способ выявления микобактерий туберкулеза

Формула изобретения

Способ выявления микобактерий туберкулеза, включающий обработку патологического материала с последующим посевом и бактериоскопией посевного осадка, отличающийся тем, что обработку патологического материала осуществляют препаратом "Лесептик" концентрацией 0,1%, причем патологический материал обрабатывают указанным препаратом в равных объемах в течение 18-24 ч при комнатной температуре.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области микробиологии, касается способа предпосевной обработки патологического материала с последующим посевом на плотные питательные среды и бактериоскопией посевного осадка и может быть использовано для выявления микобактерий туберкулеза.

Уже известен способ выявления микобактерий туберкулеза, включающий предпосевную обработку патологического материала серной, соляной, щавелевой кислотой или щелочью и посев на плотную питательную среду (1). Однако известный способ сложен в осуществлении из-за необходимости четкой временной экспозиции и использования агрессивных химических реагентов.

Известен также способ выявления микобактерий туберкулеза, включающий предпосевную обработку патологического материала 0,05-0,25%-ным раствором хлоргексидина биглюконикума, посев на плотные яичные среды с приготовлением из остатка патологического материала мазка для люминесцентной микроскопии с окраской смесью аурамина и родамина по Бою (2, 3). Однако этот способ недостаточно эффективен из-за отсутствия у хлоргексидина биглюконикума лизирующих свойств вследствие его принадлежности к антисептикам, что затрудняет выделение микобактерий из некротизированной ткани и клеточного пула.

Еще известен способ выявления микобактерий туберкулеза, включающий предпосевную обработку патологического материала ферментативно-антисептической смесью препаратов имозимазы и "Плевасент" (4). При достаточно высокой эффективности способ сложен в осуществлении из-за необходимости коррекции рН для активизации фермента имозимазы в процессе приготовления реакционной ферментативно-антисептической смеси и поддержания температурного оптимума активности фермента имозимазы +31^oС в процессе обработки патологического материала.

В качестве базового рассматривается способ выявления микобактерий туберкулеза, включающий предпосевную обработку патологического материала 10%-ным раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия в течение 18-24 ч, посев на плотные питательные среды с приготовлением из остатка патологического материала мазка для люминесцентной микроскопии с окраской смесью аурамина и родамина по Бою (5) или для микроскопии с окраской по Цилю-Нильсену (6). При достаточной эффективности способ сложен в осуществлении из-за необходимости коррекции рН при посеве и приготовлении мазка из посевного осадка, контроля рН и его выравнивания на предметном стекле с использованием бумажных индикаторов и растворов соляной кислоты. Кроме того, посевной осадок патологического материала, полученный обработкой раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия, содержит мелкую или крупную дисперсную взвесь кристаллов препарата вследствие его высокой концентрации, что делает посевной осадок мутным, крошковатым и затрудняет визуальную оценку посевов на плотных питательных средах.

Цель изобретения - повышение эффективности при упрощении и снижении трудоемкости способа.

Поставленная цель достигается предпосевной обработкой патологического материала 0,1%-ным раствором препарата "Лесептик".

Дезинфекционное средство "Лесептик" (свидетельство о государственной регистрации Р 082-0049/6 от 09.08.2000) представляет собой прозрачную жидкость от бесцветного до желтого цвета со специфическим запахом, содержит в качестве действующих веществ алкилдиметилбензиламмоний хлорид, монотерпеновые соединения, ПАВ-эмульгаторы и изопропанол при оптимальном соотношении, обладает антимикробным действием в отношении бактерий и грибов родов кандида и трихофитон, а также плесневых грибов.

Средство "Лесептик" применяется для дезинфекции поверхностей в помещениях, жесткой мебели и сантехнического оборудования при бактериальных и грибковых инфекциях в лечебно-профилактических учреждениях (7).

Способ осуществляется следующим образом.

Патологический материал смешивают с 0,1%-ным раствором дезинфекционного средства "Лесептик" в равных объемах с экспозицией 18-24 часа при комнатной температуре с последующим посевом на плотную питательную среду и бактериоскопией посевного осадка.

Сущность изобретения заключается в предпосевной обработке патологического материала дезинфекционным средством "Лесептик" в концентрации 0,1% смешиванием в равных объемах в течение 18-24 ч при комнатной температуре с последующим посевом на плотную питательную среду и бактериоскопией посевного осадка.

На основании проведенных исследований по источникам патентной и научно-технической литературы можно сделать вывод, что совокупность существенных признаков является новой и позволяет повысить эффективность вследствие максимального высвобождения микобактерий туберкулеза без снижения их жизнедеятельности - входящие в состав "Лесептика" поверхностно-активные вещества и изопропанол хорошо денатурируют белки патологического материала, разжижают и гомогенизируют некротизированные ткани и обеззараживают сопутствующую гноеродную и гнилостную микрофлору - и упростить способ вследствие отсутствия необходимости коррегировать рН - посевной субстрат после обработки патологического материала имеет рН среды, близкий к нейтральному.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Для предпосевной обработки патологического материала готовят 0,1%-ный раствор "Лесептика" смешиванием 1 мл концентрата с дистиллированной водой до 1000 мл. Патологический материал, собранный в специальные флаконы, заливают 0,1%-ным раствором "Лесептика" в объемном соотношении 1:1, гомогенизируют на встряхивателе и оставляют на 18-24 ч при комнатной температуре. Посевной осадок получают центрифугированием и засевают на плотные питательные среды, а из остатка готовят мазок на предметном стекле для бактериоскопии.

Пример 2. Проводят выявление микобактерий туберкулеза в пробах патологического материала от обследуемых и больных туберкулезом (мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, отделяемое верхних дыхательных путей) предлагаемым способом в сравнении с базовым. Пробы патологического материала обрабатывают, как в примере 1. Посевной осадок, полученный центрифугированием, засевают на плотную питательную среду, из остатка готовят мазок на предметном стекле. После фиксации мазка его окрашивают для микроскопии по Цилю-Нильсену. Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Из таблицы 1 видно, что эффективность предлагаемого способа по бактериоскопическому выявлению микобактерий туберкулеза достоверно выше базового на 3,9% (р < 0,05), относительная доля бактериоскопически положительных результатов выше на 18,7% (р < 0,05) по сравнению с базовым.

Как видно из таблицы 2, эффективность одновременного выявления бактериовыделения методом посева и бактериоскопией по Цилю-Нильсону при обработке патологического материала в соответствии с изобретением на 3%, а выявления видимых, но не растущих форм микобактерий туберкулеза на 0,9% выше по сравнению с базовым способом.

Пример 3. Проводят выявление микобактерий туберкулеза в пробах патологического материала от обследуемых и больных туберкулезом (мокрота, истечения из носовой полости, отделяемое верхних дыхательных путей) предлагаемым способом в сравнении с базовым. Пробы патологического материала обрабатывают, как в примере 1. Посевной осадок, полученный центрифугированием, засевают на плотную питательную среду, из остатка готовят мазок на предметном стекле. После фиксации мазка его окрашивают для люминесцентной микроскопии смесью аурамина и родамина по Бою. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Как видно из таблицы 3, эффективность предлагаемого способа на 2,5% (р<0,05) выше, чем базового.

Как видно из таблицы 4, эффективность одновременного выявления методом посева и люминесцентной микроскопией при обработке патологического материала в соответствии с изобретением на 2,0%, а выявления видимых, но не растущих форм микобактерий туберкулеза на 1,9% выше по сравнению с базовым.

Проведенные исследования по выявлению микобактерий туберкулеза в патологическом материале показали следующие преимущества предлагаемого способа относительно базового:

- повышение выявления микобактерий туберкулеза в патологическом материале с люминесцентной микроскопией посевного осадка на 2,0%;

- повышение эффективности выявления микобактерий туберкулеза в патологическом материале в зависимости от метода микроскопии посевного осадка на 2,5-3,9%, что обуславливает преимущество обнаружения бактериовыделения как способа ранней диагностики относительно метода посева и выделения культур из патологического материала, позволяющего получать результат в течение длительного времени (от 2 недель до 3 месяцев);

- достоверное повышение (на 0,9-1,9%) выявления из патологического материала так называемых бактериальных видимых, но не растущих форм, т.е. микобактерий туберкулеза, утративших в процессе длительной химиотерапии способность расти на искусственных питательных средах;

- уменьшение числа образцов, в которых находят единичные бактерии.

Эффективность способа при повышении информативности микроскопии в сочетании с простотой осуществления позволяет успешно применять его в лабораторной практике.

Источники информации

1. Туберкулез сельскохозяйственных животных /Под ред. В.П.Шишкова и В.П. Урбана. - М.: Агропромиздат, 1991. - С. 114-115.

2. Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза. - М., 1992.

3. А.Н.Калюк. Комплексные бактериологические исследования в диагностике туберкулеза //Туберкулез и экология. - 1995. - 3. - С. 31-33.

4. А.Л.Лазовская, Л.С.Финкельштейн, К.Н.Слинина. Предпосевная обработка патологического материала в противотуберкулезном диспансере //Проблема туберкулеза. - 2000. - 2. - С. 44-46.

5. Использование люминесцентной микроскопии для диагностики бактериовыделеиия у больных туберкулезом. Методические рекомендации МЗ РСФСР и Московского НИИ туберкулеза. М., 1981.

6. Туберкулез. Руководство для врачей /Под ред. А.Г.Хоменко. - М.: Медицина, 1996. - С. 114.

7. Методические указания по применению и методам контроля качества дезинфекционного средства "Лесептик" ГУН ЦНИИЛХИ (Россия). МЗ РФ. М., 2000.