питательная среда для выделения патогенных энтеробактерий

Формула изобретения

Питательная среда для выделения патогенных энтеробактерий, содержащая источник азотистого питания, агар, лактозу, метиленовый синий, буфер, эозин, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит сахарозу, в качестве источника азотистого питания - панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2%, а в качестве буфера - трис(оксиметил)аминометан при следующем соотношении компонентов, в г/л дистиллированной воды:

Панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2% - 8-14

Агар - 8-12

Сахароза - 7,0-8,0

Лактоза - 7,0-8,0

Эозин - 0,55-0,65

Метиленовый синий - 0,06-0,07

Трис(оксиметил)аминометан - 0,35-0,65

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды.

Известно использование для выделения патогенных энтеробактерий ряда питательных сред: Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, Макконки агар, дезоксихолат-цитрат агар [1] .

Недостатком этих сред являются многокомпонентность состава, необходимость введения в их состав дорогостоящих компонентов, а также трудности в приготовлении.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявленному изобретению по совокупности признаков является среда Левина, содержащая источник азотистого питания (пептон) агар, лактозу, эозин, метиленовый синий, натрия фосфат [2] .

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического решения при использовании известной среды, принятой за прототип, является слабая селективность, она не подавляет роение протеев, которые образуют вуалеобразный налет по всей поверхности среды (Н-форма), что делает невозможным выделить патогенные энтеробактерии на данной среде в чистой культуре.

Недостатком среды является также то, что она не позволяет дифференцировать патогенные микроорганизмы от непатогенных, не разлагающих лактозу. Кроме того, известная среда не обладает достаточной буферной емкостью и поэтому образующаяся в результате сбраживания непатогенными микроорганизмами лактозы кислота может диффундировать в соседние участки среды, в результате чего не сбраживающие лактозу патогенные энтеробактерии изменяют свою окраску, что ухудшает дифференцирующие свойства среды.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных и дифференцирующих свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит сахарозу, в качестве источника азотистого питания содержит панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2%, в качестве буфера - трис (оксиметил) аминометан при следующем соотношении компонентов, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2% - 8-14

Агар - 8-12

Лактоза - 7,0-8,0

Сахароза - 7,0-8,0

Эозин - 0,55-0,65

Метиленовый синий - 0,06-0,07

Трис (оксиметил) аминометан - 0,35-0,65

Вода дистиллированная - Остальное

Использование панкреатического гидролизата рыбы в качестве азотистого питания с указанным содержанием солей подавляет роение протеев, которые на предлагаемой среде растут в виде изолированных О-форм колоний, тем самым создается возможность выделения патогенных энтеробактерий в чистой культуре.

Внесение в среду дополнительно сахарозы обеспечивает, четкую дифференциацию патогенных энтеробактерий, не разлагающих лактозу и сахарозу, от непатогенных бактерий, не разлагающих лактозу, но разлагающих сахарозу.

Введение в среду трис(оксиметил) аминометана, вместо натрия фосфата, повышает буферные свойства среды, что способствует тому, что кислота, образующаяся в результате сбраживания углеводов непатогенными микроорганизмами, не диффундирует в соседние участки среды, в результате чего патогенные микроорганизмы, не сбраживающие углеводы, не изменяют свою окраску, они бесцветны и прозрачны и их можно легко отличить от окрашенных в темно-фиолетовый цвет колоний непатогенных энтеробактерий.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. К 10 кг белкового сырья (фарш рыбы) добавляют 20 л водопроводной воды, смесь перемешивают в течение 10-15 мин, нагревают до 48-50^oС, вносят 1,1 кг фарша поджелудочной железы крупного рогатого скота или 0,3 кг панкреатина и ведут гидролиз в течение 5-6 часов до содержания аминного азота 0,5-0,6%. По окончании гидролиза смесь кипятят 10-15 мин и фильтруют. Фильтрат подщелачивают водным раствором аммиака до pH 8,2-8,5, кипятят 10-15 мин и фильтруют. Фильтрат упаривают до 22-25% сухих веществ и высушивают.

Полученный сухой панкреатический гидролизат рыбы, содержащий 0,3-1,2% хлористого натрия, в количестве 8 г растворяют в 1 л дистиллированной воды, далее последовательно растворяют 8,0 г агара, 7,0 г лактозы, 7,0 г сахарозы, 0,55 г эозина, 0,06 г метиленовый сини, 0,35 г трис(оксиметил) аминометана. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятя 1-2 мин, охлаждают до 45-50^oС, разливают в стерильные чашки Петри, чашки подсушивают в термостате при 371^oС в течение 90-120 мин. Контроль качества среды осуществляют путем посева тест-штаммов E. Coli 168/59, Sh. Flexneri 1A, S. Typhi H 901, Pr. Vulgaris Hxl9, Pr. Mirabilis 392, Serratia marcescens 1.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л воды растворяют 11 г панкреатического гидролизата рыбы, 10 г агара, 7,5 г лактозы, 7,5 г сахарозы, 0,6 г эозина, 0,065 г метиленовой сини, 0,5 г трис(оксиметил)аминометана. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1, 2 тем, что в 1 л воды растворяют 14 г панкреатического гидролизата рыбы, 12 г агара, 8 г лактозы, 8 г сахарозы, 0,065 г эозина, 0,07 г метиленовой сини, 0,65 г трис (оксиметил) аминометана. Далее по примеру 1.

Результаты бактериологического контроля на предлагаемой и известной средах представлены в таблице.

Из данных таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество, так как на ней подавляется роение протеев, которые растут в виде изолированных 0-форм колоний, что обеспечивает выделение из микробной ассоциации патогенных энтеробактерий в чистой культуре. На известной же среде протеи растут в виде Н-формы, вследствие чего происходит феномен роения, т. е. сплошной слизистый газон, покрывающий всю поверхность чашки, что делает невозможным выделение из микробной ассоциации патогеннных микроорганизмов в чистой культуре. Кроме того, предлагаемая среда обеспечивает четкую дифференциацию лактозонегативных патогенных микроорганизмов от лактонегативных непатогенных микроорганизмов, которые способны в отличие от патогенных ферментировать сахарозу, введенную в состав среды, что показано в таблице на примере штамма Serratia marcescens. На предлагаемой среде данный штамм образует темно-фиолетовые колонии и их легко отличить от бесцветных колоний патогенных бактерий, а на известной среде - те и другие колонии бесцветные.

Представленные преимущества предлагаемой среды повышают эффективность диагностики при бактериологических исследованиях клиническогго материала на энтеробактерии.

Источники информации

1. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. Под ред. Н. И. Жукова-Вережникова Москва, Медгиз. 1962 том 1. Стр. 312-313.

2. Там же (прототип).