ретиноиды и фармацевтическая композиция, их содержащая

Формула изобретения

1. Ретиноиды общей формулы



где Х обозначает оксогруппу или группу OR¹ в положении 4 или 5;

R¹ обозначает водород;

R² обозначает водород или алкил;

связи, обозначенные пунктиром, являются необязательными и 3,4-двойная связь может присутствовать только в том случае, когда Х находится в положении 5,

а также фармацевтически приемлемые соли карбоновых кислот формулы I.

2. Соединения по п.1 формулы



где Х и R² определены в п.1.

3. Соединения по п.1 формулы



где R¹ и R² определены в п.1.

4. Соединения по п.1 формулы



где R¹ и R² определены в п.1.

5. Соединение по п.1, представляющее собой (2Z, 4E, 6E, 8E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту.

6. Соединение по п.1, представляющее собой этил-(2Z, 4E, 6E, 8E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеноат.

7. Соединение по п.1, представляющее собой (2Z, 4E, 6E, 8E)-(S)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту.

8. Соединения по п.1 формулы



где R¹ и R² определены в п.1.

9. Соединения по п.1 формулы



где R¹ и R² определены в п.1.

10. Соединения по п.1, представляющее собой (2Z, 4E, 6E, 8E)-9-(5-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту.

11. Соединения по п.1 формулы



где R² определен в п.1.

12. Соединения по п.1, представляющее собой (2Z, 4E, 6E, 8E)-9-(5-оксо-2,6,6-триметилциклогекс-1,3-диенил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту.

13. Соединение по п.1, представляющее собой (2Z, 4E, 6E, 8E)-3,7-диметил-9-(2,6,6-триметил-5-оксоциклогекс-1-енил)нона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту.

14. Соединения по п.1 формулы



где R¹ и R² определены в п.1.

15. Соединение по п.1, представляющее собой (2Z, 4E, 6E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6-триен -8-иновую кислоту.

16. Соединения по пп.1-15, обладающие способностью уменьшать секрецию сальных желез и предназначенные, в частности, для лечения и профилактики угрей.

17. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью уменьшать секрецию сальных желез, предназначенная, в частности, для лечения и профилактики угрей и содержащая соединение по пп.1-15 и традиционные фармацевтические носители.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к новым ретиноидам общей формулы



где X обозначает оксогруппу или группу OR¹ в положении 4 или 5;

R¹ обозначает водород, алкил или ацил; и

R² обозначает водород или алкил;

связи, обозначенные пунктиром, являются необязательными, а 3,4-двойная связь может присутствовать только в том случае, когда X находится в положении 5;

а также к фармацевтически приемлемым солям карбоновых кислот формулы I.

Кроме того, изобретение относится к способу получения этих ретиноидов и их солей, фармацевтическим композициям, содержащим эти ретиноиды или их соли, а также к применению этих ретиноидов и их солей в качестве лекарств или для приготовления лекарств.

В соединениях общей формулы I алкильные группы предпочтительно представляют собой низшие алкильные группы (под "низшими" понимают группы с 1-7 атомами углерода), которые могут быть с прямой или разветвленной цепью, такие как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, гексил и гептил. Термин "ацил" предпочтительно относится к низшим алканоильным группам, таким как ацетил, пропионил, бутирил и пивалоил; к ароматическим ацильным группам, таким как бензоил и толуил; и к аралифатическим ацильным группам, таким как фенилацетил.

Соединения формулы I, в которых X обозначает группу OR¹, могут представлять собой как R- или S-энантиомеры, так и рацематы.

Предпочтительная группа соединений формулы I включает соединения формулы



в частности соединения, имеющие формулы



и



в которых X, R¹ и R² имеют указанные выше значения.

Кроме того, к подгруппам соединений формулы I относятся соединения формул ID, IE, IF, IG и IH









Примерами соединений формулы I являются:

(2Z, 4E, 6E, 8E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z, 4E, 6E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6-тетраен-8-иновая кислота,

2Z, 4E, 6E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6-триен-8-иновая кислота,

этил(2Z,4E,6E,8E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеноат

(2Z, 4E,6E,8E)-9-(5-оксо-2,6,6-триметилциклогекса-1,3-диенил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z, 4E, 6E, 8E)-(R)-9-(4-ацетолкси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z, 4E,6E,8E)-(R)-9-(4-метокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z, 4E, 6E, 8E)-(RS)-9-(5-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z, 4E, 6E,8E)-(RS)-9-(5-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1,3-диенил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z, 4E, 6E, 8E)-9-(5-оксо-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z,4E,6E,8E)-9-(4-оксо-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона- 2,4,6,8-тетраеновая кислота,

(2Z,4E,6E,8E)-(S)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота и

(2Z, 4E, 6E, 8E)-(RS)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновая кислота.

Соединения формулы I и их соли могут быть получены в соответствии с изобретением взаимодействием соединения общей формулы



где A обозначает фенил или замещенный фенил и Y^- обозначает анион, а X и связи, обозначенные пунктиром, имеют указанные выше значения, с 5-гидрокси-4-метил-5H-фуран-2-оном в присутствии основания, изомеризацией присутствующих в продукте реакции изомеров, в которых образовавшаяся в результате взаимодействия двойная связь C = C имеет цисконфигурацию, в транс-изомеры и при необходимости обработкой полученного продукта взаимодействия формулы I в соответствии с одной или нескольким из следующих реакций:

а) этерификацией карбоксильной или гидроксильной группы в сложный эфир;

б) этерификацией гидроксильной группы в простой эфир;

в) окислением гидроксильной группы до оксогруппы;

г) восстановлением оксогруппы до гидроксильной группы;

д) стерическим обращением гидроксильной группы; и

е) превращением карбоксильной группы в соль.

Вышеприведенные реакции могут быть осуществлены в соответствии с известными методами.

Взаимодействие соединения формулы II может быть осуществлено в соответствии с известными методами по реакции Виттига. При этом реакционные компоненты подвергают взаимодействию друг с другом в присутствии связывающего кислоту агента, например, в присутствии сильного основания, такого как КОН, в водном растворителе; или гидрида натрия, трет-бутилата калия или этилата натрия в безводном растворителе, таком как диметилформамид или метиленхлорид, в диапазоне температур от приблизительно -30^oC до комнатной. Предпочтительно применяют соединения формулы II, в которых X обозначает оксо- или гидроксигруппу. В результате реакции Виттига в рационной смеси образуется смесь из цис/транс-изомеров относительно двойной связи C=C. Эта смесь 4E/Z-изомеров может быть избирательно изомеризована до 4E-изомеров хорошо известным способом, например путем обработки палладиевым катализатором, таким как нитрат Pd(II).

Из анионов Y^- неорганических кислот предпочтительными являются ионы хлора и брома, а из анионов органических кислот предпочтительным является тозилокси-ион. Группа А предпочтительно представляет собой фенильную группу.

Этерификация карбоксильной группы в соединении формулы I может быть осуществлена, например, путем взаимодействия с галоидалкилом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в органическом растворителе, таком как, например, этилацетат. Этерификация гидроксильной группы может быть осуществлена путем взаимодействия с галоидацилом в присутствии основания, такого как пиридин. Гидроксильная группа может быть окислена до оксогруппы, например, в соответствии с методами Сверна (диметилсульфоксид/оксалилхлорид) или Дэсс-Мартина (периодат). Восстановление оксогруппы до гидроксильной группы может быть осуществлено гидридным восстановителем, таким как NaBH₄. Стерическая конфигурация гидроксильной группы может быть обращена в соответствии с методом Митсунобу (взаимодействие с трифенилфосфином, пара-нитробензойной кислотой и диэтилазодикарбоксилатом и последующее омыление).

Примеры солей, в которые могут быть превращены карбоновые кислоты формулы I, являются соли щелочных металлов, такие как соли Na и К, соли щелочно-земельных металлов, такие как соли Ca и Mg, и соли аммония, например, соли с алкиламинами и гидроксиалкиламинами или с другими органическими основаниями, такими как диметиламин, диэтаноламин и пиперидин.

Соединения формулы II могут быть получены по методике, описанной в Pure and Appl. Chem. 57, 741 (1985) или в других представленных в этой публикации литературных ссылках.

Соединения по изобретению могут применяться для лечения и профилактики кожных заболеваний, которые сопровождаются патологическими изменениями эпителия, например, для лечения угрей и псориаза, а также злокачественных и предраковых патологических изменений эпителия, опухолевых и предопухолевых изменений слизистой мембраны рта, языка, гортани, пищевода, мочевого пузыря, шейки матки и ободочной кишки.

Следовательно, соединения формулы I и их соли могут применяться в виде фармацевтических композиций.

Композиции, которые применяют для системного введения, могут быть получены, например, добавлением соединения формулы I или его соли в качестве активного ингредиента к нетоксичным инертным твердым или жидким носителям, которые обычно применяют в таких композициях.

Композиции могут вводиться энтерально, парентерально или локально. Композиции в виде таблеток, капсул, драже, сиропов, суспензий, растворов и суппозиториев пригодны, например, для энтерального введения. Композиции в виде растворов для инфузии или инъекции пригодны для парентерального введения.

При энтеральном и парентеральном введении соединения формулы I могут назначаться взрослым людям в дозах приблизительно 10-400 мг/день, предпочтительно 20-200 мг/день.

Для локального нанесения активные ингредиенты обычно применяют в виде мазей, настоек, кремов, растворов, лосьонов, аэрозолей, суспензий и т.п. Предпочтительны мази и кремы, а также растворы. Эти композиции, пригодные для локального нанесения, могут быть получены смешением указанных продуктов в качестве активных ингредиентов с нетоксичными инертными твердыми или жидкими носителями, которые пригодны для локальной обработки и которые обычно применяют в таких композициях.

Обычно для локального нанесения применяют приблизительно 0,1-5%-ные, предпочтительно 0,3-2%-ные растворы, а также приблизительно 0,1-5%-ные, предпочтительно 0,3-2%-ные мази или кремы.

При необходимости к композициям может быть добавлен антиокислитель, например токоферол, N-метил- -токоферамин, а также бутилированный гидроксианизол или бутилированный гидрокситолуол.

Активность соединений по изобретению для лечения угрей может быть подтверждена с использованием описанных ниже методов исследования.

1. Ингибирование пролиферации себоцитов человека (in vitro)

Литература: Methods in Enzymology 190, 334 (1990), Т. Doran и S. Shapiro

2. Изменения в дифференцировке себоцитов свиньи (in vitro), индукция кератина 7

Культуры себоцитов свиньи готовят из выделенных сальных желез находящихся в сознании поросят. Себоциты реагируют на обработку ретиноидами, экспрессируя кератин 7, что также соответствует процессу in vivo. Кератин 7 рассматривается как маркер для оценки измененной дифференцировки себоцитов. Полученный фенотип более не может образовывать секрет сальных желез. Измерение индукции кератина 7 базируется на применении метода ELISA с использованием мышиного моноклонального антитела антикератин-7.

3. Модель с использованием поросят (in vivo)

Кожа поросят имеет сходное анатомическое строение с кожей человека. В частности секрет сальных желез напоминает таковой у пациентов, страдающих угрями. При обработке ретиноидами сальные железы проявляют такие же гистологические изменения, какие происходят у человека. Поросята получают суточную оральную дозу исследуемого соединения в течение 8 недель. Каждые 2 недели делают биопсию и проводят гистологическое исследование.

В этом тесте соединение, полученное согласно примеру 1, в количестве 10 мг/кг уже через 3-4 недели приводит к выраженному уменьшению секрета сальных желез, который практически полностью исчезает через 8 недель. В противоположность изотретиноину никаких побочных проявлений на коже или слизистой мембране не выявлено при дозе 50 мг/кг.

Тератогенные воздействия относятся к наиболее серьезным побочным проявлениям всех ретиноидов. Соединения по настоящему изобретению обладают существенно более низкой тератогенностью по сравнению, например, с изотретиноином или третиноином. Для оценки потенциального тератогенного воздействия применяли метод с использованием культуры клеток зачатка конечности (литература: Arch. Toxicol. 60, 403 [1987] A. Kistler). Корреляция между значением IC₅₀ в этом тесте и тератогенностью in vivo является очень хорошей.

Соединение из примера N - IC₅₀ (нМ)

1 - > 1000

3 - > 1000

4 - > 1000

Изотретиноин - 200

Третиноин - 80

Ниже изобретение более подробно иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

50 г [(2E, 4E)-(R)-5-(4-гидрокси-2,6,6-триметил-1-циклогексен-1-ил)-3- метил-2,4-пентадиенил]трифенилфосфонийхлорида растворяли в 500 мл изопропанола и обрабатывали 11 г 5-гидрокси-4-метил-5H-фуран-2-она. После охлаждения реакционной смеси до -30^oC добавляли по каплям 120 мл водного 2 н. раствора КОН и смесь перемешивали еще в течение 1 ч при -30^oC в атмосфере аргона. Затем реакционную смесь сливали на 1,3 л ледяной воды, шестикратно экстрагировали, используя каждый раз по 500 мл смеси (2:1) гексан/этилацетат, водный щелочной раствор подкисляли добавлением охлажденной на льду 3 н. серной кислоты, продолжая охлаждение на льду, и далее трижды экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и упаривали. Вязкий остаток желтого цвета вновь растворяли в 800 мл этилацетата, обрабатывали 100 г силикагеля (фирмы Merck, 0,063-0,2 мм), слегка нагревали в паровой бане в течение 5 минут при интенсивном перемешивании и после фильтрации концентрировали с помощью роторного испарителя. Полученный таким образом желтый кристаллический неочищенный продукт обрабатывали 500 мл ацетонитрила и нагревали до 50^oC в атмосфере аргона. После порционного добавления приблизительно 700 мл ацетонитрила получали прозрачный желтый раствор. После добавления 1,1 г трифенилфосфина и 118 мл 0,125%-ного раствора нитрата палладия (II) в ацетонитриле реакционную смесь перемешивали при 50^oC в течение 3 ч. Конечный продукт кристаллизовали из реакционного раствора, охлажденного до -10^oC. Его отфильтровывали, промывали гексаном и сушили при 40^oC в глубоком вакууме. Путем перекристаллизации из гексана/этилацетата получали 15 г (2Z,4E,6E,8E)-(R)-9- (4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8- тетраеновую кислоту, t_пл 180-182^oC (разл.), []²⁰_D = -49,7 (с = 1, диоксан).

Пример 2

3 г карбоновой кислоты, полученной в соответствии с примером 1, последовательно обрабатывали 120 мл метилэтилкетона, 5,2 г тонкоизмельченного карбоната калия и 7,4 г этилиодида и кипятили с обратным холодильником в атмосфере аргона при интенсивном перемешивании в течение 2,5 ч. Реакционную смесь сливали на смесь лед/1 н. соляная кислота, экстрагировали простым эфиром, промывали водой, сушили и упаривали. Маслянистый неочищенный продукт фильтровали через силикагель (элюент гексан/этилацетат 2:1) и перекристаллизовывали из гексана. При этом получали 2,9 г этил(2Z,4E,6E,8E)-(R)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1- енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеноата в виде желтых кристаллов, t_пл 93-95^oC, []²⁰_D/ = -45,5 (с = 1, диоксан).

Пример 3

Аналогично примеру 1 взаимодействием 10 г [(E)-(R)- 5-(4-гидрокси-2,6,6-триметил-1-циклогексен-1-ил)-3-метил-2-пентен- 4-инил] трифенилфосфонийхлорида с 2,3 г 5-гидрокси-4-метил-5H- фуран-2-она с последующей катализируемой палладием изомеризацией неочищенного продукта и перекристаллизацией его из гексана/этилацетата получали 3,1 г (2Z,4E,6E)-(R)-9-(4-гидрокси- 2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6-триен-8- иновой кислоты в виде желтых кристаллов, t_пл 189-190^oC (разл.), []²⁰_D = -87,3 (с = 1, CHCl₃).

Пример 4

9 г [(2E, 4E)-3-метил-5-(2,6,6-триметил-5-оксо-1,3- циклогексадиен-1-ил)-2,4-пентадиенил] трифенилфосфонийбромида и 1,7 г 5-гидрокси-4-метил-5H-фуран-2-она суспендировали в 100 мл изопропанола. После охлаждения реакционной смеси до -30^oC добавляли по каплям 2 н. водный раствор гидроксида калия. После перемешивания в течение 30 минут при -30^oC реакционную смесь сливали на ледяную воду, трехкратно экстрагировали гексаном, водную щелочную фазу подкисляли добавлением охлажденной на льду 3 н. серной кислоты и несколько раз экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали водой, сушили и упаривали. Вязкий коричневатый остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюент гексан/этилацетат 3:1). Полученное таким образом желтое масло (приблизительно 4 г) растворяли в 100 мл ацетонитрила, обрабатывали 150 мг трифенилфосфина и нагревали до 50^oC, после чего по каплям в него добавляли 10 мл 0,125%-ного раствора нитрата палладия (II) в ацетонитриле. После выдержки при 50^oC в течение 2 ч реакционную смесь охлаждали до 0^oC. Через 2 ч отделившиеся кристаллы отфильтровывали под вакуумом и перекристаллизовывали из гексана/этилацетата. При этом получали 1,4 г (2Z,4E,6E, 8E)-9-(5-оксо-2,6,6-триметилциклогекса-1,3-диенил)-3,7- диметилнона-2,4,6,8-тетраеновой кислоты в виде желтых кристаллов, t_пл 188^oC (разл.).

Пример 5

7 г [(2E, 4E)-3-метил-5-(2,6,6-триметил-5-оксо-1-циклогексен-1-ил)- 2,4-пентадиенил] трифенилфосфонийбромида и 1,4 г 5-гидрокси-4-метил-5H-фуран-2-она суспендировали в 100 мл изопропанола. После охлаждения реакционной смеси до -30^oC в нее по каплям добавляли раствор, содержащий 1,76 г гидроксида калия в 30 мл изопропанола. После перемешивания в течение 40 минут при - 30^oC реакционную смесь сливали на 200 мл ледяной воды, шестикратно экстрагировали смесью гексан/этилацетат (2:1), органические фазы промывали водой, объединенные водные фазы подкисляли 3 н. серной кислотой и несколько раз экстрагировали этилацетатом. Органические фазы промывали (H₂O), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Маслянистый остаток растворяли в 100 мл этилацетата, обрабатывали 12 г силикагеля и интенсивно перемешивали при 40^oC в атмосфере аргона. После охлаждения силикагель отфильтровывали, тщательно промывали этилацетатом и раствор упаривали. Остаток растворяли в 30 мл ацетонитрила и после добавления 256 мг трифенилфосфина обрабатывали при 50^oC вводимым по каплям раствором, содержащим 26 мг нитрата палладия в 5 мл ацетонитрила. После перемешивания при 50^oC в течение 1 ч реакционную смесь охлаждали до 0^oC и через 1 ч отфильтровывали отделившийся осадок. После двукратной перекристаллизации из гексана/ этилацетата получали 1,4 г (2Z,4E,6E,8E)-3,7-диметил-9-(2,6,6- триметил-5-оксоциклогекс-1-енил)нона-2,4,6,8-тетраеновой кислоты в виде желтых кристаллов, t_пл 178-179^oC.

Пример 6

0,5 г (2Z, 4E, 6E,8E)-3,7-диметил-9-(2,6,6-триметил-5-оксоциклогекс-1- енил)нона-2,4,6,8-тетраеновой кислоты растворяли в 25 мл этанола при слабом нагревании и обрабатывали 100 мг боргидрида натрия, охлаждая на льду. После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч реакционную смесь сливали на ледяную воду, подкисляли 2 н. соляной кислотой и экстрагировали этилацетатом. Органические фазы промывали (H₂O), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Через небольшую колонку (силикагель, гексан/этилацетат [1: 1] ) отфильтровывали аморфный остаток и перекристаллизовывали из гексана/этилацетата. Таким путем получали 0,35 г (2Z,4E,6E,8E)-9-(5-гидрокси- 2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8- тетраеновой кислоты в виде желтых кристаллов, t_пл 152-154^oC.

Пример 7

2,5 г этилового эфира, полученного в соответствии с примером 2, растворяли в 35 мл абсолютного тетрагидрофурана и при 0^oC последовательно обрабатывали 3,8 г трифенилфосфина, 2,4 г пара-нитробензойной кислоты и добавляемым по каплям раствором, содержащим 2,5 г диэтилазодикарбоксилата в 30 мл тетрагидрофурана. После перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре смесь упаривали, остаток растворяли в простом эфире и выдерживали в холодильнике в течение 3 ч. Удаляли отделившийся при этом осадок (трифенилфосфиноксид), фильтрат концентрировали и остаток очищали с помощью хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат 5%). Полученное таким образом желтое масло (0,68 г) растворяли в 15 мл этанола и после добавления раствора, содержащего 0,78 г гидроксида калия в 3 мл воды, 3 мл этанола и 3 мл тетрагидрофурана, перемешивали при 45^oC в течение 6 ч. Затем реакционную смесь сливали на ледяную воду, подкисляли 1 н. соляной кислотой и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали (H₂O), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Кристаллический остаток отфильтровывали через небольшую колонку (силикагель, этилацетат) и после перекристаллизации из гексана/этилацетата получали 190 мг (2Z,4E,6E,8E)-(S)-9-(4-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил) - 3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеновой кислоты в виде желтых кристаллов, t_пл 178-180^oC, []²⁰_D = +48,2 (с = 0,66, диоксан).

Пример 8

1 г карбоновой кислоты, полученной в соответствии с примером 4, суспендировали в 50 мл метилэтилкетона, обрабатывали 1,5 г тонкоизмельченного карбоната калия и 1,3 мл этилиодида и выдерживали при температуре дефлегмации в течение 1 ч. Охлажденную реакционную смесь сливали на ледяную воду, нейтрализовали 1 н. соляной кислотой, экстрагировали этилацетатом, промывали (H₂O), сушили (Na₂SO₄) и упаривали. Полученное таким образом желтое масло очищали с помощью хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат [2:1]), получая в результате 1,5 г соответствующего этилового эфира в виде желтого масла.

1,18 г трихлорида церия7H₂О растворяли в 25 мл метанола и последовательно обрабатывали раствором полученного выше этилового эфира в 5 мл метанола и 120 мг боргидрида натрия. По завершении выделения газа (приблизительно через 5 минут) смесь упаривали и органический остаток очищали с помощью хроматографии (силикагель, гексан/этилацетат [4:1]). Таким путем получали 1,04 г соответствующего гидроксиэфира в виде желтого масла. Это масло растворяли в 25 мл этанола, обрабатывали раствором, содержащим 1,6 г гидроксида калия в 12 мл воды, и перемешивали при 40^oC в течение 4 ч в атмосфере аргона. Охлажденную реакционную смесь сливали на ледяную воду, подкисляли до pH 3 1 н. соляной кислотой и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали (H₂O), сушили (Na₂SO₄) и упаривали, получая 0,95 г аморфного остатка оранжевого цвета. Путем фильтрации через небольшую колонку (силикагель, гексан/этилацетат [1: 1] ) и кристаллизации из гексана/этилацетата получали (22,4E, 6E, 8E)-9-(5-гидрокси-2,6,6-триметилциклогекс-1,3-диенил)-3,7-диметилнона-2,4,6,8-тетраеновую кислоту в виде желто-оранжевых кристаллов, t_пл 108-110^oC.

Пример А

Желатиновые капсулы с твердым покрытием могут быть приготовлены следующим образом.

Ингредиент, мг/капсула

Высушенный распылением порошок, содержащий 75% соединения формулы I - 20

Диоктилсульфосукцинат натрия - 0,2

Натрийкарбоксиметилцеллюлоза - 4,8

Микрокристаллическая целлюлоза - 86,0

Тальк - 8,0

Стеарат магния - 1,0

Всего - 120

Высушенный распылением порошок, в состав которого входят активный ингредиент, желатин и микрокристаллическая целлюлоза и который имеет средний размер частиц активного ингредиента < 1 мкм (измеренный с помощью автокореллирующей спектроскопии), увлажняют водным раствором натрийкарбоксиметилцеллюлозы и диоктилсульфосукцината натрия и перемешивают. Полученную массу гранулируют, сушат и просеивают. Полученный гранулят смешивают с микрокристаллической целлюлозой, тальком и стеаратом магния. Порошком заполняют капсулы размера 0.

Пример Б

Таблетки могут быть приготовлены следующим образом.

Ингредиенты, мг/таблетка

Соединение формулы I в виде тонкоизмельченного порошка - 20

Порошкообразная лактоза - 100

Белый кукурузный крахмал - 60

Повидон К30 - 8

Белый кукурузный крахмал - 16

Тальк - 16

Стеарат магния - 4

Всего - 320

Тонкоизмельченный активный ингредиент смешивают с лактозой и с порцией кукурузного крахмала. Смесь увлажняют водным раствором повидона К30 и перемешивают и полученную массу гранулируют, сушат и просеивают. Гранулят смешивают с оставшимся количеством кукурузного крахмала, тальком и стеаратом магния и прессуют в таблетки соответствующего размера.

Пример В

Лосьон может быть приготовлен следующим образом.

Ингредиенты, г:

Тонкоизмельченное соединение формулы I - 1,0

Карбопол 934 - 0,6

Гидроксид натрия - q.s. до pH 6

Ингредиенты, г:

Этанол, 94%-ный - 50,0

Деминерализованная вода - до 100,0

Активный ингредиент вводят в смесь 94%-ный этанол/вода, защищая от света. Карбопол 934 перемешивают до завершения гелеобразования и с помощью гидроксида натрия регулируют значение pH.

Пример Г

Крем может быть приготовлен хорошо известным способом из указанных ниже ингредиентов.

Ингредиент, мас.%:

Соединение формулы I - 0,1 - 5

Цетиловый спирт - 5,25 - 8,75

Arlacel 165 (глицерил/стеарат ПЭГ 100) - 3,75 - 6,25

Miglyol 818 (триглицерид каприловой/каприновой/линолевой кислоты) - 11,25 - 18,75

Раствор сорбита - 3,75 - 6,25

Na₂ ЭДТК - 0,075 - 0,125

Карбопол 934Р (карбомер 934Р) - 0,15 - 0,25

Бутилированный гидроксианизол - 0,0375 - 0,0625

Метилпарабен - 0,135 - 0,225

Пропилпарабен - 0,0375 - 0,0625

NaOH (10%-ный раствор) - 0,15 - 0,25

Вода - q.s до 100,00

Пример Д

Ингредиент, мас.%:

Соединение формулы I - 0,1 - 5

Плюроник L 101 (полоксамер 331) - 10,00

Аэросил 200 (двуокись кремния) - 8,00

Жидкий PCL (эфир жирной кислоты) - 15,00

Цетиол V (децилолеат) - 20,00

Масло Neobee (триглицерид со средней длиной цепи) - 15,00

Эуханол G (октилдодеканол) - q.s. до 100,00

Физические свойства композиции могут быть изменены варьированием соотношения между адъювантами в примерах Г и Д.

Пример 9

Поросята получали суточную оральную дозу исследуемого соединения в течение 2 дней. Через 4 часа после приема второй дозы определяли уровень содержания полностью транс-изомерного аналога в ткани (сальные железы) и в плазме. Соотношение содержания исследуемого вещества Плазма/Ткань существенно ниже после приема 13-цис-3-гидроксиретиноевой кислоты. (см. табл. 1).

Пример 10

13-Цис-производные менее тератогенны, чем соответствующие полностью транс-изомеры. Это демонстрируют результаты, полученные в экспериментах in vivo на мышах (см. табл. 2)

Пример 11

13-Цис-4-оксо-ретиноевая кислота (D) и 13-цис-4-гидрокси-ретиноевая кислота (E) являются основными метаболитами 13-цис-ретиноевой кислоты (известный уровень техники). 3-Гидрокси-производные согласно изобретению (А) и 13-цис-ретиноевую кислоту (Роуккутан) вводили в виде суточной оральной дозы поросятам в течение 8 недель. Эффективность (уменьшение секрета сальных желез в соответствии со стандартными гистологическими исследованиями) и вредные побочные воздействия (кожно-слизистые явления) изучали в процессе введения исследуемых соединений.

Активность 13-цис-3-гидрокси-ретиноевой кислоты была аналогична активности известного соединения Роуккутан, однако побочные кожно-слизистые явления (главным образом конъюнктивит) проявились значительно позже.

Пример 12

Соотношение тератогенность/индукция кератина 7 (К7) для соединений согласно изобретению значительно превышает таковую для Роуккутана. Для оценки тератогенного воздействия применяли метод с использованием культуры клеток зачатка конечности ("limb bud"-анализ). К7 - индукция дефференцировки себоцитов свиньи (см. табл. 3).

Соединения A-H проиллюстрированы ниже.