способ выделения аксенических культур микроводорослей
Классы МПК: | C12N1/12 одноклеточные водоросли; питательные среды для них C12N1/02 выделение микроорганизмов из питательных сред |
Автор(ы): | Немцева Н.В., Алехина Г.П., Шабанов С.В., Бухарин О.В. |
Патентообладатель(и): | Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН |
Приоритеты: |
подача заявки:
1998-12-15 публикация патента:
10.04.2001 |
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения аксенических культур микроводорослей при проведении физиолого-биохимического, цитологического и генетического изучения микроскопических водорослей. Способ выделения аксенических культур микроводорослей осуществляют путем рассева микроводорослевой суспензии по поверхности плотной питательной среды, суточной инкубации и последующего пересева выросших единичных микроколоний с кусочками плотной питательной среды в стерильные элективные жидкие питательные среды. Рассев микроводорослей суспензии осуществляют путем ее втирания стеклянным шпателем в поверхность 1,5%-ной агаризованной питательной среды Прата, в которую предварительно вводят водный раствор мертиолата так, чтобы его концентрация в питательной среде составила 2
10-6 г/мл. Способ позволяет сократить сроки выделения чистых культур, повысить эффективность их выделения и надежность получения искомых видов чистых культур микроводорослей. Также способ имеет широкий круг применения, т.к. позволяет получать аксенические культуры микроводорослей независимо от источника выделения и степени их бактериальной обсемененности. 1 табл., 2 ил.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
Формула изобретения
Способ выделения аксенических культур микроводорослей путем рассева микроводорослевой суспензии по поверхности плотной питательной среды, инкубации и последующего пересева выросших единичных микроколоний с кусочками плотной питательной среды в стерильные элективные жидкие питательные среды, отличающийся тем, что рассев микроводорослевой суспензии осуществляют путем ее втирания стеклянным шпателем в поверхность 1,5%-ной агаризованной питательной среды Прата, в которую предварительно вводят водный раствор мертиолата так, чтобы его концентрация в питательной среде составила 2![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения аксенических культур микроводорослей при проведении физиолого-биохимического, цитологического и генетического изучения микроскопических водорослей. Под аксеничностью понимают присутствие в культуре единственного вида водорослей, свободного от прочих микроорганизмов. Использование чистых, аксенических, культур - необходимая предпосылка успешного физиолого-биохимического изучения микроскопических водорослей. Однако, как известно, в альгологии именно этот этап является наиболее сложным. Собранный в природе живой материал представляет собой смесь различных видов водорослей, к тому же загрязненых бактериальной микрофлорой, которые, обладая антагонизмом в отношении друг друга, могут искажать результаты изучения лизоцим-антилизоцимных взаимодействий. Разделение альгологической и бактериальной составляющих весьма трудоемкий процесс. Между водорослями и бактериями существуют плотные биоценотические связи. Слизистые "обертки" водорослей служат источником питания и укрытиями для микроорганизмов, что позволяет считать их идеальным местообитанием бактерий [1]. Водоросли, в свою очередь, используют бактерии как источник витаминов B2, B6, B12 [2]. Тесная мутуалистическая связь определяет трудность разделения альгобактериальных сообществ на изолированные культуры: водорослей и бактерий. Известен способ выделения аксенических культур микроводорослей путем применения ультрафиолетового облучения [3, 4]. Однако недостатком данного способа является то, что ультрафиолетовое облучение оказывает мутагенное действие и может вызвать необратимые генетические изменения изучаемой культуры. Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ выделения аксенических культур микроводорослей методом агаровых пластинок [5]. Способ заключается в том, что микроводорослевую суспензию, средняя плотность которой составляет 1 клетка/1 мм3, вносят в объеме 0,1 мл в чашку Петри и равномерно распределяют микробиологической петлей по поверхности 0,5-2%-го мясопептонного агара (МПА) с последующей инкубацией в термостате. Затем отдельные микроколонии, выросшие на поверхности мясопептонного агара, снимают стерильными инструментами вместе с кусочками плотной питательной среды и вносят в пробирки с соответствующими стерильными элективными жидкими питательными средами для накопления биомассы водорослей. Аксенические культуры водорослей получают с помощью многократного повторного рассева по поверхности МПА в стерильных условиях. Однако известный способ имеет ограниченный круг применения. Например, при выделении аксенических культур сине-зеленых водорослей не удается добиться их полной свободы от бактерий, т.к. последние очень прочно связаны со слизистыми обертками этих микроводорослей. Процесс разделения их трудоемок, длителен и порой неэффективен, т.к. требует многократного пересева. Кроме того, при использовании петли получить отдельно лежащие клетки не удается, т.к. при значительной концентрации водорослевой суспензии петля не позволяет равномерно распределить водоросли по поверхности плотной питательной среды, к тому же при ее использовании часто происходит травмирование клеточных структур микроводорослей. Заявляемый способ решает задачу повышения эффективности выделения аксенических микроводорослей и сокращение срока их выделения. Для решения указанной задачи в заявляемом способе выделения аксенических культур микроводорослей путем рассева микроводорослевой суспензии по поверхности плотной питательной среды, инкубации и последующего пересева выросших единичных микроколоний с кусочками плотной питательной среды в стерильные элективные жидкие питательные среды рассев микроводорослевой суспензии осуществляют путем ее втирания стеклянным шпателем в поверхность 1,5%-ной агаризованной питательной среды Прата, в которую предварительно вводят водный раствор мертиолата так, чтобы его концентрация в питательной среде составила 2![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
Использование чистых аксенических культур - необходимая предпосылка успешного физиолого-биохимического изучения микроводорослей. 1. В предлагаемом способе в качестве основы для 1,5% плотной питательной среды используется среда Прата: KNO3 - 0,10 г/л, K2HPO4 - 0,01 г/л, MgSO4
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
![способ выделения аксенических культур микроводорослей, патент № 2164940](/images/patents/307/2164005/183.gif)
1. Stewart W.D.P. Algae, men and environment, Syracuse - N.Y. - 1968. - 302 p. 2. Юнг Л. А., Панкратова Е.М. //Труды Кировского сельскохозяйственного института, 1967. - N 20. - Вып.40. - 98 с. 3. Gerloff G.C., Fitzgerald G.P., Skoog F. // The isolation purification and culture of blue-green Amer. J., 1950. - Vol. 37. -N 3. - P. 216. 4. Квитко К.В. Получение культур отдельных клеток хлореллы // Исследования по генетике. - Л.: Из-во Ленинградского университета, 1961. - Вып. 1. - С. 50-54. 5. Вассер С.П., Кондратьева Н.В., Масюк Н.П. и др. Водоросли. Справочник. - Киев: Наукова думка, 1989. - 608 с. (прототип). 6. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. / Под ред. Биргера М.О. - М.: Медицина, 1982. - 464 с. 7. Газизова Г.P. Исследование токсичности консервантов в бактерийных и сывороточных препаратах на клеточной культуре //Препараты крови. - Горький, 1981. - С. 55-58. 8. Волгарева Г.М. Цитогенетический контроль безвредности мертиолата // ЖМЭИ, 1989. - N 11. - С. 46-52.
Класс C12N1/12 одноклеточные водоросли; питательные среды для них
Класс C12N1/02 выделение микроорганизмов из питательных сред