индуктор интерферона пролонгированного действия

Формула изобретения

1. Индуктор интерферона пролонгированного действия, содержащий натриевую соль двуспиральной РНК из киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae, полимер-носитель и хлорид натрия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 6,0

Полимер-носитель - 10 - 70

Хлорид натрия - Остальное

2. Индуктор интерферона по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера-носителя содержит поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 4,5

Поливинилпирролидон М.в. 10000 - 35000 - 10 - 30

Хлорид натрия - Остальное

3. Индуктор интерферона по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера-носителя содержит полисахарид полигликин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 4,5 - 6,0

Полиглюкин - До 70

Хлорид натрия - Остальное1

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения и профилактики вирусных заболеваний различной этиологии.

Интерфероны относятся к классу индуцибельных белков клеток позвоночных, которые осуществляют широкие контрольно-регуляторные функции, направленные на сохранение клеточного гомеостаза. Важнейшими из этих функций являются антивирусная, противоклеточная, иммуномодулирующая и радиопротективная. Наиболее изученным к настоящему времени свойством интерферона является его практически универсальная антивирусная активность. Будучи при этом важнейшим неспецифическим фактором противовирусной резистентности интерферон продуцируется почти сразу же после попадания вируса в организм, однако естественно образующегося интерферона часто оказывается недостаточно для предупреждения развития инфекций.

В связи с этим выработаны два основных подхода к прикладному использованию интерферона при вирусных заболеваниях: введение готовых препаратов (экзогенного) интерферона и индукция выработки собственного (эндогенного) интерферона.

Индукторы интерферона, стимулирующие выработку в организме человека и животных эндогенного интерферона, имеют ряд преимуществ перед препаратами экзогенного интерферона и являются перспективными средствами профилактики и терапии вирусных инфекций.

К наиболее активным индукторам интерферона относятся синтетические полирибонуклеотиды и двуспиральные РНК (до РНК) природного происхождения /1/. Однако наряду с высокой эффективностью их как индукторов интерферона эти препараты обладают высокой токсичностью /2, 3/, проявляют мутагенную активность /4/ и быстро выводятся из организма.

Известен индуктор интерферона - двуспиральный полирибонуклеотидный комплекс (поли И:поли Ц) /4/, оказывающий ингибирующее действие в отношении широкого круга вирусов. Однако данный комплекс является высокотоксичным и обладает мутагенной активностью /4, 5/.

Наиболее близким к заявляемому препарату (прототипом) является индуктор интерферона "Ридостин", содержащий до РНК из киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 8-15% и дополнительно однонитевую высокополимерную РНК дрожжей /6, прототип/, индуцирующий высокие титры интерферона и проявляющий выраженную противовирусную активность в отношении различных форм герпесной и хламидиозной инфекций. Ридостин относится к классу среднетоксичных препаратов.

Недостатками препарата-прототипа являются:

- довольно высокое содержание до РНК - 8-15%;

- большое содержание нуклеотидного материала - 40-60%;

- быстрое выведение препарата из организма (в течение 24 ч),

требующее частого его приема для поддержания терапевтической дозы (максимум индукции интерферона достигается через 3 часа).

Поскольку препараты нуклеиновых кислот относятся к классу нестабильных высокотоксичных соединений, то увеличение дозировок ведет к усилению побочных эффектов.

В последние годы разработан ряд технологических приемов создания новых лекарственных форм, позволяющих решить проблему пролонгации действия лекарств при уменьшении их дозы и снижении побочных эффектов. Описаны способы получения пероральных форм (таблетки, капсулы) с дозированным высвобождением активного начала, липосомальных, мазевых, иммобилизованных форм, в которых лекарственное вещество связано с носителем методами физической и химической иммобилизации.

Среди синтетических полимеров-носителей следует отметить поливинилпирролидон (ПВП), который находит наибольшее применение в медицине. ПВП относится к полимерным поверхностно-активным веществам и образует растворимые комплексы со многими неорганическими и органическими соединениями: витаминами, антибиотиками, различными лекарственными веществами /7/. Показано, что инъекционные препараты с ПВП с молекулярной массой от 10000 до 60000 дают пролонгированный эффект. ПВП в водном растворе образует комплексы с большим числом лекарственных веществ (пенициллин, инсулин, вазопрессин и др.) /8/. Другим "клиническим" полимером является полиглюкин (ПГ) - среднемолекулярная фракция частично гидролизованного декстрана (полимер глюкозы). Нативный декстран - высокомолекулярный бактериальный полисахарид, продуцируемый микроорганизмами различных штаммов Leuconostos mecenteroides и некоторыми другими /9,10/. В результате фракционирования гидролизованного нативного декстрана получают полиглюкин с молекулярной массой 6010 тыс. Да, который применяют при хирургических операциях, нарушениях микроциркуляции в качестве плазмозаменяющих противошоковых препаратов /11/, а также в фармацевтических композициях противовирусного действия /12/.

Технической задачей прелагаемого изобретения является создание препарата индуктора интерферона на основе до РНК киллерных дрожжей, обладающего пролонгированной продуцирующей способностью интерферона в организме, при низком содержании до РНК и нуклеотидного материала, сохраняющего при этом свойство низкой токсичности.

Поставленная задача решается путем создания оптимальной лекарственной формы индуктора интерферона, в состав которого входит натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 2,4 - 6,0% и дополнительно полимерные вещества-носители в количестве 10 -70% (поливинилпирролидон - 10 - 30% или полиглюкин - до 70%), а в качестве наполнителя - хлорид натрия. При этом препарат натриевой соли до РНК дрожжей, полученный по ВФС 42-2643-95, представляет собой смесь до РНК и сопутствующего нуклеотидного материала клеток дрожжей Sacchromyces cerevisiae.

Пролонгация продуцирующей активности интерферона в организме при применении заявляемого препарата индуктора интерферона достигается за счет синергидного эффекта, проявляющегося при совместном действии полимера и лекарственного начала, а также за счет ионного взаимодействия между ними. При этом содержание дрожжевой до РНК ограничивается 2,4 - 6% (против 8 - 15% в прототипе) с 7,6 - 20% нуклеотидного материала (против 45 - 60% в прототипе), что и обеспечивает низкую токсичность нового препарата.

Патентуемый препарат индуктора интерферона представляет собой стерильную лиофилизованную субстанцию в виде белого аморфного порошка следующего состава, мас.%:

1) Натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 4,5

Поливинилпирролидон с М.в. 10000 - 35000 - 10 - 30

Хлористый натрий - Остальное

2) Натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 4,5 - 6,0

Полиглюкин - До 70

Хлористый натрий - Остальное

Новыми существенными признаками предлагаемого препарата индуктора интерферона являются:

- введение в состав препарата синтетических полимеров-носителей для обеспечения пролонгации;

- снижение содержания высокотоксичного компонента до РНК киллерных дрожжей до 2,5 - 5%.

Экспериментальные образцы комплексного препарата до РНК с ПВП (с разным процентным содержанием двуспиральных структур и полимера) и с полиглюкином охарактеризованы по следующим физико-химическим показателям: удельная экстинция, максимум поглощения, pH раствора. Процентное содержание до РНК в препаратах определяют хроматографическим методом и по температуре плавления.

Партии препарата имеют следующие биологические характеристики:

- интерферониндуцирующая активность - не менее 640 UE 50/0,2 мл;

- значение среднесмертельных доз для мышей при внутрибрюшинном способе введения - от 260 до 850 мг/кг веса.

Определение среднесмертельных доз комплексных препаратов до РНК киллерных дрожжей с полиглюкином и ПВП в сравнении с препаратом-прототипом "Ридостин" проводили экспресс-методом по Прозоровскому /13/ на белых беспородных мышах при внутрибрюшинном введении.

Результаты, представленные в таблице 1, показывают, что введение в состав препарата индуктора интерферона полимеров (поливинилпирролидона или полиглюкина) вызывает явное снижение токсичности последнего по сравнению с прототипом - препаратом "Ридостин".

Биологическую активность образцов препарата оценивали по показателям фагоцитарной активности (ФА) перитонеальных макрофагов, уровню противовирусной активности и титрам интерферона в сыворотке крови животных.

Метод определения фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов был использован в качестве метода первичной оценки новых форм индукторов интерферона. Выбор метода определялся следующими соображеними. Клетки макрофагальной фагоцитозстимулирующей системы (МФС) являются важным звеном неспецифической защиты организма от инвазивных агентов. Существует тесная корреляция между процессом индукции интерферона и функциональной зависимостью фагоцитов, повышением их способности к эндоцитозу и ферментативной деградации чужеродных частиц /14/. Следовательно, состояние МФС отражает изменение естественной резистентности организма при воздействии разных форм индукторов интерферона.

Тестирование проводили на монослойной культуре клеток по методу Rowley; в качестве объекта фагоцитоза использовали опсонизированные эритроциты барана.

Исследование показало, что препараты комплекса до РНК с ПВП с содержанием до РНК от 2,4 до 9,3% достоверно вызывают повышение поглотительной способности фагоцитов. Эффект стимуляции регистрируется через сутки и сохраняется в течение 5 сут после введения. Снижение содержания до-структур до 0,3% приводит к исчезновению фагоцитозстимулирующего эффекта (см. таблицу 2).

Для дальнейшего изучения в качестве оптимального был выбран комплекс с ПВП с содержанием до PHK 2,4%.

Оценка активности фагоцитов перитонеальных макрофагов мышей с содержанием до PHK 2,4% и равным содержанием ПВП (10 - 30%) показывает, что варьирование содержания в препарате носителя не приводит к дальнейшему усилению либо пролонгированию эффекта (таблица 3).

Введение в состав комплексного препарата до РHK высокомолекулярного ПВП с М.в. 35000 приводит к ярко выраженной пролонгации функциональной активности макрофагов до 5 сут в сравнении с препаратом "Ридостин" (см. табл. 4).

Таким образом, оценка влияния образцов до PHK на различных носителях на функцию макрофагов показывает, что через сутки после введения животным комплекса [до PHK - ПВП] фагоцитарная активность макрофагов повышается более чем в 1,5 раза по сравнению с до PHK без носителя (прототип "Ридостин"). Через 2 сут фагоцитозстимулирующее действие комплексных образцов препарата с низко- и высокополимерным ПВП не только сохраняется, но и усиливается до 128 и 184% соответственно. Через 3 сут фагоцитозстимулирующей активностью обладает лишь комплекс до PHK с высокополимерным ПВП (процент стимуляции - 150%). Данный комплекс приводит к пролонгации активности перитонеальных макрофагов до 5 сут. Комплекс до PHK с полиглюкином имеет сравнимые показатели фагоцитоза с "Ридостином".

В экспериментах по оценке интерферонииндуцирующей активности интерфероногенов использовали препараты до PHK (2,4%) с различными полимерными наполнителями (ПВП или полиглюкин) и "Ридостин". Исследование проводили на белых беспородных мышах линии ICR, самцах. Титр интерферона в сыворотках крови мышей, полученных в разные сроки после введения препаратов (5 мг/кг, внутрибрюшинно), определяли по предотвращению цитопатического действия вируса энцефаломиелита (100 ТЦД 50) на монослое клеток мышиных фибробластов L929. В качестве препаратов сравнения были использованы препараты ПВП и субстанции до PHK в дозах, эквивалентных их содержанию в комплексных препаратах. В таблице 5 представлены данные титров интерферона, полученные при введении комплексных препаратов до PHK опытным животным.

Представленные данные показывают, что комплексы до PHK с полиглюкином и поливинилпирролидоном сохраняют высокую интерферониндуцирующую активность при меньшем содержании до PHK, чем в "Ридостине". Из приведенных данных также видна зависимость от природы полимера, входящего в комплекс, и его молекулярного веса. ПВП с молекулярной массой 35000 обеспечивает интерферониндуцирующую активность на уровне 16 ед. даже через 5 сут после введения препарата, тогда как в сыворотках нормальных животных уровень интерферона составляет титр до 10 ед. Высокомолекулярный ПВП, введенный в комплекс с до PHK, приводит к усилению интерферониндуцирующей активности комплексного препарата через 24 ч после введения опытным животным в 2,6 раза по сравнению с препаратом-прототипом "Ридостин".

В вирусологических экспериментах была проведена сравнительная оценка противовирусной активности препаратов до PHK на различных полисахаридных носителях, отобранных в результате изучения их интерферон- и фагоцитоpстимулирующей активности. Исследование проведено на мышах линии CBA/Calac, зараженных вирусом Ласса (1000 БОЕ, интрацеребрально), вызывающим аренавирусную геморрагическую лихорадку. Комплексные препараты до PHK с полиглюкином и поливинилпирролидоном, а также "Ридостин" вводили животным интранозально за 4 и 24 ч до заражения в дозе 5 мг/кг. Установлено (см. таблицу 6), что комплексные препараты до PHK при введении подопытным животным как за 4, так и 24 ч до заражения обеспечивают достоверную защиту животных от летального воздействия вируса Ласса, чего не наблюдалось в группах мышей, которым вводили препараты дрожжевой до PHK, не содержащие полисахаридных носителей. Этот показатель превосходит эффект защиты, который обеспечивает препарат-прототип "Ридостин".

Сущность изобретения раскрывается в примерах конкретного выполнения.

Пример 1. Приготовление комплекса до PHK rиллерных дрожжей с поливинилпирролидоном

0,42 г натриевой соли двуспиральной рибонуклеиновой кислоты коллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и 1,7 г натрия хлорида растворяют при перемешивании 15-20 мин в 180 мл дистиллированной воды. К полученному раствору добавляют 6 мл 15%-ного раствора ПВП и перемешивают еще 15-20 мин. Раствор комплекса фильтруют через мембранный фильтр N 2 и лиофильно высушивают до содержания влаги 8-10%. Содержание компонентов в высушенном препарате составляет, в мас.%: Na-соль дсPHK - (2,4 - 4,5), ПВП - (10-30), NaCl - остальное.

Пример 2. Приготовление комплекса дсPHK киллерных дрожжей с полиглюкином

1 г натриевой соли двуспиральной рибонуклеиновой кислоты дрожжей Sac.cerevisiae и 3,04 г NaCl растворяют при перемешивании 15-20 мин в 400-450 мл дистиллированной воды и добавляют 40-45 мл 6%-ного полиглюкина. После 15-20 мин перемешивания раствор фильтруют через мембранный фильтр N 2. Полученный комплекс лиофильно высушивают до содержания влажности 8-10%. Содержание компонентов в высушенном препарате составляет, в мас.%: Na-соль дсPHK-(4,5-6,0), полиглюкин-(-до 70), NaCl - остальное.

Биологическую активность комплексных препаратов индукторов интерферона оценивают по показателям фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, по титрам интерферона в сыворотке крови животных и по уровню противовирусной активности исследуемых препаратов.

Пример 3. Определение активности перитонеальных макрофагов

Исследование проводят на беспородных мышах линии ICR обоего пола, массой 25-30 г. Препараты субстанции до PHK с содержанием двуспиральных структур от 0,3 до 9,3%, а также их комплексы с полиглюкином и поливинилпирролидоном (10 - 30%) вводят внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг. Пробы инъецируют в объеме 0,2 мл в водном растворе на 20 г массы животного. Контрольной группе вводят физиологический раствор в объеме 0,2 мл. Оценку функциональной активности макрофагов проводят через 5, 24, 48, 72 ч, 5 и 7 сут после введения препаратов. Макрофаги выделяют из перитонеальной полости мышей путем вымывания средой Ханкса с гепарином (5 ед. активности на 1 мл среды). Культивирование и все последующие операции проводят в среде Хэнкса с 2,5% сыворотки крупного рогатого скота. Суспензию макрофагов (110⁶ мл) высевают на покровное стекло, помещенное в бюкс диаметром 35 мм. Инкубацию проводят в течение 1 ч при температуре 37^oC. Для исследования фагоцитоза монослой отмывают от неприкрепившихся клеток. В качестве объекта для фагоцитоза наносят 20 мкл суспензии опсонизированных эритроцитов барана (ЭБ) из расчета 30 эритроцитов на макрофаг. Монослой макрофагов продолжают инкубировать в течение 45 мин, отмывают, высушивают и готовят для микроскопирования. Оценку фагоцитоза проводят путем подсчета перитонеальных макрофагов, поглотивших ЭБ.

Фагоцитарную активность (ФА) оценивают в % от общего числа макрофагов. Достоверность различий (P) данных, полученных в опыте и контроле, оценивают с помощью критерия Стьюдента при обсчете 250 клеток на монослой. Процент стимуляции определяют по отношению показателей опытных групп животных к контролю по формуле:



Динамика фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей при введении различных доз дсPHR с поливинилпирролидоном (ПВП) представлена в таблице 2. Исследование показало, что препараты комплекса дсPHK с ПВП с содержанием двуспиральных структур от 2,4 до 9,3% достоверно вызывает повышение поглотительной способности фагоцитов. Эффект стимуляции регистрируется через сутки и сохраняется в течение 5 сут после введения. Оптимальным является комплекс с ПВП с содержанием дсPHK 2,4%.

Динамика фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей при введении комплекса дсPHK 2,4% с различным содержанием ПВП (10-30%), представленная в таблице 3, показывает, что варьирование содержания в комплексном препарате носителя не приводит к дальнейшему усилению либо пролонгированию эффекта.

Введение в состав комплексного препарата дсРНК высокомолекулярного ПВП с М. в. 35000 ед. приводит к ярко выраженной пролонгации функциональной активности макрофагов до 5 сут в сравнении с препаратом-прототипом "Ридостин" (см. таблицу 4).

Анализ данных, представленных в таблицах 2-4, показывает, что через сутки введения животным комплекса (дсРНК-ПВП) фагоцитарная активность макрофагов повышается более чем в 1,5 раза по сравнению с дсРНК без носителя (прототип "Ридостин"); через 2 сут фагоцитозстимулирующее действие комплексных образцов препарата с низко- (М.в. 10000 ед.) и высокополимерным (М. в. 35000 ед.) ПВП не только сохраняется, но и усиливается до 128 и 184% соответственно; через 3 сут фагоцитозстимулирующей активностью обладает лишь комплекс с высокополимерным ПВП (стимуляция-150%); последний приводит к пролонгации активности макрофагов до 5 сут.

Пример 4. Определение интерферониндуцирующей активности комплексных препаратов

Комплексы дсРНК(2,4%) с ПВП (М.в. 10000 ед. и 35000 ед.) и с полиглюкином (ПГ) готовят и стандартизуют как описано выше. Исследование проводят на белых беспородных мышах линии ICR, самцах. Каждый из описанных препаратов и препарат-прототип "Ридостин" вводят 5 животным внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг массы животного в объеме 0,1 мл. Через 24 ч, 48 ч или 5 сут инъекции описанных препаратов мышей декапитируют, сыворотки объединяют и определяют интерферон микрометодом на 96-луночных планшетах на культуре клеток мышиных фибробластов L-929, используя серийные разведения сывороток и вирус энцефаломиокардита мышей в качестве тест-вируса. Титром интерферона считают величину, обратную наибольшему разведению сыворотки, вызывающему 50%-ную задержку цитопатического действия дозы вируса 100 ЦПД₅₀. В качестве препаратов сравнения используют препараты ПВП и субстанции дсРНК в дозах, эквивалентных их содержанию в комплексных препаратах.

Данные, представленные в таблице 5, показывают, что комплексы дсРНК с полиглюкином и ПВП сохраняют высокую интерферониндуцирующую активность при меньшем содержании двуспиральных структур, чем в "Ридостине". Кроме того, ПВП с М. в. 35000 ед. обеспечивает интерферониндуцирующую активность на уровне 16 ед. даже через 5 сут после введения препарата, а через сутки уровень индукции интерферона в 2,6 раза выше, чем при введении препарата "Ридостин" (препарат-прототип).

Пример 5. Изучение противовирусного действия индукторов интерферона с пролонгированным эффектом на примере вируса герпеса

Оценку противовирусной активности комплекса дсРНК с полиглюкином проводят на модели герпес вирусной инфекции.

В работе используют вирус простого герпеса 2 типа штамм MS, полученный из Государственной коллекции вирусов при Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАН. Перед использованием в эксперименте штамм прошел два последовательных пассажа на культуре клеток Vero E6. Титр вируса составлял 10⁵ ЦПД. Экспериментальными животными являются самцы морских свинок весом 200-220 г. В эксперимент берут 48 животных, которых делят на 4 группы. Животных 1-3 групп заражают на наружную поверхность penis вышеуказанным вирусным штаммом. Первой группе подопытных животных вводят внутримышечно в наружную поверхность бедра препарат комплекса дсРНК с полиглюкином. Второй группе вводят препарат-прототип "Ридостин". Третья группа животных заражается, но не получает никакого лечения (положительный контроль). Четвертая группа является отрицательным контролем, т. е. здоровые животные по отношению к которым сравнивается интенсивность герпетических изменений. Противовирусный эффект оценивали по разности баллов в 3- и 1-й опытных группах в период максимального проявления заболевания 3-4-й день после инфицирования).

Результаты, представленные в таблице 7, свидетельствуют о том, что у животных третья группы, не получавших никакого лечения после заражения (положительный контроль), к 4 сут из пустулезных элементов или эрозий был выделен вирус герпеса 2 типа в титре 10² ЦПТ. У животных второй группы, получавших лечение препаратом "Ридостин", на месте заражения отмечалась отечность и гиперимия в первые 2 сут, к третьим суткам отмечались отдельные пустулезные проявления; к 5 сут эти явления затухают. За животными первой группы, получавшими лечение новым комплексным препаратом, наблюдение продолжалось 45 сут. У данной группы отмечен быстрый эффект купирования внешних проявлений герпетической инфекции; не отмечено рецидивов заболевания, выделений вируса как на месте заражения, так и из крови не обнаружено.

Пример 6. Изучение противовирусного действия комплексного препарата дсРНК на примере вируса Ласса

В работе был использован вирус Ласса штамм "Joshia", депонированный в государственной коллекции вирусов при институте им. Д.И. Ивановского, депонент N 789. Штамм прошел 2 последовательных пассажа на культуре клеток Vero и 2 пассажа через мозг сосунков белой инбредной мыши. Вирусный материал хранили при температуре -20^oC. Для внутримозгового заражения животных использовали дозы 1000 БОЕ вируса Ласса в объеме 30 мкл. Опыты проводили на мышах линии CBA/Calac (гаплотип H-12^k) массой 10-12 г.

В эксперимент взято 110 мышей, которые были разделены на 11 групп по 10 животных в каждой. Все животные заражались вирусом Ласса в дозе 1000 БОЕ-мышь.

Схема эксперимента:

- 1 группа животных - положительный контроль (не получают лечения);

- 2 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (2,7%) с ПВП в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;

- 3 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (4,5%) с полиглюкином в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;

- 4 группа животных - интраназально вводят препарат Констроля к 1 группе (2,7% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;

- 5 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля ко 2 группе (4,5% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;

- 6 группа животных - интраназально вводят препарат "Ридостин" в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;

- 7 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (2,7%) с ПВП в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;

- 8 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (4,5%) с полиглюкином в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;

- 9 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля к 7 группе (2,7% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;

- 10 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля к 8 группе 94,5% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;

- 11 группа животных - интраназально вводят препарат "Ридостин" в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом.

По количеству выживших в этих группах животных определяют % защиты. Полученные данные приведены в таблице 6.

Представленные данные свидетельствуют о том, что введение комплексных препаратов дсРНК с полиглюкином и поливинилпирролидоном в сравнении с препаратом "Ридостин" (прототип) обеспечивают достоверную защиту животных от гибели как за 4 ч, так и за 24 ч до заражения вирусом.

Таким образом, предложены новые малотоксичные комплексные препараты индукторов интерферона на основе натриевой соли дсРНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и полисахаридных полимеров-носителей, которые обладают пролонгированным до 5 сут интерферониндуцирующим действием и обеспечивают достоверный противовирусный эффект.

Список литературы:

1. Ершов Ф.И., Жданов В.М., в кн. "Индукторы интерферона", М., 1982 г., стр. 7-18.

2. Фельдмане Г. Я., Дук Ф.Э. и др. в кн.: "Индукторы интерферона", М., 1982 г., стр. 70-75.

3. Масычева В. И., Надолинная И.Г. //Острая токсичность и кумулятивные свойства полирибонуклеотидных комплексов поли И: поли Ц и поли Г: поли Ц //Фармакол.токсикол.// 1981 г., N 3, стр. 353-358.

4. Матвеева В. Г. //Исследование мутагенной активности синтетических индукторов интерферона на лабораторных мышах// Вопр. вирусологии// 1982 г. // N 5 // стр. 540-543.

5. Смородинцев А. А., Аксенов О.А., Константинова И.К. и др.// Сравнительное исследование токсичности поли Г: поли Ц и поли И: поли Ц на различных объектах. //Вопр. вирусологии //1978 г.// N 2// стр. 201-206.

6. Патент РФ 2083221 //кл. A 61 K 38/20 //1993 г.

7. Кирш Ю.Э., Соколова Л.В. //Поливинилпирролидон и лекарственные композиции на его основе, способы их получения. //Хим. фарм. ж. //1983 г.// N 6// стр. 711-721.

8. Molyneux P., Fhmed G. //Kolloid-Z. // 1973// Bd 251// s. 310-328.

9. Биотехнология. //Учебное пособие// кн. 7// Иммобилизованные ферменты. //М.: Высш.шк.// 1987 г.// стр. 159.

10. Платэ Н.А., Васильев А.Е. в кн. "Физиологически активные полимеры", М.: Химия, 1986 г., стр. 296.

11. Кн. "Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР" //Под ред. Клюева М.А, М.: Медицина //1989 г.// стр. 512.

12. Патент РФ 2129878 //кл. A 61 K 39/00 //1996 г.

13. Прозоровский В.Б., Прозоровский М.П., Демченко В.М. // Экспресси-метод определени средней эффективной дозы и ее ошибки// Фармакол. токсикол. // 1978 г. // N 4// стр. 197-502.

14. Фадина В. А. , Масычева В.И., Дубатолова Т.Д //Изучение активности макрофагов в процессе интерферонообразования // в ст. Современные аспекты применения интерферонов и других иммуномодуляторов //М., 1990 г. //стр. 130.