способ приготовления суспензии фармацевтической композиции на основе субстанции генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека

Формула изобретения

1. Способ приготовления суспензии фармацевтической композиции на основе инсулина для картриджей и/или флаконов, включающий подготовку препарата инсулина в виде водной суспензии с концентрацией 100 ЕД/мл, содержащей протамин-сульфат, глицерин, консервант, отличающийся тем, что при подготовке композиции используют отечественную субстанцию генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека, а в раствор субстанции дополнительно вносят хлорид цинка в количестве 5,0-40,0 мкг на 100 ЕД инсулина, при этом готовят растворы, содержащие в расчете на 100 ЕД инсулина: 2,4 мг натрия фосфорнокислого двухзамещенного, 0,7-0,8 мг м-крезола и 0,3-0,4 мг фенола (первый раствор); 0,7-0,8 мг м-крезола и 0,3-0,4 мг фенола (второй раствор); 0,3-0,4 мг протаминсульфата и 7,5-8,5 мг глицерина (третий раствор); инсулин, хлорид цинка и 7,5-8,5 мг глицерина (четвертый раствор); далее второй раствор смешивают с третьим и четвертым (пятый раствор), а затем в одну емкость стерильно фильтруют первый раствор и пятый, образовавшуюся взвесь разливают в картриджи и/или флаконы, укупоривают их, обкатывают на них колпачки и проводят кристаллизацию в течение 48 ч при температуре 15-30^oС.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что розлив и последующую кристаллизацию осуществляют в картриджах, имеющих объем 1,5 или 3,0 мл.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что розлив и последующую кристаллизацию осуществляют во флаконах объемом 5,0 или 10,0 мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности к получению применяемых в терапии сахарного диабета препаратов инсулина пролонгированного действия. Изобретение может быть использовано в медицинской промышленности для изготовления суспензии отечественного генно-инженерного (рекомбинантного) протамин-инсулина человека в картриджах и флаконах.

Известен способ получения суспензии инсулина крупного рогатого скота с содержанием инсулина 100 ЕД/мл во флаконах (1).

К недостаткам этого способа относится необходимость лиофильного высушивания раствора, содержащего инсулин и фенол в подкисленной воде, после чего к лиофилизату добавляют смесь протамин-сульфата, глицерина и фенола в воде. Этот способ получения суспензии протамин-инсулина обеспечивает сохранение стабильности и биологической активности препарата лишь в течение 3 месяцев.

Известны препараты биосинтетического человеческого протамин-инсулина с концентрациями 40 и 100 ЕД/мл во флаконах и картриджах (2), а также суспензии свиного протамин-инсулина с содержанием инсулина 100 ЕД/мл, предназначенной для розлива во флаконы (2).

Известен способ приготовления суспензии свиного протамин-инсулина с концентрацией 100 ЕД/мл инсулина, предназначенной для розлива в картриджи (3). По этому способу в картриджи разливают препарат суспензии протамин-инсулина, приготовленной путем смешивания четырех растворов в инъекционной воде, а именно: раствора консервантов фенола и м-крезола; раствора протамин-сульфата и глицерина; раствора инсулина и глицерина и фосфатного буферного раствора с последующей кристаллизацией при 20-25 ^oС в течение 72 ч и розливом суспензии протамин-инсулина в картриджи; при этом на стадиях подготовки растворов их стерилизуют с помощью предфильтра с диаметром пор 0,45 мкм и фильтра с диаметром пор 0,22 мкм.

Задачей изобретения является разработка способа приготовления суспензии фармацевтической композиции на основе отечественного генно-инженерного (рекомбинантного) протамин-инсулина человека, с концентрацией инсулина 100 ЕД/мл, предназначенной для розлива в картриджи и флаконы, который обеспечивает более эффективное, чем известный способ (3), проведение технологического процесса.

Задача решается созданием способа приготовления суспензии генно-инженерного протамин-инсулина человека для картриджей и флаконов с дополнительным внесением хлорида цинка и формированием кристаллов суспензии не перед розливом, а непосредственно в картриджах и флаконах после розлива, на что требуется 48 ч вместо 72 ч, как в известном способе, при этом формирование суспензии (кристаллизация) осуществляют при 15-30^oС вместо более ограниченного интервала температур (20-25 ^oС) в известном способе. В отличие от известного заявляемый способ позволяет на стадиях стерилизующей фильтрации применять не двух-, а однократную стерилизацию.

Заявленный способ осуществляют следующим образом.

Готовят предварительно растворы, содержащие в расчете на 100 ЕД инсулина: 2,4 мг натрия фосфорнокислого двухзамещенного, 0,7-0,8 мг м-крезола и 0,3-0,4 мг фенола (первый раствор); 0,7-0,8 мг м-крезола и 0,3-0,4 мг фенола (второй раствор); 0,3-0,4 мг протамин-сульфата и 7,5-8,5 мг глицерина (третий раствор); инсулин, 4,0-40,0 мкг хлорида цинка и 7,5-8,5 мг глицерина (четвертый раствор); далее второй раствор смешивают с третьим и четвертым (пятый раствор), а затем в одну емкость стерильно фильтруют первый раствор и пятый, образовавшуюся взвесь разливают в картриджи и/или флаконы, укупоривают их, обкатывают на них колпачки.

Кристаллизацию проводят в обкатанных картриджах или флаконах в течение 48 ч при температуре 15-30^oС с четырехчасовым перемешиванием через 24 ч с момента розлива взвеси.

Разработанный способ позволяет приготовить суспензию отечественного человеческого протамин-инсулина для флаконов и картриджей (вкладышей), которая сохраняет свои физико-химические и биологические свойства в течение длительного времени (см. табл.1 и 2). Для препарата разработан проект Фармакопейной статьи предприятия (ФСП).

Заявляемый препарат позволяет обеспечить здравоохранение новым эффективным и недорогим отечественным антидиабетическим средством и уменьшить проникновение на российский рынок дорогостоящих импортных препаратов инсулина.

Заявленный способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Приготовление первого раствора. В 200 мл инъекционной воды растворяют 2,4 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 0,68 г м-крезола и 0,3 г фенола. После полного растворения внесенных компонентов в раствор добавляют 1 М соляную кислоту (до рН 7,4), а затем объем раствора доводят инъекционной водой до 500 мл.

Приготовление второго раствора. В 150 мл инъекционной воды растворяют 0,68 г м-крезола и 0,3 г фенола. После полного растворения внесенных компонентов объем раствора доводят инъекционной водой до 200 мл.

Приготовление третьего раствора. В 5 мл инъекционной воды, подогретой до температуры 45^oС, растворяют 0,27 г протамин-сульфата. После растворения внесенного компонента в раствор добавляют 5 мл охлажденной до температуры 4^oС инъекционной воды, затем вносят 8,0 г глицерина. Перемешивание смеси проводят до полного растворения глицерина, после чего объем раствора доводят инъекционной водой до 30 мл.

Приготовление четвертого раствора. 3,85 г отечественного генно-инженерного инсулина человека с активностью 26 ЕД/мг и содержанием цинка 0,12% заливают 25 мл охлажденной до температуры 4^oС инъекционной воды и перемешивают, затем при перемешивании добавляют 0,2 М раствор соляной кислоты до рН 3,0-3,4. Суспензию перемешивают до полного растворения инсулина, после чего в раствор, продолжая перемешивание, вносят 1,21 мл 1% раствора хлорида цинка, содержащего 4,8 мг цинка в 1 мл. Перемешивание после добавления хлорида цинка проводят в течение 5 мин, а затем, продолжая перемешивание, в раствор добавляют 8,0 г глицерина. После полного растворения глицерина объем раствора инъекционной водой доводят до 100 мл.

Приготовление пятого раствора. Во второй раствор при постоянном перемешивании вносят 30 мл третьего и 100 мл четвертого растворов. Объем полученного раствора доводят инъекционной водой до 450 мл.

Приготовление суспензии инсулина с протамин-сульфатом. Через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм в стерильную емкость фильтруют 500 мл первого раствора и 25 мл инъекционной воды, а затем при постоянном перемешивании стерильного первого раствора к нему через стерилизующий фильтр добавляют 450 мл пятого раствора и 25 мл инъекционной воды.

Розлив взвеси. Образовавшуюся при смешивании первого и пятого растворов взвесь разливают в картриджи по 1,5 или по 3 мл или во флаконы по 5 или 10 мл. Картриджи или флаконы укупоривают и обкатывают на них колпачки.

Кристаллизация. Обкатанные картриджи или флаконы помещают в кассеты и выдерживают при температуре 15^oС в течение 24 ч, затем кассеты помещают на встряхиватель и проводят перемешивание в течение 4 ч, после чего кассеты снимают и продолжают выдерживать суспензию в течение 20 ч при температуре 15^oС.

Пример 2.

Приготовление первого раствора. В 200 мл инъекционной воды растворяют 2,4 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 0,83 г м-крезола и 0,36 г фенола. После полного растворения внесенных компонентов в раствор добавляют 1 М соляную кислоту (до рН 7,5), а затем объем раствора доводят инъекционной водой до 500 мл.

Приготовление второго раствора. В 150 мл инъекционной воды растворяют 0,83 г м-крезола и 0,36 г фенола. После полного растворения внесенных компонентов объем раствора доводят инъекционной водой до 200 мл.

Приготовление третьего раствора. В 5 мл инъекционной воды, подогретой до температуры 55^oС, растворяют 0,40 г протамин-сульфата. После растворения внесенного компонента в раствор добавляют 5 мл охлажденной до температуры 4^oС инъекционной воды, затем вносят 8,0 г глицерина. Перемешивание смеси проводят до полного растворения глицерина, после чего объем раствора доводят инъекционной водой до 30 мл.

Приготовление четвертого раствора. 3,85 г генно-инженерного инсулина человека с активностью 26 ЕД/мг и содержанием цинка 0,12% заливают 25 мл охлажденной до температуры 4^oС инъекционной воды и перемешивают, затем при перемешивании добавляют 0,2 М раствор соляной кислоты до рН 3,0-3,4. Суспензию перемешивают до полного растворения инсулина, после чего в раствор, продолжая перемешивание, вносят 7,6 мл 1% раствора хлорида цинка, содержащего 4,8 мг цинка в 1 мл. Перемешивание после добавления хлорида цинка проводят в течение 15 мин, а затем, продолжая перемешивание, в раствор добавляют 8,0 г глицерина. После полного растворения глицерина объем раствора инъекционной водой доводят до 100 мл.

Приготовление пятого раствора. Во второй раствор при постоянном перемешивании вносят 30 мл третьего и 100 мл четвертого раствора. Объем полученного раствора доводят инъекционной водой до 450 мл.

Приготовление суспензии инсулина с протамин-сульфатом. Через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм в стерильную емкость фильтруют 500 мл первого раствора и 25 мл инъекционной воды, а затем при постоянном перемешивании стерильного первого раствора к нему через стерилизующий фильтр добавляют 450 мл пятого раствора и 25 мл инъекционной воды.

Розлив взвеси. Образовавшуюся при смешивании первого и пятого растворов взвесь разливают в картриджи по 1,5 или по 3 мл или во флаконы по 5 или 10 мл. Картриджи или флаконы укупоривают и обкатывают на них колпачки.

Кристаллизация. Обкатанные картриджи или флаконы помещают в кассеты и выдерживают при температуре 30^oС в течение 24 ч, затем кассеты помещают на встряхиватель и проводят перемешивание в течение 4 ч, после чего кассеты снимают и продолжают выдерживать суспензию в течение 20 ч при температуре 30^oС.

Данные по контролю сохранности препарата при различных сроках хранения в картриджах и флаконах приведены в табл. 1 и 2.

Источники информации

1. Патент США 386358, кл. НКИ 260/112.7, кл. МКИ С 07 С 103/52, 25.02.1975 (Eli Lily and Company, Indiapolis).

2. Регистр лекарственных средств России (Энциклопедия лекарств). - М.: Изд-во "РЛС-2000", 1999, с. 948.

3. Патент РФ 2157698, кл. МКИ А 61 К 38/28, 20.10.2000 (Государственный институт кровезаменителей и медицинских препаратов).