способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении его иммуностимулирующей активности

Классы МПК:A61K31/739 липополисахариды
A61K35/66 микроорганизмы
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Самойленко Игорь Иннокентьевич
Приоритеты:
подача заявки:
2000-09-25
публикация патента:

Изобретение относится к способам получения иммуностимуляторов, лишенных таких побочных эффектов, как пирогенность. Согласно изобретению водный раствор пирогенала, взятого в концентрации 10-100 мкг/мл, подвергают гамма-облучению в дозе 40 или 120 кГр (дискретные значения). Технический результат: способ обеспечивает устранение пирогенности пирогенала. 4 з.п. ф-лы.

Формула изобретения

1. Способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении иммуностимулирующей активности, предусматривающий физико-химическое воздействие на пирогенал, находящийся в водном растворе, отличающийся тем, что указанное воздействие осуществляют в виде гамма-облучения в дозе 35-45 или 115-125 кГр.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что начальную концентрацию пирогенала выбирают равной 10-100 мкг/мл.

3. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что гамма-облучение осуществляют в дозе 40 или 120 кГр.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что гамма-облучению подвергают официнальный раствор пирогенала в ампуле.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что в качестве источника гамма-излучения используют кобальт-60.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармации, конкретно к способам получения иммуностимуляторов на основе природных полисахаридов, и может найти применение при создании соответствующих лекарственных композиций.

Пирогенал представляет собой комплексный препарат липополисахаридов и полисахаридов, выделенных из бактерии Pseudomomas aeruginosa и некоторых других микроорганизмов (М.Д. Машковский. "Лекарственные средства", часть 2, стр. 174-175, М. : Медицина, 1988 г.). Препарат применяют в хирургии при спаечной болезни, послеожоговых келоидных рубцах и контрактурах; в урологии - для лечения стриктур уретры и мочеточников, хронических простатитов и уретритов; в гинекологии - при воспалениях придатков матки; в венерологии - в качестве неспецифического иммуностимулятора в комплексной терапии сифилиса; в офтальмологии - для лечения увеитов, иридоциклитов, герпесвирусной инфекции глаз, вирусных кератитов и конъюнктивитов; в дерматологии - при псориазе, стрептодермии, нейродермитах; в косметологии - для заживления крупных дефектов кожи без образования грубого рубца; в аллергологии - в терапии бронхиальной астмы.

Введение пирогенала (внутримышечно) сопровождается повышением температуры (отсюда и название: "пирос" - по-гречески "огонь, жар", "геннао" - "порождаю"). Обычно вводимую дозу подбирают так, чтобы температура тела не повышалась более чем до 37,5-38oС; в ряде случаев, однако отмечаются потрясающий озноб и лихорадка (до 39,5oС) с головной болью и болями в пояснице.

Показано, что пирогенал не только стимулирует эмиссию противовоспалительных монокинов: интерлейкинов-1 и -6, фактора некроза опухолей и других, но и усиливает фагоцитоз, ускоряет образование антител, интерферона, - иными словами, проявляет иммуностимулирующую активность (см. выше относительно его использования в терапии сифилиса). Наличие побочных эффектов (вплоть до рвоты) серьезно ограничивает медицинское применение пирогенала в качестве иммуностимулятора и побуждает искать пути устранения токсического (пирогенного) действия пирогенала.

При мягком кислотном гидролизе пирогенала [Angewandte Chemie (Intl. Ed. In Eng.), 1954, 66, стр. 404-417] или при обработке его катионогенным полипептидом полимиксином В (Immunochemistry, 1976, 13, стр. 813-818) происходит отщепление липоидного компонента (так называемого липида А), ответственного за токсичность пирогенала в целом (D.C. Morrison, "Bacterial Endotoxins..." - in: Reviews of Infect. Diseases. - 1983, том 5, Дополнение 4, стp. S733-S747).

Целью изобретения является создание способа устранения у пирогенала его пирогенности при сохранении его иммуностимулирущей активности, - способа, который не требовал бы применения агрессивных или дорогостоящих и редких химических реактитов и допускал бы точное и легкое управление процессом.

Поставленная цель достигнута благодаря тому, что в способе устранения пирогенности пирогенала при сохранении его иммуностимулирующей активности, предусматривающем физико-химическое воздействие на пирогенал, находящийся в водном растворе, указанное воздействие осуществляют в виде гамма-облучения при мощности дозы 35-45 или 115-125 кГр, при этом концентрацию исходного липополисахарида берут равной 10-100 мкг/мл, а в качестве источника гамма-излучения используют кобальт-60. В предпочтительном варианте облучению подвергают официнальный (фармакопейный) раствор пирогенала концентрации 100 мкг/мл при мощности дозы 40 или 120 кГр.

Эффекты воздействия лучистой энергии на полисахариды, находящиеся вне "материнской" клетки и, следовательно, не защищенные клеточными органеллами, в литературе описаны: так, гамма-облучение водных растворов полисахаридов из S. Typhi в дозе 1 Мрад вызывает значительную деструкцию ("Радиобиология", 1970, 10, стр. 468). Известно, далее, что уменьшение иммуногенности форменных элементов крови может быть достигнуто при облучении УФ-светом в дозе 120-13500 Дж/м2 (заявка ЕПВ 229830), а в процессе облучения клеток млекопитающих УФ-светом (280-320 нм, 10-200 Дж/м2) образуются гликопротеины, проявляющие иммуносупрессорную (подавляющие иммунитет) активность (заявка ЕПВ 489732). С другой стороны, инактивация виpуcoв-кoнтaминантoв человеческого лейкоцитарного интерферона обеспечивается согласно патенту Российской Федерации 2080877 гамма-облучением в дозе 15-25 кГр.

Нами было обнаружено, что облучение пирогенала в водном растворе гамма-радиацией в строго определенных дозах сопровождается утратой пирогеналом своей пирогенности при сохранении иммуностимулирующей активности, что, по-видимому, обусловлено отщеплением липида А или, вероятнее всего, и других фрагментов молекулы пирогенала (в пользу последнего предположения свидетельствует дискретный характер радиационного воздействия: либо 35-45, либо 115-125 кГр, при этом промежуточные дозы подобного эффекта не вызывают). Косвенно сказанное подтверждается сдвигом профиля иммуностимулирующей активности в сторону активации В-лимфоцитов после гамма-облучения пирогенала дозой 120 кГр.

Детально изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Официнальный раствор пирогенала, выпускаемый в ампулах по 1 мл и имеющий концентрацию 100 мкг/мл, подвергают гамма-облучению от источника кобальт-60 в дозе 40 кГр.

Пример 2. Поступают аналогично примеру 1 с тем отличием, что дозу увеличивают до 120 кГр.

Пример 3. На белых беспородных мышах-самцах с массой 18-20 г производили оценку влияния раствора, полученного согласно примеру 1, на гуморальный иммунный ответ к эритроцитам барана, о чем судили по титру гемагглютининов в сыворотке крови и по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке животных, иммунизированных эритроцитами барана. Титр гемагглютининов и число АОК определяли на 6-е сутки после иммунизации животных оптимальной дозой эритроцитов барана, т.е. 5способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 2180571108 эритроцитов на мышь, внутрибрюшинно. Число АОК определяли слайд-методом Каннингэма. Раствор вводили внутрибрюшинно двукратно, с интервалом в два дня, в дозе 5 и 10 мкг/мышь, первое введение - спустя сутки после иммунизации. Среднее значение (из 12) log2 титра гемагглютининов составило 8,0, а число АОК на 106 спленоцитов равнялось 400, что соответствовало величинам для самого пирогенала.

Пример 4. На кроликах породы шиншилла осуществляли оценку пирогенной реакции на введение раствора, полученного согласно примеру 2: на трех животных - в дозе 50 мкг/кг, а еще три кролика служили контролем (пирогенал, доза 50 мкг/кг). Ректальную термометрию производили с помощью электронного термометра до введения раствора, спустя 2, 6 и 8 часов после введения. В случае раствора облученного пирогенала соответствующие величины составили 38,4способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,2o/39,4способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,4o/38,7способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,8o/38,4способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,8o, а в случае пирогенала - 38,7способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,7o/40,3способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,5o/39,6способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,2o/38,4способ устранения пирогенности пирогенала при сохранении   его иммуностимулирующей активности, патент № 21805710,2o.

Класс A61K31/739 липополисахариды

фармацевтическая композиция на основе лигандов паттерн-распознающих рецепторов, способ ее использования в качестве иммуностимулятора для лечения инфекций, вызванных бактериальными и вирусными патогенами, способ ее использования в качестве адъюванта в составе вакцин -  патент 2497541 (10.11.2013)
адъювантная композиция, включающая 3-о-деацилированный 4 -монофосфориллипид а -  патент 2427378 (27.08.2011)
способ получения липополисахаридной композиции, содержащей липид а, липополисахаридная композиция, содержащая липид а, 3-o-дезактивированный 4 -монофосфориллипид а -  патент 2302463 (10.07.2007)
способ лечения злокачественных опухолей кожи -  патент 2300403 (10.06.2007)
способ лечения спастической диплегии при дцп -  патент 2281091 (10.08.2006)
способ выделения биологически активной фракции (баф), содержащей s-липополисахариды (s-лпс) из грамотрицательных бактерий, баф для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых грамотрицательными бактериями, производящими эндотоксичные s-лпс, фармацевтическая композиция, способы индукции протективного иммунитета и улучшения состояния пациента при состояниях, требующих повышения иммунного статуса -  патент 2260053 (10.09.2005)
способ лечения спаечной болезни -  патент 2236232 (20.09.2004)
способ лечения хронического рецидивирующего трихомониаза -  патент 2180567 (20.03.2002)
способ лечения анкилозирующего спондилоартрита -  патент 2169563 (27.06.2001)
способ получения пирогенала -  патент 2168334 (10.06.2001)

Класс A61K35/66 микроорганизмы

применение штамма bifidobacterium lactis cncm i-3446 у детей рожденных, путем кесарева сечения (варианты) и пробиотическая композиция, содержащая указанный штамм (варианты) -  патент 2521500 (27.06.2014)
фармацевтическая композиция для лечения и профилактики бактериальной инфекции -  патент 2520346 (20.06.2014)
биорегуляторный комплекс, обладающий тканеспецифическим регенеративным действием, способ его получения и способ лечения катаракты с его использованием -  патент 2513994 (27.04.2014)
способ лечения больных циррозом печени -  патент 2509566 (20.03.2014)
способ лечения спастичности, сопровождающийся улучшением сознания у больных в вегетативном состоянии -  патент 2502503 (27.12.2013)
применение лизата актиномицетов для приготовления наружных средств ухода за ногтями -  патент 2500410 (10.12.2013)
новое применение пробиотиков -  патент 2497536 (10.11.2013)
способ получения бактериального препарата для профилактики послеродового эндометрита у крупного рогатого скота -  патент 2497534 (10.11.2013)
способ лечения хронического неспецифического эндометрита -  патент 2493863 (27.09.2013)
способ коррекции дисбиоза влагалища при метаболическом синдроме -  патент 2484669 (20.06.2013)
Наверх