способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума
Классы МПК: | A61K39/112 сальмонелла; шигелла G01N33/532 получение меченых иммунологических материалов C12Q1/10 Enterobacteria |
Автор(ы): | Пантюхина А.Н., Кротова М.Л. |
Патентообладатель(и): | Пермское научно-производственное объединение "БИОМЕД" |
Приоритеты: |
подача заявки:
2000-11-27 публикация патента:
10.11.2001 |
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при производстве сальмонеллезных диагностических и профилактических препаратов. Способ заключается в том, что инактивацию сальмонелл осуществляют формалином, очищают хлороформом, центрифугируют и конъюгируют с изотиоционатом флуоресцина. Затем отмывают от непрореагировавшего красителя путем многократного центрифугирования, стандартизуют и лиофилизируют. Техническим результатом является повышение чистоты и специфичности получаемого препарата. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5
Формула изобретения
1. Способ получения сальмонеллезного диагностикума путем инактивации сальмонелл, их стандартизации и центрифугирования, отличающийся тем, что инактивацию сальмонелл всех групп осуществляют формалином, взвесь сальмонелл очищают хлороформом, очищенную взвесь центрифугируют, осадок, содержащий сальмонеллы, ресуспендируют и конъюгируют с флюоресцентным красителем из расчета 2,5 мг красителя на 1

Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, а именно иммунологии, и может быть использовано при производстве сальмонеллезных диагностических и профилактических препаратов. В прикладной иммунологии, практической и научной бактериологической работе одним из наиболее распространенных тестов является реакция агглютинации (РА). Известно получение сальмонеллезных жидких инактивированных (нагреванием, ацетоном, спиртом или формалином) корпускулярных антигенов, очищенных от среды культивирования центрифугированием с последующей стандартизацией [1]. Наиболее близким к заявляемому способу является способ, заключающийся в культивировании сальмонелл на мясопептонном агаре, получении взвеси микробов в 0,9% растворе натрия хлорида после смыва с питательной среды, инактивации их формалином (группы A, B, C, D, E) или спиртом (брюшнотифозные бактерии), центрифугировании инактивированной взвеси после осаждения сальмонелл, стандартизации по оптическому стандарту и изучении специфических свойств в РА [2] . При соответствии результатов исследования регламентированным требованиям взвеси сальмонелл разливали в ампулы и герметизировали. Однако полученные по способу-прототипу сальмонеллы содержат антигенные структуры, обуславливающие ложноположительные результаты в РА с возбудителями кишечной группы. Кроме того, для получения диагностикума по способу-прототипу требуются значительные затраты питательных сред и биомассы сальмонелл. Исходя из этих негативных явлений был предложен экономичный способ получения сальмонеллезного диагностикума, повышающий качество препарата, сокращающий затраты. Изобретение направлено на решение задачи - получение комплексного сальмонеллезного диагностикума за счет повышения чистоты и специфичности препарата, обусловленных способом очистки. (Таблица 1). Решение данной задачи заключается в дополнительной обработке взвесей сальмонелл хлороформом, конъюгацией их с флуоресцентным красителем - изотиоцианатом флуоресцеина. Существенные признаки заявляемого способа:ограничительные - инактивация сальмонелл, центрифугирование, стандартизация;
отличительные - инактивация сальмонелл всех групп формалином, обработка хлороформом с последующей конъюгацией с флуоресцентным красителем - изотиоцианатом флуоресцеина, многократное центрифугирование до полного отсутствия красителя в надосадочной жидкости. Способ осуществляется следующим образом: Культуры сальмонелл серогрупп A, B, C, D, E, выращенные на МПА, смывают (каждую в отдельности) 0,9% раствором натрия хлорида, стандартизируют и соединяют в комплексную взвесь. Взвесь сальмонелл A, B, C, D, E инактивируют формалином. После этого из взвеси сальмонелл путем низкоскоростного центрифугирования осаждают агаровые частицы. Надосадочную жидкость, содержащую сальмонеллы, декантируют и подвергают высокоскоростному центрифугированию для осаждения сальмонелл. Полученный осадок ресуспендируют в 0,9% растворе натрия хлорида и обрабатывают хлороформом для удаления денатурированных белков, а также липидов. Очищенную взвесь сальмонелл центрифугируют, а осадок ресуспендируют и коньюгируют с изотиоцианатом флуоресцеина. По истечении времени конъюгации меченые сальмонеллы отмывают от непрореагировавшего-красителя, стандартизируют и оценивают в иммунофлуоресцентной реакции микроагглютинации (ИФРМА). При получении результатов, соответствующих регламентированным данным, меченые сальмонеллы лиофилизируют. Для проведения исследований с приготовленным диагностикумом на 1000 проб сывороток потребуется 1 мл культуры сальмонелл с концентрацией 20








1. Медуницин Н.В. Брюшнотифозные вакцины. Вакцинология. - М.: Триада - X. - 1999. - С. 172-173. 2. Петросян E.А., Коссова А.К., Ефимова А.А. Разработка метода получения очищенных антигенов в производственных условиях. Поливакцины. - Москва, - 1956. - Т. 8. - С. 245-276.
Класс A61K39/112 сальмонелла; шигелла
Класс G01N33/532 получение меченых иммунологических материалов