (м, 6H), 2,92-3,15 (м, 2H), 3,51 (м, 1H), 3,97 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,17 - 5,32 (м, 2H), 6,13 (м, 1H) м.д.

Препарат 13: 4,4-дихлор-5-метил-5-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]-1-гексанол (Соединение 14)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 5, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 13, а не Соединение 5.

Спектр ЯМР: 1,56 (с, 3H), 1,60 (с, 3H), 1,50 - 2,15 (м, 9H), 2,35 (м, 2H), 3,50 (м, 1H), 3,75 (м, 2H), 3,97 (м, 1H), 4,99 (м, 1H) м.д.

Препарат 14: 4,4-дихлор-5-метил-5-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]- 1-(4-толуолсульфонилокси)гексан (Соединение 7)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 6, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 14, а не Соединение 6.

Спектр ЯМР: 1,51 (с, 3H), 1,56 (с, 3H), 1,50-2,42 (м, 10H), 2,45 (м, 3H), 3,50 (м, 1H), 3,94 (м, 1H), 4,15 (т, 2H), 4,95 (м, 1H), 7,36 (д, 2H), 7,80 (м, 2H) м.д.

Препарат 15: 3-этил-4,4-дифтор-3-триэтилсилилокси-6-гептен (Соединение 16)

К перемешиваемому раствору Соединения 8 (1,7 г, 9,54 ммол) в дихлорметане (10 мл) при температуре 0^oC добавляют 2,6-лутидин (2,26 мл, 19,1 ммол) и триэтилсилилтрифторметансульфонат (2,37 мл, 10,5 ммол) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляют эфир (50 мл) и воду (75 мл). Органическую фазу отделяют, промывают водой (2 х 50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл), сушат и упаривают в вакууме. Сырой продукт очищают хроматографически (50 г силикагеля, элюент - 1% этилацетата в петролейном эфире) и получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 0,62 (кв, 6H), 0,95 (т, 9H), 0,85-1,00 (м, 6H), 1,50-1,85 (м, 4H), 2,68 (м, 2H), 5,10-5,25 (м, 2H), 5,91 (м, 1H) м.д.

Препарат 16: 3-этил-4,4-дифтор-4-триэтилсилилокси-1-гексанол (Соединение 17)

Соединение 16 (1,41 г, 4,82 ммол) растворяют в дихлорметане (100 мл) и охлаждают раствор до минус 78^oC. Через раствор пропускают смесь озона в кислороде до тех пор, пока он не приобретает светло-голубую окраску. Для удаления избытка озона раствор продувают азотом, добавляют диметилсульфид (2 мл) и раствору дают медленно нагреться до комнатной температуры. Органический слой дважды промывают водой, сушат над хлоридом кальция и упаривают при пониженном давлении.

К перемешиваемому охлажденному льдом раствору неочищенного альдегида в ТГФ (3 мл) и этаноле (10 мл) добавляют боргидрид натрия (219 мг, 5,78 ммол). Через полчаса выливают в смесь этилацетата и воды, органический слой отделяют, промывают насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния и упаривают. После испарительной хроматографии (50 г силикагеля, элюент - 1% этилацетата в петролейном эфире) получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 0,61 (кв, 6H), 0,93 (т, 9H), 0,85-1,00 (м, 6H), 1,50-1,82 (м, 4H), 1,91 (широкий т, 1H), 2,19 (м, 2H), 3,87 (кв, 2H) м.д.

Препарат 17: 3,3-дихлор-4-метил-4-[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]-1-пентанол (Соединение 18)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 16, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 13, а не Соединение 16.

Спектр ЯМР: 1,57 (с, 3H), 1,61 (с, 3H), 1,50-1,95 (м, 6H), 2,52-2,77 (м, 3H), 3,52 (м, 1H), 3,90-4,15 (м, 3H), 4,97 (м, 1H) м.д.

Препарат 18: 1-бром-4-фтор-4-метилпентан (Соединение 19)

К раствору диэтиламиносульфотрифторида (97,78 мл, 59,3 ммол) в сухом дихлорметане (25 мл) при температуре минус 70^oC по каплям добавляют 5-бром-2-метил-2-пентанол (7,15 г, 39,5 ммол) в сухом дихлорметане (25 мл). Смесь перемешивают при минус 70^oC в течение 1 ч, 0,5 ч при температуре 0^oC и 1 ч при комнатной температуре. Смесь при температуре 0^oC медленно выливают в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют продукт дихлорметаном. Органический слой высушивают (над сульфатом магния), отфильтровывают и упаривают досуха. Остаток очищают колоночной хроматографией (30 г силикагеля, элюент - 5% этилацетата в петролейном эфире) и получают 5,94 г (82%) целевого продукта в виде бесцветного масла.

Спектр ЯМР: 1,33 (с, 3H), 1,40 (с, 3H), 1,75 (м, 2H), 1,98 (м, 2H), 3,43 (т, 2H) м.д.

Препарат 19: 1-хлор-4-этил-4-фторгексан (Соединение 20)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 18, за исключением того, что в качестве исходного берут 6-хлор-3-этил-3-гексанол, а не 5-бром-2-метил-2-пентанол.

Спектр ЯМР: 0,90 (т, 6H), 1,55-1,92 (м, 8H), 3,56 (т, 2H) м.д.

Препарат 20: 1-бром-5-фтор-5-метилгексан (Соединение 21)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 18, за исключением того, что в качестве исходного берут 6-бром-2-метил-2-гексанол, а не 5-бром-2-метил-2-пентанол.

Спектр ЯМР: 1,35 (д, J = 21,4 Гц, 6H), 1,50-1,70 (м, 4H), 1,88 (м, 2H), 3,43 (т, 2H) м.д.

Препарат 21: 1-бром-4-этил-5-фторгептан (Соединение 22)

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 18, за исключением того, что в качестве исходного берут 7-бром-3-этил-3-гептанол, а не 5-бром-2-метил-2-пентанол.

Спектр ЯМР: 0,89 (т, 6H), 1,45-1,72 (м, 8H), 1,88 (м, 2H), 3,43 (т, 2H) м.д.

Общая процедура 1: O-алкилирование Соединение 3 с образованием Соединения III

В атмосфере азота к перемешиваемому раствору Соединения 3 (1,0 ммол) в сухом ТГФ (10 мл) последовательно добавляют гидрид калия (0,4 мл, 20%-ная суспензия в масле), 18-краун-6 (264 мг) и соответствующий алкилирующий агент R³-Z. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч,

разбавляют эфиром (100 мл) и промывают водой (3 х 50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). После сушки и удаления растворителя в вакууме продукт очищают хроматографически (силикагель, элюент - 10% эфира в петролейном эфире) и получают Соединение III.

Препарат 22: Соединение 23

Способ общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 7

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,08 (д, 3H), 1,32 (широкий с, 6H), 1,05-2,20 (м, 23H), 2,30 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,86 (широкий д, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,46 (м, 1H), 3,62 (м, 1H), 3,91 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,88 (м, 1H), 4,94 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м.д.

Препарат 23: Соединение 24

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 11

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 0,93 (м, 6H), 1,08 (д, 3H), 1,03-2,35 (м, 22H), 2,54 (дублет д, 1H), 2,86 (широкий д, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,63 (м, 1H), 4,22 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,72 (с, 1H), 4,94 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м.д.

Препарат 24: Соединение 25

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 15

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,85 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,09 (д, 3H), 1,00-2,50 (м, 30H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,86 (широкий д, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,48 (м, 1H), 3,69 (м, 1H), 3,95 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,52 (м, 1H), 4,94 (м, 1H), 4,98 (м, 2H), 5,80 (д, 1H), 6,45 (д, 1H) м.д.

Препарат 25: Соединение 26

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 19

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,07 (д, 3H), 1,30 (с, 3H), 1,37 (с, 3H), 1,00-1,85 (м, 14H), 1,92 (м, 1H), 2,03 (широкий т, 1H), 2,14 (широкий д, 1H), 2,30 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (широкий д, 1H), 3,23 (м, 2H), 3,55 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,93 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м. д.

Препарат 26: Соединение 27

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 20

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,90 (с, 9H), 0,80-0,95 (м, 6H), 1,08 (д, 3H), 1,05-1,98 (м, 19H), 2,03 (широкий т, 1H), 2,16 (широкий д, 1H), 2,31 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (м, 1H), 3,18 (м, 1H), 3,26 (м, 1H), 3,57 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,93 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м.д.

Препарат 27: Соединение 28

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 21

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,08 (д, 3H), 1,32 (д, J = 21,5 Гц, 6H), 1,10-1,85 (м, 16H), 1,92 (м, 1H), 2,03 (широкий т, 1H), 2,15 (широкий д, 1H), 2,30 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (широкий д, 1H), 3,18 (м, 1H), 3,25 (м, 1H), 3,58 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,94 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м.д.

Препарат 28: Соединение 29

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: Соединение 22

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 0,80-0,92 (м, 6H), 1,07 (д, 3H), 1,10-2,00 (м, 21H), 2,04 (м, 1H), 2,16 (широкий д, 1H), 2,30 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (широкий д, 1H), 3,17 (м, 1H), 3,25 (м, 1H), 3,58 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,54 (м, 1H), 4,93 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м.д.

Препарат 29: Соединение 30

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: 1-бром-5-хлорпентан

т.пл.: 74-75^oC

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,54 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,90 (с, 9H), 1,07 (д, 3H), 1,00-1,86 (м, 16H), 1,92 (м, 1H), 2,04 (т, 1H), 2,13 (широкий д, 1H), 2,31 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (широкий д, 1H), 3,12-3,35 (м, 2H), 3,52 (т, 2H), 3,53 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,93 (м, 1H), 4,99 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м.д.

Препарат 30: Соединение 31

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: 6-хлор-п-метилбензолсульфонат-1-гексанол

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,54 (с, 3H), 0,86 (с, 9H), 0,89 (с, 9H), 1,07 (д, 3H), 1,05-1,85 (м, 18H), 1,91 (м, 1H), 2,03 (широкий т, 1H), 2,13 (широкий д, 1H), 2,31 (широкий д, 1H), 2,55 (дублет д, 1H), 2,87 (широкий д, 1H), 3,12-3,32 (м, 2H), 3,53 (т, 2H), 3,54 (м, 1H), 4,21 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 4,93 (м, 1H), 4,94 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,80 (д, 1H), 6,46 (д, 1H) м. д.

Препарат 31: Соединение 32

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: 4-(1-этоксиэтокси)-3,3-дифтор-1-иод-4-метилпентан

Препарат 32: Соединение 33

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: (R)-4-(1-этоксиэтокси)-3-фтор-1-иод-4-метилпентан

Препарат 33: Соединение 34

Способ: Общая процедура 1

Алкилирующий агент: (S)-4-(1-этоксиэтокси)-3-фтор-1-иод-4-метилпентан

Препарат 34: Соединение 35

Раствор Соединения 17 (889 мг, 3,0 ммол) и пиридина (242 мкл, 3,0 ммол) в дихлорметане (20 мл) медленно добавляют под аргоном к раствору ангидрида трифторметансульфокислоты (566 мкл, 3,5 ммол) в дихлорметане (200 мл) при температуре ^oC. Перемешивают в течение 15 минут и раствор быстро промывают водой (10 мл). После сушки (сульфат магния + бикарбонат натрия) и упаривания растворителя (над несколькими миллиграммами бикарбоната натрия) получают трифлат в виде масла желтоватого цвета, который по причине его неустойчивости немедленно используют на следующей стадии алкилирования.

Раствор полученного выше трифлата в сухом ТГФ (5 мл) добавляют по каплям с помощью шприца к смеси Соединения 3 (561 мг, 1,0 ммол), гидрида калия (0,4 мл, 20%-ная дисперсия в масле) и 18-краун-6 (264 мг, 1,0 ммол) в сухом ТГФ (10 мл). Полученную смесь перемешивают под аргоном в течение 1 ч, разбавляют эфиром (100 мл) и промывают водой (2 х 50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). После сушки и удаления растворителя в вакууме продукт очищают хроматографически (силикагель, элюент - 5% эфира в петролейном эфире) и получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Препарат 35: Соединение 36

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 34, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 18, а не Соединение 17.

Общая процедура 2: Изомеризация Соединения III в соответствующее Соединение IV

Раствор Соединения III (приблизительно 0,2 г), антрацена (200 мг) и триэтиламина (2 капли) в дихлорметане (15 мл) в колбе из пирекса в атмосфере азота облучают в течение 30 минут при температуре 10^oC светом УФ лампы высокого давления, тип ТQ718 2 (Ханау). Раствор отфильтровывают и упаривают в вакууме, а остаток очищают хроматографически и получают Соединение IV.

Препарат 36: Соединение 37

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 23

Элюент при хроматографии: от 2 до 5% этилацетата в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 1,06 (д, 3H), 1,31 (широкий с, 6H), 1,02-2,25 (м, 24H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,81 (широкий д, 1H), 3,23 (м, 2H), 3,46 (м, 1H), 3,61 (м, 1H), 3,91 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,85 (м, 1H), 4,88 (м, 1H), 5,16 (д, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,23 (д, 1H) м.д.

Препарат 37: Соединение 38

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 24

Элюент при хроматографии: от 2 до 5% этилацетата в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,54 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 0,94 (м, 6H), 1,07 (д, 3H), 1,02-2,38 (м, 22H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,82 (широкий д, 1H), 3,23 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,62 (м, 1H), 4,20 (м, 1H), 4,37 (м, 1H), 4,73 (с, 2H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,24 (д, 1H) м.д.

Препарат 38: Соединение 39

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 25

Элюент при хроматографии: от 2 до 5% этилацетата в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,54 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 1,08 (д, 3H), 1,00-2,50 (м, 31H), 2,81 (широкий д, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,48 (м, 1H), 3,69 (м, 1H), 3,95 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,37 (м, 1H), 4,85 (м, 1H), 4,98 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,23 (д, 1H) м.д.

Препарат 39: Соединение 40

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 26

Элюент при хроматографии: 2% эфира в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,05 (м, 6H), 0,06 (с, 6H), 0,54 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 1,07 (д, 3H), 1,30 (с, 3H), 1,37 (с, 3H), 1,02-1,93 (м, 15H), 1,99 (широкий т, 1H), 2,13 (широкий д, 1H), 2,21 (дублет д, 1H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,83 (широкий д, 1H), 3,22 (м, 2H), 3,56 (м, 1H), 4,19 (м, 1H), 4,37 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,24 (д, 1H) м.д.

Препарат 40: Соединение 41

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 27

Элюент при хроматографии: 1% эфир в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,55 (с, 3H), 0,88 (с, 18H), 0,75-1,00 (м, 6H), 1,08 (д, 3H), 1,05-1,93 (м, 19H), 2,00 (широкий т, 1H), 2,16 (широкий д, 1H), 2,22 (дублет д, 1H), 2,45 (дублет д, 1H), 2,83 (широкий д, 1H), 3,18 (м, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,60 (м, 1H), 4,20 (м, 1H), 4,38 (м, 1H), 4,87 (м, 1H), 5,18 (м, 1H), 6,01 (д, 1H), 6,25 (д, 1H) м.д.

Препарат 41: Соединение 42

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 28

Элюент при хроматографии: 2% этилацетата в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 1,07 (д, 3H), 1,32 (д, J = 21,5 Гц, 6H), 1,10-1,90 (м, 17H), 1,98 (широкий т, 1H), 2,15 (широкий д, 1H), 2,20 (дублет д, 1H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,82 (широкий д, 1H), 3,10-3,30 (м, 2H), 3,56 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,98 (д, 1H), 6,23 (д, 1H) м.д.

Препарат 42: Соединение 43

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 29

Элюент при хроматографии: 2% этилацетата в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,06 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,88 (с, 18H), 0,89 (т, 6H), 1,06 (д, 3H), 1,05-2,08 (м, 22H), 2,15 (широкий д, 1H), 2,20 (дублет д, 1H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,82 (широкий д, 1H), 3,16 (м, 1H), 3,24 (м, 1H), 3,58 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,24 (д, 1H) м.д.

Препарат 43: Соединение 44

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 30

Элюент при хроматографии: 3% эфира в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,88 (с, 18H), 1,06 (д, 3H), 1,00-1,93 (м, 17H), 1,99 (т, 1H), 2,12 (широкий д, 1H), 2,21 (дублет д, 1H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,82 (широкий д, 1H), 3,12-3,30 (м, 2H), 3,52 (т, 2H), 3,53 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,24 (д, 1H) м.д.

Препарат 44: Соединение 45

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 31

Элюент при хроматографии: 3% эфира в петролейном эфире

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 1,06 (д, 3H), 1,05-1,93 (м, 19H), 1,98 (широкий т, 1H), 2,12 (широкий д, 1H), 2,22 (дублет д, 1H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,82 (м, 1H), 3,12-3,30 (м, 2H), 3,52 (т, 2H), 3,48-3,60 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,37 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,24 (д, 1H) м.д.

Препарат 45: Соединение 46

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 32

Препарат 46: Соединение 47

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 33

Препарат 47: Соединение 48

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 34

Препарат 48: Соединение 49

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 35

Препарат 49: Соединение 50

Способ: Общая процедура 2

Исходное вещество: Соединение 36

Препарат 50: Соединение 51

Раствор Соединения 44 (170 мг, 0,25 ммол) и тетрабутиламмонийазида (285 мг, 1 ммол) в этилацетате (5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 55 ч. Этилацетат отгоняют в вакууме, остаток экстрагируют эфиром (3 х 10 мл). Эфирные вытяжки объединяют, упаривают в вакууме и очищают хроматографически (силикагель, элюент - 2% эфира в петролейном эфире) и получают целевое соединение в виде бесцветного масла.

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,88 (с, 18H), 1,06 (д, 3H), 1,05-1,93 (м, 17H), 1,98 (т, 1H), 2,12 (широкий д, 1H), 2,21 (дублет д, 1H), 2,44 (дублет д, 1H), 2,83 (широкий дублет, 1H), 3,25 (т, 1H), 3,13-3,32 (м, 2H), 3,55 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,99 (д, 1H), 6,24 (м, 1H) м.д.

Препарат 51: Соединение 52

Соединение получают, используя способ, приведенный для Препарата 50, за исключением того, что в качестве исходного берут Соединение 45, а не Соединение 44.

Спектр ПМР: 0,05 (м, 12H), 0,53 (с, 3H), 0,87 (с, 18H), 1,06 (д, 3H), 1,05-2,05 (м, 20H), 2,12 (широкий д, 1H), 2,21 (дублет д, 1H), 2,43 (дублет д, 1H), 2,82 (м, 1H), 3,25 (т, 1H), 3,12-3,30 (м, 2H), 3,54 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,36 (м, 1H), 4,86 (м, 1H), 5,17 (м, 1H), 5,98 (д, 1H), 6,23 (д, 1H) м.д.

Общая процедура 3А: Превращение Соединения IV в соответствующее Соединение I путем снятия защиты с помощью HF

Соединение IV (приблизительно 0,2 г) растворяют в этилацетате (0,6 мл) и при интенсивном перемешивании добавляют ацетонитрил (8 мл). Добавляют 5%-ный раствор плавиковой кислоты в смеси ацетонитрил/вода (8:1, 4,0 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 90 минут. Добавляют избыток 4N раствора едкого натра и экстрагируют этилацетатом. Остаток очищают хроматографически (элюент - этилацетат) и получают Соединение I.

Общая процедура 3Б: Превращение Соединения IV в соответствующее Соединение I путем снятия защиты с помощью тетра-н-бутиламмонийфторида

Раствор Соединения IV (0,3 ммол) и тетра-н-бутиламмонийфторида (3,0 ммол) в ТГФ (10 мл) перемешивают при температуре 65^oC в течение 1 ч. Реакционную смесь выливают в смесь этилацетата и 1%-ного раствора бикарбоната натрия. После выделения и хроматографической очистки (элюент - этилацетат) и получают целевое Соединение I.

Пример 1: 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(4,4-дифтор-5-гидрокси-5- метилгексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 108)

Способ: Общая процедура 3А

Исходное вещество: Соединение 37

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 1,08 (д, 3H), 1,30 (широкий с, 6H), 1,10-2,20 (м, 20H), 2,31 (дублет д, 1H), 2,60 (м, 1H), 2,83 (широкий д, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,63 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,32 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,38 (д, 1H) м.д.

Пример 2: 1(S),3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-этил-4,4-дифтор-5- гидрокси-5-метилгексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 109)

Способ: Общая процедура 3А

Исходное вещество: Соединение 38

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 0,92 (широкий т, 6H), 1,08 (д, 3H), 1,05-2,20 (м, 24H), 2,31 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,83 (широкий д, 1H), 3,23 (м, 2H), 3,63 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,33 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,39 (д, 1H) м.д.

Пример 3: 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(4,4-дихлор-5-гидрокси-5- метилгексилокси)-9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 129)

Способ: Общая процедура 3А

Исходное вещество: Соединение 39

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 1,09 (д, 3H), 1,50 (с, 3H), 1,52 (с, 3H), 1,00-2,50 (м, 21H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,83 (широкий д, 1H), 3,25 (м, 2H), 3,69 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,32 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,38 (д, 1H) м.д.

Пример 4: 1(S),3(R)-дигидрокси-20(R)-(4-фтор-4-метилпентилокси)- 9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 116)

Способ: Общая процедура 3Б

Исходное вещество: Соединение 40

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 1,08 (д, 3H), 1,31 (с, 3Н), 1,38 (с, 3H), 2,32 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 1,02-2,75 (м, 19H), 2,84 (широкий д, 1H), 3,23 (м, 2H), 3,56 (м, 1H), 4,24 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,32 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,39 (д, 1H) м.д.

Пример 5: 1(S),3(R)-дигидрокси-20(R)-(4-этил-4-фторгексилокси)- 9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 117)

Способ: Общая процедура 3Б

Исходное вещество: Соединение 41

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 0,88 (дублет т, 6H), 1,08 (д, 3H), 1,10-2,10 (м, 22H), 2,16 (широкий д, 1H), 2,31 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,18 (м, 1H), 3,26 (м, 1H), 3,58 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,33 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,38 (д, 1H) м.д.

Пример 6: 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-фтор-5-гексилокси)- 9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 118)

Способ: Общая процедура 3Б

Исходное вещество: Соединение 42

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 1,08 (д, 3H), 1,33 (д, J = 21,5 Гц, 6H), 1,10-2,10 (м, 20H), 2,16 (широкий д, 1H), 2,31 (дублет д, 1H), 2,60 (м, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,10-3,30 (м, 2H), 3,58 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,41 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,32 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,38 (д, 1H) м.д.

Пример 7: 1(S),3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-этил-4-фторгептилокси)- 9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 119)

Способ: Общая процедура 3Б

Исходное вещество: Соединение 43

Спектр ПМР: 0,56 (с, 3H), 0,88 (дублет т, 6H), 1,08 (д, 3H), 1,10-2,10 (м, 24H), 2,16 (широкий д, 1H), 2,31 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,83 (м, 1H), 3,17 (м, 1H), 3,24 (м, 1H), 3,58 (м, 1H), 4,22 (м, 1H), 4,42 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,33 (м, 1H), 6,00 (д, 1H), 6,39 (д, 1H) м.д.

Пример 8: 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(5-азидопентилокси)- 9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 134)

Способ: Общая процедура 3Б

Исходное вещество: Соединение 44

Спектр ПМР: 0,55 (с, 3H), 1,07 (д, 3H), 1,05-2,07 (м, 22H), 2,13 (широкий д, 1H), 2,32 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,84 (широкий д, 1H), 3,26 (т, 2H), 3,13-3,32 (м, 2H), 3,56 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,32 (м, 1H), 6,00 (д, 1H) м.д.

Пример 9: 1(S), 3(R)-дигидрокси-20(R)-(6-азидогексилокси)- 9,10-секопрегна-5(Z),7(E)-10(19)-триен (Соединение 135)

Способ: Общая процедура 3Б

Исходное вещество: Соединение 45

Спектр ПМР: 0,55 (с, 3H), 1,07 (д, 3H), 1,05-2,10 (м, 22H), 2,14 (широкий д, 1H), 2,31 (дублет д, 1H), 2,60 (дублет д, 1H), 2,84 (м, 1H), 3,26 (т, 1H), 3,12-3,30 (м, 2H), 3,55 (м, 1H), 4,23 (м, 1H), 4,43 (м, 1H), 5,00 (м, 1H), 5,32 (м, 1H), 6,00 (д, 1H) м.д.

Пример 10. Капсулы, содержащие Соединение 109

Соединение 109 растворяют в арахисовом масле до конечной концентрации 1 мкг Соединения 109 в 1 мл масла. 10 весовых частей желатина, 5 весовых частей глицерина, 0,08 весовых частей карбоната калия и 14 весовых частей дистиллированной воды смешивают друг с другом при нагревании с образованием мягких желатиновых капсул. Каждую из указанных капсул наполняют 100 мкг раствора Соединения 109 в масле, так что каждая капсула содержит 0,1 мкг Соединения 109.

Пример 11. Крем для кожи, содержащий Соединение 109.

В 1 г миндального масла растворяют 0,05 мг Соединения 109. К полученному раствору добавляют 40 г минерального масла и 20 г самоэмульгирующегося пчелиного воска. Смесь нагревают до получения жидкости. После добавления 40 мл воды смесь хорошо перемешивают. Полученный крем содержит приблизительно 0,5 мг Соединения 109 на 1 грамм крема.

2. Данные по биологической активности.

Методики проведения экспериментов

1. Действие in vitro на раковые клетки.

Исследования роста клеток проводили на раковых клетках линии U937 человеческой гистоцитной лимфомы (Американская Коллекция Типовых культур, Rockvill, MD). Клетки U937 доводили до концентрации 110⁵ клеток/мл в RPMI 1640 (Gibco, USA). Среду обогащали 2 мМ глютамина, 100 IU/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 10% сывороткой зародыша теленка (FCS/Gibco). Клетки (5 мл) инкубировали во влажной атмосфере в течение 96 часов при 37^oC в присутствии 1,25 (OH)₂D₃ или аналогов витамина D (10^-12 до 10^-7 М). В контрольные культуры добавляли 0,2% растворителя. В конце инкубирования клетки подсчитывали и находили концентрацию тестируемого соединения, приводящую к 50% ингибированию роста клеток (IC₅₀) по кривой доза/ответ. Типичная величина IC₅₀ для 1,25(OH)₂D₃ составляет 510^-8 М. Каждый эксперимент включал контроли с или без 1,25(OH)₂D₃.

2. Исследование связывания рецептора.

Рецептор белка эпиталия кишечника рахитических цыплят поставляли из Amersham, U. K. (TRK 870). Образцы по 500 мкл инкубировали с 10,000 ч/млн [³H] 1, 25(OH)₂D₃ (180 кюри/ммоль, Amersham U.K.) и добавляли повышенные концентрации 1, 25(OH)₂D или аналогов витамина D₃.

После инкубирования в течение 60 мин при 22^oC разделяли связанный и свободный [³H] 1, 25(OH)₂D₃ на древесном угле, покрытом декстраном. Определяли концентрацию, приводящую к 50% замещению связанного [³H] 1, 25(OH)₂D₃.

Каждое соединение тестировали трижды.

Рецептор белка готовили из клеточных культур U937, T-47D UM-1-OS/C42. Суспензии 510⁷ клеток/мл гомогенизировали, обрабатывали ультразвуком и центрифугировали при 30,000 г в течение 1 ч при 4^oC. Наличие рецептора 1, 25(OH)₂D₂ проверяли с помощью анализа на градиент плотности сахарозы, описанного в Colston et al. Надосадочную жидкость доводили до концентрации 2 мг белка/мл и использовали для исследования связывания с 1, 25(OH)₂D₃ и аналогами витамина, как описано выше для рецептора кишечника цыплят.

3. Действие in vivo на кальциевый метаболизм.

Кальцемический эффект производных витамина D₃ исследовали на самках родственноскрещенных крыс Льюиса (140-160 г), получавших витамин D в избытке и находящихся на стандартном лабораторном питании, содержащим 1% кальция и 0,75% фосфора.

Повышенное содержание кальция в крови выбрали как наиболее чувствительный параметр для определения активности, подобной активности витамина D. Тестируемые соединения вводили перорально в количестве 0,1; 1,0 и 10 мкг/г в день в течение 7 дней. Контрольные крысы получали растворитель (пропиленгликоль) и каждый эксперимент включал группу, обработанную 1, 25(OH)₂D₃ (0,5 мкг/кг в день). Каждая группа включала 3 крысы. Крыс помещали в метаболические клетки и ежедневно собирали мочу. Определяли содержание кальция в моче с помощью образования комплекса с O-крезолфталеином. Выделение кальция с мочой определяли в дни от 3 до 7 эксперимента (условия для излучения). Дозу, приводящую к выделению кальция, сравнимому с выделением у крыс, получавших 0,5 мкг/день 1, 25(OH)₂D₃ определяли по кривой доза-ответ и выражали по отношению к 1, 25(OH)₂D₃. Выбор дозы 1, 25(OH)₂D₃ 0,5 мкг/кг/день основывался на экспериментально полученной полной шкале доза-ответ (0,01-10 мкг/кг/день 1, 25(OH)₂D₃.

Полученные результаты представлены в таблице 4. Во всех экспериментах в качестве сравнения использовали природный гормон 1, 25(OH)₂D₃. Представленные величины вычислены по отношению к величинам, полученным для 1, 25(OH)₂D₃.

Представленные в таблице 4 данные показывают, что заявленные аналоги витамина D имеют очень высокий антипролиферативный эффект и уникальный терапевтический профиль (соотношение между антипролиферативным и кальцемическим эффектом). Поскольку при лечении заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией (таких, как рак), кальцемическая активность препарата рассматривается как нежелательное побочное действие, предпочтительны соединения, имеющие наиболее высокое соотношение между антипролиферативным и кальцемическим действием.