способ агглютинационного иммунологического анализа
Классы МПК: | G01N33/551 неорганическим носителем G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого |
Автор(ы): | Мешандин А.Г. |
Патентообладатель(и): | Мешандин Алексей Гаврилович |
Приоритеты: |
подача заявки:
1996-09-12 публикация патента:
10.07.2001 |
Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, а именно к способу агглютинационного анализа. Сущность изобретения состоит в том, что способ включает проведение агглютинационного иммунологического анализа в присутствии гидродолей, имеющих в своем составе неорганические катионы, в качестве которых используют катионы металлов, склонные к комплексообразованию, или обладающих алифотерными свойствами. Преимущество изобретения состоит в повышении чувствительности способа. 4 табл.
Рисунок 1
Формула изобретения
Способ агглютинационного иммунологического анализа при помощи нерастворимых в воде дисперсных гидрозольных препаратов, имеющих в своем составе неорганические катионы, включающий сорбцию биоспецифических лигандов на поверхность гидрозолей, последующее соединение гидрозоля с подлежащей тестированию биологической жидкостью и оценку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве неорганических катионов, образующих гидрозоли, используют катионы металлов или склонные к комплексообразованию, или обладающие амфотерными свойствами.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, может быть использовано в диагностике различных инфекционных и соматических патологий. При этих заболеваниях в организме больного возникают антитела, комплементарные антигенам, лежащим в основе патогенеза заболевания. Эти антитела и антигены могут обнаруживаться в периферической крови, однако до настоящего времени не созданы диагностические препараты, отличающиеся стабильностью иммунохимических свойств и позволяющие осуществлять данную реакцию бесприборно. Отсутствуют надежные и простые методы для скрининговых исследований больных и населения, относящихся к группам риска, что важно для коррекции терапии и определения прогноза заболевания. Цель изобретения - разработка бесприборного экспресс-метода для определения наличия и вида антител и антигенов - маркеров различных нозологий, увеличение чувствительности анализа, снижение времени постановки анализа. Аналогом данного метода является способ определения различных антигенов либо антител путем мечения одного из компонентов: антигенов либо комплиментарных им антител, именуемых в дальнейшем биолигандами, различными метками - радиологическими, ферментными, флуоресцентными, эритроцитарными [1], латексными [2]. Аналогом данного метода является способ определения антител против вируса клещевого энцефалита в сыворотке крови с помощью реакции непрямой гемагглютинации [3]. Аналогом данного метода является также способ определения антирезусных антител при аутоиммунной гемолитической анемии [4] с помощью прямой реакции гемагглютинации. Аналогом данного метода является способ постановки агглютинационного иммунологического анализа при помощи гидрозолей [5] ультрадисперсных частиц неорганической природы, например оксида железа (III), Fe2O3, на поверхности которых адсорбированы антигены либо антитела. Прототипом данного технического решения является способ постановки агглютинационного иммунохимического анализа, описанный в [6]. Данный способ предусматривает приготовление взвеси оксида железа (III) Fe2O3 в буферном растворе, составленном из пары: органическая кислота, например уксусная, и ее соль с каким-либо сильным основанием, например, ацетатом натрия согласно этому способу, приготавливают соответствующие буферные растворы, например уксусная кислота-ацетат натрия с pH от 4,0 до 5,0. Далее осуществляют диспергирование в данном буфере: в 2 мл его 50 мг оксида железа. Оксид железа (III) инкубируют в данном буфере, по меньшей мере, 12 часов для предактивации. При этом поверхность окиси железа модифицируется в кислой среде и становится катионнообменником. После этот вводят подлежащей сорбции биолиганд, антигены либо антитела и сорбируют по механизму ионной адсорбции [5] в течение 1 до 24 часов в зависимости от природы искомого биолиганда. По завершении сорбции осуществляют отмывку препарата оксида железа с сорбированными биоспецифическими препаратами от несвязавшихся биолигандов - антигенов (антител) путем многократных промывок тем же самым буфером с последующим центрифугированием, удалением надосадка и ресуспендированием в том же самом буфере на основе карбоновой кислоты и ее соли. Полученный препарат именуют гидрозолем, например гидрозолем оксида железа (III) с сорбированным на нем туберкулезным антигеном для детекции комлементарных антител против антигенов M.tyberculosis в биологических жидкостях человека. Далее осуществляют инкубацию гидрозоля с исследуемой пробой биожидкости, например сыворотки крови, и определение содержания по агглютинации частиц в последнем разведении с использованием фосфатно-солевого [6] буферного раствора с pH от 6,8 до 7,6. Недостатками прототипа можно считать:1. Многоэтапность и длительность приготовления реагентов. 2. Недостаточную чувствительность агглютинационного иммунологического анализа. Указанные недостатки преодолеваются, если в качестве дисперсных твердых фаз для последующей сорбции биоспецифических препаратов (биолигандов) используют дисперсные препараты, имеющие в своем составе неорганические катионы, образующие гидрозоли, и в качестве таковых используют или катионы металлов, склонные к комплексообразованию, или обладающие амфотерными свойствами [7]. Указанные катионы используют для синтеза различных неорганических солей [8]. Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения. Пример 1
Осуществляют сорбцию биолигандов на дисперсном препарате окиси железа (III) Fe2O3 - прототип и CnO - склонных к комплексообразованию. В качестве биолиганда используют противокоревой
![способ агглютинационного иммунологического анализа, патент № 2170434](/images/patents/301/2170104/947.gif)
![способ агглютинационного иммунологического анализа, патент № 2170434](/images/patents/301/2170104/947.gif)
![способ агглютинационного иммунологического анализа, патент № 2170434](/images/patents/301/2170104/947.gif)
Осуществляют нагружение частиц оксида железа (III) (прототип) и частиц: оксида меди (CuO) - склонных к комплексообразованию, оксида алюминия (Al2O3) - амфотерных, оксида хрома (Cr2O3) - склонных к комплексообразованию - дифтерийным анатоксином. В остальном методики нагружения и последующей постановки анализа не отличаются от таковых как в примере 1. Результаты данного эксперимента представлены а таблице 2. Пример 3
Осуществляют нагружение частиц оксида железа (прототип) и частиц оксида меди, гидроксида меди, оксида кобальта - все склонны к комплексообразованию - моноклональными антителами против поверхностного антигена рака молочной железы. В остальном методики нагружения и последующей постановки анализа не отличаются от таких как в примерах 1-2. Результаты представлены в таблице 3. Пример 4
Осуществляют нагружение частиц оксида железа (прототип) и частиц оксида меди, оксида алюминия, оксида хрома, фракцией 1 из вакцинного штамма EV-микроба. В остальном методики нагружения и последующей постановки анализа не отличаются от таковых как в примерах 1-3. Опытные данные представлены в таблицы 4. Таким образом, из представленных примеров ясно видны преимущества технического решения по сравнению с прототипом в плане обеспечения большей чувствительности иммунологического агглютинационного анализа. Наряду с этим обеспечивается расширение сырьевой базы: дисперсные препараты оказывается возможным изготавливать не только на оксиде железа, но и на основе других неорганических оксидов и гидроксидов. Представленные результаты указывают на возможность использования предложенного способа в диагностике наличия титра и динамических изменений уровня специфических антигенов и антител, связанных с той или иной конкретной нозологической единицей. Полученные данные могут иметь важное значение в скрининговой диагностике, определении прогноза заболевания и коррекции лечения. ЛИТЕРАТУРА
1. Ройт А. Основы иммунологии. -М.: Мир, 1991. -С. 91-93. 2. Ред. Покровский В.И. Иммунология инфекционного процесса. -М: Медицина, 1994 -с. 230. 3. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. -Кишинев, 1982. -304 с. 4. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. Кишинев, 1982. 304 с. 5. Мешандин А Г. Физико-химические аспекты сорбционных процессов при синтезе твердофазных биолигандов. М., 1994. -С. 31-34. 6. R.U. 2044320 C1. 20.09.1995 г. 7. Слесарев В.И. Основы химии живого. -С.Петербург, 2000. -с. 344-355. 8. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические вещества. -М. 1974 -407 с.
Класс G01N33/551 неорганическим носителем
Класс G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого