l-нуклеозиды, обладающие анти-hbv или анти-ebv активностью, способ ингибирования hbv или ebv инфекции

Формула изобретения

1. L-Нуклеозид общей формулы (1)



где R представляет собой остаток урацила, тимина, цитозина или пурина, который может быть замещен атомом галогена и алкилом;

R"" представляет собой атом водорода, ацил, алкил, монофосфат, дифосфат или трифосфат, или его фармацевтически приемлемые соли.

2. L-Нуклеозид формулы (1) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль в качестве активного компонента фармацевтической композиции, обладающей анти-HBV или анти-EBV активностью.

3. L-Нуклеозид формулы (1) по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающие анти-HBV или анти-EBV активностью.

4. L-Нуклеозид по п.1, который представляет собой 2"-фтор-5-метил--L-арабинофуранозилурацил.

5. L-Нуклеозид по п.1 или 3, выбираемый из группы, включающей N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-этилурацил,N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-иодоцитозин и N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-иодоурацил.

6. L-Нуклеозид по п.1 или 3, где основание выбирается из группы, включающей 5-метилурацил(тимин), 5-иодоурацил, цитозин и 5-этилурацил.

7. L-Нуклеозид по п.2, который представляет собой 2"-фтор-5-метил--L-арабинофуранозилурацил.

8. L-Нуклеозид по п.2, который выбирается из группы, включающей N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-этилурацил,N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-иодоцитозин и N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-иодоурацил.

9. L-Нуклеозид по п.2, в котором основание выбирается из группы, включающей 5-метилурацуил(тимин), 5-иодоурацил, цитозин и 5-этилурацил.

10. Способ ингибирования HBV или EBV инфекции, отличающийся тем, что вводят L-нуклеозил формулы (1) по п.1 в дозе от 0,1 до 100 мг/кг массы тела в день.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что L-нуклеозид представляет собой 2"-фтор-5-метил--L-арабинофуранозилурацил.

12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что L-нуклеозид выбирается из группы, включающей N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-этилурацил, N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-иодоцитозин и N₁-(2"-деокси-2"-фтор--L-арабинофуранозил)-5-иодоурацил.

13. Способ по п.10, отличающийся тем, что основание выбирается из группы, включающей 5-метилурацил(тимин), 5-иодоурацил, цитозин и 5-этилурацил.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области способов лечения заболеваний, вызванных вирусом гепатита B (называемым также HBV и вирусом Эпштейна-Барра (называемым также EBV, которые включают введение эффективного количества одного или более из активных соединений, раскрытых здесь, или их формацевтически приемлемых производных или пролекарств одного из этих соединений.

Предпосылки изобретения

Заболевания, вызванные вирусом гепатита B, во всем мире достигли эпидемического уровня. После двух-шестимесячного инкубационного периода, во время которого носитель инфекции не знает об инфицировании, HBV инфекция может привести к острому гепатиту и повреждению печени, боли в желудке, желтухе и повышенным уровням содержания некоторых энзимов в крови. HBV может вызвать скоротечные гепатиты, быстро развивающиеся, часто фатальные формы заболевания, при которых разрушаются большие участки печени. Обычно пациенты выздоравливают от острых вирусных гепатитов. Однако у некоторых пациентов высокие уровни вирусных антигенов существуют в крови в течение длительного или неопределенного промежутка времени, вызывая хроническую инфекцию. Хронические инфекции могут привести к хроническим гепатитам. Пациенты, инфицированные хроническим персистентным HBV, наиболее часто встречаются в развивающихся странах. К середине 1991 г. только в одной Азии было примерно 225 миллионов хронических носителей HBV, а по всему миру - почти 300 миллионов носителей. Хронические персистентные гепатиты могут вызвать нарушение функций, циррозы печени и гепатоцеллюлярную карциному, первичный рак печени.

В западных индустриальных странах высокому риску HBV инфекции подвержены те, кто находится в контакте с HBV носителями или образцами их крови. Эпидемиология HBV в действительности очень сходна с эпидемиологией синдрома приобретенного иммунодефицита, чем можно объяснить то, почему HBV инфекция обычна среди пациентов с AIDS (СПИД) или HIV-связанными инфекциями. Однако HBV гораздо более заразны, нежели HIV.

HBV является второй после табака причиной раковых заболеваний человека. Механизм, посредством которого HBV вызывает рак, неизвестен, хотя считается, что он может непосредственно включать развитие опухоли или вызывать развитие опухоли косвенным путем за счет хронического воспаления, цирроза и перерождения клеток, связанных с инфекцией.

Вирус Эпштейна-Барра (EBV) является членом рода Lymphocryptovirus, который принадлежит к подсемейству gammaherpesvirinae. Он заметно лимфотрофичен. EBV имеет классическое строение герпесных вирусов, а именно его двухцепочечный геном ДНК заключен в айкозапентаэдрический нуклеокапсид, который, в свою очередь, окружен липидной оболочкой с вирусными гликопротеинами. Аморфный оболочковый протеин занимает пространство между оболочкой и нуклеокапсидом.

Все герпесвирусы человека инфицируют лимфоциты и реплицируются в них до некоторой степени, но EBV проделывает это более эффективно. Наиболее важно, что патогенез и реакции хозяина на инфицирование EBV гораздо более зависят от инфицирования лимфоцитов, нежели это происходит с другими герпесвирусами человека.

В настоящее время EBV считают причиной лимфопролиферативных заболеваний B-клеток и связывают с различными другими серьезными и хроническими заболеваниями, включая редкий синдром, сходный с прогрессирующим мононуклеозом и оральной волосистой лейкоплакией у пациентов с AIDS (СПИДом). Предположение, что EBV является основной причиной хронической усталости, не выдерживает проверки.

EBV передается, главным образом, со слюной, хотя иногда инфекция передается при переливании крови. Более чем 85% пациентов с острой фазой инфекционного мононуклеоза секретируют EBV.

EBV связан с раком. По крайней мере, две группы пациентов подвергаются риску развития связанных с EBV лимфом: те, кому были трансплантированы почка, сердце, костный мозг, печень или тимус в сочетании с иммуноподавляющей терапией, и пациенты с AIDS. Раковые заболевания, связанные с EBV, включают лимфому Буркитта и назофарингиальную карциному.

В свете того факта, что вирус гепатита В и вирус Эпштейн-Барра оказывают сильное и часто трагическое действие на инфицированного пациента, существует настоятельная необходимость в создании эффективных фармакологических агентов для лечения пациентов, инфицированных этими вирусами, которые отличались бы низкой токсичностью по отношению к носителю.

Поэтому целью настоящего изобретения является создание соединения, композиции и способа лечения заболевания, вызываемого вирусом гепатита B.

Другой целью изобретения является создание соединения, композиции и способа лечения заболевания, вызываемого вирусом Эпштейн-Барра.

Краткое содержание изобретения

Предложен способ лечения носителя и, в частности, человека, инфицированного HBV или EBV, который включает введение HBV или EBV, который включает введение HBV- или EBV-лечебного количества L-нуклеозида формулы (1)



где R представляет пуриновое или пиримидиновое основание.

В предпочтительном варианте предложен нуклеозид в виде указанного энантиомера и практически без соответствующего ему энантиомера (т.е. в виде обогащенного энантиомером вещества, включая энантиомерно чистую форму).

В одном предпочтительном варианте активное соединение является 2"-фтор-5-метил- -L-арабинофуранозилуридином (именуемым также как L-FMAU). Это соединение является эффективным антивирусным агентом против HBV и EBV и отличается низкой цитотоксичностью. Другие конкретные примеры активных соединений включают N₁-(2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)-5- этилурацил, N₁-(2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)-5- иодоцитозин и N₁-(2"-деокси-2" -фтор- - L -арабинофуранозил)-5-иодоурацил.

В альтернативном варианте предложен L-нуклеозид для лечения HBV или EBV, который содержит 2"-apaбиногидроксильную группу, например, L-аратимидин, L-флюдарабин, L-арагуанозин и L-араинозин, как показано на фиг. 1.

Раскрытые здесь L-нуклеозиды и их фармацевтически приемлемые производные или фармацевтически приемлемые композиции, содержащие эти соединения, полезны для профилактики и лечения HBV инфекций и родственных состояний, таких как состояния, связанные с позитивом анти-HBV антител и HBV-позитивом, хронические воспаления печени, вызванные HBV, цирроз, острые гепатиты, скоротечные гепатиты, хронические персистентные гепатиты и усталость. Подобным образом эти соединения можно использовать для лечения заболеваний, связанных с EBV. Эти соединения или композиции можно также использовать для профилактики и предотвращения или замедления развития клинических заболеваний у пациентов, которые позитивны в отношении анти-HBV или анти-EBV антител или HBV- или EBV-антигенов, или тех, кто был в контакте с HBV и EBV.

В другом варианте активное соединение или его производное, или его соль можно вводить в сочетании или чередуя с другим анти-HBV агентом или анти-EBV агентом, включая те, что перечислены ранее, или анти-HIV агентом. Обычно, при альтернативной терапии, эффективную дозу каждого агента вводят серийно, тогда как при комбинированной терапии эффективные дозы двух или более агентов вводят вместе. Дозы зависят от скоростей абсорбции, инактивации и экскреции (выделения) лекарства, а также других факторов, известных специалистам. Следует отметить, что величины доз будут зависеть также от тяжести состояния, требующего облегчения. Следует также учесть, что для каждого конкретного пациента конкретные дозовые режимы и схемы со временем следует пересматривать в соответствии с необходимостью для пациента и профессиональной точкой зрения врача, проводящего лечение.

Нелимитирующие примеры противовирусных агентов, которые можно использовать в сочетании с раскрытыми здесь соединениями, включают (-)-энантиомер 2-гидроксиметил-5-(5-фтороцитозин-1-ил)- 1,3-оксатиолана (FTC); (-)-энантиомер 2-гидроксиметил-5-(цитозин-1-ил)- 1,3-оксатиолана (ЗТС); карбовир, ацикловир, интерферон, AZT, DDI (2",3"-дидеоксиинозин), DDC(2",3"-дидеоксицитидин), L-DDC, L-5-F-DDC и D4T.

Краткое описание рисунков

Фиг. 1 представляет иллюстрацию выбранных L-нуклеозидов, которые входят в объем настоящего изобретения:

L-FMAU (2"-фтор-5-метил- -L-арабинофуранозилуридин), L-FIAU(2"-фтор-5-иодо- -L-арабинофуранозилуридин), L-FC (2"-фтор- -L-арабинофуранозилцитозин), L-FIAC (2"-фтор-5-иодо- -L-арабинофуранозилцитозин), L-2-C1-2" -F-2"-деоксиаденин, L-FEAU (2"- фтор-5-этил- -L-арабинофуранозилуридин), L-aратимидин L-флударабин, L-арагуанозин и L-араинозин.

Фиг. 2 представляет график зависимости процента жизнеспособных клеток от концентрации лекарства для L-FMAU в H1 клетках.

Фиг. 3 является схематической иллюстрацией получения 1-O- ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофуранозы (соединение 10).

Фиг. 4 представляет схему альтернативного получения 1-O- ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофуранозы (соединение 10).

Фиг. 5 представляет схему способа получения 1,3,5-три-O- бензоил-2-деокси-2-фтор- -L-арабинофуранозы (соединение 13).

Фиг. 6 схематически представляет способ получения N₉-(3", 5"-ди-O-бензоил-2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)-2,6- ди-хлорпурина (соединение 15) и N₉-(2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)- 2,6-ди-хлорпурина (соединение 16).

Фиг. 7 представляет способ получения ряда 2"-деокси-2"- фтор- -L-арабинофуранозил -пиримидинов (соединения 17-24).

Фиг. 8 представляет способ получения N₁-(2"-деокси-2"- фтор- -L-арабинофуранозил)-5-иодоцитозина) (соединение 22).

Фиг. 9 представляет способ получения 9- -L- арабинофуранозиладенина.

Фиг. 10 представляет альтернативный способ получения 1-O- ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофуранозы (соединение 10) из 1,2-ди-O-изопропилиден- -L-ксилофуранозы (соединение 3).

Фиг. 11 представляет график зависимости концентрации L- (-)-FMAU в плазме у мышей после перорального введения в зависимости от времени (перекрестно, 10 мг/кг вводимых дважды в день (bid) в течение 29 дней до фармакокинетических исследований, а затем исследования проводят на тридцатый день при введении той же самой концентрации; заштрихованные кружки - введение 50 мг/кг дважды в день в течение 29 дней до исследования, а затем на тридцатый день проводят исследование при введении той же самой концентрации; незаштрихованные кружки - введение в первый раз 50 мг/кг в первый день исследования).

Фиг. 12 представляет график зависимости концентрации L- (-)-FMAU в печени мышей после перорального введения от времени (перекрестно, 10 мг/кг вводимых дважды в день в течение 30 дней до фармакокинетических исследований, а затем исследования проводят на тридцатый день при введении той же самой концентрации; заштрихованные кружки - введение 50 мг/кг дважды в день в течение 30 дней до исследования, а затем на тридцатый день проводят исследование после введения той же самой концентрации; незаштрихованные кружки - введение в первый раз 50 мг/кг в первый день исследования).

Фиг. 13a представляет изменение веса животных после 30 дней у контрольных самок мышей BDF1.

Фиг. 13b и 13c представляют изменение веса после 30 дней введения самкам мышей BDF1 доз 10 мг/кг (13b) и 50 мг/кг (13c) дважды в день препарата L-(-)-FMAU. Показанные веса животных представляют собой среднее и стандартное отклонение для 5-7 мышей.

Фиг. 14-20 представляют клинический анализ плазмы мышей после введения L-(-)-FMAU в концентрации 10 мг/кг (три мыши) или 50 мг/кг (три мыши) дважды в день в течение 30 дней. Фиг. 14 представляет график концентрации общего количества биллирубина в плазме мышей в мг/дл. Фиг. 15 представляет график концентрации щелочной фосфатазы в мышиной плазме в Ед/л. Фиг. 16 представляет график концентрации креатинина в плазме мышей в мг/дл (децилитр). Фиг. 17 представляет график концентрации AST (SCOT, сывороточная глутаминовая оксалиновая трансаминаза) в плазме мышей в Ед/л. Фиг. 18 представляет график концентрации ALT (SGPT, сывороточная глутаминовая пируват-трансаминаза) в плазме мышей в Ед/л. Фиг. 19 представляет график концентрации молочной кислоты в плазме мышей в ммоль/л. Фиг. 20 представляет график концентрации молочной дегидрогеназы в плазме мышей в Ед/л.

Подробное описание изобретения

Термин "энантиомерно обогащенный", в том смысле, как здесь использован, относится к нуклеозидной композиции, которая включает, по крайней мере 95%, и предпочтительно, приблизительно 97, 98, 99% или 100% одного энантиомера этого нуклеозида.

Термин алкил, в том смысле, как здесь использован, включает, но не ограничивается ими, C₁-C₁₀алкильные группы, включающие метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, изопентил, амил, трет-пентил, циклопентил и циклогексил.

Термин ацил, в том смысле, как здесь использован, включает, но не ограничивается ими, ацетил, пропионил, бутирил, пентаноил, 3-метилбутирил, кислый сукцинат, 3-хлорбензоат, бензоил, ацетил, пивалоил, мезилат, пропионил, валерил, капроил, каприлоил, каприл, лаурил, миристил, пальмитил, стеарил и олеил.

В том смысле, как здесь использован и, если нет других определений, термин арил относится к фенилу.

Термин "защищенный" в том смысле, как здесь использован, относится к группе, если нет других определений, которая присоединена к атому кислорода или азота, чтобы предотвратить их вступление в реакции в процессе получения производных по другим фрагментам молекулы, в которой находятся эти кислород или азот. Специалистам в области органического синтеза известен широкий диапазон кислород- и азотзащищающих групп.

Термины пуриновое или пиримидиновое основание включают, но не ограничиваются ими, аденин, N⁶-алкилпурины, N⁶-ацилпурины (где ацил представляет C(O)алкил, арил, алкарил или аралкил), N⁶-бензилпурин, N⁶-галоидпурин, N⁶-винилпурин, N⁶-ацетиленпурин, N⁶-ацилпурин, N⁶-гидроксиалкилпурин, N⁶-тиоалкилпурин, тимин, цитозин, 6-азапиримидин, 2-меркаптопиримидин, урацил, N⁵-алкилпиримидин, N⁵-бензилпиримидины, N⁵-галоидпиримидины, N⁵-винилпиримидин, N⁵ -ацетиленпиримидин, N⁵-ацилпиримидин, N⁵-гидроксиалкилпурин, N⁵-тиоалкилпурин, 5- азацитидинил, 5-азаурацилил, триазолопиридинил, имидазолопиридинил, пирролопиримидинил, пиразолопиримидинил.

Функциональные группы кислорода и азота основания можно защитить при необходимости или при желании. Подходящие защитные группы хорошо известны специалистам и включают триметилсилил, диметилгексилсилил, трет-бутилдиметилсилил и трет-бутилдифенилсилил, тритилметил, алкильные группы, такие ацильные группы, как ацетил, пропионил, бутил, метилсульфонил и паратолуилсульфонил. Они конкретно включают 5-метилурацил (тимин), 5- иодоурацил, цитозин и 5-этилурацил.

В настоящем изобретении раскрыты также способ и композиция для лечения HBV инфекций, EBV инфекций и других вирусных инфекций, в которых вирусы реплицируются у человека или других животных-носителей таким же образом, как HIV, что включает введение эффективного количества одного или более вышеуказанных L-нуклеозидов или физиологически приемлемых производных, или их физиологически приемлемых солей, при желании в фармацевтически приемлемом носителе. Соединения настоящего изобретения либо обладают анти-HBV активностью, анти-EBV активностью, либо превращаются в организме в соединение или соединения, которые проявляют анти-HBV или анти-EBV активность. Раскрываемые в настоящем изобретении соединения можно также использовать для лечения заболеваний, связанных с HBV и EBV.

Активные соединения можно вводить в виде любого производного, которое после введения реципиенту способно обеспечить, прямо или косвенно, родственное соединение или само проявить активность. Нелимитирующими примерами могут служить фармацевтически приемлемые соли (иначе именуемые как "физиологически приемлемые соли"), и 5" и пурин- или пиримидин-ацилированные или алкилированные производные активного соединения (иначе именуемые как "физиологически активные производные"). В одном варианте ацильная группа представляет собой сложный эфир карбоновой кислоты (т.е. -C(O)R"), в которой некарбонильный фрагмент (R") сложноэфирной группы выбирают из разветвленного, неразветвленного или циклического C₁-C₁₀алкила, алкоксиалкила, включая метоксиметил, аралкила, включая бензил, такого алкоксиалкила, как феноксиметил, арила, включая фенил, необязательно замещенный галоидом, C₁-C₄алкила или C₁-C₄алкокси, сульфонатных сложных эфиров, таких как алкил- или аралкилсульфонил, включая метансульфонил, моно-, ди- или три-фосфатные сложные эфиры, тритил или монометокситритил, замещенный бензил, триалкилсилил (например, диметил-трет-бутилсилил) или ди- фенилметилсилил. Оптимально, арильные группы в сложных эфирах содержат фенильные или бензильные группы. Алкильная группа может быть неразветвленной, разветвленной или циклической, а оптимально, представляет собой C₁-C₁₀группу.

I. Синтез L-нуклеозидов

Раскрытые здесь L-нуклеозиды можно получить, как подробно описано ниже, или другими путями, известными специалистам.

В приведенной далее схеме синтеза можно использовать другие стандартные реагенты, включая эквивалентные кислоты, основания и растворители вместо перечисленных, из числа тех, которые вполне известны специалистам. Для защиты кислорода и азота можно использовать широкий диапазон защитных групп, например, таких, которые указаны в книге: Greene et al., "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, 2nd. Ed., 1991. Подходящие защитные группы для кислорода и азота включают, например, такие тризамещенные силильные группы, как триметилсилил, диметилгексилсилил, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, тритил, алкильная группа, такие ацильные группы, как ацетил, пропионил, бензоил, p-NO₂-бензоил, бензил или толуил, метилсульфонил или p-толуилсульфонил. Функциональные группы кислорода и азота у гетероциклического основания необходимо защитить перед конденсацией с сахаром.

Подходящие восстанавливающие агенты включают NaBH₄, диизобутилалюминийгидрид (DIBAL-H) , боргидрид лития (LiBH₄) и натрий-бис(2-метоксиэтокси)-алюминийгидрид (Red-Al). Подходящие окисляющие агенты включают водные кислые хромовую кислоту (CrO₃), дихромат натрия (Na₂CrO₇), пиридинийхлорхромат (PCC), пиридиний дихромат (PDC), перманганат калия (KMnO₄,), тетраацетат свинца/пиридин, кислород над катализатором платина/углерод, RuO₄, RuO₄/NaIO₄, диметилсульфоксид/дициклогексилкарбодиимид (DMSO/DCC) и такие доноры протонов, как карбонат серебра и карбонат трифенилвисмута, окисление Оппенауэра (алкоксиды алюминия в ацетоне) и диоксиды марганца (для селективного окисления аллильных или бензильных спиртов в присутствии других спиртов).

Катализаторы Фриделя-Крафтса (кислоты Льюиса), которые можно использовать в реакции конденсации, включают SnCl₄, ZnCl₄, TiCl₄, AlCl₃, FeCl₃, BF₃-диэтиловый эфир и BCl₃. Эти катализаторы требуют безводных условий, так как наличие воды снижает их активность. Эти катализаторы можно также инактивировать в присутствии органических растворителей с активными водородами, такими как спирты и органические кислоты. Эти катализаторы обычно используют в таких растворителях, как сероуглерод, метиленхлорид, нитрометан, 1,2-дихлорэтан, нитробензол, тетрахлорэтан, хлорбензол, бензол, толуол, диметилформамид, тетрагидрофуран, диоксан или ацетонитрил. Безводный алюминийхлорид нерастворим в сероуглероде (Niedballa, et al., J.Org. Chem. 39, 25 (1974)). Предпочтительным катализатором является SnCl₄. Предпочтительным растворителем является 1,2-дихлорэтан. Триметилсилилтрифлат можно использовать в тех же условиях, которые указаны ранее для катализаторов Фриделя-Крафтса. Реакция протекает при температуре в интервале от -10 до 200^oC. Десилилирование можно осуществить с помощью различных реагентов, включая уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, фтористый водород, н-тетрабутиламмонийфторид, фторид калия и пиридиний HCl.

Как представлено на фиг. 3, исходя из L-ксилозы (1a), ключевое промежуточное соединение 1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофуранозу (10) получают с полным выходом 20% (L.Vargha, Chem.Ber., 1954, 87, 1351; Holy A., et al. , Synthetic Procedure in Nucleic Acid Chemistry, VI, 163-67). Как представлено на фиг. 4, соединение 10 можно также получить из более дорогого исходного материала L-рибозы (Holy A. , et al., Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, VI, 163-67). Фиг. 3 представляет альтернативный синтез соединения 10 (выход 53%), который последовательно фторируют по C₂ (J. Org. Chem. , 1985, 50, 3644-47) с получением 1,3,5-три-O-бензоил-2-деокси- 2-фтор-L-арабинофуранозы (13), которую конденсируют с различными основаниями через бромированный сахар с получением 2"-деокси-2"-фторарабинофуранозилнуклеозидов с различными выходами.

1,2-Ди-O-изопропилиден- -L-ксилофураноза (3)

К 650 мл безводного ацетона добавляют 4 мл концентрированной серной кислоты, 5 г молекулярных сит (4A), 80 г безводного сульфата меди и 50 г L-ксилозы, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 36 часов. Реакционную смесь фильтруют и тщательно промывают ацетоном, объединенные фильтраты нейтрализуют гидроксидом аммония, а затем выпаривают досуха. Добавляют 200 мл этилацетата, затем фильтруют и выпаривают, получая масло, которое растворяют в 250 мл 0,2% HCl раствора и перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 часа, pH устанавливают в размере 8 насыщенным раствором NaHCO₃, затем выпаривают досуха, остаток экстрагируют этилацетатом. После удаления растворителя получают масло желтого цвета, соединения 3 (41,7 г, 82,3%).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 5,979 (д, J = 3,78 Гц, 1H, H-1); 4,519 (д, J = 3,6 Гц, 1H, H-2); 4,308 (шир.д., 1H, H-3); 4,080 (м, 3H, H-4 и H-5); 1,321 (с, 3H, CH₃); 1,253 (с, 3H, CH₃).

1,2-ди-O-изопропилиден-3,5-ди-O-o-толилсульфонил- -L-ксилофураноза (4)

Соединение 3 (40 г, 210 ммолей) перемешивают в 500 мл безводного пиридина при 0^oC, при этом TsCl (75 г, 393 ммоля) растворяют в 100 мл CHCl₃ путем добавления по каплям. Спустя 3 часа таким же образом добавляют вторую порцию TsCl (50 г, 262 ммоля) в 50 мл CHCl₃. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, затем охлаждают при 0^oC, добавляют 10 мл воды, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакционную смесь выливают в 500 мл смеси льда с водой, экстрагируют CHCl₃ (150 мл x 4), промывают 1,5М H₂SO₄, (150 мл x 4), насыщенным раствором NaHCO₃ (200 мл x 2), сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают коричневый сироп, который после кристаллизации из EtOH дает соединение 4 в виде твердого вещества белого цвета (103,8 г, 99%).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,282, 7,836 (м, 8H, OT); 5,849 (д, J = 3,51 Гц, 1H, H-1); 4,661, 4,779 (м, 2H, H-3 и H-4); 4,193 (дд, 1H, H-2); 4,011 (д, 2H, H-5); 2,448, 2,478 (2с, 6H, -OTs); 1,261, 1,320 (2с, 6H, CH₃).

1,2-ди-O-ацетил-3,5-ди-O-p-толилсульфонил- , - ксилофураноза (5)

Соединение 4 (70 г, 140,5 ммоля) растворяют в 700 мл ледяной AcOH и 100 мл Ac₂O, прикапывая при 0^oC 50 мл концентрированной серной кислоты. Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, а затем выливают в 1 л смеси лед-вода, экстрагируют CHCl₃ (200 мл x 4), промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя в вакууме получают соединение 5 в виде сиропа (84,2 г, выход неочищенного продукта 110%).

Метил-3,5-ди-O-p-толилсульфонил- , - ксилофураноза (6)

Неочищенный продукт 5 (80 г) перемешивают в 500 мл 1% смеси HCl/CH₃OH при комнатной температуре в течение 30 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, остаток растворяют в 300 мл CHCl₃, промывают насыщенным NaHCO₃, сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают соединение 6 в виде сиропа (60 г, 90% из 4).

Метил-2-O-бензоил-3,5-ди-O-p-толилсульфонил- , - ксилофуранозид (7)

Сироп соединения 6 (60 г, 127 ммолей) растворяют в 200 мл пиридина и перемешивают при 0^oC, прикапывая бензоилхлорид (40 мл, 345 ммолей), а полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. Его концентрируют до около 50 мл, затем выливают в 300 мл смеси лед-вода, экстрагируют CHCl₃, промывают 3 н. H₂SO₄ и насыщенным NaHCO₃, сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают соединение 7 в виде сиропа (71 г, 97%).

Meтил-2,3,5-три-O-бензоил- , -L-рибофуранозид (9)

Сироп соединения 7 (70 г) и бензоат натрия (100 г, 694 ммоля) суспендируют в 1200 мл ДМФ и перемешивают механической мешалкой при кипячении с обратным холодильником в течение 16 часов. Смесь охлаждают до комнатной температуры и выливают в 1 л смеси лед-вода, экстрагируют эфиром, сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают сироп (50 г, 8a и 8b), который растворяют в 180 мл пиридина и бензоилируют (BzCl, 20 мл, 172 ммоля) в течение 17 часов при комнатной температуре. После обработки получают соединение 9 в виде сиропа коричневого цвета (48 г, 83% из 7).

1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофураноза (10)

Соединение 9 (26 г, 54,6 ммоля) обрабатывают 275 мл ледяной уксусной кислоты, 55 мл уксусного ангидрида и 16 мл концентрированной серной кислоты при температуре от 0^oC до комнатной температуры в течение 17 часов. Затем выливают в 1 л смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (200 мл x 4). Объединенный экстракт промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают сироп коричневого цвета, который обрабатывают этанолом и получают соединение 10 в виде твердого вещества белого цвета (8,8 г, 32%). Т.плавления 124,7^oC, литерат. 129-130^oC; Д форма: 130-131^oC []_D= -45,613 (с 1,0, CHCl₃); Д форма: []_D= +44,2.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,317, 8,134 (м, 15H, OBz), 6,437 (с, 1H, H-1), 5,835 (м, H-2 и H-3), 4,649 (м, 3H, H-4 и H-5), 2,003 (с, 3H, ).

1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофураноза (из L-рибозы)

L-рибозу (5 г, 33,3 ммоля) суспендируют в 120 мл 1% HCl/ MeOH и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, в результате чего получают прозрачный раствор. Реакцию гасят, добавляя 30 мл безводного пиридина, а затем выпаривают при пониженном давлении. Оставшийся сироп выпаривают совместно с пиридином (30 мл x 2), затем растворяют в 80 мл безводного пиридина и перемешивают при 0^oC, прикапывая бензоилхлорид (20 мл, 172 ммоля). После перемешивания при комнатной температуре в течение 17 часов реакцию завершают. Добавляют 10 мл воды, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 часа, затем концентрируют до около 50 мл, выливают в 150 мл смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (50 мл x 4), промывают последовательно 3 н. H₂SO₄, (30 мл x 2), насыщенным бикарбонатом натрия (30 мл x 3) и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают соединение 9 в виде 13 г сиропа.

Неочищенное соединение 9 растворяют в 80 мл HBr/AcOH (45%, вес/объем) и перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часа. К этой смеси добавляют ледяную уксусную кислоту (50 мл), полученный раствор перемешивают при 0^oC, медленно добавляя 34 мл воды для поддержания температуры ниже 7^oC. Затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, выливают в 200 мл смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (50 мл x 5). Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают 13 г сиропа, который растворяют в 40 мл безводного пиридина, перемешивают при 0^oC. Затем прикапывают уксусный ангидрид (14 мл, 148,4 ммоля). После завершения реакции реакционную смесь выливают в 150 мл смеси лед-вода, экстрагируют хлороформом (50 мл x 4), промывают последовательно 3 н. H₂SO₄, (30 мл x 2), насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл x 2) и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя и обработки метанолом получают соединение 10 в виде твердого вещества белого цвета (9,2 г, 53,7% из L-рибозы).

1,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофураноза (11)

Соединение 10 (9 г, 17,84 ммоля) перемешивают в 100 мл CH₂Cl₂ при 0^oC, при этом добавляют 70 мл CH₂Cl₂, содержащего HBr (3,2 г, 30,5 ммоля), сразу. Полученную смесь перемешивают при температуре 0^oC в течение 3,5 часа, добавляют 55 мл воды, полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Органический слой выделяют, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают пену, из которой после перекристаллизации из CH₂Cl₂ и н-гексана получают соединение 11 в виде твердого вещества белого цвета (6,2 г, 75,5%). Т. плавления 137-138^oC, из литературы: 140-141^oC, []_D= -81,960 (с 0,55, CHCl₃; Д форма: []_D= +83,71.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,312, 8,187 (м, 15H, OBz), 6,691 (д, J = 4,59 Гц, H-1); 5,593 (дд, J_4-3 = 6,66 Гц, J_2-3 = 1,8 Гц, 1H, H-30); 4,637, 4,796 (м, 4H, 4-2, H-4 и H-5); 2,3 (шир. OH).

1,3,5-три-O-бензоил-2-O-имидазосульфурил- -L- рибофураноза (12)

Соединение 11 (5,94 г, 12,84 ммоля) перемешивают в 50 мл безводного CH₂Cl₂ при -15^oC (смесь сухой лед-CCl₄). Последовательно добавляют безводный ДМФ (15 мл) и сульфурилхлорид (3,2 мл, 3,98 ммоля). Полученный раствор перемешивают при -15^oC в течение 30 минут, а затем оставляют при комнатной температуре на 4 часа. Тремя порциями добавляют имидазол (9,7 г, 12,78 ммоля), охлаждая при этом в ледяной ванне. Затем ее перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. Полученную смесь выливают в 150 мл смеси лед-вода, водную фазу экстрагируют CH₂Cl₂ (50 мл x 3). Объединенные органические слои промывают водой и сушат над сульфатом магния. Очищают на хроматографической колонке (гексан: EtOAc/5:1 до 1:1), в результате чего получают соединение 12 в виде твердого вещества белого цвета (3,7, 49%). Т.плавления 124,5-125,5^oC; литерат. 129^oC; []_D= -68,976, Д форма: +66,154.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 6,9, 8,2 (м, 18H, Ar-H); 6,67 (д, J = 4,4 Гц, 1H, H-1); 5,59 (дд, 1H, H-3); 5,21 (дд, 1H, H-2); 4,5, 4,8 (м, 3H, H-4 и H-5).

1,3,5-три-O-бензоил-2-деокси-2-фтор- -L-арабинофураноза (13)

Суспензию соединения 12 (3,33 г, 5,62 ммоля), KHF₂ (1,76 г, 22,56 ммоля) в 30 мл 2,3-бутандиола перемешивают в атмосфере аргона. Смесь нагревают до 150^oC, добавляя 1 мл HF/H₂O (48%, 27,6 ммоля), полученную смесь перемешивают при 160^oC в течение 1,5 часа. Для гашения реакции добавляют смесь рассол-вода, а затем полученный раствор экстрагируют метиленхлоридом (50 мл x 4). Объединенные экстракты промывают рассолом, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над безводным сульфатом магния и активированным углем (Darco-60). Все это выливают на слой силикагеля (5 см x 5 см), промывают метиленхлоридом, а затем EtOAc, получают сироп, который кристаллизуют из 95% EtOH, получая соединение 13 (1,3 г, 49,8%). Т.плавления 77-78^oC (литературн. 82^oC).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,314, 8,146 (м, 15H, OBz); 6,757 (д, J = 9,1 Гц, 1H, H-1); 5,38 (д, J = 48,5 Гц, 1H, H-2); 5,630 (дд, J = 22,5 Гц, 1H, H-3); 4,768 (м, 3H, H-4 и H-5).

N₉-(3", 5"-ди-O-бензоил-2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)-2,6-ди-хлорпурин (15)

Соединение 13 (464 мг, 1 ммоль) растворяют в 10 мл метиленхлорида, добавляя при этом 1,4 мл HBr/AcOH (45% вес/объем). Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем выпаривают досуха. Остаток растворяют в 20 мл метиленхлорида и промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния. После фильтрования и выпаривания получают бромосахар - соединение 14 (100%, на основании данных ТСХ).

Одновременно суспендируют 2,6-ди-хлорпурин (378 мг, 2 ммоля) в 15 мл HMDS (гексаметилдисилозан) и 2 мг сульфата аммония, а затем кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. HMDS выпаривают при высоком вакууме в атмосфере азота до получения силилированного основания белого цвета.

Бромосахар 14 растворяют в 25 мл безводного 1,2-дихлорэтана. Полученный раствор добавляют к силилированному основанию в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 2 дней. Добавляют хлороформ (30 мл) и промывают последовательно водой (20 мл x 2), насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл x 2), насыщенным раствором NaCl (20 мл x 2) и сушат над сульфатом магния. Из CHCl₃ кристаллизуют соединение 15 (105 мг, 19,7%). Т. плавления 158^oC; Д форма: 158^oC.

УФ (метанол) _макс = 238,5 нм, 273,0 нм.

¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 8,82 (д, J = 1,5 Гц, 1H, H-8); 7,49, 8,33 (м, 10H, OBz); 6,767 (дд, J_H-H = 4 Гц, K_F-H = 13,8 Гц, 1H, 1-H"); 5,854 (дкв, J = 67,4 Гц, 1H, H-2"), 5,910 (м, 1H, H-3"); 4,751 (м, 3H, H-4" и H-5").

М₉(2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)- 2,6-ди-хлорпурин (16)

Соединение 15 (70 мг, 0,13 ммоля) растворяют в 25 мл насыщенного NH₃/CH₃OH в запаянной стальной бомбе и нагревают при 90^oC в течение 6 часов. После удаления растворителя при пониженном давлении получают полужидкое вещество желтого цвета, которое очищают с помощью препаративной ТСХ (9: 1/CHCl₃: CH₃OH). После лиофилизации из воды и 1,4-диоксана получают порошок белого цвета - соединение 16 (30 мг, 75%). УФ (H₂O) pH2, _макс = 212,00 нм, 263,5 нм ( 6711); pH7, _макс = 213,5 нм, 263,00 нм ( 7590); pH11, _макс = 213,5 нм, 263,00 нм ( 5468).

¹H-ЯМР (300 МГц, BMSO-d₆): 8,279 (д, J = 1,5 Гц, 1H, H-8); 7,908 (шир. с, 2H, NH₂); 6,321 (дд, J_H-H = 4,4 Гц, J_F-H = 13,8 Гц, 1H, H-1"), 5,986 (т, 1H, 5"-OH), 5,230 (дт, J_F-H = 52,6 Гц, 1H, H-2"); 5,115 (д, 1H, 3"-OH); 4,425 (дкв, J_F-H = 19 Гц, 1H, H-3"); 3,841 (м, 1H, H-4"); 3,636 (д, 2H, H-5").

N₁-(2"-деокси-2"-фтор-3", 5"-ди-O-бeнзил- -L- арабинофуранозил)-тимин (17)

К раствору соединения 13 (400 мг, 0,86 ммоля) в безводном CH₂Cl₂ (10 мл) добавляют бромистый водород в уксусной кислоте (45% вес/объем, 1,5 мл), полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 17 часов. После удаления растворителя и совместного испарения с толуолом получают соединение 14.

В то же самое время тимин (215 мг, 1,72 ммоля) кипятят с обратным холодильником в НМ (25 мл) в атмосфере азота в течение 17 часов до получения гомогенного раствора. После выпаривания растворителя получают силилированный тимин.

Раствор соединения 14 в 50 мл дихлорэтана добавляют к силилированному тимину и полученный раствор кипятят в атмосфере азота в течение 3 дней. Добавляют воду, а затем экстрагируют CHCl₃. Органический слой промывают водой, рассолом и сушат над сульфатом магния. После выпаривания растворителя получают неочищенный продукт, который очищают с помощью препаративной ТСХ, используя 2% MeOH/CHCl₃ до получения соединения 17 (235 мг, 58%). Т.плавления 99-101^oC. УФ (метанол): 230, 264 нм []_D= +22,397..

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,343-8,389 (м, 12H, Ar-H, NH); 6,34 (дд, J_H-H = 2,97 Гц, J_F-H = 28,32 Гц, 1H, H-1"); 5,383 (дд, J_H-H = 2,7 Гц, J_F-H = 63,27 Гц, 1H, H-2"); 5,565 (дд, 1H, H-3"); 4,812 (д, 2H, H-5"); 4,466 (м, 1H, H-4"); 1,775 (с, 3H, CH₃).

Элементный анализ (CH₂₄H₂1N₂O₇F), C: 61,01; H: 4,57, N: 5,73, F: 3,92.

N₁-(2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)- тимин (18)

Соединение 17 (145 мг, 0,309 ммоля) обрабатывают NH₃/CH₃OH при комнатной температуре в течение 18 часов. После выпаривания растворителя и очистки с помощью препаративной ТСХ (15% MeOH/CHCl₃) получают соединение 18 (70 мг, 87,5%). Т.плавления 174-175^oC. УФ: 264 нм, []_D= -104,36.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 11,401 (с, 1H, NH); 7,575 (с, 1H, H-6); 6,093 (дд, J_H-H = 4,41 Гц, J_F-H = 15,6 Гц, H-1"); 5,844 (д, 1H, 3"-OH); 5,019 (дт, J_F-H = 53,3 Гц, 1H, H-2"); 5,087 (т, 1H, 5"-OH); 4,194 (дкв, 1H, H-3"); 3,647 (м, 3H, H-4" и H-5"); 1,781 (с, 3H, CH₃).

Элементный анализ: (C₁₀H₁₃N₂FO₅), C: 44,80; H: 4,97; N: 10,04; F: 7,03.

N₁-(2"-деокси-2"-фтор-3", 5"-ди-O-бензоил- -L- арабинофуранозил)-5-этилурацил (19)

К раствору соединения 13 в безводном дихлорметане (10 мл) добавляют бромистый водород в уксусной кислоте (45% вес/объем, 0,97 мл, 5,385 ммоля). Этот раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 13 часов, после выпаривания растворителя и совместного испарения с толуолом получают соединение 14.

В то же самое время 5-этилурацил (0,75 г, 5,39 ммоля суспендируют в HMDS (10 мл) с сульфатом аммония (5 мг) и кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов в атмосфере азота до получения гомогенного раствора.

Раствор силилированного основания выпаривают досуха, избегая контакта с влагой. К полученному сиропу добавляют раствор соединения 14 в безводном 1,2-дихлорэтане (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при 95^oC в атмосфере азота в течение 20 часов, затем выпаривают в вакууме досуха до получения твердого вещества желтого цвета, которое смешивают с CH₃OH/CHCl₃ (1:1) и фильтруют. Полученный фильтрат выпаривают до получения остатка, который обрабатывают на хроматографической колонке (CH₃OH/CHCl₃, 0-1%) до получения твердого вещества белого цвета, соединение 19 (0,557 г, 100%).

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 11,55 (с, 1H, NH); 7,51, 8,08 (м, 10H, Ar-H); 7,32 (с, 1H, H-6); 6,29, 6,37 (дд, J_H-H = 3,7 Гц, J_F-H = 20 Гц, 1H, H-3"); 5,47-5,65 (дд, J_F-H = 54 Гц, 1H, H-2"); 4,62-4,82 (м, 3H, H-4" и H-5"); 2,01, 2,09 (кв, 2H, ); 0,85 (т, 3H, CH₃).

N₁-(2"-деокси-2"-фтop- -L-apaбинoфуpaнoзил)-5- этилурацил (20)

Соединение 19 (500 мг) растворяют в метанольном аммиаке (50 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 44 часов. Полученный раствор выпаривают досуха до получения твердого вещества белого цвета (0,4 г), которое обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем (CH₃OH/CHCl₃, 0-5%) до получения твердого вещества белого цвета, соединение 20 (240 мг, 84%). Т. плавления 158-161^oC.

УФ (MeOH): _макс = 260 нм.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 11,42 (с, 1H, NH); 7,57 (с, 1H, H-6"); 6,10, 6,17 (дд, J_H-H = 5,0 Гц, J_F-H = 14 Гц, 1H, H-1"), 5,88 (шир.с, 1H, 3"-OH); 5,14, 5,19 (м, 2H, H-2" и 5"-OH); 4,98 (т, 1H, H-3"); 4,22, 4,28 (м, 1H, H-4"); 3,55, 3,78 (м, 2H, H-5").

Элементный анализ (C₁₁H₁₅N₂O₅F): C: 7,93; H: 5,56; N: 10,06; F: 6,68.

N₁-(2-деокси-2"-фтор-3", 5"-ди-O-бeнзoил- -L-apaбинoфуранозил- N⁴-бензоил-5-иодоцитозин (21)

К раствору соединения 13 (150 мг, 0,323 ммоля) в безводном метиленхлориде (5 мл) добавляют бромистый водород в уксусной кислоте (45% вес/объем, 0,29 мл, 1,615 ммоля). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 9,5 часов. После выпаривания растворителя и совместного испарения с толуолом получают соединение 15 в виде сиропа желтого цвета.

В то же самое время N⁴-бензоил-5-иодоцитозин (550 мг, 1,615 ммоля) суспендируют в HMDS (8 мл) с сульфатом аммония (3 мг) и кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов в атмосфере азота до получения гомогенного раствора.

Раствор силилированного основания выпаривают досуха, избегая контакта с влагой. К полученному сиропу добавляют раствор соединения 14 в безводном 1,2-дихлорэтане (10 мл). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 23 часов, затем выпаривают досуха до получения сиропа коричневого цвета, который тщательно растирают с хлороформом (30 мл). Полученный осадок отфильтровывают и промывают хлороформом. Полученный фильтрат и промывки объединяют и выпаривают до получения сиропа коричневого цвета. Полученную смесь разделяют с помощью хроматографической колонки с силикагелем (CH₃OH)CHCl₃, 0-1%) до получения твердого вещества белого цвета, соединения 21 (100 мг, 45%).

¹H-ЯМР (CDCl₃); 11,40 (шир.с, 1H, NH); 7,26, 8,20 (м, 17H, Ar-H, H-6 и NH); 6,36, 6,44 (дд, J_H-H = 2,8 Гц, J_F-H = 21 Гц, 1H, H-1"); 5,62, 5,68 (дд, 1H, H-3"); 5,39, 5,56 (дд, 1H, H-2"); 4,58, 4,85 (м, 3H, H-4" и H-5").

N₁-(2"-деокси-фтор- -L-арабинофуранозил)-5- иодоцитозин (22)

Соединение 21 (100 мг, 0,27 ммоля) обрабатывают насыщенным NH₃/MeOH (60 мл) при комнатной температуре в течение 24 часов. В результате хроматографической обработки на силикагеле (0-10% CH₃OH/CHCl₃) получают соединение 22 (35 мг, 71%) в виде твердого вещества белого цвета. []_D= -65,4 (с 0,34, CH₃OH). УФ (MeOH) _макс= 293 нм.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 8,04 (с, 1H, H-6); 6,74, 7,94 (с, 1H, NH); 6,01, 6,08 (дд, _H-H = 3,9 Гц, J_F-H = 16,6 Гц, 1H, H-1"), 5,85 (д, 1H, 3-OH), 5,17 (т, 1-H, 5"-OH); 5,08 (т, 1H, H-2"); 4,89 (т, 1H, H-3"); 4,15-4,23 (м, 1H, H-4"), 3,63-3,79 (м, 2H, H-5").

N₁-(2"-деокси-2"-фтор-3",5"-ди-бензоил- -L-арабинофуранозил) -5-иодоурацил (23)

К раствору соединения 13 (260 мг, 0,56 ммоля) в 10 мл безводного CH₂Cl₂ добавляют HBr/AcOH (45%, вес/объем, 0,5 мл, 2,8 ммоля). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 36 часов, а затем выпаривают досуха. Остаток растворяют в 20 мл CH₂Cl₂, промывают водой (10 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и сушат над сульфатом магния. После фильтрования и выпаривания получают бромосахар - соединение 14 в виде сиропа.

В то же самое время 5-иодоурацил (270 мг, 1,12 ммоля) суспендируют в 10 мл HMDS и кипятят с обратным холодильником в течение 36 часов до получения гомогенного раствора. Его выпаривают

в вакууме досуха. К этому добавляют раствор соединения 14 в безводном 1,2-дихлорэтане, и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 1,5 дней. Добавляют CHCl₃ (20 мл), и полученный раствор промывают последовательно водой (10 мл), рассолом (10 мл) и насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл), а затем сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя получают сироп, который кристаллизуют из CH₂Cl₂ до получения соединения 23 в виде твердого вещества желтого цвета (237 мг, 73%). Часть его (70 мг) перекристаллизовывают из 2-изопропанола до получения твердого вещества белого цвета (67 мг). УФ (метанол): _макс= 230,0 нм, 276 нм.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 8,4, 7,3 (м, 12H, Ar-H); 6,29 (дд, J_H-H = 2,43 Гц, J_F-H = 21,6 Гц, 1H, H-1"); 5,377 (дд, J_H-H = 2,8 Гц, J_F-H = 61,3 Гц, 1H, H-2"); 5,55 (дд, 1H, H-3"); 4,865, 4,793 (д, 2H, H-5"); 4,588, 4,502 (м, 1H, H-4").

N₁-(2"-деокси-2"-фтор- -L-арабинофуранозил)-5- иодоурацил (24)

Соединение 23 (40 мг, 0,069 ммоля) растворяют в 25 мл насыщенного NH₃/MeOH и перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем выпаривают досуха. Полученный сироп очищают с помощью препаративной ТСХ (5:1/CHCl₃:MeOH) до получения соединения 24 в виде твердого вещества (19 мг, 74%). УФ (MeOH): _макс= 280,5 нм.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 11,82 (шир.с, CONH); 8,24 (с, 1H, H-6); 6,082 (дд, J_H-H = 4,45 Гц, J_F-H = 13,7 Гц, 1H, H-1"); 5,947 (д, 1H, 3"-OH); 5,296 (т, 1H, 5"-OH); 5,07 (дт, J_F-H = 53 Гц, 1H, H-2); 4,24 (шир.д, J_F-H = 21 Гц, 1H, H-3"); 3,81, 3,55 (м, 3H, H-4", H-5").

2,3,5-три-O-бензил-L-арабиноза

Как проиллюстрировано на фиг. 9, 30 грамм (0,2 моля) порошка L-арабинозы (5), а затем 0,4 мл концентрированной серной кислоты добавляют к 600 мл (14,8 молей) безводного метанола. Эту суспензию перемешивают и нагревают при слабом кипении с обратным холодильником до получения прозрачного раствора в течение 2 часов. Затем реакционную смесь нейтрализуют 1,5 г бикарбоната натрия, сушат над сульфатом магния, а затем выпаривают в вакууме до получения густого сиропа (соединение 6), который разбавляют 50 мл свежеочищенного тетрагидрофурана, и снова концентрируют (35-40^oC баня) для удаления остаточного метанола. Добавляют свежеочищенный тетрагидрофуран (400 мл), и полученную смесь обрабатывают 30 г Drierite, 156 г (2,78 моля) гидроксида калия и 200 мл (1,74 моля) бензилхлорида. Полученную смесь нагревают при слабом кипении с обратным холодильником в течение ночи, охлаждают, фильтруют через тонкий слой целита и концентрируют в вакууме, а затем при высоком вакууме и 100^oC (баня). Неочищенный сиропообразный метил-2, 3,5-три-O-бензил-L-арабинозид (7) растворяют в 400 мл ледяной уксусной кислоты. Гидролизную смесь нагревают до 65-70^oC в течение 2 часов, концентрируют в вакууме до одной трети объема и выливают в 2,5 л смеси льда и воды. После введения затравки (затравочные кристаллы были исходно получены хроматографически при элюировании дихлорметаном), полученную смесь выдерживают при 5^oC в течение ночи. Водный слой декантируют из частично кристаллической массы, и последнюю растворяют в 200 мл дихлорметана. Полученный раствор промывают холодным водным бикарбонатом натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют через тонкий слой обесцвечивающего угля и концентрируют в вакууме до получения сиропа, который растворяют в 200 мл циклогексана. После введения затравки раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем при 5^oC в течение ночи до получения 27,7 г (33,2%) 2,3,5-три-O-бензил- L-арабинозы (8). Т.плавления 68-73^oC. []²_D⁵= -1,69 (C 2,01, 9:1 (объем/объем p-диоксан-вода)),

УФ (MeOH) _макс = 220;

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 3,48-3,62 (м, 2H, H-5); 3,94-4,18 (м, 3H, H-2, 3,4); 5,33 (д, 1H, J = 4,07, H-1); 5,29 (с, H-1); 7,25-7,33 (м, 15, H-аромат.).

2,3,5-три-O-бензил-1-O-(p-нитробензоил)-L-арабиноза (9)

Соединение 8 (фиг. 9) (2 г, 4,76 ммоля) растворяют в 7,5 мл дихлорметана, к этому раствору добавляют раствор 0,95 г (5,1 ммоля) p-нитробензоилхлорида в смеси 5 мл дихлорметана и 1,5 мл пиридина. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение ночи, а затем промывают последовательно 1 н. соляной кислотой (10 мл x 2), водным бикарбонатом натрия (10 мл x 2) и водой (30 мл x 3). Влагу удаляют с помощью Na₂SO₄, полученный раствор концентрируют в вакууме до получения 2,67 г (98,4%) смеси аномеров соединения 9. Т.плавления 68-82^oC. Дополнительная очистка на хроматографической колонке с силикагелем (гексан:ацетон 8:1) обеспечивает температуру плавления 89-93^oC; []²_D⁴= 13,04 (C 6,8, CH₂Cl₂),

УФ (MeOH) _макс = 215,5 и 258,5,

¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): 3,54-3,69 (м, 2H, H-5); 4,06 (м, 1H, H-4"); 4,22 (м, 1H, H-3"); 4,33 (м, 1H, H-2"); 4,38-4,78 (м, 6H, бензил CH₂); 6,50 (д, 1H, J = 2,35, H-1); 7,23-7,36 (м, 15H, H-аромат.бензильной группы); 8,01-8,25 (м, 4H, H-аромат. нитробензильной группы).

10(2,3,5-три-O-бензил- -L-арабинозил)тимин (12)

0,444 г (3,52 ммоля) тимина и 2 мг сульфата аммония суспендируют в гексаметилдисилазане (10 мл); суспензию кипятят с обратным холодильником (140^oC) в течение ночи в атмосфере азота до получения прозрачного раствора. Избыток гексаметилдисилазана удаляют в вакууме, избегая при этом контакта с влагой, в результате чего получают сироп-соединение 11.

Соединение 9 (1 г, 1,76 ммоля) добавляют к 17 мл дихлорметана, предварительно насыщенного безводным хлористым водородом при 0^oC. Спустя 2 часа при 0^oC осажденную p-нитробензойную кислоту (0,25 г) удаляют фильтрованием, и полученный фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, а затем выдерживают в высоком вакууме при комнатной температуре в течение 2 часов, в результате чего получают 2,3,5-три-O-бензил- - L-арабинозилхлорид (соединение 10).

Полученное таким образом соединение 10 растворяют в 15 мл безводного дихлорметана, полученный раствор добавляют к смеси силилированного тимина (11) и 3 г молекулярных сит. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 18 часов. Реакционную смесь разбавляют 50 мл дихлорметана и выливают в 2 мл насыщенного водного NaHCO₃ при интенсивном перемешивании. Появляется белый осадок (гидроксид олова), который отфильтровывают на слое целита. Органический слой отделяют от водного и промывают водой (30 мл x 3). Водный слой экстрагируют дихлорметаном, объединенные дихлорметановые слои сушат над сульфатом натрия, а затем выпаривают в вакууме до получения сиропа, который очищают на хроматографической колонке с силикагелем (хлороформ:метанол (100:1)) до получения соединения 12 в виде сиропа (0,68 г, 73%). []²_D⁵= -56,71 (C 0,6, CH₂Cl₂).

УФ (MeOH) _макс= 218 и 265;

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 1,67 (д, 3H, J = 1,11, CH₃); 3,66-3,70 (м, 2H, H-5"); 4,06 (м, 1H, H-4"); 4,13 (т, 1H, J = 4,7, H-3"); 4,41, 4,54, 4,56 (м, 6H, бензил CH₂); 6,28 (д, 1H, J = 5,24, H-1"); 7,15-7,33 (м, 15H, H-аромат.); 7,43 (д, 1H, J = 1,31, H-6).

1- -L-арабинофуранозилтимин (13)

Палладийхлорид (680 мг, 3,835 ммоля) суспендируют в 100 мл метанола и восстанавливают, встряхивая при комнатной температуре в атмосфере водорода. Затем раствор 450 мг соединения 12 в 25 мл метанола добавляют к подкисленной суспензии палладиевой черни. Реакционную смесь встряхивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 38 часов. После удаления катализатора раствор нейтрализуют Dowex (HCO₃) до pH 7 и концентрируют в вакууме до получения твердого вещества белого цвета, которое после перекристаллизации из этанола дает соединение 13 (105 мг, 47,7%). Т.плав. 244-249^oC. []²_D⁵= -91,48 (0,25, H₂O).

ИК (KBr): 1750, 1600 см^-1 (CO); УФ (MeOH): _макс= 268 нм;

¹H-ЯМP (300 МГц, DMSO-d₆): 1,76 (с, 3H, CH₃), 3,62 (т, 2H, J = 4,56, H-5); 3,69 (м, 1H, H-4 ); 3,90 (т, 1H, J = 3,88, H-3); 3,99 (т, 1H, J = 4,10, H-2"); 5,08 (шир. с, 1H, C"5-OH, в обмене); 5,54 (д, 1H, J = 5,23, C"2-OH или C"3-OH, в обмене); 5,97 (д, 1H, J = 4,64, H-1"); 7,51 (д, 1H, J = 0,97, H-6); 11,26 (с, 1H, NH, в обмене). Элементный анализ для C₁₀H₁₄N₂O₆;

Рассчитано: C 46,51 H 5,46 N 10,85

Найдено: C 46,67 H 5,63 N 10,56

1-(2,3,5-три-O-бензил- -L-арабинозил)цитозин (15)

Цитозин (0,61 г, 6 ммолей) и сульфат аммония (2 мг) суспендируют в гексаметилдисилазане (15 мл), и все это кипятят с обратным холодильником (140^oC) в атмосфере азота в течение 2 часов до получения прозрачного раствора. Смесь силилированного цитозина выпаривают досуха в вакууме, не допуская контакта с влагой, до получения соединения 14 в виде сиропа.

Соединение 9 (2,82 г, 5 ммолей) добавляют к 47 мл сухого дихлорметана, предварительно насыщенного безводным хлористым водородом при 0^oC. Спустя 2 часа при 0^oC выпавшую в осадок p-нитробензойную кислоту (0,807 г) удаляют фильтрованием, полученный фильтрат концентрируют в вакууме до получения соединения 10, - 2,3,5-три-O-бензил- -L-арабинозилхлорида в сиропообразном виде.

Полученное таким образом соединение 10 растворяют в 28,5 мл безводного дихлорметана, полученный раствор добавляют к смеси силилированного цитозина (14) и 8,3 г молекулярных сит . Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 5 дней. Затем реакционную смесь разбавляют 50 мл дихлорметана и 20 мл воды и выливают в 2 мл насыщенного водного NaHCO₃ при интенсивном перемешивании. Появляется белый осадок (гидроксид олова), который отфильтровывают на слое целита. Органический слой отделяют от водного и промывают водой (30 мл x 3). Водный слой экстрагируют дихлорметаном, объединенные дихлорметановые слои сушат над сульфатом натрия, а затем выпаривают в вакууме до получения сиропа, который очищают на хроматографической колонке с силикагелем (хлороформ:метанол 96:4) до получения соединения 15 в виде твердого вещества белого цвета, которое после перекристаллизации из 2-пропанола составляет 1,53 г (60%). Т.плавления 146-148^oC, []²⁵= -105,2 (C1, CH₂Cl₂); УФ (MeOH): _макс= 211,5, _мин= 272,5, при pH 7; _макс= 211,5, _мин= 284 при pH 9.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 3,65 (д, 2H, J = 4,85, H-5"); 4,00 (т, 1H, J = 3,72, H-3"); 4,11 (м, 1H, H-4"); 4,28 (м, 1H, H-2"); 4,38-4,55 (м, 6H, бензил CH₂); 5,56 (д, 1H, J = 7,5, H-5); 6,39 (д, 1H, J = 4,59, H-1"); 7,12-7,31 (м, 15H, H-аромат.); 7,63 (д, 1H, J = 7,5, H-6).

Гидрохлоридная соль (16) 1- -L-арабинофуранозилцитозина, полученная каталитическим гидрированием соединения 15

Палладийхлорид (315 мг, 1,78 ммоля) суспендируют в 160 мл метанола и восстанавливают, встряхивая при комнатной температуре в атмосфере водорода. К этой кислотной суспензии палладиевой черни добавляют раствор 300 мг соединения 15 в 15 мл метанола. Реакционную смесь встряхивают с водородом при комнатной температуре в течение 3 часов. После удаления катализатора полученный раствор нейтрализуют Dowex (HCO₃), концентрируют в вакууме, а затем очищают с помощью препаративной ТСХ (MeOH:CHCl₃, 3:5) до получения сиропа, который растворяют в 3 мл метанола, в который добавляют 1% раствора HCl в MeOH до pH 1, концентрируют досуха и тщательно растирают с 2-пропанолом, в результате чего получают 36 мг (22,1%) соединения 16. Т.плавления 190-194^oC []²_D⁵= -115,47 (C 0,07, H₂O); УФ (H₂O) _макс= 275 нм при pH 7; _макс= 209,5 273 при pH 11; _макс= 280 нм при pH 1.

¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 3,61 (д, 2H, H-5"), 3,82 (м, 1H, H-4"); 3,93 (м, 1H, H-2" или H-3"); 4,04 (шир.с, 1H, H-2" или H-3"); 5,18 (шир.с, 1H, C5"-OH, в обмене); 5,61 (шир.с, 1H, C2"-OH или C3"-OH, в обмене), 5,67 (шир.с, 1H, C2"-OH или C3"-OH, в обмене); 6,00 (д, 1H, J = 4,02, H-1"); 6,01 (д, 1H, J_5,6 = 7,8, H-5), 7,92 (д, 1H, J_5,6 = 7,8, H-6), 8,49 (шир.с, 1H, NH, способен к обмену), 9,38 (шир.с, 1H, NH, способен к обмену).

Гидрохлоридная соль 1- -L-арабинофуранозилцитозина (16), полученная обработкой соединения 15 треххлористым бором

5 мл 1М треххлористого бора в дихлорметане охлаждают до -72^oC (сухой лед-ацетон). К раствору треххлористого бора медленно добавляют раствор соединения 15 (180 мг, 0,351 ммоля) в 3 мл дихлорметана. После 2,75 часа (полное время реакции) охлаждающую ванну удаляют, растворитель и газ удаляют в вакууме. Остаток растворяют в холодном дихлорметане (10 мл) и полученный раствор выпаривают досуха (трижды, пока не получают остаток белого твердого вещества), добавляют холодный насыщенный раствор бикарбоната натрия для установления pH 6-7. Полученную смесь разбавляют этанолом, нагревают до кипения, обрабатывают древесным углем и фильтруют. Полученный фильтрат выпаривают досуха, получая сироп, который растворяют в 3 мл метанола, добавляют 1% раствор HCl в метаноле до pH 1, концентрируют досуха и тщательно растирают с 2-пропанолом до получения соединения 16 (66 мг, 78,4%).

9-(2,3,5-три-O-бензил- -L-арабинозил/аденин (18)

Тщательно высушенное соединение 9 (5 г, 8,8 ммоля) добавляют к 82 мл дихлорметана, предварительно насыщенного безводным хлористым водородом при 0^oC. После 2 часов реакции при 0^oC выпавшую в осадок p-нитробензойную кислоту (1,53 г) удаляют фильтрованием, а полученный фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, который выдерживают в полном вакууме при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученный таким образом 2,3,5-три-O-бензил- -L-арабинозилхлорид (соединение 10) растворяют в 50 мл дихлорметана, и этот раствор добавляют к смеси 4,5 г (18,8 ммоля) высушенного N-бензоиладенина⁵ (17) и 14,5 г молекулярных сит . Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 недели, фильтруют через слой целита и концентрируют в вакууме до получения сиропа, который обрабатывают на хроматографической колонке с силикагелем, используя смесь гексаны-ацетон (3: 1, R_f = 0,22). Полученный продукт выделяют и концентрируют в вакууме до получения сиропа, который растворяют и перемешивают с метильным аммиаком (20 мл) в бомбе из нержавеющей стали, а затем нагревают в течение ночи при 50-55^oC. Полученный раствор затем концентрируют при пониженном давлении до получения полутвердого вещества, которое после перекристаллизации из теплого изопропилового спирта дает соединение 18 (2,4 г, 50,7%. Т.плавления 128-129^oC. []²⁷_D/= -20,04 (1,04 CH₂Cl₂);

УФ (CH₂Cl₂): _макс= 213, 258,5.;

¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): 1,95 (шир.с, 14, NH, способен к обмену); 3,69 (д, 2H, J = 4,82, Н-5"); 4,18-4,30 (м, 6H, бензил CH₂); 4,51-4,64 (м, 3H, Н-2", 3", 4"); 5,73 (шир. с, 1H, H, способен к обмену); 6,52 (д, 1H, J = 4,00, Н-1"); 6,89-6,93, 7,17-7,37 (м, 15 H, H-аромат.бензильной группы); 8,17 (C, 1H, Н-2 или Н-8); 8,32 (с, 1H, Н-2 или Н-8).

9- -L-apaбинофуранозиладин (19)

Треххлористый бор (5 мл, 1М) в дихлорметане охлаждают до -72^oC (сухой лед-ацетон). Раствор соединения 18 (150 мг, 0,279 ммоля) в 5 мл дихлорметана медленно добавляют к раствору треххлористого бора. После 3,5 часов реакции охлаждающую ванну удаляют, а растворитель и газ удаляют в вакууме. Остаток растворяют в холодном дихлорметане (10 мл), полученный раствор выпаривают досуха (6 раз, до получения твердого вещества желтого цвета). Холодный насыщенный раствор бикарбоната натрия добавляют для установления pH 7-8. Полученную смесь разбавляют этанолом, нагревают до кипения, суспензию фильтруют через целит, полученный фильтрат концентрируют в вакууме до сиропа, который кристаллизуют из воды. Выход соединения составил 55 мг (74%). Т. плавления 256-258^oC. УФ (H₂O): _макс= 259.

¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 3,62-3,66 (м, 2H, Н-5"); 3,77 (шир.с, 1H, Н-4"); 4,13 (шир.с, 2H, Н-2", 3"); 5,12 (т, 1H, J = 5,4, C"5-OH, способен к обмену), 5,54 (д, 1H, J = 3,78, C"2-OH или C"3-OH, способен к обмену); 5,63 (д, 1H, J = 4,32, C"2-OH или C"3-OH, способен к обмену); 6,25 (д, 1H, J = 4,02, H-1"), 7,25 (шир.с, 2H, NH₂, способен к обмену); 8,13 (с, 1H, Н-2 или Н-8); 8,18 (с, 1H, Н-2 или Н-8).

Фиг. 10 представляет иллюстрацию альтернативного способа получения 1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L-рибофуранозы (соединения 10) из 1,2-ди-O-изопропилиден- -L-ксилофуранозы (соединение 3).

1,2-ди-O-изопропилиден- -L-ксилофураноза (3)

К 650 мл безводного ацетона добавляют 4 мл концентрированной серной кислоты, 5 г молекулярных сит 80 г безводного сульфата меди (2) и 40 г L-ксилозы. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 36 часов. Реакционную смесь фильтруют и тщательно промывают ацетоном, объединенные фильтраты нейтрализуют гидроксидом аммония, а затем выпаривают досуха. Добавляют 200 мл этилацетата, а затем фильтруют и выпаривают, получая масло, которое растворяют в 250 мл 0,2% HCl, и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 часов. За счет насыщенного NaHCO₃ устанавливают pH 8, а затем выпаривают досуха. Остаток экстрагируют этилацетатом. После удаления растворителя получают масло желтого цвета - соединение 3 (41,7 г, 82,3%).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 5,979 (д, J = 3,73 Гц, 1H, H-1); 4,519 (д, J = 3,6 Гц, 1H, H-2); 4,308 (шир. д, 1H, H-3); 4,08 (и, 3H, H-4 и H-5); 1,321 (с, 3H, CH₃); 1,253 (с, 3H, CH₃).

5-O-бензоил-1,2-ди-O-изопропилиден- -L- ксилофураноза (25)

Соединение 3 (41 г, 215,6 ммоля) перемешивают в пиридине (150 мл) и CH₂Cl₂ (150 мл) при 0^oC. BzCl (27,5 мл, 237 ммоля), растворенного в 30 мл пиридина, добавляют к этой смеси по каплям. Спустя 30 минут, добавляют 5 мл воды, полученную смесь выпаривают досуха, растворяют в EtOAc, промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. После выпаривания растворителя получают сироп оранжевого цвета, который кристаллизуют из Et₂O, получая соединение 20 (36 г). Маточный раствор выпаривают досуха, а остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем (1% CH₃OH/CHCl₃) до получения другой порции соединения 25 (12 г, всего выход 76%). Т.плавления 82-83^oC (литерат.¹ D_форма 83,5-84,5^oC).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,43, 8,07 (м, 5H, Ar-H); 5,97 (д, 1H, J = 3,6 Гц, H-1); 4,80 (кв, 1H, H-4); 4,60 (д, 1H, J = 3,6 Гц, H-2); 4,40, 4,20 (м, 3H, H-5, H-5", H-3); 3,50 (шир.с., 1H, D₂O, способен к обмену, 3OH); 1,51, 1,32 (2с, 6H, 2CH₃).

5-O-бeнзoил-1,2-ди-O-изoпропилидeн- -L-эритропентофураноз-3-улоза (26)

Соединение 25 (40 г, 136 ммолей) перемешивают в 450 мл CH₂Cl₂. К этой смеси добавляют пиридинийдихромат (PDC, 30,7 г, 81,6 ммоля) и Ac₂O (42,3 мл, 448,8 ммоля). Полученную смесь концентрируют до 1/5 ее начального объема, а затем в нее добавляют EtOAc (50 мл). Полученный раствор фильтруют, полученный фильтрат выливают на слой силикагеля (10 см x 5 см), элюируют EtOAc, объединенный элюат концентрируют и совместно испаряют с толуолом (50 мл x 2). После кристаллизации из гексана и EtOAc получают соединение 26 в виде твердого вещества белого цвета (38 г, 96%). Т.плавления 91-93^oC, []_D: -132 (с, 1,0, CHCl₃); литерат.² D_форма: т.плавления 93-94^oC, []_D: +135 (с, 1,0, CHCl₃); ИК (KBr): 1773 (ArCO), 1730 см^-1 (CO).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,97, 7,42 (м, 5H, Ar-H); 6,14 (д, 1H, J = 4,4 Гц, H-1); 4,74, 4,68 (м, 24, H-4, H-2); 4,50, 4,44 (м, 2H, H-5, H-5"); 1,52, 1,44 (2с, 6H, 2CH₃). Элементный анализ для (C₁₅H₁₆O₆): Рассчитано: C 61,64 H 5,52;

Найдено: C 61,42 H 5,53.

1,2-ди-O-изопропилиден- -L-рибофураноза (27)

Соединение 26 (37 г, 127 ммолей) растворяют в EtOH/H₂O (400 мл/100 мл) при 0^oC, добавляя порциями NaBH₄ (23,3 г, 612 ммолей). Полученную суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Ее фильтруют и полученный фильтрат выпаривают досуха и испаряют совместно с метанолом. После хроматографической обработки на силикагеле (0-15%, CH₃OH/CH₂Cl₂) и кристаллизации из EtOAc/гексан получают соединение 27 в виде иголок белого цвета (19 г, 79%). Т.плавления 86-87^oC, []_D= -31,5 (с, 0,62, CHCl₃), литерат.³ D_форма: т.плавления 86-87^oC, []_D= +37 (с, 0,59, CHCl₃).

ИК (KBr) 3356 см^-1 (OH).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 5,83 (д, 1H, J = 3,98 Гц, H-1); 4,595 (т, 1H, H-2), 4,055, 3,72 (м, 4H, H-3, H-4, H-5, H-5"); 2,38 (д, 1H, D₂O, способен к обмену, 3-OH); 1,83 (т, 1H, D₂O, способен к обмену, 5-OH); 1,58, 1,38 (2с, 6H, 2CH₃); Элементный анализ (C₈H₁₄O₅): Рассчитано: C 50,50 H 7,42;

Найдено: C 50,62 H 7,46.

3,5-ди-O-бензоил-1,2-ди-O-изопропилиден- -L- рибофураноза (28)

Соединение 27 (19 г, 100 ммолей) перемешивают в 300 мл пиридина при 0^oC, прикапывая при этом BzCl (40 мл, 348 ммоля), а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель выпаривают досуха. Остаток экстрагируют EtOAc, промывают насыщенным раствором NaHCO₃, сушат над сульфатом натрия, выпаривают растворитель и кристаллизуют из эфира, получая соединение 28 в виде твердого вещества белого цвета (39 г, 98%). Т.плавления 83-85^oC.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 8,07, 7,36 (м, 10H, Ar-H); 5,94 (д, 1H, J = 3,6 Гц, H-1); 5,05, 5,00 (м, 1H, H-2); 4,73, 4,63 (м, 3H, H-4, H-5, H-5"); 1,58, 1,35 (2с, 6H, 2CH₃). Элементный анализ (C₂₂H₂₂O₇). Рассчитано: C 66,50 H 5,64;

Найдено: C 66,32 H 5,57.

1-O-ацетил-2,3,5-три-O-бензоил- -L- рибофураноза (31)

Соединение 23 (38 г, 95 ммолей) перемешивают в 300 мл 1% HCl/CH₃OH при комнатной температуре в течение 30 часов, добавляют 20 мл пиридина, а затем раствор выпаривают досуха. Остаток выпаривают совместно с пиридином (30 мл x 2), а затем растворяют в 100 мл безводного пиридина, прикапывая BzCl (17 мл, 146 ммолей) при 0^oC, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель выпаривают, а остаток растворяют в EtOAc, промывают 0,5 н. HCl, затем насыщенным NaHCO₃, сушат над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя получают сырое соединение 30 в виде сиропа. Это неочищенное соединение перемешивают в ледяной уксусной кислоте (400 мл), а затем Ac₂O (100 мл) при 0^oC, прикапывая концентрированную серную кислоту (10 мл). Этот раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Полученную смесь выливают в смесь лед-вода, экстрагируют CHCl₃, нейтрализуют насыщенным раствором бикарбоната натрия, а затем сушат над сульфатом магния. После испарения растворителя получают светложелтый сироп, который кристаллизуют из метанола до получения соединения 31 в виде твердого вещества белого цвета (23,89 г, 49,6%, от 28-31). Т.плавления 124,7^oC []_D= 45,613, CHCl₃ (с, 1,0, CHCl₃); литерат. ⁴, Т.плавления 129-130^oC, []_D= -43,6 (с, 1,0, CHCl₃).

¹H-ЯМР (CDCl₃): 7,317, 8,134 (м, 15H, OBz); 6,437 (с, 1H, H-1); 5,835 (м, 2H, H-2 и H-3); 4,649 (м, 3H, H-4 и H-5); 2,003 (с, 3H, ).

II. Биологическая активность

Раскрытые здесь соединения могут быть оценены в плане их активности против HBV и EBV, как подробно описано далее, или другими способами, известными специалистам.

Пример 1. Биологическая активность против HBV

Используют клетки гепатомы человека с HBV (2.2.15 клетки) в этом анализе. Эти клетки выращивают до слияния в питательной среде с минимальным необходимым набором с 10% сывороткой плода теленка. Среду заменяют с трехдневными интервалами. При слиянии начинают обработку лекарствами, а затем продолжают ее в течение 3 дней. Еще раз добавляют ту же концентрацию лекарства после удаления среды из культур, и выдерживают эти культуры в течение еще 3-х дней. Среду после шестидневной обработки собирают, и вирусные частицы осаждают с использованием полиэтиленгликоля. Затем частицы переваривают, и проводят Southern анализ. Полученные блоты гибридизируют с HBV-специфическим зондом и оценивают количество вирусных ДНК по сравнению с уровнями ДНК из культур, которые не были обработаны лекарствами. Геномную ДНК переваривают Hind 111 и проводят Southern анализ. Уровни эписомальной ДНК определяют по отношению к интегрированной HBV ДНК. Рассчитывают концентрации лекарств, которые вызывают 50% ингибирование ДНК (ID₅₀) по сравнению с контрольными образцами. Полученные результаты суммированы в таблице 1.

Пример 2. Биологическая активность против EBV

H1 клетки поддерживают в длительной фазе роста в течение двух дней перед началом первичной обработки. Клетки центрифугируют при 600 g в течение 10 минут при комнатной температуре для того, чтобы отделить их от среды, содержащей существовавшие ранее вирусные частицы. H1 клетки высеивают в пластины с 24 ячейками при плотности 110⁵ клеток на ячейку в 2 мл свежей среды с лекарством или без него и инкубируют при 37^oC, в течение 5 дней. Среду, содержащую вирион, сохраняют и используют для оценки ингибирующего действия лекарств на продуктивность и заразительность вируса, используя биоанализ. Вирион осаждают из не содержащей клеток среды за счет центрифугирования при 45000 об/мин в течение 90 минут в роторе SW-50 Ti (Beckman). Вирионы ресуспендируют в 1 мл ростовой среды, а затем используют для инфицирования 110⁶ клеток Раджи в течение 48 часов. Так как уровень EBV DP активности в клетках Раджи после суперинфицирования пропорционален количеству добавленных варионов, индуцированную EBV специфическую DP активность можно определить. Ингибирующий эффект лекарства рассчитывают, сравнивая EBV DP активность с многократно разбавленными контролями. Если клетки обрабатывают 1 мМ L-FMAU в течение 6 дней, то не наблюдается никакого ингибирования содержания митохондриальных ДНК в H1 клетках.

Слот-блоттинг - Количество митохондриальных ДНК определяют с помощью метода слот-блоттинга (2). Обработанные и необработанные клетки H1 в количестве 210⁵ подвергают лизису в 200 мкл 10 мМ Tris.HCl (pH 7,5) растворе методом замораживания/оттаивания. Клеточный лизат обрабатывают 10 мкг/мл PHазы A при 37^oC в течение 30 мин, а затем протеиназой K (100 мкг/мл) при 55^oC в течение 2 часов. Равные количества 20 x SSC буфера добавляют к каждому клеточному лизату. После кипячения в течение 10 минут образцы наносят на нейлоновые мембраны (Hyhond-N, Amersham Corp.). Радиомеченный фрагмент митохондриальной ДНК человека используют в качестве зонда для ДНК гибридизации. Те же самые мембраны снова зондируют Alu ДНК человека после удаления зонда митохондриальной ДНК. Количество митохондриальной ДНК в обработанных и необработанных H1 клетках подсчитывают с помощью денситометра (LKB Ultroscan XL).

Полученные результаты представлены в таблице 2.

Эффект ингибирования соединений по EBV: Величину CD₅₀ получают, подвергая клетки H1 воздействию различных концентраций соединений в нормальной среде для роста при 37^oC в течение 72 часов, затем клетки подсчитывают и сравнивают полученные значения с контрольными. H1 клетки обрабатывают в течение 5 дней и определяют ID₉₀ в биоанализах.

Пример 3. Выведение L-(-)-FMAU из плазмы и печени

Оценивают очистку плазмы и печени мышей от L-(-)-FMAU после орального введения. Мышам вводят L-(-)-FMAU, меченые тритием (радиоспецифичность 9,3 мкмоль/мкКюри).

Фиг. 11 представляет график зависимости концентрации L- (-)-FMAU в плазме мышей после орального введения от времени, а фиг. 12 представляет график зависимости концентрации L-(-)- FMAU в печени мышей после орального введения от времени (перекрестно, 10 мг/кг вводят дважды в день в течение 30 дней перед фармакокинетическими исследованиями, а затем проводят исследования на тридцать первый день, после введения той же самой концентрации; заштрихованные кружки - введение 50 мг/кг дважды в день в течение 30 дней перед исследованиями, а затем на тридцать первый день проводят исследования после введения той же концентрации; незаштрихованные кружки - введение в первый раз 50 мг/кг в первый день исследования).

В указанные моменты времени (см. фиг. 10 и 11) у мышей отбирают кровь из ретро-орбитального синуса, используя обработанные гепарином капилляры. Плазму экстрагируют трихлоруксусной кислотой и нейтрализуют фреоном/триоктиламином. Надосадочные жидкости измеряют напрямую и рассчитывают концентрации.

Как показано на фиг. 10 и 11, пиковая концентрация L-(-)-FMAU в печени и плазме наблюдается примерно через один час. Соединение практически выводится как из плазмы, так и из печени спустя четыре часа.

Пример 4. Токсичность L-(-)-FMAU для самок мышей BDF1

Фиг. 13a иллюстрирует изменение веса тела через тридцать дней у контрольных BDF1 самок мышей. Фиг. 13b и 13c иллюстрируют изменения веса тела через 30 дней у самок мышей BDF1, которым вводят 10 мг/кг (13b) и 50 мг/кг (13c) дважды в день L-(-)-FMAU. Вес тела представлен репрезентативно как среднее и стандартное отклонение для 5-7 мышей. Как видно из фиг. 13 и 13c, L-(-)-FMAU, по-видимому, не оказывает серьезного влияния на вес мышей в течение тридцати дней, что указывает на хорошую переносимость соединения.

Пример 5. Клинический анализ плазмы мышей после обработки L-(-)-FMAU

На фиг. 14-20 представлены результаты клинических анализов химического состава плазмы мышей после введения L-(-)-FMAU в дозах 10 мг/кг (три мыши) или 50 мг/кг (три мыши) дважды в день в течение тридцати дней.

Фиг. 14 представляет график концентрации общего количества билирубина в плазме мышей в мг/дл. Фиг. 15 представляет график концентрации щелочной фосфатазы в мышиной плазме в Ед/л. Общее количество билирубина и щелочная фосфатаза являются показателями функционирования печени. Значения билирубина у мышей попадают в нормальный интервал значений для человека (менее чем 1,2 мг/дл), но значения для щелочной фосфатазы несколько выше нормального уровня для человека (30-114 Ед/л).

Фиг. 16 представляет график концентраций креатинина в мышиной плазме в мг/дл. Креатинин является показателем функций печени. За исключением мыши 50-2 уровни креатинина у обработанных мышей не отличаются от уровней у контрольных мышей.

Фиг. 17 представляет график концентрации AST (SGOT, сывороточная глутаминовая щавелевая трансаминаза) в мышиной плазме в Ед/л. Фиг. 18 представляет график концентраций AST (SGPT, сывороточная глутаминовая пировиноградная трансаминаза) в мышиной плазме в Ед/л. SGOT и SGPT являются показателями функции печени. За исключением мыши 50-2 (как для SGOT, так и для SGPT) и мыши 10-2 (только для SGOT) уровни энзимов обработанных мышей не отличаются от уровней, наблюдаемых у контрольных животных.

Фиг. 19 представляет график концентраций молочной кислоты в мышиной плазме в ммоль/л. Фиг. 20 представляет график концентраций молочной дегидрогеназы в мышиной плазме в Ед/л. Молочная кислота вырабатывается в мышцах при гликолизе. Молочная дегидрогеназа (LDH) присутствует в виде различных изоэнзимов в различных тканях. Выделение LDH в плазму может служить показателем повреждений тканей. Уровни молочной кислоты и молочной дегидрогеназы у обработанных мышей не отличаются заметно от уровней для контрольных животных.

III. Олигонуклеотиды

Олигонуклеотиды желательных последовательностей можно модифицировать, замещая один или более из L-нуклеозидов, раскрытых здесь, на нуклеозид в олигонуклеотиде. В предпочтительном варианте L-нуклеозид помещают на один конец олигонуклеотида. Модифицированный олигонуклеотид можно использовать, например, в антисмысловой технологии.

Антисмысловая технология относится обычно к модуляции генной экспрессии путем процесса, в котором синтерический нуклеотид гибридизуют с комплементарной последовательностью нуклеиновой кислоты, чтобы ингибировать транскрипцию или репликацию (если мишеневой последовательностью является ДНК), ингибировать трансляцию (если мишеневой последовательностью является РНК) или ингибировать процессинг (если мишеневой последовательностью является пре-РНК). Используя эту методику, можно модулировать широкий круг клеточных активностей. Простым примером может служить ингибирование биосинтеза протеинов за счет антисмыслового олигонуклеотида, связанного с мРНК. В другом варианте, синтетический олигонуклеотид гибридизуют со специфической генной последовательностью в двухцепочной ДНК, образуя трехцепочный комплекс (триплекс), который ингибирует экспрессию этой генной последовательности. Антисмысловые олигонуклеотиды можно также использовать для активации генной экспрессии косвенным путем, подавляя биосинтез природного репрессора. АОТ можно использовать для подавления экспрессии патогенных генов, например, тех, которые облегчают репликацию вирусов, включая вирус иммунодефицита человека (HIV), вирус гепатита B (HBV) и герпесвирус, а также раковые заболевания, особенно твердые опухоли, такие, как глиомы, рак молочной железы и меланомы.

Стабильность выбранного олигонуклеотида по отношению к нуклеазам представляет важный фактор для применений ин виво. Известно, что 3"-экзонуклеазная активность ответственна за разрушение немодифицированных антисмысловых олигонуклеотидов в сыворотке (Влассов В.В., Якубов Л.А., Prospects for Antisense Nucleic Acid Therapy of Cancer and AIDS, 1991, 243-266, Wiley-Liss, Inc. , New York; Nucleic Acids Res., 1993, 21, 145). В одном варианте раскрытые здесь L-нуклеотиды можно использовать для минимизации 3"-экзонуклеазой антисмысловых олигонуклеотидов.

Олигонуклеотиды настоящего изобретения, которые способны связываться с полирибонуклеиновой кислотой или полидеоксирибонуклеиновой кислотой, можно использовать в качестве антисмысловых агентов таким образом, что и обычные антисмысловые агенты. См., в основном: Antisense Molecular Biology and S-oligos, Synthesis 1 (Oct. 1988) (опубликовано Synthecell Corp., Rockville, Md. ); 2 Discoveries in Antisense Nucleic Acids (C.Brakel and R.Fraley eds. 1989); Uhlmann, et. al. , "Antisense Oligonucleotides: A New Therapeutic Technique", Chem.Rev. 90 (4), 1990; и Milligan J.F., Matteucci M.D., Martin J. C. , J. Med.Chem., 1993, 36, 1923-1937. Антисмысловые агенты настоящего изобретения можно использовать, конструируя антисмысловой агент, который способен селективно связываться с заранее определенной последовательностью полидеоксирибонуклеиновой кислоты или последовательностью полирибонуклеиновой кислоты с клеткой, содержащей такую последовательность (например, добавляя антисмысловой агент в культурную среду, содержащую такую клетку), так, чтобы антисмысловой агент был захвачен клеткой, связался с заранее определенной последовательностью и блокировал бы ее транскрипцию, трансляцию или репликацию. Требования для селективного связывания антисмыслового агента известны (например, длина 17 оснований для селективного связывания с геномом человека).

IV. Получение фармацевтических композиций

Раскрытые здесь соединения и их фармацевтически приемлемые соли, пролекарства и производные можно использовать для профилактики и лечения инфекций HBV и EBV, а также других родственных состояний, таких как анти-HBV или анти-EBV позитивные антитела и HBV- или EBV-позитивные состояния, хронические воспаления печени, вызванные HBV, циррозы, острые гепатиты, фульминантные (скоротечные) гепатиты, хронические персистентные гепатиты и утомляемость. Эти соединения или композиции можно также использовать в профилактических целях для предотвращения или замедления развития клинических заболеваний у индивидуумов с анти-HBV и анти-EBV антителами или HBV- или EBV- позитивными антигенами, или тех, кто находился в контакте с HBV или EBV.

Пациентов с любым из этих состояний можно лечить, вводя им эффективное HBV- или EBV-лечащее количество одного из описанных здесь активных соединений или их смеси, или фармацевтически приемлемого производного или его соли, выборочно, в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе. Активные вещества можно вводить любым подходящим способом, например, парэнтерально, перорально, внутривенно, подкожно, через кожу или наружно, в жидкой или твердой форме.

Активное соединение включают в фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель в количестве, достаточном для доставки в организм пациента терапевтически эффективного количества, которое не вызывает серьезных токсических эффектов у проходящего лечение пациента.

Предпочтительной дозой активного соединения для всех вышеперечисленных состояний будет доза в интервале от около 1 до 60 мг/кг, предпочтительно от 1 до 20 мг/кг веса тела в день, обычно от 0,1 до около 100 мг/кг веса тела в день. Эффективный интервал доз можно подсчитать на основании веса исходного нуклеозида, который следует внести. Если производное само проявляет активность, то эффективную дозу можно установить, как указано выше, используя вес производного, или другими методами, известными специалистам. В одном варианте активное соединение вводят в соответствии с указаниями на вкладыше к лекарственному продукту или в Physician"s Desk Reference (Настольный справочник врача) по 3"-азидо-3"-деокситимидину (AZT), 2",3"-дидеоксиинозину (DDI), 2"3"-дидеоксицитидину (DDC) или 2",3"-дидеокси-2",3"-дидегидротимидину (D4T) для HIV индикации.

Соединение обычно вводят в виде отдельной подходящей дозированной формы, включающей, но не ограничиваемой этим, дозу, содержащую от 7 до 3000 мг, предпочтительно, от 70 до 1400 мг активного ингредиента на единичную дозовую форму. Обычно удобна оральная доза 50-1000 мг.

В идеале активный ингредиент следует вводить для достижения пиковой концентрации активного соединения в плазме от около 0,2 до 70 мкМ, предпочтительно от около 1,0 до 10 мкМ. Этого можно достичь, например, за счет внутривенного введения от 0,1 до 5% раствора активного ингредиента, как вариант, в физиологическом растворе или в виде пилюли с активным ингредиентом.

Активное соединение можно приготовить в форме фармацевтически приемлемой соли. В том смысле, как здесь использован, термин фармацевтически приемлемые соли или комплексы, относится к солям или комплексам нуклеозидов, которые сохраняют нужную биологическую активность исходного соединения и демонстрируют минимальные, если вообще демонстрируют, нежелательные токсические эффекты. Нелимитирующими примерами таких солей могут служить (a) соли присоединения неорганических кислот (например, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты и т.п.) и соли таких органических кислот, как уксусной кислоты, щавелевой кислоты, виннокаменной кислоты, янтарной кислоты, малеиновой кислоты, аскорбиновой кислоты, бензойной кислоты, дубильной кислоты, памоевой кислоты, альгиновой кислоты, полиглутаминовой кислоты, нафталинсульфокислоты, нафталиндисульфоновой кислоты и полигалактуроновой кислоты; (b) соли присоединения оснований, образованные с такими катионами, как натрий, калий, цинк, кальций, висмут, барий, магний, алюминий, медь, кобальт, никель, кадмий и т.п., или с такими органическими катионами, как образованные N,N-дибензилэтилендиамином, аммиаком или этилендиамином; или (c) сочетанием (a) и (b), например, соль танната цинка и т.п.

Модификации активного соединения, конкретно, по N⁶ или N⁴ и 5"-O положениям, могут повлиять на биоусвояемость и скорость метаболизма активных соединений, обеспечивая контроль за поступлением активного соединения.

Концентрация активного соединения в лекарственной композиции зависит от скоростей абсорбции, инактивации и выделения лекарства, а также от других факторов, известных специалистам. Следует отметить, что величина дозы зависит от серьезности состояния пациента, которое следует облегчить. Также следует понимать, что для конкретного субъекта конкретный дозовый режим с течением времени должен изменяться в соответствии с индивидуальными потребностями и профессиональным опытом проводящего лечение врача, и приведенные здесь диапазоны концентраций являются лишь примерами и никоим образом не должны ограничивать объем изобретения или практическое применение заявленных композиций. Активный ингредиент можно принимать сразу или его можно разделить на несколько более мелких доз и принимать с различными интервалами между приемами.

Предпочтительным способом введения активного соединения является оральный. Оральные композиции обычно включают инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или могут быть запрессованы в таблетки. Для целей орального терапевтического приема активное соединение может быть включено в эксципиенты и использовано в форме таблеток, лепешек или капсул.

Частью композиции могут быть фармацевтически совместимые связующие агенты и/или адъюванты.

Таблетки, пилюли, капсулы, лепешки и т. п. могут содержать любые из следующих ингредиентов или соединений аналогичной природы: такие связующие, как микрокристаллическая целлюлоза, смола трагаканта или желатин; такие эксципиенты, как крахмал или лактоза, такие разрыхлители, как альгининовая кислота, Примогель или кукурузный крахмал, такие скользящие вещества, как стеарат магния или Sterotes или коллоидная двуокись кремния; подслащивающий агент, такой как сахароза или сахарин; или вкусовые агенты, такие как мята, метилсалицилат или апельсиновый концентрат. Если единичная дозовая форма представляет собой капсулу, она может содержать, помимо указанных выше типов, также такой жидкий носитель, как жировое масло. Кроме того, дозированная единичная форма может содержать различные другие материалы, которые модифицируют форму единичной дозы, например, сахарные, шеллаковые или другие покрытия для приема внутрь.

Активное соединение или его фармацевтически приемлемую соль, или его производное можно вводить как составную часть эликсира, суспензии, сиропа, вафель, жевательной резинки и т.п. Сироп может содержать, помимо активных соединений, сахарозу в качестве подслащивающего агента и некоторые консерванты, красители и отдушки.

Активное соединение или фармацевтически приемлемое производное, или его соль можно также смешивать с другими активными материалами, которые не обладают желаемым действием, или материалами, которые дополняют нужное действие, например, с антибиотиками, противогрибковыми препаратами, противовоспалительными или другими антивирусными препаратами, включая анти-HBV, анти-EBV, антицитомегаловирус или анти-HIV или анти-EBV агенты.

Растворы или суспензии, используемые для парэнтерального, внутрикожного, подкожного или наружного применения могут включать следующие компоненты; стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль и другие синтетические растворители; такие антибактериальные агенты, как бензиловый спирт или метилпарабен; такие антиоксиданты, как аскорбиновая кислота или бисульфат натрия; такие хелатирующие агенты, как этилендиаминтетрауксусная кислота; такие буферы, как ацетаты, цитраты или фосфаты и такие агенты для регулирования тонуса, как хлорид натрия или декстроза. Препараты для парэнтерального введения могут быть заключены в ампулы, одноразовые шприцы или флаконы с многоразовыми дозами, изготовленные из стекла или пластика.

Если препарат вводят внутривенно, предпочтительными носителями являются физиологический раствор или буферсодержащий физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS). В предпочтительном варианте активное соединение готовят с такими носителями, которые защищали бы соединение от быстрого выведения из организма, например, в виде композиций с регулируемым выделением, включая имплантаты и микрокапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые биосовместимые полимеры, такие, как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевую кислоту, коллаген, полиортоэфиры и полимолочную кислоту. Способы получения таких композиций известны специалистам. Эти материалы можно также приобрести у Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc.

Липосомные суспензии (включая липосомы, мишенями для которых являются инфицированные клетки с моноклональными антителами к вирусным антигенам) также предпочтительны в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Их можно получить в соответствии со способами, известными специалистам, например, как описано в патенте США N 4522811 (который включен в качестве ссылки). Так, например, липосомные композиции можно получить, растворяя соответствующий липид (липиды) (такой как стеароилфосфатидилэтаноламин, стеароилфосфатидилхолин, арахадоилфосфатидилхолин и холестерин) в неорганическом растворителе, который затем выпаривают, причем остается тонкая пленка сухого липида на поверхности сосуда. Затем в сосуд вводят водный раствор активного соединения или его монофосфатного, дифосфатного и/или трифосфатного производных. Затем этот сосуд вращают вручную, чтобы освободить липидный материал со стенок сосуда и диспергировать липидные фрагменты, в результате чего получают липосомную суспензию.

Настоящее изобретение было раскрыто со ссылкой на его предпочтительные варианты. Другие варианты и модификации изобретения должны быть очевидны из предшествующего подробного описания изобретения. Все эти варианты и модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.