способ определения неспецифической защиты организма от микробов

Формула изобретения

Способ определения неспецифической защиты организма от микробов путем исследования слезной жидкости, отличающийся тем, что оценку неспецифической защиты организма от микробов проводят по титрам антител в слезной жидкости в реакции пассивной гемагглютинации к дизентерийной группе микробов и при величине титра антител, равной 64 и ниже, величину неспецифической защиты организма от микробов считают низкой.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и предназначено для определения индивидуального уровня неспецифической защиты организма от микробов, для оценки эффективности лечения ряда заболеваний органа зрения (кератиты, склериты, увеиты и др.), а также контроля и прогнозирования изменения уровня неспецифической защиты организма под влиянием лечения. В настоящее время в практической медицине оценка величины неспецифической защиты организма (НЗО), как правило, проводится путем выделения из крови и исследования активности или количества отдельных клеточных и гуморальных факторов иммунитета (Шляхов Э.Н., Андриеш Л.П. Иммунология: Справочное пособие. - Кишинев, 1985. - 280 с.). Однако большинство этих способов отличаются сложностью и трудоемкостью. При проведении этих исследований требуются дорогостоящие, дефицитные реактивы и сложная аппаратура. Забор крови представляет определенную опасность как для обследуемого, так и для медицинского персонала в связи с распространением среди населения различных инфекций, в том числе СПИДа. Вышеперечисленные недостатки ограничивают применение данных способов для оценки неспецифической защиты организма.

В медицине с этой же целью применяются различные способы оценки активности или количества факторов слезной жидкости, участвующих в иммунитете, в том числе -лизина (Стукалов С.Е. Иммунологические исследования в офтальмологии. - Воронеж, 1975. - 224 с. ); иммуноглобулинов класса А, М, G, (Пучковская Н. А. , Шульгина Н. С. , Минев М.Г., Игнатов Р.К. Иммунология глазной патологии. - М.: Медицина, 1983.-208 с.).

Однако эти методики трудоемки, а для проведения исследований требуются дорогостоящие реактивы.

В литературе имеются работы, в которых установлена возможность использования реакции пассивной гемагглютинации для характеристики процессов аутоиммунитета (Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. Под ред. В.В. Меньшикова, М.: Медицина, 1987.- 368 с.).

Однако для определения величины неспецифической защиты организма от микробов этот метод не применяется.

Прототипом предлагаемого способа является метод определения в слезной жидкости, слюне и сыворотке крови иммуноглобулинов класса A, M, G. Для этого обычно используется способ радиарной иммунодиффузии по Манчини (Шляхов Э.Н. Андриеш Л.П. Иммунология: Справочное пособие. - Кишинев, 1985, - 280 с.). Но и эта методика также имеет ряд недостатков, касающихся трудоемкости получения результатов исследования. Кроме этого, для проведения исследований с использованием данного метода требуются дорогостоящие сыворотки, агары, специальные пластинки и камеры.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение, повышение экономичности и безопасности исследования величины неспецифической защиты организма от микробов.

Сущность способа. Решение данной задачи достигается путем определения титра антител (ТА) в слезной жидкости в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) к дизентерийной группе микробов, и при величине титра антител 64 и ниже величину неспецифической защиты организма от микробов считают низкой.

Новизна способа заключается в том, что впервые величину неспецифической защиты организма от микробов определяют по титрам антител в слезной жидкости с использованием РПГА к дизентерийной группе микробов и при величине титра антител 64 и ниже величину неспецифической защиты организма от микробов считают низкой.

Способ осуществляют следующим образом. У обследуемого проводят забор слезной жидкости в количестве от 0,125 до 0,5 мл в пробирку. Затем слезную жидкость дозатором переносят в лунку первого ряда планшета для макроварианта постановки РПГА в количестве от 0,125 до 0,5 мл и путем добавления физиологического раствора в объеме от 0,0 до 0,385 мл доводят объем раствора слезы до 0,5 мл в 1-й лунке. В лунки первого ряда и последующих рядов приливают по 0,5 мл физиологического раствора и раститровывают слезную жидкость каждой пробы по горизонтали так, чтобы в первой лунке ее разведение было двухкратное, во второй - четырехкратное и т.д. до 10 - 12 ряда лунок планшета. В последующем в каждую лунку добавляют по 0,2 - 0,25 мл 1% взвеси эритроцитов антигенного диагностикума из шигелл Зонне, Ньюкестл или Флекснера. Для этой цели 1,0 мл сухого антигенного эритроцитарного диагностикума разводят в 10 мл физиологического раствора. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при температуре 10 - 20^oC в течение 18-24 часов, затем оценивают результаты.

Учет реакции проводят по 4-х крестной системе:

4+ - все эритроциты были агглютинированы и равномерно покрывали дно лунок;

3+ - агглютинированы почти все эритроциты, но на фоне их имелось мало заметное кольцо из осевших неагглютинированных;

2+ - одновременно с равномерным агглютинатом на дне лунок имелся осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде маленького колечка;

1+ - большинство эритроцитов не было агглютинировано и осело в виде маленького колечка в центре лунки;

0+ - все эритроциты не были агглютинированы и осели в виде колечка в центре лунки.

Величиной ТА слезной жидкости считают максимальное ее разведение, в котором гемагглютинация оценивается не менее чем на три креста.

Результаты о возможности использования предлагаемого метода для определения индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма, для контроля эффективности лечения больных с заболеваниями органа зрения изложены в приведенных примерах.

Пример 1. Величина неспецифической защиты организма от микробов у больных с различными формами глазной патологии.

Для этого все больные разделены на три группы: первая группа - 36 человек с механическими травмами органа зрения (проникающие и непроникающие ранения, контузии средней и тяжелой степени глазного яблока); вторая группа - 43 человека с воспалительными заболеваниями склеры, роговицы, сосудистого тракта различной этиологии; третья группа - 20 человек с заболеваниями глаз невоспалительного характера (глаукома, катаракта, дистрофии тканей глаза). Контролем служили результаты исследований ТА слезной жидкости, проведенные у 26 офтальмологически здоровых мужчин и женщин в возрасте от 21 до 62 лет.

Результаты исследований представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, наибольшая величина титра антител в слезной жидкости определяется у больных с воспалительными заболеваниями и составляет 284, индивидуальные показатели колеблются от 2 до 2048. Из 43 больных этой группы низкая исходная величина неспецифической защиты организма определяется у 24 обследуемых: ТА равняется 64 и ниже, а у 19 больных отмечается высокая исходная ее величина: ТА составляют 128 и выше.

У больных с невоспалительными заболеваниями органа зрения средняя исходная величина ТА равняется 270, индивидуальные показатели колеблются от 8 до 2048. При этом из 20 больных у 11 - величина ТА составляет 64 и ниже, а у 9 - 128 и выше. Наименьшая величина титра антител определяется у больных с механическими травмами и составляет 120, индивидуальные его показатели - от 2 до 2048. Из 36 обследованных - у 26 определяется низкая величина ТА: соответственно равняется 64 и ниже, а у 11 больных - 128 и выше.

Как видно из табл. 1, у обследованных контрольной группы средняя исходная величина ТА равняется 28, индивидуальные показатели колеблются от 4 до 128.

Результаты этих исследований свидетельствуют о том, что средняя величина ТА в слезной жидкости в контроле значительно ниже по сравнению с соответствующей величиной у больных с травмами и заболеваниями органа зрения. Эти данные указывают на то, что любая патология органа зрения является причиной изменения величины титра антител в слезной жидкости.

Таким образом, результаты, представленные в примере 1, подтверждают возможность использования предлагаемого способа для оценки индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма от микробов у больных с различной патологией органа зрения.

Пример 2. Зависимость между величинами ТА в слезной жидкости и в сыворотке крови у больных с глазной патологией.

Для этого одновременно проводили исследования слезной жидкости и сыворотки крови у 32 больных с различными формами глазной патологии по вышеуказанной методике с использованием РПГА к дизентерийной группе микробов.

Результаты отражены в табл. 2.

Из табл. 2 следует, что средняя величина ТА в слезной жидкости у всех обследуемых составляет 209, индивидуальные его показатели колеблются от 8 до 2048, в сыворотке крови средняя величина ТА ниже и соответственно равняется 98, индивидуальные его колебания от 4 до 2048. Всех обследуемых больных по возрастанию индивидуальной величины ТА в слезной жидкости разделили на четыре группы. К I группе отнесли 8 человек с величиной ТА до 16, ко II - 11 человек, с величиной ТА до 64, к III - 8 человек с величиной ТА до 256 и к IV - 5 человек с величиной ТА, равной 512 и более. При этом, несмотря на существенные колебания концентрации гуморальных факторов в слезной жидкости и сыворотке крови, наблюдается прямая корреляционная связь между средними величинами ТА четырех подгрупп обследуемых (r = +1,000,00; p < 0,001).

Следовательно, данные примера 2 свидетельствуют о том, что заявляемый способ отражает как уровень местного иммунитета в слезной жидкости у больных с заболеваниями органа зрения, так и величину НЗО от микробов в целом.

Пример 3. Зависимость ТА слезной жидкости в РПГА от иммуноглобулинов в сыворотке крови у больных с глазной патологией.

Для установления связи между величиной ТА в слезной жидкости и концентрацией иммуноглобулинов класса G, A, M в сыворотке крови использовали способ определения иммуноглобулинов методом радиарной иммунодиффузии по Манчини у 27 больных с заболеваниями органа зрения.

Результаты исследований представлены в табл. 3.

Как видно из табл. 3, наблюдается прямая корреляционная связь между средними величинами ТА в слезной жидкости и концентрацией иммуноглобулинов класса М в сыворотке крови (r = +1,000,00; p < 0,001). В то же время определяется тенденция к обратной корреляции между средними величинами ТА в слезной жидкости и концентрацией иммуноглобулинов класса А (r = -0,80,2; p > 0,05). Таким образом, полученные результаты доказывают возможность использования изучаемого способа для определения НЗО от микробов в слезной жидкости у больных с заболеваниями органа зрения независимо от определения гуморальных факторов иммунитета в сыворотке крови.

Пример 4. Динамика изменения величины неспецифической защиты организма от микробов у больных с воспалительными заболеваниями глазного яблока под влиянием лечения.

Исследования проводили со слезной жидкостью, взятой в течение первых трех суток поступления в стационар и после окончания курса лечения при выписке из стационара (через 2-3 недели) у 16 больных, страдающих воспалительными заболеваниями глазного яблока (кератиты, склериты, увеиты различной этиологии).

Результаты отражены в табл.4.

Из табл. 4 следует, что средняя исходная величина ТА у обследуемых составила 352, а индивидуальные показания колеблются от 4 до 1024. С учетом динамики изменения ТА под влиянием лечения всех больных разделили на две группы: к первой отнесли лиц с низкой величиной ТА, равной 64 и менее; ко второй - равной 128 и более. После лечения отмечается снижение средней величины ТА с 352 до 257.

Однако определяется обратная зависимость между исходной величиной ТА и уровнем ее изменения. У обследованных первой группы с величиной ТА, равной 64 и ниже, после лечения определяется статистически достоверное (p < 0,05) повышение показателя неспецифической защиты с 31 до 157 (+406% к фону), а у больных второй группы с высокой исходной величиной, равной 256 и более, наблюдается снижение ее уровня с 672 до 356 (-47% к фону).

Следовательно, данные примера 4 подтверждают возможность использования заявляемого способа как для определения индивидуальной величины НЗО организма, так и контроля и прогнозирования эффективности лечения. Результаты исследований, изложенные в примере, убедительно подтверждают обоснованность деления больных на две группы по исходной величине ТА в слезной жидкости. Именно у больных первой группы с низкой исходной величиной ТА, равной 64 и ниже, наблюдается существенное повышение ее уровня под влиянием лечения.

Приведенные выше данные свидетельствуют о значительных преимуществах предлагаемого способа в сравнении с прототипом, заключающихся прежде всего в том, что заявляемый способ отличается простотой использования, высокой точностью, экономичностью и безопасностью для обследуемых лиц.

Простота исполнения связана с тем, что в серийных исследованиях слезной жидкости для определения титра антител в реакции пассивной гемагглютинации требуется не более 5 - 7 минут.

Высокая точность исследования: процент ошибки в различных сериях опытов составляет 1-3%, стопроцентная воспроизводимость способа связана с тем, что титр антител в слезной жидкости определяется в реакции пассивной гемагглютинации с использованием коммерческих антигенных эритроцитарных диагностикумов.

Экономичность способа основана на том, что для исследований не требуются стерильная посуда и инструменты для взятия крови, а также дорогостоящие дефицитные препараты, сыворотки к иммуноглобулинам, агары и стерильные условия для постановки опытов.

Дополнительным преимуществом заявляемого способа является его безопасность для обследуемых лиц, что является очень важным в связи с широким распространением инфекций среди населения, таких как вирусный гепатит, венерические заболевания, СПИД и других.

С учетом вышеизложенного предлагаемый способ можно рекомендовать для широкого использования при исследовании индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма от микробов, определения иммунодефицитных состояний, контроля и прогнозирования эффективности лечебно-оздоровительных мероприятий, отбора больных для лечения средствами, повышающими резистентность организма к микробам, а также в других областях медицины.