способ прогнозирования привычного невынашивания
Классы МПК: | G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого |
Автор(ы): | Данькова И.В., Башмакова Н.В., Мазуров А.Д. |
Патентообладатель(и): | Уральский НИИ охраны материнства и младенчества |
Приоритеты: |
подача заявки:
2000-11-21 публикация патента:
10.07.2002 |
Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству. Способ обеспечивает повышение точности прогноза привычного невынашивания на прегравидарном этапе. Проводят исследование иммуногенетического профиля лейкоцитов периферической крови в супружеской паре, при этом на основе показателей HLA-антигенов I, II классов определяют дискриминантную функцию F по формуле: F (x) = 0,78
A1 + 0,74
A9 + 0,77
A11 + 1,71
A28 - 0,94
A29 - 0,95
B21 + 5,04
B39 - 1,54
B57 - 1,87
B65 - 0,22
Dr5 + 1,39
Dr7 - 0,83
MA9 + 0,56
MA10 - 1,12
MA28 + 1,73
MA29 - 0,74
MB5 + 0,56
MB7 + 0,71
MB8 +1,11
MB12 + 1,62
MB14 - 0,65
MB27 - 0,61
MB53 - 0,83
MDr2 - 1,60
MDr3 - 0,51
MDr5 - 0,67
MDr7 - 0,46, где А1, А9, А11, А28, А29 - гены А локуса жены, МА9, МА10, МА28, МА29 - гены А локуса мужа, В21, В39, В57, В65 - гены В локуса жены, МВ5, МВ7, МВ8, МВ12, МВ14, МВ27, МВ53 - гены В локуса мужа, Dr5, Dr7 - гены Dr локуса жены, MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 - гены Dr локуса мужа, N - норма, если F (x) > 0, P - патология, если F (x) < 0. Полученная функция обеспечивает чувствительность решающего правила прогноза 79,4%, специфичность 81%, эффективность 80,7%.
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
Формула изобретения
Способ прогнозирования привычного невынашивания беременности путем исследования иммуногенетического профиля лейкоцитов периферической крови в супружеской паре, отличающийся тем, что на основе показателей HLA-антигенов I, II классов определяют дискриминантную функцию F по формулеF (x) = 0,78
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
где А1, А9, А11, А28, А29 - гены А локуса жены,
МА9, МА10, МА28, МА29 - гены А локуса мужа,
В21, В39, В57, В65 - гены В локуса жены,
МВ5, МВ7, МВ8, МВ12, МВ14, МВ27, МВ53 - гены В локуса мужа,
Dr5, Dr7 - гены Dr локуса жены,
MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 - гены Dr локуса мужа,
и при значении F > 0 прогнозируют привычное невынашивание беременности, а при F < 0 делают заключение об отсутствии угрозы невынашивания беременности.
Описание изобретения к патенту
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования привычного невынашивания у женщин группы высокого риска по перинатальной патологии, что позволит формировать группы риска на прегравидарном этапе, с проведением у женщины при беременности иммуноцитотерапии аллогенными лимфоцитами отца будущего ребенка. АктуальностьВ последние годы иммунологическая концепция привычного прерывания беременности не вызывает ни у кого сомнения. В ее основе лежит представление о прерывании беременности как иммунологической реакции отторжения материнским организмом фетоплацентарного комплекса (реакция "хозяин против трансплантата") за счет слабого распознавания лимфоцитами женщины антигенных детерминант мужа и отсутствия достаточного стимула к формированию общих и локальных факторов иммуносупрессии в супружеских парах, где есть общие пары-антигены по системе HLA. Привычное невынашивание ассоциируется с реакциями лейкоцитарной сенсибилизации и развитием иммунологического конфликта, который проявляется усилением иммунного ответа матери на фетоплацентарный комплекс, несущий HLA-антигены отца, что подтверждается повышенной концентрацией антиплацентарных, лимфоцитотоксических антител, циркулирующих иммунных комплексов [1,2,8,9,10,11,12]. Аналог
Аналогом предлагаемого метода является описанный в литературе метод прогнозирования привычного невынашивания путем определения кариотипа супругов. Частота транслокаций у супругов с нарушением репродуктивной функции составляет 2-10%, т. е. значительно выше, чем в общей популяции (0,2%) [Кулаженко В.П и др., 1977 г.]. А по данным Н.А. Каретниковой (1980 г.) показано, что у супругов с привычным невынашиванием частота хромосомных вариантов в среднем составляет 21,7%, т.е. значительно выше, чем в популяции. Прототип
Прототипом предлагаемого изобретения является метод прогнозирования у женщины самопроизвольных абортов с помощью предварительного типирования HLA-антигенов лимфоцитов супругов [4]. Так, по данным Ю.М. Зарецкой, достоверно чаще при привычном невынашивании встречались HLA-антигены А9, В5 [4], тогда как в работе И.А. Гусевой (1995 г.) не были выявлены антигенные маркеры привычного невынашивания. Иммуногенетический подход к роли HLA-антигенов не ограничивается только поиском антигенных маркеров патологии [1,2]. Актуальным остается наличие общих пар антигенов системы HLA, особенно DR-локуса в качестве одной из причин, приводящих к невынашиванию [1,2]. Таким образом, вопрос о роли HLA-антигенов является актуальным и требует дальнейшего углубленного изучения. Прогноз невынашивания только на основе обнаружения возможных антигенов маркеров невынашивания (А9, В5) и наличия у супругов общих пар антигенов не может быть высоко достоверным, так как их частота достаточно высока как в норме, так и при патологии, к тому же описанные методы не позволяют дифференцировать привычное невынашивание неясной этиологии от других осложнений беременности. Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа прогнозирования привычного невынашивания беременности на прегравидарном этапе. Данный способ позволяет выявить группу риска, а значит, и предпринять соответствующие этиопатогенетические мероприятия. Способ основан на иммуногенетическом исследовании супружеской пары. Способ осуществляют следующим образом. Проводят забор 5 мл венозной крови натощак утром у каждого из супругов. Однократный забор крови позволяет одномоментно у супругов определить от 140 до 210 антигенов лейкоцитов по системе HLA в зависимости от панели сывороток [7]. Лимфоциты выделяют в градиенте плотности фиколл-верографина. Для типирования HLA-антигенов I класса используют мононуклеары, полученные из периферической крови с помощью градиентного центрифугирования на фиколл-градиенте. Для определения HLA-антигенов II класса исследуют лимфоциты, обогащенные В-клетками, т.к. этот класс антигенов лучше представлен на антигенпрезентирующих клетках, включая и В-лимфоциты. Лимфоциты, используемые в реакциях серологического типирования, должны быть жизнеспособны. После выделения лимфоцитов на фиколл-верографиновом градиенте проводят стандартный NIH-микролимфоцитотоксический тест для определения HLA-антигенов локусов А, В, Cw, DR. Реакция учитывается под микроскопом по проценту лизиса клеток: негативная реакция (лизировано менее 10% клеток), сомнительная (лизировано от 11 до 20% клеток), слабо позитивная (лизировано от 21 до 50% клеток), позитивная (лизировано от 51 до 80% клеток), сильно позитивная (лизировано 81 % и более клеток). В нашем случае одномоментно из 5 мл периферической крови каждого из супругов определяют 102 антигена по системе HLA. В итоге после проведения реакции определяют фенотип человека, состоящий из 8 антигенов, по два аллеля на каждом локусе: А, В, Cw, DR. Из всей панели определяемых генов в качестве наиболее информативных выделены 26 генов: А1, А9, А11, А28, А29, В21, В39, В57 и др. На основании математической обработки полученных данных (фенотип супругов с привычным невынашиванием) методом дискриминантного анализа выведено решающее правило прогноза, по которому определяют дискриминантную функцию F по формуле:
F(x) = R1
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
![способ прогнозирования привычного невынашивания, патент № 2184968](/images/patents/286/2184008/8226.gif)
где A1, A9, A11, A28, A29 - гены А локуса жены;
МА9, МА10, МА28, МА29 - гены А локуса мужа;
В21, В39, В57, В65 - гены В локуса жены;
МВ5, МВ7, МВ8, MB 12, MB 14, МВ27, МВ53 - гены В локуса мужа;
Dr5, Dr7 - гены Dr локуса жены;
MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 - гены Dr локуса мужа;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R26 - коэффициенты, равные соответственно: 0,78; 0,74; 0,77; 1,71; - 0,94; - 0,95; 5,04; - 1,53; - 1,87; - 0,22; 1,39; -0,83; 0,56; 1,12; 1,73; -0,74; 0,56; 0,71; 1,11; 1,62; - 0,65; - 0,61; - 0,83; -1,60; -0,51; 0,67;
const = - 0,46;
и при F менее 0 делают заключение об отсутствии риска невынашивания беременности, а при значении F более 0 прогнозируют возможное невынашивание беременности у данной пары. Чувствительность метода прогнозирования составляет 79,4%, специфичность 81%, эффективность 80,7%. Пример 1. Сильверстова О. Е. , 30 лет, наблюдалась в ГКБ 35 с 1996 г. после самопроизвольного выкидыша в 7-8 недель, последующего бесплодия II в течение 2 лет. При обследовании хромосомной патологии не выявлено, из инфекций - хламидии, гормоны крови в норме, экстрагенитальной патологии не выявлено, у жены HLA- А1, А24; В 15, В 18; Cw4, у мужа HLA-А3, А25; В7, В 18; Cw3, Cw5. Согласно правилу прогноза, F = 1,59 - женщина из группы "патология". После исключения антифосфолипидного синдрома (коагулологическими методами) и санации хламидиоза (неовир, ровамицин), на прегравидарном этапе и при беременности 5-6, 8 недель была проведена иммуноцитотерапия аллогенными лимфоцитами отца будущего ребенка в составе комплексной сохраняющей терапии. Беременность завершилась срочными родами в 38-39 недель рождением ребенка без признаков внутриутробной инфекции. Пример 2. Пастухова Т.Л., 26 лет, наблюдалась в ГКБ 35 с привычным невынашиванием с 1997 г. При обследовании хромосомной патологии не выявлено, гормоны крови в норме, по тестам функциональной диагностики - цикл овуляторный, из инфекций выявлен хламидиоз, персистирующая герпетическая инфекция (проведена санация неовиром, ровамицином), ВА не обнаружен в коагулологических тестах, у жены HLA- А1,А2; В35,В41; Cw2,Cw4, у мужа HLA- A3,A11; B35, B41; Cw2, Cw3. Согласно правилу прогноза, F = 0,32, а значит, женщина - из группы "патология". При беременности иммуноцитотерапия проводилась в сроках 5, 7-8, 11-12 недель, а так же в 18 недель после выявления снижения уровня ТБГ, плацентарного лактогена с целью профилактического лечения формирующейся плацентарной недостаточности. Беременность завершилась самостоятельными самопроизвольными родами в 39 недель беременности, ребенком без признаков внутриутробной инфекции и признаков перинатального повреждения ЦНС. Пример 3. Семенова В.Ю., 27 лет, обследовалась в ГКБ 35 после антенатальной гибели плода в 25 недель в 1997 г. При обследовании: хромосомный набор 46хх, 46ху; хламидиоз санирован в 1996 году; гиперандрогения яичникового генеза; из экстрагенитальной патологии отмечался хронический компенсированный тонзиллит. HLA-антигены: жена - HLA-A2, А24; В7, В 12; Cw4, Cw6; Dr1, Dr2; муж: HLA-A1,A3; B51, B27; Cw3, Cw5; Dr1, Dr-. Согласно правилу прогноза, F = -1,1, что соответствует группе "норма". В дальнейшем при обследовании у женщины был выявлен антифосфолипидный синдром. Во время беременности женщина получала глюкокортикоиды для коррекции гиперандрогении и в качестве этиотропной терапии антифосфолипидного синдрома. Беременность закончилась срочными родами живым плодом в сроке 38-39 недель. Источники информации:
1. Алексеев Л.П., Болдырева М.Н., Трофимов Д.Ю.// Иммунология. -1997.- 5.-С.21-23. 2. Алексеев Л. П. , Хаитов P.M., Яздовский В.В. // Вестн. АМН СССР. - 1988. - 5. - С.30-38. 3. Асанов М.О., Мазуров Вл. Д., Шилко В.И. (редакторы) //Медицинская и биологическая кибернетика. - Екатеринбург, 1998 - УрГУ -С.70. 4. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. - М. Мед., 1986.-С.207. 5. Кошелева Н.Г. Современная тактика лечения и профилактики невынашивания беременности с учетом этиопатогенеза // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. - 1996. - 3. - С.45-49. 6. Мазуров Вл. Д., Смирнов А.И. (редакторы) // Математическое моделирование медицинских и биологических систем. -Екатеринбург, 1988 - УрО АН СССР -С. 104. 7. Шабалин В.Н., Серова Л.Д. Современные представления об антигенах крови человека. // Рос. вест. перинатол. и педиатр. - 1996. - 6. -С 35-43. 8. Bjerck-S // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. - 1995. - may. Vol 73, 5. -P.373-376. 9. Christiansen-OB; Mathiesen-O; Husth-M; Lauristsen-JG; Grunnet-N. // Hum - Reprod. Scand. - 1997. - nov. - Vol.8, 11.- P1943-1947. 10. Dava-S // Curr - Opin - Obstet - Gynecol. Canada. -1996.- Vol.6, 2. -P153-159. 11. Kilpatrick-DC; Liston - WA. // Hum - Reprod. Gr.Br.- 1998. - Vol.8, 10.-P. 1645-1649. 12. Ober-C; Stect-T; van-der-Ven-K; Billstrand-C; Messer-L; Kwak-J; Beaman-K; Beer-A. // J - Reprod - Immunol. Amer. - 1993.-Vol.l6, 3. P. 195-207. 13. Van-Iddekinge- В; Hofmeyr-GJ; Bezwoda-WR; Wadee-AA; Van-Rooy-P. // Reprod. Immunol. Amer.- 1997.- Vol.30, 1.- P.37-44.
Класс G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого