способ получения иммобилизованной глюкоамилазы
Классы МПК: | C12N11/08 с носителем, являющимся синтетическим полимером C12N9/34 глюкоамилаза |
Автор(ы): | Селеменев В.Ф., Стоянова О.Ф., Шкутина И.В., Руадзе И.Д., Жеребцов Н.А., Слепокурова Ю.И., Смирнов В.Б. |
Патентообладатель(и): | Воронежский государственный университет |
Приоритеты: |
подача заявки:
2000-06-20 публикация патента:
27.04.2002 |
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности с целью получения глюкозы в процессе гидролиза крахмала. В предложенном способе в качестве носителя для иммобилизации используют Стиросорб МХДЭ-100 или макросетчатые комплексообразующие ионообменники АНКБ-2, АНКБ-35. Способ позволяет получить продукт с большей активностью и упростить процесс (сорбция ведется при комнатной температуре).
Формула изобретения
Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы, заключающийся в адсорбции фермента на органическом носителе и отмывании от несвязавшегося белка, отличающийся тем, что в качестве носителя используют неионогенный сорбент Стиросорб МХДЭ-100, полученный сшиванием полистирольных цепей монохлордиэтиловым эфиром, или макросетчатые аминокарбоксильные ионообменники АНКБ-2, АНКБ-35.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения иммобилизованной глюкоамилазы, и может быть использовано в пищевой промышленности с целью получения глюкозы в процессе гидролиза крахмала. Известны способы иммобилизации глюкоамилазы на ионообменных материалах: КМ-сефадексе, ДЭАЭ-целлюлозе, ДЭАЭ - сефадексе, амберлите CG-50 [1, 2]. Наиболее близким аналогом является получение иммобилизованной глюкоамилазы на анионите АВ-17-2П, отработанном в сахарно-рафинадном производстве, отмытым от слабосвязанных красящих веществ кислотно-щелочной обработкой и выдержанным в ацетатном буфере (рН 4,5-4,7) в течение 14 ч при 20oС. Процесс иммобилизации проводят при 40oС с последующей отмывкой носителя от несвязавшегося белка. Полученный препарат обладает активностью 2,2 ед/г носителя (52% от активности свободного фермента) [3]. Недостатками этого способа являются необходимость предварительного активирования носителя, проведение процесса при повышенной температуре, невысокая активность полученных препаратов. Заявляемое изобретение предназначено для расширения числа носителей, используемых для получения иммобилизованной глюкоамилазы. Их применение позволит получить продукт с большей активностью и упростить процесс (сорбция ведется при комнатной температуре). Вышеуказанная задача решается за счет того, что в известном способе получения иммобилизованной глюкоамилазы, заключающемся в адсорбции фермента на органических носителях и отмывании от несвязавшегося белка, согласно изобретению, в качестве носителя используют неионогенный сорбент Стиросорб МХДЭ-100, полученный сшиванием полистирольных цепей монохлордиэтиловым эфиром, или макросетчатые комплексообразующие ионообменники АНКБ-2 и АНКБ-35. Неионогенный сорбент Стиросорб МХДЭ-100 получен сшиванием полистирольных цепей монохлордиэтиловым эфиром, имеет 100% сшивки и относится к типу сверхсшитых сорбентов. Полистирольная сетка получается сшиванием цепей полистирола в набухшем состоянии и при высушивании обладает небольшой плотностью. Сорбент стремится увеличить свой объем до первоначального набухшего состояния, что приводит к интенсивному поглощению органических веществ. Внутренняя удельная поверхность Стиросорба МХДЭ-100 составляет 440 м2/г. АНКБ-2 представляет собой окисленный сополимер 2-метил-5-винилпиридина и дивинилбензола (ДВБ). В качестве функциональных групп содержит амино- и карбоксильные группы. АНКБ-35 получен карбоксиметилированием и аминированием химически модифицированного сополимера (ХМС) стирола и ДВБ и имеет в качестве функциональных амино- и карбоксильные группы. Эти носители обладают высокой механической прочностью, значительной устойчивостью к сжатию, не подвержены действию микроорганизмов. Матрица при условиях технологического процесса не выделяет токсичных веществ. Сорбцию проводят из раствора глюкоамилазы с рН 4,7![способ получения иммобилизованной глюкоамилазы, патент № 2181770](/images/patents/289/2181015/177.gif)
![способ получения иммобилизованной глюкоамилазы, патент № 2181770](/images/patents/289/2181015/177.gif)
1. Иммобилизованные ферменты. // Под ред. И.В.Березина. - М.: 1976, т. 1,2. 2. Микробные ферменты и биотехнология // Под ред. В.М.Фогарти, К.Бек, К. Т.Кели и др. - М.: Агропромиздат, 1986, - с. 317. 3. Ковалева Т.А. Физико-химические и кинетико-термодинамические аспекты катализа свободными и иммобилизованными амилазами.: Автореф. дис.... докт. биол. наук. - Воронеж, 1998. - 269 с. (Прототип).
Класс C12N11/08 с носителем, являющимся синтетическим полимером