аналоги камптотецина, способы их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Формула изобретения

1. Аналог камптотецина формулы (I)



в рацемической или энантиомерной формах или в виде любого сочетания этих форм,

где R₁ - низший алкил, низкий алкенил, низший алкинил;

R₂, R₃ и R₄ независимо, - Н, галоген, низший галогеналкил, низший алкил, низший алкенил, -(СН)_mOR₆, замещенный или незамещенный фенил или фенилалкил, где заместитель представляет собой низший алкил, галоген, или R₃ и R₄ образуют вместе цепь с 3-4 членами, в которой элементы цепи выбраны из группы, состоящей из СН, СН₂, О, N или NR₉;

R₅ - Н, галоген, низший галогеналкил, низший алкил, низший алкокси, замещенный или незамещенный фенил или фенилалкил, где заместитель представляет собой низший алкил, галоген;

R₆ - Н, низший алкил;

R₉ - Н, низший алкил;

R₁₈ и R₁₉ независимо - Н, галоген, низший алкил, низший алкокси или гидрокси;

R₂₀ - Н или галоген;

R_р - Н или легко отщепляемую группу, предпочтительно выбранную из групп, соответствующих формуле - С(О)-А-NR₂₂R₂₃, где А - линейный или разветвленный алкиленовый радикал, тогда как R₂₂ и R₂₃ независимо - Н, низший алкил, если R_p - атом водорода, R₃ и R₄ вместе образуют цепь с 3 или 4 членами;

m = 0 - 6, целое число,

или его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R₁ - этильная группа, или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R₅ - Н, низший алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R₃ и R₄ образуют, в случае необходимости замещенное оксазиновое кольцо, или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R_p - легко отщепляемая группа, или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по п. 5, отличающееся тем, что R_p - группа С(О)-(А₁)-N-R₂₂-R₂₃, где А₁ - (СН₂)_m или разветвленный низший алкиленовый радикал, m = 0 - 6, целое число, или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение по п. 4, отличающееся тем, что соединение выбрано из группы соединений, включающей

1,8-диэтил-8,9-дигидро-8-гидрокси-2Н, 10Н, 12Н-[1,3] оксазино[5,6-f] оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-10, 13(15Н)-дион;

8-этил-8,9-дигидро-8-гидрокси-1-метил-2Н, 10Н, 12Н-[1,3] оксазино[5,6-f] оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-10, 13(15Н)-дион;

8-этил-8,9-дигидро-8-гидрокси-1-бензил-2Н, 10Н, 12Н-[1,3] оксазино[5,6-f] оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-10, 13(15Н)-дион;

8-этил-8,9-дигидро-4-фтор-8-гидрокси-1-бензил-2Н, 10Н, 12Н-[1,3] оксазино[5,6-f] оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-10,13(15Н)-дион,

или его фармацевтически приемлемые соли.

8. Соединение по п. 5, отличающееся тем, что соединение выбрано из группы соединений, включающей

5-этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-(2-амино-1-оксоэтокси)-1Н-оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-3,15-(4Н, 13Н)-дион;

5-этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-(2-амино-1-оксопропокси)-1Н-оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-3,15-(4Н, 13Н)-дион, или его фармацевтически приемлемые соли.

9. Соединение по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемая соль, применяемая в качестве лекарственного средства, обладающего ингибиторной активностью в отношении тоноизомеразы I.

10. Соединение по одному из пп. 1-9 или его фармацевтически приемлемая соль, применяемое в качестве активного ингредиента для получения фармацевтической композиции, обладающей ингибиторной активностью в отношении тоноизомеразы I.

11. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибиторной активностью в отношении тоноизомеразы I, содержащая активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента по крайней мере одно из соединений по любому из пп. 1-8.

12. Способ получения соединений формулы Ia, соответствующих соединениям формулы I, где R₃ и R₄ образуют оксазиновое кольцо по любому из пп. 1, 4 или 7, отличающийся тем, что -гидроксилактоновое соединение формулы D



где R₃ - гидроксильный радикал, R₄ - Н и R₁, R₂, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения,

обрабатывают первичным амином в условиях Манниха для получения -гидроксилактонового соединения общей формулы Ia



где R₁, R₂, R₅, R₉, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения.

13. Способ получения соединений формулы Ib, соответствующих продуктам формулы I, в которых R_p не является атомом водорода, по п. 1, отличающийся тем, что соединение общей формулы D



или Ia



ацилируют предпочтительно производным С(О)-А-N-R₂₂R₂₃ радикала, как определено в п. I, для получения -гидроксилактонового соединения общей формулы I с R_p, отличным от Н.

Описание изобретения к патенту

Камптотецин представляет собой соединение природного происхождения, которое впервые было выделено из листьев и коры китайского растения, называемого Camptotheca acuminata (смотри Wall et al., J. Amer. Chem. Soc. 88:3888 (1966). Камптотецин представляет собой пентациклическое соединение, образованное индолизино[1,2-b]хинолиновым фрагментом (кольца А, В, С и D), сконденсированным с шестичленным -гидроксилактоном (кольцо Е). Углерод в положении 20, несущий -гидроксильную группу, является асимметрическим и придает молекуле вращательную энергию. Природная форма камптотецина имеет абсолютную конфигурацию "S" углерода 20 и соответствует следующей формуле:



Камптотецин и его аналоги обладают антипролиферативной активностью на нескольких раковых клеточных линиях, включая клеточные линии рака толстой кишки, легкого и молочной железы у человека (Suffness M. et al., The Alkaloids Chemistry and Pharmacology (Химия и фармакология алкалоидов), Bross A. , ed. Vol. 25, p.73 (Academic Press, 1985)). Предполагается, что антипролиферативная активность камптотецина связана с его ингибирующим действием в отношении ДНК топо-изомеразы I.

Более того, камптотецин и некоторые его аналоги не растворимы в воде, что затрудняет их введение парентеральным путем. Водорастворимые производные камптотецина были получены в том случае, когда кольца А и В имели заместители, способные образовывать соли (ср., например, патент США 4981968, патент США 5049668, Европейский патент 540099). Однако эти продукты проявляли более низкую противоопухолевую активность, чем водонерастворимые производные. Также были получены другие водорастворимые производные камптотецина, где гидроксильная группа в 20 положении была проэтерифицирована кислотой, имеющей способный образовывать соли радикал, такой как, например, глицин (ср. патент США 4943579 и РСТ WO 96/02546). Эти производные обозначаются специалистом в данной области под названием "пролекарственная форма", так как, будучи биологически неактивными, они становятся таковыми только в процессе метаболизма после введения пациенту. Пролекарственные формы -гидроксилактоновых аналогов камптотецина показали хорошую противоопухолевую эффективность на животных и при клинических испытаниях, но сопровождались побочными эффектами, такими как появление серьезной диареи, которая могла привести к опасности для жизни пациента. Следовательно, необходимо разработать такие водорастворимые аналоги камптотецина, которые были бы более эффективны и более хорошо переносимы.

Кроме того, указывается, что -гидроксилактон является абсолютно необходимым как для in vivo, так и для in vitro активности камптотецинов (Camptothecins: New Anticancer Agents (Камптотецины: новые противораковые агенты) Putmesil М. et al., ed, р. 27 (CRC Press, 1995); Wall M. et al., Cancer Res. , 55:753 (1995); Hertzberg et al., J. Med. Chem., 32:715 (1982) и Crow et al., J. Med. Chem., 35:4160 (1992)). Однако заявителем показано, что 7-членные -гидроксилактоны обладают биологической активностью, сравнимой или превосходящей активность -гидроксилактонов (неопубликованная заявка РСТ Франции 96/00980). Настоящее изобретение относится к новым производным этого класса аналогов камптотецина, в которых 7-членный -гидроксилактон заменяет природный -гидроксилактон камптотецина. Под -гидроксилактоном подразумевается лактон, включающий дополнительный атом углерода между углеродом карбоксила и -углеродом, содержащим гидроксил в -гидроксилактоне.

Для увеличения водорастворимости были выбраны два решения аналогов камптотецина: первое заключалось в введении оксазина в кольцо А молекулы, а второе - в создании пролекарственных форм путем ацетилирования гидроксильной функции -гидроксилактона.

Более конкретно, среди нового класса аналогов камптотецина соединения, согласно настоящему изобретению, являются или аналогами, модифицированными путем фиксирования оксазинового кольца по углеродам 10 и 11, или пролекарственными формами, в которых природный -гидроксилактон камптотецина заменен на -гидроксилактон. Таким образом, соединения в данном изобретении представляют собой -гидроксилактоновые аналоги камптотецина, в которые было введено оксазиновое кольцо, или являются водорастворимыми пролекственными формами и обладают высокой биологической активностью, что является неожиданным в свете развития предшествующего уровня данной области.

Более конкретно, предметом изобретения являются соединения формулы (I)



в рацемической или энантиомерной формах или в виде сочетания этих форм, где:

R₁ представляет низший алкил, низший алкенил, низший алкинил,

R₂, R₃ и R₄ представляют, независимо, Н, галоген, низший галогеналкил, низший алкил, низший алкенил, -(СН₂)_mОR₆, фенил или фенилалкил, замещенный (т. е. замещенный одним до четырех заместителей в фенильной группе) или незамещенный, где заместитель представляет собой низший алкил, галоген или R₃ и R₄ образуют вместе цепь с 3-4 членами, в которой элементы цепи выбраны из группы, состоящей из СН, СН₂, О, N или NR₉;

R₅ представляет Н, галоген, низший галогеналкил, низший алкил, низший алкокси, замещенный или незамещенный фенил или алкилфенил (т.е. замещенный от одного до четырех заместителей в фенильной группе), где заместитель представляет собой низший алкил, галоген;

R₆ представляет Н, низший алкил,

R₉ представляет Н, низший алкил,

R₁₈ и R₁₉ представляют, независимо, Н, галоген, низший алкил, низший алкокси или гидрокси;

R₂₀ представляет Н или галоген;

R_p представляет Н или легко отщепляемую группу, предпочтительно выбранную из групп, соответствующих формуле -С(О)-А-NR₂₂R₂₃, где А представляет линейный или разветвленный алкиленовый радикал, тогда как R₂₂ и R₂₃ представляют, независимо, Н, низший алкил;

m = 0 - 6, целое число;

понимается, что когда R_p представляет атом водорода, R₃ и R₄ вместе образуют цепь с 3 или 4 членами;

или фармацевтически приемлемая соль последних.

Как это использовано здесь, термин "низший", употребленный по отношению к алкильной, алкилтио или алкокси группам, означает линейные или разветвленные насыщенные алифатические углеводородные группы, содержащие от 1 до 6 атомов углерода, такие как, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, метилтио, этилтио, метокси и этокси. Что касается алкенильной или алкинильной групп, то термин "низший" означает группы, содержащие от 2 до 6 атомов углерода и одну или более двойную или тройную связь, такие, например, как винильная, аллильная, изопропенильная, пентенильная, гексанильная, этинильная, пропенильная, пропинильная и бутинильная группы. Термин "циклоалкил" означает кольцо из 3-7 атомов углерода, такое как, например, циклопропильная, циклобутильная, циклопентильная или циклогексильная группы. Термин "арил" означает моно-, ди- или трициклическое углеводородное соединение с, по крайней мере, одним ароматическим кольцом, при этом каждое кольцо содержит алкил, низший алкенил, низший алкокси, низший алкокси низший алкил, низший галогеналкил, или замещенный или незамещенный арил, или низший арилалкил (т.е. замещенный от одного до четырех раз по арильной группе), где заместитель представляет низший алкил, галоген, нитро, амино, низший алкиламино, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил, низший алкокси или низший алкокси низший алкил;

R₉ представляет Н, низший алкил, низший галогеналкил, арил или арил, замещенный одной или несколькими группами, выбранными из следующих радикалов: низший алкил, галоген, нитро, амино, низший алкиламино, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил, низший алкокси или низший алкокси низший алкил;

R₁₀ представляет Н, низший алкил, низший галогеналкил, низший алкокси, арил или арил, замещенный (т.е. имеющий от одного до четырех заместителей в арильной группе) одной или несколькими группами, выбранными из следующих радикалов: низший алкил, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил или низший алкокси низший алкил;

R₁₁ представляет низший алкил, арил, (СН₂)_mOR₁₄, (CH₂)_m-SR₁₄, (CH₂)₂NR₁₄R₁₅ или (CH₂)_m[N=X];

R₁₂ и R₁₃ представляют, независимо, низший алкил, арил, низший алкокси, арилокси или амино;

R₁₄ и R₁₅ представляют, независимо, Н, низший алкил или арил;

R₁₆ представляет Н или OR₂₁;

R₁₇ представляет ОR₆ или NR₆R₇;

R₁₈ и R₁₉ представляют, независимо, Н, галоген, низший алкил, низший алкокси или гидрокси;

R₂₀ представляет Н или галоген;

R₂₁ представляет Н, низший алкил, СНО или С(О)(СН₂)_mСН₃;

R_p представляет Н или легко отщепляемую группу, предпочтительно выбранную из групп, соответствующих формуле -С(О)-A-NR₂₂R₂₃, где А представляет линейный или разветвленный алкиленовый радикал, необязательно замещенный радикалом, выбранным из свободного, этерифицированного или солевого гидрокси, галогена, свободного, этерифицированного или солевого карбокси, амино, моно- или диалкиламино радикалов, тогда как R₂₂ и R₂₃ представляют, независимо, Н, низший алкил, низший гидроксиалкил, низший алкил низший аминоалкил, низший аминоалкил, циклоалкил, циклоалкил низший алкил, низший алкенил, низший алкокси низший алкил, низший галогеналкил или замещенный или незамещенный арил или низший арилалкил (т.е. замещенный от одного до четырех раз в арильной группе), где заместителем является низший алкил, галоген, нитро, амино, низший алкиламино, низший галогеналкил, низший гидроксиалкил, низший алкокси или низший алкокси низший алкил;

m = 0 - 6, целое число;

n = 1 или 2; и

q = 0, 1, до 2; и

[N= Х] представляет гетероциклическую группу с 4-7 членами, Х представляет цепь, необходимую для завершения указанной гетероциклической группы и выбран из группы, состоящей из О, S, СН₂, СН, N, NR₉ и COR₁₀;

понимается, что когда R_p представляет атом водорода, R₃ и R₄ вместе образуют цепь с 3 или 4 членами;

или фармацевтически приемлемая соль последних.

Как это использовано здесь, термин "низший", употребленный по отношению к алкильной, алкилтио или алкокси группам, означает линейные или разветвленные насыщенные алифатические углеводородные группы, содержащие от 1 до 6 атомов углерода, такие как, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, метилтио, этилтио, метокси и этокси. Что касается алкенильной или алкинильной групп, то термин "низший" означает группы, содержащие от 2 до 6 атомов углерода и одну или более двойную или тройную связь, такие, например, как винильная, аллильная, изопропенильная, пентенильная, гексанильная, этинильная, пропенильная, пропинильная и бутинильная группы. Термин "циклоалкил" означает кольцо из 3-7 атомов углерода, такое как, например, циклопропильная, циклобутильная, циклопентильная или циклогексильная группы. Термин "арил" означает моно-, ди- или трициклическое углеводородное соединение с, по крайней мере, одним ароматическим кольцом, при этом каждое кольцо содержит, как максимум, 7 членов, такое как, например, фенил, нафтил, антрацил, бифенил или инденил. Термин "галоген" означает хлор, бром, иод или фтор. Радикалы, соответствующие выражениям "низший галогеналкил", "низший цианоалкил", "низший нитроалкил", "низший амидоалкил", "низший гидразиноалкил", "низший азидоалкил", "низший арилалкил", "низший гидроксиалкил", "низший алкокси низший алкил", "низший алкилтио низший алкил" и "низший алкил низший сульфонилалкил", являются замещенными, соответственно, одним-тремя галогенами, циано, нитро, амидо, гидразино, азидо, арилом, гидрокси, низшей алкокси, низшей алкилтио или низшей сульфонилалкильной группами. Низший алкиламино радикал может содержать одну или две алкильные группы и представляет, например, NНСН₃, NНСН₂СН₃, N(СН₃)₂ или N(СН₃)(СН₂СН₃). Термин "свободный, этерифицированный сложноэфирной группой, "этерифицированный простой эфирной группой или солевой гидрокси" относится к ОН, OCOR₂₆, OR₂₇ группам и к соли алкоголята.

Соединения согласно настоящему изобретению имеют две возможные энантиомерные формы, то есть с "R" и "S" конфигурациями. Настоящее изобретение включает две энантиомерные формы и любое сочетание этих форм, включая "RS" рацемические смеси. С целью упрощения там, где не указана в структурной формуле конкретная конфигурация, следует понимать, что представлены две энантиомерные формы и их смеси.

Что касается пролекарственных форм по изобретению (тех, для которых R_p не является атомом водорода) предпочтительными являются продукты общей формулы I.

Примеры замещенных камптотецинов, используемых в качестве исходных продуктов, могут быть найдены в американских патентах 4473692, 4604463, 4894956, 5162532, 5395939, 5315007, 5264579, 5258516, 5254690, 5212317 и 5341745 и заявках на патент РТС US91/08028, US94/06451, US90/05172, US92/04611, US93/10987, US91/09598, ЕР 94/03058 и ЕР 95/00393 и заявках на Европейский патент 325247, 495432, 321122 и 540099.

Для соединений, включающих оксазиновое кольцо:

- -гидроксилактоновое соединение общей формулы D



где R₃ представляет собой гидроксильный радикал, R₄ представляет Н, и R₁, R₂, R₅, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения,

обрабатывают первичным амином в условиях Манниха для получения -гидроксилактонового соединения общей формулы Iа



где R₁, R₂, R₅, R₉, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения.

Этот способ заключается в нагревании исходного продукта в присутствии первичного амина, такого как бензиламин, и формальдегида в кислотном растворителе, таком как уксусная кислота или пропионовая кислота, при температуре от 30^o до 80^oС в течение от 0,5 до 5 часов. Альтернативно, суспензию исходного продукта в уксусной кислоте с три-N-замещенным гексагидротриазином, таким как гексагидро-1,3,5-триметилтриазин, 1,3,5-триэтилгексагидротриазин или 1,3,5-трибензилгексагидротриазин, можно нагревать при температуре от 30^oС до 80^oС в течение от 0,5 до 5 часов.

- лактон общей формулы Iа раскрывают, необязательно в щелочной среде, для получения после нейтрализации соединения формулы IIa



где R₁, R₂, R₅, R₉, R₁₇, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения; R₁₆ представляет OR₂₁, где R₂₁ представляет Н или низший алкил; и R₁₇ представляет OR₆ или NHR₆, и R₆ представляет Н, низший алкил, циклоалкил, низший алкил циклоалкил, низший алкенил, низший алкил низший алкокси или арил, или низший алкиларил.

- указанное соединение общей формулы D или Iа необязательно ацилируют, предпочтительно производным -C(О)-A-N-R₂₂R₂₃ радикала, как определено выше для получения -гидроксилактонового соединения общей формулы Ib, т.е. I, в котором R_p отличается от Н (пролекарственная форма по изобретению).

В указанном выше способе, группы R₂, R₃, R₄ и R₅ могут быть защищены, при необходимости, в соответствии с обычными способами защиты (Greene Т., Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе) 10-86 (John Wiley & Sons 1981)). Если по крайней мере одна из R₂₂ или R₂₃ групп представляет собой Н или содержит по крайней мере одну функцию, которая химически несовместима со способом ацилирования, например такую как первичный или вторичный амин, то тогда необходимо использовать защитную группу, которая устойчива к условиям ацилирования. Защитная группа, обычно используемая для аминов, представляет собой трет-бутоксикарбонил (ВОС). Затем реакцию ацилирования осуществляют, как описано выше, затем защитную группу отщепляют, например обработкой трифторуксусной кислотой в случае ВОС, для получения соединения общей формулы (I) или (II). Использование защитных групп известно специалисту в данной области (для других примеров можно сослаться на Greene Т., Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе), John Wiley & Sons 1981).

Соединения формулы D получают следующим образом:

- соединение общей формулы М



где R₁, R₁₈ и R₁₉ имеют указанные выше значения, и R₂₀ представляет собой водород или атом галогена, приводят во взаимодействие с 2-галоген-3-хинолинметанолом общей формулы



где R₂, R₃, R₄ и R₅ имеют указанные выше значения и Х представляет собой атом галогена, для получения соединения формулы О



где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₁₈, R₁₉, R₂₀ и X имеют указанные выше значения,

- затем соединение общей формулы О циклизуют для получения соединения общей формулы D, как определено выше.

В указанном выше способе группы R₁, R₂, R₃ и R₄, при необходимости, могут быть защищены в соответствии со стандартными способами защиты (Greene Т. , Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе) 10-86 (John Wiley & Sons 1981)). Образование соединения О, при использовании соединений общих формул М и N, осуществляют при обработке, известной специалисту в данной области под названием реакции Митцунобу (Mitsunobu) (смотри Mitsunobu О. et al., Synthesis, p.l (1981)). Гидроксильную функцию соединения N замещают нуклеофилом, таким как соединение М, или депротонированным производным последнего, путем обработки фосфином, например трифенилфосфином, и азодикарбоксилатным производным, например диэтилазодикарбоксилатом, в апротонном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или N,N-диметилформамид. Циклизацию соединения О предпочтительно проводят в присутствии палладиевого катализатора (например, диацетата палладия) в щелочных условиях (создаваемых, например, ацетатом щелочного металла необязательно в сочетании с агентом межфазного переноса, таким как, например, бромид тетрабутиламмония) в апротонном растворителе, таком как ацетонитрил или N,N-диметилформамид, при температуре в диапазоне от 50^oС до 120^oС (R. Grigg et al., Tetrahedron 46, page 4003 (1990)).

Соединения общей формулы М могут быть получены согласно способу, отличающемуся тем, что

- карбонил пиридина общей формулы



где R₁ и R₂₀ имеют значения, указанные выше, a R₂₄ представляет атом галогена или низший алкокси, защищают ацетальной функцией для получения соединения общей формулы



где R₁, R₂₀ и R₂₄ имеют указанные выше значения, a Z и Z" группы представляют, независимо, низший алкил или образуют вместе насыщенную углеводородную цепь с 2-4 членами;

- в соединение общей формулы F вводят гидроксиметильную функцию для получения соединения общей формулы G



где R₁, R₂₀, R₂₄, Z и Z" имеют указанные выше значения,

- затем спиртовую функцию соединения общей формулы G защищают для получения соединения общей формулы Н



где R₁, R₂₀, R₂₄, Z и Z" имеют указанные выше значения и R₂₅ представляет собой защитную группу спиртовой функции,

- в ацетале соединения общей формулы Н снимают защиту для получения соединения общей формулы I"



где R₁, R₂₀, R₂₄ и R₂₅ имеют указанные выше значения,

- соединение формулы I" обрабатывают функционализированным алкилирующим агентом для получения -гидрокси сложного эфира общей формулы J



где R₁, R₂₀, R₂₄ и R₂₅ имеют указанные выше значения, R₁₇, R₁₈ и R₁₉ являются такими, как определено в общей формуле II,

- расщепляют защитную группу R₂₅ в соединении общей формулы J для получения соединения общей формулы К



где R₁, R₁₈, R₁₉, R₂₀ и R₂₄ имеют указанные выше значения, и R₁₇ представляет OR₆ или NHR₆, и R₆ представляет Н, низший алкил, циклоалкил, низший алкил циклоалкил, низший алкенил, низший алкилалкокси или арил или низший алкиларил,

- соединение общей формулы К циклизуют в соединение общей формулы L



где R₁, R₁₈, R₁₉, R₂₀ и R₂₄ имеют указанные выше значения, и, наконец,

- радикал R₂₄ соединения L преобразовывают в карбонил для получения соединения общей формулы М



где R₁, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения.

Карбонильную функцию 4-ацил-2-галоген-пиридина (полученного, например, в соответствии с Lammattina J. L. , J. Heterocyclic Chem. 20, р.553 (1983)) предпочтительно защищают ацетальной функцией, предпочтительно циклическим ацеталем, согласно стандартным условиям, известным специалисту в данной области (Greene Т., Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе) 10-86 (John Wiley & Sons 1981)). Полученное таким образом промежуточное соединение обрабатывают алкоголятом натрия или калия в апротонном растворителе (например, ацетонитриле) или спирте, производным которого является алкоголят, при температуре между 0^oС и 100^oС для получения соединения общей формулы F. Последнее может быть литиилировано в положение 3 при обработке арил- или алкиллитием (например, мезитиллитием) в эфирном растворителе, таком как тетрагидрофуран, при температуре между -100^oС и 0^oС. К полученному таким образом литиевому промежуточному соединению добавляют формилирующий электрофил, такой как N,N-диметилформамид, и полученный таким образом альдегид обрабатывают, после гидролиза, восстанавливающим агентом, таким как боргидрид натрия, для получения соединения общей формулы G. Защиту спиртовой функции соединения G осуществляют согласно стандартным условиям, известным специалисту в данной области, для получения соединения общей формулы Н. Примерами защитных групп спиртовой функции являются те, которые образуют простые эфиры (т.е. метил, метоксиметил, тетрагидропиранил, 2-метоксиэтоксиметил, бензилоксиметил, трет-бутил и бензил (замещенный или незамещенный) и сложные эфиры (т.е. формиат, ацетат и изобутират). На другие примеры защитных групп первичного гидроксила можно сослаться на Greene Т., Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе) 10-86 (John Wiley & Sons 1981). Снятие защиты в соединении общей формулы Н для получения соединения общей формулы I" осуществляют в селективных условиях, сохраняющих целостность радикала R₂₅, например, путем обработки в кислых условиях (например, трифторуксусной кислотой). Селективные условия защиты и снятия защиты функциональных групп известны специалисту в данной области (Greene Т., Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе) 10-86 (John Wiley & Sons 1981)). Обработка соединения I" функционализированным алкилирующим агентом для получения -гидрокси сложного эфира общей формулы J может быть выполнена с использованием енолята лития или производного цинка карбоксильного сложного эфира в безводном апротонном растворителе, например тетрагидрофуране. Защитная группа R₂₅ соединения общей формулы J расщепляется для получения соединения общей формулы К в условиях снятия защиты, известных специалисту в данной области. Например, когда R₂₅ представляет собой бензильную группу, спиртовый раствор соединения общей формулы J с добавленным к нему палладиевым катализатором может быть подвергнут действию атмосферы водорода, при давлении от 0,5 до 10 бар. Циклизация полученного таким образом соединения общей формулы К может быть осуществлена в кислых условиях (например, обработкой трифторуксусной кислотой или газообразным хлористым водородом, растворенным в безводном растворителе, таком как дихлорметан или диоксан) для получения -гидроксилактонового кольца с 7-ю членами, такого как в соединении общей формулы L. Соединения общей формулы L могут быть преобразованы в пиридоны общей формулы К, например, при обработке теплой соляной кислотой или при обработке триметилсилилиодидом.

2-галоген-3-хинолинметанолы общей формулы N могут быть получены, исходя из ацетанилидов общей формулы Р



где R₂, R₃ и R₄ имеют значение, указанное в общих формулах соединений I и II. В способе, приведенном ниже, группы R₂, R₃ и R₄, если это необходимо, могут быть защищены в соответствии с обычными способами защиты (Greene Т., Protective Groups in Organic Synthesis (Защитные группы в органическом синтезе) 10-86 (John Wiley & Sons 1981)).

Таким образом соединения формулы N могут быть получены в соответствии со следующим способом: N-ацетилируют указанные анилины формулы Р путем обработки ацетилирующим агентом, таким, например, как уксусный ангидрид. Полученные таким образом ацетанилиды обрабатывают при температуре в интервале от 50^oС до 100^oС, предпочтительно при 75^oС, реагентом, известным специалистам в данной области под названием реактива Вильсмейера (получаемого взаимодействием оксихлорида фосфора с N,N-диметилформамидом при температуре между 0^oС и 10^oС) для получения соответствующего 2-хлор-3-хинолинкарбальдегида (например, ссылаясь на Meth-Cohn et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, p. 1520 (1981); Meth-Cohn et al. , J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, p. 2509 (1981); и Nakasimhan et al., J. Am. Chem. Soc., 112, p. 4431 (1990)). Хлор во 2-положении 2-хлор-3-хинолинкарбальдегидов может быть замещен на иод или бром путем нагревания продукта в инертном растворителе, таком как ацетонитрил, в присутствии йодистой или бромистой соли, например иодида натрия или бромида тетрабутиламмония). Следовые количества кислоты, такой как концентрированная соляная кислота, могут быть необходимы для катализирования такого превращения. 2-Галоген-3-хинолинкарбальдегиды легко восстанавливаются в соответствующие 2-галоген-3-хинолинметанолы общей формулы N в стандартных условиях, известных специалисту в данной области, таких как обработка в спиртовом растворителе (например, метаноле) боргидридом натрия при температуре между 0^oС и 40^oС.

Соединения формулы N также могут быть получены в соответствии со следующим способом: анилины общей формулы Р, определенные выше, ацилируют взаимодействием с нитрилом (таким как хлорацетонитрил или пропионитрил) в присутствии трихлорида бора и другой кислоты Льюиса, такой как трихлорид алюминия, тетрахлорид титана или хлорид диэтилалюминия, в апротонном растворителе или смеси апротонных растворителей с последующим гидролизом (ср. Sugasawa Т. et al. , J. Am. Chem. Soc., 100, р. 4842 (1978)). Полученное таким образом промежуточное соединение затем обрабатывают этилмалонилхлоридом в апротонном растворителе, таком как ацетонитрил, в присутствии основания, такого как триэтиламин, затем обрабатывают щелочью в спирте, например метилатом натрия в метаноле, для получения этил-2-гидрокси-3-хинолинкарбоксилата, замещенного в положении 4. Его превращают в этил-2-хлор-3-хинолинкарбоксилат обработкой оксихлоридом фосфора. Когда в положении 4 хинолина имеется хлорметильная группа, может быть осуществлено нуклеофильное замещение посредством обработки вторичным амином, таким как, например, диметиламин, N-метил-пиперазин, морфолин или пиперидин. Этил-2-хлор-3-хинолинкарбоксилат затем восстанавливают диизобутилалюминийгидридом в апротонном растворителе, таком как дихлорметан, для получения 2-хлор-3-хинолинметанола общей формулы N. Аналоги промежуточных соединений (N) были описаны в литературе и, в частности, в заявке РСТ 95/05427.

Некоторые соединения по изобретению могут быть получены обычными способами в виде фармацевтически приемлемых солей. Приемлемые соли включают, в качестве примера и неограничивающим образом, аддитивные соли с неорганическими кислотами, такие как гидрохлорид, сульфат, фосфат, дифосфат, гидробромид, нитрат, или с органическими кислотами, такие как ацетат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат, салицилат, оксалат и стеарат. Соли, образованные основаниями, такими как гидроксид натрия или калия, также представляют часть заявляемой области настоящего изобретения, когда они могут использоваться. За другими примерами фармацевтически приемлемых солей можно отослать к работе "Pharmaceutical Salts" (Фармацевтические соли), J. Pharm. Sci., 66:1 (1977).

Соединения по настоящему изобретению обладают полезными фармакологическими свойствами. Таким образом, соединения по настоящему изобретению обладают ингибирующим действием в отношении топоизомеразы I и/или II и противоопухолевой активностью. Состояние знаний в данной области позволяет предположить, что соединения согласно изобретению обладают антипаразитарной и/или антивирусной активностями. Соединения согласно настоящему изобретению также могут использоваться для различных терапевтических применений.

В экспериментальной части представлена иллюстрация фармакологических свойств соединений изобретения.

Соединения могут ингибировать топоизомеразу, например типа I и/или II, пациента, например, млекопитающего, такого как человек, при введении этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

Соединения согласно изобретению обладают также противоопухолевой активностью. Они могут использоваться для лечения опухолей, например, опухолей, экспрессирующих топоизомеразу у пациента, путем введения последнему терапевтически эффективного количества соединения формулы (I). Примеры опухолей или раков включают рак пищевода, желудка, кишечника, прямой кишки, ротовой полости, глотки, гортани, легкого, толстой кишки, молочной железы, шейки матки, шишковидного эндометрия, яичников, простаты, яичек, мочевого пузыря, почек, печени, поджелудочной железы, костей, соединительной ткани, кожи, глаз, мозга и центральной нервной системы, также как и рак щитовидной железы, лейкемию, болезнь Ходжкина (Hodgkin), лимфому, отличную от относящейся к Ходжкиновской, множественную миелому и другие.

Они также могут использоваться для лечения паразитарных инфекций путем ингибирования геможгутиковых (например, при трипаносомных или лейшманических инфицированиях) или путем ингибирования плазмодия (как, например, при малярии), а также для лечения вирусных инфекций и заболеваний.

Эти свойства делают продукты формулы (I), подходящими для фармацевтического применения. Предметом настоящей заявки также является применение продуктов формулы (I), определенных выше, а также аддитивных солей указанных продуктов формулы (I) с фармацевтически приемлемыми минеральными или органическими кислотами, в качестве лекарственных средств, а также фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента по крайней мере одно из лекарственных средств, как это определено выше.

Таким образом, изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение согласно изобретению или его аддитивную соль с фармацевтически приемлемой кислотой, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем в соответствии с выбранным способом введения (например, пероральное, внутривенное, внутрибрюшинное, внутримышечное, чрескожное или подкожное). Фармацевтическая композиция (например, терапевтическая) может быть в твердой, жидкой, липосомной формах или в форме липидных мицелл.

Фармацевтическая композиция может быть в твердой форме, например в виде порошков, пилюль, гранул, таблеток, липосом, желатиновых капсул или суппозиториев. Пилюля, таблетка или желатиновая капсула могут быть покрыты веществом, способным предохранять композицию от действия кислоты в желудочном тракте или ферментов в желудке пациента в течение достаточного периода времени, позволяющего этой композиции пройти в неусвоенном виде в тонкий кишечник пациента. Соединение также может применяться локально, например в месте расположения опухоли. Соединение также может вводиться в соответствии со способом замедленного высвобождения (например, композиция замедленного высвобождения или инфузионное нагнетание). Подходящие твердые носители могут представлять собой, например, фосфат кальция, стеарат магния, карбонат магния, тальк, сахара, лактозу, декстрин, крахмал, желатин, целлюлозу, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу натрия, поливинилпирролидин и воск. Фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно изобретению, также могут быть представлены в жидкой форме, такой как, например, растворы, эмульсии, суспензии или составы замедленного высвобождения. Подходящими жидкими носителями могут быть, например, вода, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, как, например, полиэтиленгликоль, а также их смеси в различном соотношении в воде.

Предметом изобретения также является применение продуктов формулы (I), как определено выше, для получения лекарственных средств, предназначенных для ингибирования топоизомеразы, и, более конкретно, топоизомеразы типа I или типа II, лекарственных средств, предназначенных для лечения опухолей, лекарственных средств, предназначенных для лечения паразитарных инфекций, а также лекарственных средств, предназначенных для лечения вирусных заболеваний.

Доза соединения согласно настоящему изобретению, предназначаемая для лечения отмеченных выше заболеваний или нарушений, варьируется в соответствии со способом введения, возрастом, весом тела субъекта, а также состоянием последнего и будет окончательно определяться лечащим врачом или ветеринаром. Такое количество, определяемое лечащим врачом или ветеринаром, называются здесь "эффективным терапевтическим количеством".

Если не оговорено другое, все используемые здесь технические и научные термины имеют те же значения, как это обыкновенно понимается обычным специалистом в области, к которой относится изобретение. Аналогично, все публикации, патентные заявки, все патенты и все другие отмеченные здесь ссылки включены в данное описание посредством ссылки.

Следующие примеры представлены для иллюстрации вышеуказанных способов и не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения.

Получение 1: 5-Этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино-[3",4":6,7]индолизин[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

1.а. 4-Этил-3,4-дигидрокси-1Н-пирано[3",4":6,7]-индолизино [1,2-b]хинолин-14 (4Н,12Н)-он

Боргидрид натрия (14 г, 370 ммоль) добавляют порциями к суспензии (S)-(+)-камптотецина (14 г, 40 ммоль, который может быть получен из различных коммерческих источников, таких как Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI)) в метаноле (750 мл) и полученную смесь аккуратно нагревают до 55^oС для получения прозрачного раствора, который затем перемешивают в течение 16 часов при температуре окружающей среды. Затем растворитель упаривают при пониженном давлении, остаток поглощают водой (250 мл), нейтрализуют, добавляя уксусную кислоту (21 мл), и оставляют на 2 часа при 4^oС. Полученную суспензию фильтруют и промывают последовательно холодной водой, ацетоном и диэтиловым эфиром, что приводит после сушки при пониженном давлении к получению искомого продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 280^oС.

l.b. 8-Формилоксиметил-7-пропионилиндолизино[1,2-b]-хинолин-9(11Н)-он

Раствор метапериодата натрия (14 г, 65 ммоль) в воде добавляют по каплям к суспензии 4-этил-3,4-дигидрокси-1Н-пирано[3", 4":6,7]индолизин[1,2-b]хинолин-14 (4Н,12Н)-она (13,4 г, 38 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (720 мл) и полученный раствор перемешивают в течение одного часа при температуре окружающей среды. Затем реакционную смесь выливают в смесь лед/вода (650 мл) и после этого полученную суспензию перемешивают в течение получаса, затем фильтруют и промывают последовательно водой, изопропиловым спиртом и диэтиловым эфиром, что приводит после сушки при пониженном давлении к получению искомого продукта (11,5 г) в виде бледно-желтого твердого вещества, т.пл. >200^oС (разл.).

1. c. трет-Бутил -этил--гидрокси--(8-гидроксиметил-9-оксо(11H)-индолизино[1,2-b]хинолин-7-ил)пропионат

Суспензию цинка (6,5 г, 100 ммоль), перемешиваемую на магнитной мешалке в безводном диэтиловом эфире (50 мл) под аргоном, активируют, добавляя по каплям хлортриметилсилан (0,75 мл, 5,7 ммоль). Перемешивание продолжают в течение 15 минут при температуре окружающей среды, после чего реакционную смесь нагревают до кипения с обратным холодильником. После этого нагревающую баню убирают и добавляют по каплям трет-бутилбромацетат (15 мл, 100 ммоль) с такой скоростью, чтобы поддерживалось кипение с обратным холодильником. Внешний нагрев возвращают на место и продолжают нагревание в течение одного часа. Полученный эфирный раствор реактива Реформатского оставляют охлаждаться до температуры окружающей среды, а затем переносят с использованием канюли в суспензию 8-формилоксиметил-7-пропионилиндолизино[1,2-b] хинолин-9(11Н)-она (1,6 г, 4,7 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (40 мл) под аргоном. Реакционную смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение одного часа, затем оставляют охлаждаться до температуры окружающей среды и реакцию останавливают путем добавления насыщенного хлорида аммония (100 мл) и проводят экстракцию хлороформом (3100 мл). Объединенные хлороформные экстракты сушат над сульфатом натрия, упаривают и остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем. (1-2% MeOH/CH₂Cl₂), что приводит к получению 0,64 г (31%) целевого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества, т.пл. 146-149^oС.

ЯМР-1Н (СDСl₃): 0,93 (т, 3Н); 1,37 (с, 9Н); 1,99 (м, 2Н); 2,97 (дд, 2Н); 3,5 (се, 1Н); 5,10 (с, 2Н); 5,24 (с, 2Н); 7,40 (с, 1Н); 7,59 (т, 1Н); 7,83 (т, 1Н); 7,90 (д, 1Н); 8,20 (д, 1Н); 8,34 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (СDСl₃): 8,18; 27,90; 34,59; 45,34; 49,91; 58,55; 77,39; 82,42; 100,52; 127,67; 127,97; 128,10; 128,64; 129,44; 129,79; 130,42; 130,99; 142,86; 148,69; 152,75; 155,16; 162,38; 172,24.

ИК (KBr): 764; 1016; 1157; 1580; 1651; 1726

1. d. 5-Этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

трет-Бутил--этил--гидрокси--(8-гидроксиметил-9-оксо(11Н)-индолизино[1,2-b] хинолин-7-ил)-пропионат (1,45 г, 3,32 ммоль) растворяют в безводном дихлорметане (25 мл) и обрабатывают насыщенным раствором хлористого водорода в дихлорметане (100 мл). Полученную смесь выдерживают при -20^oС в течение 16 часов. Осадок отфильтровывают, промывают метанолом и сушат при пониженном давлении, получая 662 мг (55%) целевого продукта в виде желтого твердого вещества, т.пл. >300^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,90 (т, 3Н); 1,20 (к, 2Н); 3,27(дд, 2Н); 5,29 (с, 2Н); 5,49 (дд, 2Н); 7,42 (с, 1Н); 7,73 (т, 1Н); 7,90 (т, 1Н); 8,16 (т, 2Н); 8,71 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,45; 36,48; 42,54; 50,68; 61,44; 73,34; 99,78; 122,71; 127,83; 128,15; 128,75; 129,08; 130,07; 130,61; 131,81; 144,66; 148,04; 152,80; 155,91; 159,26; 172,08.

ИК (KBr): 761; 1127; 1204; 1285; 1580; 1653; 1757.

Получение 2: Разделение 5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-lH-оксепино[3",4": 6,7]-индолизин[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона

Смесь -этил--гидрокси--(8-гидроксиметилиндолизино-[1,2-b]хинолин-9-(11H-он-7-ил)-пропионовой кислоты (19,5 г, 51 ммоль) и L-(-)--метилбензиламина (12,12 г, 100 ммоль) в абсолютном этаноле (1 л) нагревают до кипения с последующим фильтрованием в теплом виде и оставляют на 68 часов. Осадок отфильтровывают и промывают этанолом и диэтиловым эфиром, получая 9,8 г белого твердого продукта. Анализ с помощью жидкостной хроматографии высокого давления на хиральной стационарной фазе ("Хиральная ВЭЖХ" на колонке Chiral-AGP (Chromtech, Stockholm, Sweden) 1004 мм, элюент 2% ацетонитрил в 10 мМ фосфатном буфере при рН 6,9, пики элюируются при 4,5 и 7,5 минутах) выявляет два пика, интегрированных соответственно как 24% и 76% общей площади двух. пиков. Твердое вещество растворяют в 93% этаноле (350 мл) при кипячении с обратным холодильником, затем оставляют на 48 часов. Осадок отфильтровывают, затем промывают этанолом и диэтиловым эфиром, получая 4,8 г твердого белого продукта, который дает два пика, интегрируемых соответственно как 9% и 91% общей площади двух пиков, при использовании хиральной ВЭЖХ. Твердое вещество растворяют в 50% этаноле (48 мл) при кипячении с обратным холодильником и оставляют на 48 часов. Осадок отфильтровывают, затем промывают этанолом и эфиром для получения 2,7 г твердого белого продукта, который дает два пика, интегрируемых соответственно как 3% и 97% общей площади двух пиков, при использовании хиральной ВЭЖХ. Твердое вещество растворяют в 50% этаноле (22 мл) при кипячении с обратным холодильником и оставляют на 48 часов. Осадок отфильтровывают, затем промывают этанолом и диэтиловым эфиром, получая 1,6 г твердого белого продукта, который дает два пика, интегрируемых соответственно как 1% и 99% общей площади двух пиков, при использовании хиральной ВЭЖХ. Полученную диастереомерно обогащенную соль, растворенную в дистиллированной воде (20 мл), обрабатывают уксусной кислотой (0,35 мл, 6,4 ммоль) в течение 15 минут. Полученный осадок отфильтровывают, промывают водой, ацетоном и диэтиловым эфиром, затем сушат в вакууме при 80^oС для получения 1,1 г белого твердого продукта. Последний растворяют в абсолютном этаноле (55 мл) с добавленной к нему концентрированной соляной кислотой (11,5 н., 11 мл), получая желтый раствор, который выдерживают, перемешивая, при температуре окружающей среды в течение 68 часов. Полученный таким образом осадок отфильтровывают и промывают водой, этанолом и эфиром, затем сушат в вакууме при 80^oС, получая 770 мг энантиомерно обогащенного 5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино-[3", 4": 6,7] -индолизин[1,2-b] хинолин-3,15 (4Н, 13Н)-диона. Анализ с помощью хиральной ВЭЖХ (колонка Chiral-AGP, элюирование градиентом от 2% до 5% ацетонитрила в 10 мМ фосфатном буфере при рН 6,9, пики элюируются при 15 и 20 минутах) показывает энантиомерный избыток 98%. Описанный выше способ проводят повторно, заменяя L-(-)--метилбензиламин на D-(+)--метилбензиламин. Таким образом получают другой энантиомер 5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]-индолизин[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона.

Получение 3: 5,12-диэтил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино [3",4":6,7] -индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают способом, аналогичным Примеру 1, за исключением того, что на стадии 1.а. вместо камптотецина используют 7-этил-камптотецин (Sawada et al., Chem. Pharm. Bull. 39:2574 (1991)). Целевое соединение получают в виде ярко-желтого твердого вещества, т.пл. >270^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,92 (т, 3Н); 1,39 (т, 3Н); 1,93 (к, 2Н); 3,08 (д, 2Н); 3,25 (к, 2Н); 3,51 (д, 2Н); 5,32 (с, 2Н); 5,52 (дд, 2Н); 7,42 (с, 1Н); 7,76 (т, 1Н); 7,89 (т, 1Н); 8,18 (д, 1Н); 8,32 (д, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,46; 14,15; 22,42; 36,50; 42,54; 49,95; 61,45; 73,35; 99,68; 122,61; 124,27; 126,76; 127,70; 128,27; 129,92; 130,18; 145,17; 145,82; 148,57; 152,15; 155,89; 159,26; 172,08.

Получение 4: 5-Этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3", 4":6,7]-индолизинo[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

4.а. 2-Этил-2-(2-метокси-4-пиридил)-1,3-диоксолан

Из смеси 2-хлор-4-пропионилпиридина (10 г, 59 ммоль), полученного как описано в Lamattina J. L., J. Heterocyclic Chem., 20, р. 553 (1983), этиленгликоля (20 мл) и п-толуолсульфоновой кислоты (250 мг) в толуоле (150 мл) отгоняют воду (в течение ночи) азеотропным способом с использованием насадки Дина-Старка. Затем растворитель удаляют при пониженном давлении, кислоту нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и продукт экстрагируют эфиром. Объединенные эфирные экстракты промывают насыщенным солевым раствором, сушат над сульфатом натрия и упаривают, что приводит к 13,3 г (96%) сырого продукта, защищенного по карбонильной группе, который нагревают при кипении с обратным холодильником с 3 эквивалентами метоксида натрия в ацетонитриле до окончания реакции (контроль с помощью тонкослойной хроматографии: SiO₂, трет-бутилметилоксид/гексан (ТБМО/ГК, 50/50). После этого ацетонитрильный раствор фильтруют и упаривают. Остаток растворяют в эфире, промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат над сульфатом натрия и упаривают, получая коричневое масло, которое перегоняют (70-75^oС, 0,04 мбар); собирая 10,7 г (общий выход 81%) продукта (F) в виде прозрачного масла.

4.b. 2-Этил-2-(3-гидроксиметил-2-метокси-4-пиридил)-1,3-диоксолан

К раствору броммезитилена (13 мл, 85 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (300 мл) при -78^oС под аргоном добавляют по каплям с использованием канюли трет-бутиллитий (1,7 М в пентане, 100 мл, 170 ммоль). Полученный белый осадок перемешивают при -78^oС в течение одного часа, затем добавляют 2-этил-2-(2-метокси-4-пиридил)-1,3-диоксолан (10 г, 44,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 15 минут при -78^oС, в течение одного часа при 0^oС и в течение одного часа при температуре окружающей среды. После повторного охлаждения до -78^oС добавляют безводный N,N-диметилформамид (100 мл) и реакционную смесь оставляют нагреваться до температуры окружающей среды, затем перемешивают в течение 16 часов, после чего анализ с помощью тонкослойной хроматографии (SiО₂, ТБМО/ГК, 50/50) показывает, что исходный продукт израсходован полностью. Реакцию останавливают насыщенным хлоридом аммония и реакционную смесь экстрагируют диэтиловым эфиром (200 мл, 50 мл, 50 мл). Объединенные экстракты сушат над сульфатом натрия и упаривают, получая желтое масло, которое очищают колоночной хроматографией (SiO₂, ТБМО/ГК: 0/100 до 5/95, элюируя производные мезитилена, затем 20/80 до 50/50, элюируя продукт) с получением промежуточного альдегида (7 г). Альдегид растворяют в метаноле (100 мл) и обрабатывают боргидридом натрия (5 г, 132 ммоль) и полученную смесь перемешивают до полного израсходования промежуточного альдегида (приблизительно 1 час) с аналитическим контролем по тонкослойной хроматографии. Затем растворитель упаривают, остаток растворяют в эфире, промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат и растворитель выпаривают. Колоночная хроматография (SiO₂, ТБМО/ГК; 10/90 до 50/50) остатка дает 7 г (общий выход 62%) продукта (G) в виде желтого масла.

4.с. 2-(3-Бензилоксиметил-2-метокси-4-пиридил)-2-этил-1,3-диоксолан

Раствор 2-этил-2-(3-гидроксиметил-2-метокси-4-пиридил)-1,3-диоксолана (7 г, 30 ммоль) и бензилхлорида (5 мл, 45 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (50 мл) добавляют по каплям к суспензии гидрида натрия (80% в минеральном масле, 1,85 г, 61 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (100 мл) и реакционную смесь выдерживают при кипении с обратным холодильником в течение 16 часов. Затем реакционную смесь оставляют охлаждаться до температуры окружающей среды, реакцию останавливают водой (50 мл) и реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в диэтиловом эфире (150 мл), промывают водой и насыщенным солевым раствором, сушат и упаривают. Очистка колоночной хроматографией (SiO₂, ТБМО/ГК: 5/95 до 20/80) дает продукт, защищенный бензилом (Н), 9 г (87%) в виде прозрачного масла.

4.d. 1-(3-Бензилоксиметил-2-метокси-4-пиридил)-пропан-1-он

2-(3-Бензилоксиметил-2-метокси-4-пиридил)-2-этил-1,3-диоксолан (9 г, 27 ммоль) обрабатывают трифторуксусной кислотой (10 мл) и водой (5 мл) при температуре бани 120^oС в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаточные количества кислот нейтрализуют добавлением насыщенного водного бикарбоната натрия. Проводят экстракцию диэтиловым эфиром с последующей колоночной хроматографией (SiO₂, ТБМО/ГК: 10/90), что дает 5,5 г (70%) продукта (I).

4. е. трет-Бутил--этил--гидрокси--(3-бензилоксиметил-2-метокси-4-пиридил)-пропионат

трет-Бутилбромацетат (13 мл, 80 ммоль) добавляют по каплям к суспензии цинка (5,3 г, 80 ммоль, активированного 6 н. НС1 в течение 10 секунд, затем промытого последовательно водой до достижения нейтрального рН, ацетоном и диэтиловым эфиром) в безводном тетрагидрофуране (60 мл) при кипении с обратным холодильником. По окончании добавления по каплям реакционную среду выдерживают при кипении с обратным холодильником в течение еще 10 минут. Затем добавляют раствор 1-(3-бензилоксиметил-2-метокси-4-пиридил)-пропан-1-она (5,8 г, 20 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) и реакционную смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение одного часа. Реакцию останавливают при 0^oС насыщенным водным хлоридом аммония (100 мл) и реакционную смесь экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные экстракты сушат над сульфатом натрия и упаривают, получая желтое масло, которое очищают колоночной хроматографией (SiO₂, ТБМО/ГК: 5/95 до 10/90), получая трет-бутиловый сложный эфир (J) (7 г, 85%) в виде прозрачного масла.

4.f.трет-Бутил--этил--гидрокси--(3-гидроксиметил-2-метокси-4-пиридил)-пропионат

трет-Бутил--этил--гидрокси--(3-бензилоксиметил-2-метокси-4-пиридил)-пропионат (1 г, 2,5 ммоль) подвергают гидрогенолизу при атмосферном давлении и при температуре окружающей среды с использованием в качестве катализатора 5% палладия на угле (50 мг) и абсолютного этанола в качестве растворителя (10 мл). После окончания реакции (6 часов) катализатор отделяют фильтрованием и растворитель упаривают, что дает 0,7 г (90%) продукта (К) достаточной чистоты для последующего синтетического использования.

4. g. 5-Этил-1,5-дигидро-5-гидрокси-9-метокси-оксепино-[3,4-С]пиридин-3(4Н)-он

трет-Бутил--этил--гидрокси--(3-гидроксиметил-2-метокси-4-пиридил)-пропионат (8,8 г, 28 ммоль) обрабатывают трифторуксусной кислотой (30 мл) в течение 3 часов при температуре окружающей среды. Летучие компоненты упаривают и остаток очищают колоночной хроматографией (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH: 100/0 до 98/2), что дает прозрачное масло, которое после обработки толуолом приводит к получению 5,9 г продукта (L) (89%) в виде белых кристаллов, т.пл. 97-98^oС.

4. h. 5-Этил-1,5-дигидро-5-гидрокси-оксепино[3,4-с]пиридин-3,9 (4Н,8Н)-дион

5-Этил-1,5-дигидро-5-гидрокси-9-метокси-оксепино[3,4-с]-пиридин-3(4Н)-он (0,5 г, 2,1 ммоль) нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 9 часов в 1 н. соляной кислоте (20 мл). Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток опять высушивают, дважды добавляя и упаривая толуол, затем оставляют на ночь при пониженном давлении в присутствии пентаоксида фосфора. Полученное масло растворяют в безводном ацетонитриле (5 мл) и перемешивают под аргоном в течение 24 часов. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,23 г (49%) белого твердого продукта (М), т.пл. 118-119^oС.

4.i. 2-Хлор-6,7-дифтор-3-хинолин-метанол

Используют способ, описанный Meth-Cohn с сотрудниками, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, p. 1520 (1981); Meth-Cohn, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, p. 2509 (1981). 3,4-Дифторацетанилид (38 г, 22 ммоль) добавляют к реактиву Вильсмейера, полученному путем добавления по каплям оксихлорида фосфора (103 мл, 1,1 моль) к безводному диметилформамиду (34 мл, 44 ммоль), охлаждают на бане вода/лед и снова перемешивают в течение 0,5 часа в атмосфере аргона. Полученную смесь нагревают при 70^oС в течение 16 часов. После охлаждения до температуры окружающей среды реакционную смесь прибавляют к смеси льда и воды (400 мл), которую выдерживают при перемешивании в течение 2 часов, затем фильтруют и промывают последовательно водой, этанолом и эфиром, получая 9 г 2-хлор-6,7-дифторхинолин-3-карбальдегида в виде желтого твердого продукта, т. пл. 222-224^oС. Это промежуточное соединение обрабатывают боргидридом натрия (2 г, 52 ммоль) в метаноле (400 мл) при температуре окружающей среды в течение 0,5 часа, затем избыток реагента разрушают, добавляя уксусную кислоту (2 мл). Растворитель удаляют при пониженном давлении, остаток помещают в раствор этилацетата и промывают последовательно разбавленным бикарбонатом натрия, водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Полученный твердый продукт перекристаллизовывают из 1,2-дихлорэтана, получая 8 г 2-хлор-6,7-дифтор-3-хинолинметанола в виде бежевого твердого продукта.

4. j. 5-Этил-8-(2-хлор-6,7-дифтор-3-хинодинметил)-1,5-дигидро-5-гидрокси-оксепино[3,4-с]пиридин-3,9 (4Н,8Н)-дион

К раствору 5-этил-1,5-дигидро-5-гидрокси-оксепино [3,4-с]-пиридин-3,9 (4Н, 8Н)-диона (400 мг, 1,79 ммоль), соединения, полученного на предшествующей стадии 4.i., (770 мг, 2,23 ммоль) и трифенилфосфина (934 мг, 3,58 ммоль) в безводном N,N-диметилформамиде (45 мл) добавляют по каплям диэтилазодикарбоксилат (570 мл, 3,6 ммоль) в течение 5 минут и полученную смесь перемешивают в аргоне при температуре окружающей среды в течение 16 часов. Затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и остаток растворяют в диэтиловом эфире (100 мл). Полученный раствор промывают рассолом (450 мл), сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают колоночной хроматографией (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH: 99/1 до 98/2), что дает 650 мг (66%) продукта (0) в виде белого твердого продукта, т.пл. 165-167^oС.

4. k. 5-Этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3",4":6,7] индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

5-Этил-8-(2-хлор-6,7-дифтор-3-хинолинметил)-1,5-дигидро-5-гидрокси-оксепино[3,4-с] пиридин-3,9(4Н, 8Н)-дион (600 мг, 1,1 ммоль), бромид тетрабутиламмония (352 мг, 1,1 ммоль), ацетат натрия (359 мг, 4,4 ммоль) и ацетат палладия II (98 мг, 0,43 ммоль) растворяют в безводном ацетонитриле (40 мл) и нагревают при 90^oС в аргоне в течение 16 часов. После охлаждения до температуры окружающей среды из красноватого раствора выделяют белый осадок. Этот осадок отфильтровывают и сушат при пониженном давлении. Сырой продукт суспендируют в воде, отфильтровывают и сушат при пониженном давлении над пентаоксидом фосфора, что дает 250 мг целевого соединения в виде бежевого твердого продукта, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,91 (т, 3Н); 1,87 (м, 2Н); 3,08 (д, 1Н); 3,51 (д, 1H); 4,45 (с, 4Н); 5,19 (с, 2Н); 5,47 (дд, 2Н); 6,02 (секстет, 1H); 7,33 (с, 1H); 7,54 (с, 1H); 7,55 (с, 1H); 8,43 (с, 1H).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,43; 36,47; 42,54; 50,52; 61,43; 64,43 (2С); 73,31; 99,07; 112,27; 113,14; 122,00; 124,24; 128,18; 129,74; 144,59; 145,01; 145,33; 147,63; 150,88; 155,88; 159,23; 172,07.

Получение 5: 5-Этил-4,5-дигидро-5,10-дигидрокси-1H-оксепино[3",4":6,7] индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

10-Бензилокси-5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино-[3", 4": 6,7]индолизино[1,2-b] хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион (370 мг, 0,79 ммоль) обрабатывают водородом при атмосферном давлении и температуре окружающей среды с использованием в качестве катализатора 10% палладия на угле (60 мг) и трифторуксусной кислоты (15 мл) в качестве растворителя. После завершения реакции (16 часов) к реакционной смеси добавляют дихлорметан (50 мл) и метанол (50 мл), катализатор отфильтровывают и летучие компоненты упаривают при пониженном давлении, что приводит к получению сырого целевого продукта, содержащего следовые количества трифторуксусной кислоты. Эти следовые количества удаляют совместной перегонкой с 1,4-диоксаном. Продукт получают в виде оранжевого твердого вещества, т. пл. 150^oС (разл.), достаточной степени чистоты для последующего синтетического использования.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,89 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,02 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 5,19 (с, 2Н); 5,37 (д, 1Н); 5,50 (д, 1Н); 5,98 (секстет, 1Н); 7,26 (с, 1Н); 7,31 (с, 1Н); 7,40 (д, 1Н); 8,00 (д, 1Н); 8,42 (с, 1Н); 10,32 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,47; 36,50; 42,61; 50,57; 61,46; 73,35; 98,84; 109,02; 121,83; 123,18; 129,50; 129,85; 130,12; 130,80; 143,39; 145,10; 149,69; 155,97; 156,82; 159,30; 172,11.

Получение 6: 5-Этил-9-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 3-фтор-4-метоксианилина в соответствии со способом, проиллюстрированным стадиями 4i, 4j и 4k получения 4. Желтый твердый продукт, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,89 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,08 (д, 1Н); 3,49 (д, 1Н); 4,00 (с, 3Н); 5,25(с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,00 (с, 1Н); 7,32 (с, 1Н); 7,72 (д, 1Н); 7,91 (д, 1Н); 8,58 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,43; 36,48; 42,51; 50,68; 56,60; 61,42; 73,29; 99,25; 108,68; 113,52; 122,23; 126,33; 129,99; 130,30; 143,79; 144,70; 148,42; 151,18; 153,19; 155,81; 159,20; 172,06.

ИК (KBr): 1259; 1503; 1602; 1737.

Получение 7: 9-Хлор-5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метил-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 3-хлор-4-метоксианилина в соответствии со способом, проиллюстрированным стадиями 4i, 4j и 4k получения 4, в виде желтого твердого продукта, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,35 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 2,55 (с, 3Н); 3,07 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 5,25 (с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,05 (с, 1Н); 7,39 (с, 1Н); 8,10 (с, 1Н); 8,20 (с, 1Н); 8,60 (с, 1Н)

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,43; 20,20; 36,47; 42,49; 50,67; 61,41; 73,28; 99,87; 122,82; 126,98; 127,99; 129,60; 130,53; 131,08; 135,64; 136,56; 144,39; 147,11; 153,10; 155,85; 159,18; 172,03.

ИК (KBr): 1208; 1479; 1606; 1656; 1724.

Получение 8: 8-Этил-2,3,8,9-тетрагидро-8-гидрокси-10Н,12Н-[1,4]диоксино[2,3-g]оксепино-[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13 (15Н)-дион

Это соединение получают из 3,4-этилендиоксианилина в соответствии со способом, проиллюстрированным стадиями 4i, 4j и 4k получения 4, в виде желтого твердого продукта, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО); 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,47 (д, 1Н); 5,25 (с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,05 (с, 1Н); 7,39 (с, 1Н); 8,15 (к, 1Н); 8,25 (к, 1Н); 8, 68 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,41; 36,45; 42,48; 50,68; 61,40; 73,25; 99,92; 114,44; 115,42; 115,58; 122,96; 125,52; 130,56; 131,46; 144,21; 145,25; 142.36; 153,41; 155,85; 159,15; 172,00.

ИК (KBr): 1266; 1512; 1581; 1618; 1751.

Получение 9: 7-Этил-7,8-дигидро-7-гидрокси-9Н,11Н-[1,3]диоксоло[4,5-g] оксепино[3",4":6,7]-индолизино[1,2-b]хинолин-9,12 (14Н)-дион

Это соединение получают из 3,4-метилендиоксианилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4, в виде твердого продукта кремового цвета, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 5,20 (с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,00 (с, 1Н); 6,30 (с, 2Н); 7,30 (с, 1Н); 7,49 (д, 2Н); 8,45 (с, 1H).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,43; 36,49; 42,56; 50,58; 61,42; 73,31; 98,87; 102,75; 103,33; 104,92; 121,76; 125,74; 128,59; 130,33; 145,08; 146,69; 148,78; 150,19; 151,49; 155,90; 159,24; 172,08.

ИК (KBr): 1248; 1458; 1606; 1731.

Получение 10: 9-Хлор-5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 3-хлор-4-метоксианилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4, в виде белого твердого продукта т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 4,01 (с, 3Н); 5,22 (с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,02 (с, 1Н); 7,31 (с, 1Н); 7,68 (с,1Н); 8,20 (с, 1Н); 8,55 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,22; 36,27; 42,30; 50,48; 56,69; 61,23; 73,08; 99,16; 107,44; 122,16; 127,12; 128,12; 129,25; 130,02; 130,53; 143,29; 144,37; 151,12; 153,29; 155,71; 158,98; 171,84.

ИК (KBr): 1056; 1256; 1483; 1592; 1657; 1747.

Получение 11: 5-Этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метокси-1Н-оксепино[3", 4":6,7]индолизино[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 4-метоксианилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4. Желтый твердый продукт, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 3,95 (с, 3Н); 5,28 (с, 2Н); 5,40 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,00 (с, 1Н); 7,38 (с, 1Н); 7,51 (д, 2Н); 8,07 (д, 1Н); 8,55 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,45; 36,48; 42,51; 50,64; 55,92; 61,42; 73,33; 99,01; 106,49; 122,02; 123,19; 129,59; 130,20; 130,43; 144,17; 144,94; 150,40; 155,92; 158,31; 159,26; 172,07.

ИК (KBr): 1251; 1604; 1655; 1735.

Получение 12: 9,11-Дихлор-5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3", 4":6,7]индолизино[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 3,5-дихлоранилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4, в виде желтого твердого продукта, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 5,30 (с, 2Н); 5,41 (д, 1Н); 5,55 (д, 1Н); 6,08 (с, 1Н); 7,41 (с, 1Н); 8,05 (с, 1Н); 8,21 (с, 1Н); 8,91 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,39; 36,45; 42,51; 51,03; 61,39; 73,25; 100,62; 123,55; 124,63; 127,60; 128,08; 128,56; 132,06; 132,19; 134,53; 143,77; 148,80; 154,88; 155,82; 159,13; 171,98.

ИК (KBr): 1064; 1275; 1586; 1651; 1743.

Получение 13: 5-Этил-9-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метил-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 3-фтор-4-метиланилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4. Желтый твердый продукт, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,89 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 2,49 (с, 3Н); 3,08 (д, 1Н); 3,49 (д, 1Н); 5,21 (с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,51 (д, 1Н); 6,05 (с, 1Н); 7,39 (с, 1Н); 7,87 (д, 1Н); 8,05 (д, 1Н); 8,61 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,40; 15,14; 36,45; 42,52; 50,60; 61,41; 73,28; 99,71; 112,00; 122,66; 125,38; 127,66; 129,59; 130,28; 144,49; 147,88; 152,88; 155,85; 159,18; 162,25; 172,02.

ИК (KBr): 1054; 1580; 1651; 1760.

Получение 14: 5-Этил-10-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3",4": 6,7]индолизино[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 4-фторанилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4, в виде белого твердого продукта, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,45 (д, 1Н); 5,29 (с, 2Н); 5,39 (д, 1Н); 5,55 (д, 1Н); 6,30 (с, 1H); 7,39 (с, 1Н); 7,80 (к, 1Н); 7,99 (к, 1Н); 8,23 (к, 1Н); 8,68 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,40; 36,46; 42,48; 50,66; 61,41; 73,31; 99,68; 111,83; 122,75; 128,93; 130,93; 131,22; 131,93; 144,46; 145,27; 152,60; 155,89; 159,21; 172,04.

ИК (KBr): 1209; 1589; 1659; 1739.

Получение 15: 10-Хлор-5-этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3",4": 6,7]индолизино[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 4-хлоранилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4. Желтый твердый продукт, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО); 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1Н); 3,47 (д, 1H); 5,25 (c, 2Н); 5,39 (д, 1H); 5,51 (д, 1H); 6,05 (c, 1H); 7,39 (c, 1H); 7,89 (д, 1H); 8,19 (д, 1H); 8,29 (с, 1H); 8,67 (с, 1H).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,40; 36,46; 42,47; 50,70; 61,42; 73,31; 100,00; 122,96; 127,31; 127,42; 128,87; 131,11; 132,12; 144,34; 146,53; 153,38; 155,88; 159,20; 172,04.

ИК (KBr): 1069; 1483; 1606; 1741.

Получение 16: 9-Хлор-5-этил-10-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Это соединение получают из 4-хлор-3-фторанилина в соответствии со способом, проиллюстрированным на стадиях 4i, 4j и 4k получения 4, в виде желтого твердого продукта, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО); 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,07 (д, 1H); 3,45 (д, 1H); 5,25 (с, 2Н); 5,39 (д, 1H); 5,51 (д, 1H); 6,05 (с, 1H); 7,40 (с, 1H); 8,20 (д, 1H); 8,40 (д, 1H); 8,68 (с, 1H).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,38; 36,47; 42,58; 50,71; 61,40; 73,26; 99,99; 113,59; 123,09; 124,28; 127,74; 130,64; 131,31; 144,13; 145,08; 153,57; 154,13; 155,84; 156,61, 159,14; 172,00,

ИК (KBr): 1488; 1583; 1655; 1743.

Получение 17: 5,12-Диэтил-9-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

17.а. 5-Фтор-4-метокси-2-пропиониланилин

(Этот продукт получен согласно Sugasawa Т.; Toyoda Т.; Adachi M.; Sasakura К., J.Am.Chem.Soc., 100 (1978), р.4842-4852). Трихлорид бора (1 М в гептане, 156 мл, 156 ммоль) при 0^oС в атмосфере аргона добавляют по каплям к раствору 3-фтор-4-метоксианилина (20 г, 142 ммоль) в безводном дихлорметане (200 мл). Полученную таким образом розовую суспензию выдерживают при перемешивании в течение 5 минут, затем добавляют по каплям пропионитрил (33 мл, 420 ммоль), а после этого добавляют небольшими порциями трихлорид алюминия (20,8 г, 156 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов, охлаждают до 0^oС, гидролизуют, осторожно добавляя 2 н. соляную кислоту (100 мл), затем кипятят с обратным холодильником в течение 45 минут. После охлаждения до 0^oС выпавший осадок отфильтровывают, промывают дихлорметаном, затем помещают в воду (300 мл). Водную фазу подщелачивают до щелочного рН, экстрагируют дихлорметаном, а затем этилацетатом. Органическую фазу сушат (МgSО₄), после чего упаривают, получая сырой продукт, который очищают колоночной хроматографией (SiO₂, AcOEt/гептан: 1/99 до 20/80). Получают 15,3 г желтого твердого продукта.

ЯМР-1Н (CDCl₃): 1,20 (т, 3Н); 2,92 (к, 2Н); 3,83 (с, 3Н); 6,2 (с, 2Н); 6,40 (д, 2Н); 7,32 (д, 2Н).

ИК (КВr): 857; 1148; 1240; 1561; 1583; 1662.

17.b. Этил 4-этил-7-фтор-2-гидрокси-6-метокси-3-хинолинкарбоксилат

Раствор хлорида этилмалонила (12,9 мл, 100 ммоль) в безводном ацетонитриле (30 мл) добавляют по каплям в аргоне при 0^oС к раствору 5-фтор-4-метокси-2-пропиониланилина (15,3 г, 77,5 ммоль) и триэтиламина (13,9 мл, 100 ммоль) в безводном ацетонитриле (110 мл). Реакционную смесь оставляют нагреваться до температуры окружающей среды, по каплям через канюлю в аргоне добавляют раствор этилата натрия (полученного из 1,8 г, 78 ммоль натрия в 80 мл этанола), затем реакционную смесь перемешивают в течение 12 часов при температуре окружающей среды. Реакционную смесь выливают в охлажденную льдом воду (100 мл) и перемешивают в течение двух часов, затем отфильтровывают осадок и промывают водой, этанолом и эфиром. Получают 19,4 г белого твердого продукта.

ЯМР-1Н (ДМСО): 1,25 (м, 6Н); 2,78 (к, 2Н); 3,92 (с, 3Н); 4,30 (к, 2Н); 7,15 (д, 2Н) ; 7,40 (д, 2Н); 11,93 (с, 1Н).

ИК (КВr): 786; 1083; 1410; 1521; 1644; 1725.

17.с. Этил 2-хлор-4-этил-7-фтор-6-метокси-3-хинолинкарбоксилат

Суспензию этил 4-этил-7-фтор-2-гидрокси-6-метокси-3-хинолинкарбоксилата (19,4 г, 0,066 моль) в фосфорилхлориде (243 мл) нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 6 часов. Фосфорилхлорид отгоняют. Реакционную смесь декантируют в охлажденную льдом воду, затем помещают в дихлорметан для растворения. Органическую фазу промывают водой, затем насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и растворитель упаривают. Остаток суспендируют в диэтиловом эфире и не вступивший в реакцию исходный продукт (4 г) отфильтровывают. Фильтрат упаривают и остаток очищают колоночной хроматографией (SiO₂, AcOEt/гептан: 5/95 до 20/80). Получают 10,9 г белого твердого продукта.

ЯМР-1Н (ДМСО): 1,30 (т, 3Н); 1,39 (т, 3Н); 3,08 (к, 2Н); 4,09 (с, 3Н); 4,49 (к, 2Н); 7,64 (д, 2Н); 7,86 (д, 2Н).

ИК (КВr): 865; 1016; 1082; 1190; 1224; 1253; 1272; 1508; 1571; 1732.

17.d. 2-Хлор-4-этил-7-фтор-6-метокси-3-хинолинметанол

Раствор этил 2-хлор-4-этил-7-фтор-6-метокси-3-хинолинкарбоксилата (10,8 г, 35 ммоль) в безводном дихлорметане (200 мл) обрабатывают, прибавляя по каплям, при температуре окружающей среды в инертной атмосфере диизобутилалюминий-гидридом (1 М в дихлорметане, 65 мл, 65 ммоль), затем нагревают при 40^oС в течение 4 часов. После охлаждения до 0^oС осторожно добавляют 20% водный раствор соли Рошелля (Ro-cheile) (105 мл) и дихлорметан (200 мл) и реакционную смесь выдерживают при перемешивании в течение 1 часа, после чего декантируют и промывают три раза водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и растворитель упаривают. Остаток очищают колоночной хроматографией (SiO₂, AcOEt/гептан: 5/95 до 50 /50). Получают 6 г белого твердого продукта.

ЯМР-1Н (ДМСО): 1,28 (т, 3Н); 3,25 (к, 2Н); 4,04 (с, 3Н); 4,77 (д, 2Н); 5,27 (т, 1Н); 7,55 (д, 2Н); 7,73 (д, 2Н).

ИК (KBr): 840; 864; 1023; 1232; 1267; 1317; 1444; 1511; 1569.

17. е. 5,12-Диэтил-9-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-10-метокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион.

Проводят взаимодействие 2-хлор-4-этил-7-фтор-6-метокси-3-хинолинметанола с соединением (М), как описано в стадии 4j получения 4. Полученный в результате продукт циклизуют в соответствии со способом, описанным на стадии 4.k. Получают желтый твердый продукт, т.пл. >275^oС.

ЯМР-1Н (CF3COOD); 1,07 (м, 3Н); 1,62 (м, 3Н); 2,27 (м, 2Н); 3,44 (д, 1Н); 3,54 (м, 2Н); 3,91 (д, 1Н); 4,25 (с, 3Н); 5,60 (д, 1Н); 5,74 (с, 2Н); 5,98 (д, 1Н); 7,85 (м, 1Н); 8,16 (м, 1Н); 8,31 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (CF3COOD): 9,03; 14,20; 26,68; 38,77; 43,98; 53,79; 58,27; 64,73; 77,93; 106,85; 109,24; 110,15; 128,99; 129,20; 131,61; 137,32; 141,23; 144,13; 154,79; 158,32; 160,25; 160,81; 179,30.

ИК (KBr): 1013; 1068; 1265; 1466; 1514; 1601; 1655; 1748.

Получение 18: 5-Этил-4,5-дигидро-5-гидрокси-12-метил-1H-оксепино[3",4": 6,7]индолизино[1,2-b]-хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Для получения 2-хлор-4-метил-3-хинолинметанола способ, описанный в примерах 17.b., 17.с. и 17.d. применяют к 2-ацетанилину. Последнее подвергают взаимодействию с соединением (М), как описано в стадии 4.j. получения 4. Полученный продукт циклизуют в соответствии со способом, описанным на стадии 4.k. Получают желтый твердый продукт, т.пл. >260^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО); 0,87 (т, 3Н); 1,87 (к, 2Н); 2,78 (с, 3Н); 2,80 (д, 1Н); 3,55 (д, 1Н); 5,27 (с, 2Н); 5,42 (д, 1Н); 5,52 (д, 1Н); 6,04 (с, 1Н); 7,39 (с, 1Н); 7,75 (т, 1Н); 7,88 (т, 1Н); 8,13 (д, 1Н); 8,25 (д,1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,23; 36,26; 42,36; 62,00; 73,11; 78,65; 79,13; 79,25; 99,52; 122,36; 124,30; 127,67; 129,54; 129,55; 129,56; 140,11; 145,06; 148,07; 152,00; 155,79; 159,09; 171,89.

ИК (KBr): 1649; 1751; 3404.

Получение 19: 10-Бензилокси-5-этил-9-фтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Способ, представленный на стадии 4.i., применяют для 3-фтор-4-метоксиацетанилида для получения 2-хлор-7-фтор-6-метоксихинолин-3-карбальдегида, который обрабатывают избытком трибромида бора в дихлорметане при температуре окружающей среды в течение 24 часов. Полученный 2-хлор-7-фтор-6-гидроксихинолин-3-карбальдегид O-бензилируют в диметилформамиде в присутствии бромистого бензила и карбоната калия для получения 6-бензилокси-2-хлор-7-фторхинолин-3-карбальдегида, который восстанавливают боргидридом натрия в метаноле для получения соответствующего хинолинметанола. Последний вводят в реакцию сочетания с соединением (М), как описано на стадии 4.j. получения 4. Полученный продукт реакции сочетания циклизуют в соответствии со способом, описанным на стадии 4.k. Получают желтый твердый продукт, т.пл. >275^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО); 0,86 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,5 (д, 1Н); 5,25 (с, 2Н); 5,37 (с, 2Н); 5,45 (дд, 2Н); 6,05 (с, 1Н); 7,4-7,6 (м, 5Н); 7,88 (д, 1Н]; 7,95 (д, 1Н); 8,56 (с, 1Н).

Получение 20: 5-Этил-9-фтор-4,5-дигидро-5,10-дигидрокси-1Н-оксепино[3", 4",:6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Соединение по примеру 19 (0,79 ммоль), растворенное в трифторуксусной кислоте (15 мл), обрабатывают водородом с использованием 10% палладия на угле (60 мг). Получают желтый твердый продукт, т.пл. >275^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО); 0,86 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,05 (д, 1Н); 5,25 (с, 2Н); 5,37 (с, 2Н); 5,45 (дд, 2Н); 6,05 (с, 1Н); 7,8 (д, 1Н); 7,90 (д, 1Н); 8,56 (с, 1Н).

Вышеописанные способы получения иллюстрируют изобретение с помощью нижеследующих примеров.

Пример 1: 5-Этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-(2-амино-1-оксоэтокси)-1H-оксепино[3",4",:6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

а. Гидрохлорид 5-этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-(2-(трет-бутилоксикарбонил-амино)-1-оксоэтокси)-1Н-оксепино[3", 4", : 6,7] индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона

Смесь 5-этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3", 4":6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-3,15 (4Н,13Н)диона (200 мг, 0,526 ммоль, полученного согласно получению 4), N-Вос-глицина (185 мг, 1,051 ммоль) и каталитическое количество 4-диметиламинопиридина (20 мг) в безводном пиридине (10 мл) обрабатывают при 0^oС в аргоне дициклогексилкарбодиимидом (239 мг, 1,16 ммоль), затем перемешивают при температуре окружающей среды в течение 48 часов. Летучие компоненты упаривают в вакууме и остаток хроматографируют (SiO₂, 1% метанол в хлороформе) для получения целевого промежуточного соединения (40 мг, 14%) в виде желтого твердого вещества.

ЯМР-1Н (CDCl₃): 1,20 (т, 3Н); 1,38 (с, 9Н); 1,40-1,70 (м, 2Н); 3,10 (д, 1Н); 4,00 (д, 2Н); 4,30 (д, 1Н); 5,00 (т, 1Н); 5,20 (с, 2Н); 5,30-5,90 (дд, 2Н); 7,20 (с, 1Н); 7,50-8,10 (м, 2Н); 8,50 (с, 1Н).

b. Гидрохлорид 5-этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-(2-амино-1-оксоэтокси)-1H-оксепино[3",4":6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона

Полученное выше промежуточное соединение (40 мг, 0,072 ммоль) в растворе дихлорметана (10 мл) поддерживают при 0^oС и добавляют по каплям диоксан, насыщенный хлористым водородом (8 мл). Полученную таким образом желтую суспензию выдерживают при перемешивании в течение 2 часов, затем летучие компоненты удаляют в вакууме. Остаток, помещенный в воду (5 мл), промывают дихлорметаном (330 мл). Водную фазу замораживают и лиофилизуют, получая требуемую соль в виде гигроскопичного желтого твердого продукта (20 мг, 50%).

ЯМР-1Н (СDС1₃): 1,00 (т, 3Н); 2,15 (м, 1Н); 2,30 (м, 1Н); 3,60 (д, 1Н); 3,90 (д, 1Н); 4,15 (с, 2Н); 5,10 (с, 2Н); 5,40 (д, 1Н); 5,70 (д, 2Н); 7,40 (с, 1Н); 7,80 (м, 2Н); 8,50 (с, 1Н).

Пример 2: 5-Этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-(2-амино-1-оксопропокси)-1H-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-дион

Способ по примеру 1 применяют для 5-этил-9,10-дифтор-4,5-дигидро-5-гидрокси-1Н-оксепино[3", 4", : 6,7]индолизино-[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона с использованием N-Boc-b-аланина вместо N-Вос-глицина, затем Воc защиту полученного таким образом промежуточного соединения расщепляют с помощью обработки трифторуксусной кислотой в дихлорметане. Летучие компоненты упаривают в вакууме и остаток помещают в дихлорметан. Полученный раствор промывают разбавленным бикарбонатом, сушат и упаривают. Получают желтый твердый продукт.

При использовании способа примеров 1 и 2 для других соединений были получены аналогичные результаты. Таким образом, весь класс аналогов камптотецина доступен в виде "пролекарственной" формы.

Пример 3: 1,8-Диэтил-8,9-дигидро-8-гидрокси-2Н, 10Н, 12Н-[1,3] оксазино[5,6-f]оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13 (15Н)-дион

Суспензию 5-этил-4,5-дигидро-5,10-дигидрокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона (84 мг, полученного по получению 5) в уксусной кислоте (2,5 мл) обрабатывают 1,3,5-триэтилгексагидротриазином (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивают при 70^oС в течение 30 минут, затем упаривают в вакууме. Остаток помещают в этанол, фильтруют и промывают эфиром. Получают твердый продукт, т.пл. >275^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,87 (т, 3Н); 1,50 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 2,77 (к, 2Н); 3,05 (д, 1Н); 3,47 (д, 1Н); 4,37 (с, 2Н); 5,00 (с, 2Н); 5,22 (с, 2Н); 5,45 (дд, 2Н); 6,00 (с, 1Н); 7,34 (с, 1Н); 7,36 (д, 1Н); 7,93 (д, 1Н); 8,53 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,46; 13,48; 36,46; 42,49; 45,49; 46,44; 50,75; 61,43; 73,33; 82,06; 99,02; 112,90; 122,00; 122,98; 125,42; 127,04; 129,04; 130,20; 144,09; 144,97; 149,87; 152,92; 155,98; 172,07.

ИК (KBr): 1045; 1215; 1502; 1604; 1657; 1722.

Пример 4: 8-Этил-8,9-дигидро-8-гидрокси-1-метил-2Н, 10Н,12Н[1, 3]оксазино[5,6-f]оксепино 3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13 (15Н)-дион

Суспензию 5-этил-4,5-дигидро-5,10-дигидрокси-1Н-оксепино-[3", 4": 6,7] индолизино[1,2-b] хинолин-3,15 (4Н,13Н)-диона (200 мг, полученного по получению 5) в уксусной кислоте (5 мл) обрабатывают гексагидро-1,3,5-триметилтриазином (110 мг). Реакционную смесь перемешивают при 70^oС в течение 30 минут, затем упаривают в вакууме. Остаток помещают в этанол, фильтруют

и промывают диэтиловым эфиром. Получают твердый продукт, т.пл. >275^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,87 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,04 (д, 1Н); 3,48 (д, 1Н); 4,33 (с, 2Н); 4,93 (с, 2Н); 5,28 (с, 2Н); 5,45 (дд, 2Н); 6,01 (с, 1Н); 7,35 (с, 1Н); 7,38 (д, 1Н); 7,94 (д, 1Н); 8,49 (с, 1Н).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,46; 36,43; 37,85; 42,55; 48,68; 50,79; 61,43; 73,35; 83,82; 99,04; 112,49; 122,04; 123,00; 125,46; 127,14; 129,07; 130,27; 144,99; 149,95; 152,46; 155,99; 172,09.

ИК (KBr): 1047; 1058; 1219; 1246; 1295; 1439; 1504; 1604; 1655; 1735.

Пример 5: 8-Этил-8,9-дигидро-8-гидрокси-1-бензил-2Н,10Н,12Н-[1,3]оксазино[5,6-f]оксепино-[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13 (15Н)-дион

Суспензию 5-этил-4,5-дигидро-5,10-дигидрокси-1Н-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b] хинолин-13,15 (4Н,13Н)-диона (200 мг, полученного по поручению 5) в уксусной кислоте (5 мл) обрабатывают 1,3,5-трибензилгексагидротриазином (285 мг). Реакционную смесь перемешивают при 70^oС в течение 30 минут, затем упаривают в вакууме. Остаток помещают в этанол, фильтруют и промывают эфиром. Получают твердый продукт, т.пл. >275^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,05 (д, 1Н); 3,47 (д, 1H); 3,96 (с, 2Н); 4,33 (с, 2Н); 5,04 (с, 2Н); 5,17 (с, 2Н); 5,44 (дд, 2Н); 6,01 (с, 1H); 7,38 (м, 6Н), 7,42 (д, 1H); 7,97 (д, 1H); 8,42 (с, 1H).

ЯМР-С13 (ДМСО): 8,42; 19,96; 36,45; 42,51; 46,36; 50,78; 55,38; 61,39; 73,31; 99,00; 112,55; 122,01; 123,08; 125,38; 127,09; 127,47; 128,70; 129,14; 130,35; 128,40; 139,19; 144,18; 149,99; 152,84; 155,92; 159,24; 172,05.

ИК (KBr) 1056, 1205, 1225, 1248, 1504, 1535, 1599, 1655, 1726.

Пример 6: 8-Этил-8,9-дигидро-4-фтор-8-гидрокси-1-бензил-2Н, 10Н, 12Н[1,3] оксазино [5,6-f]-оксепино[3",4":6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13 (15Н)-дион

Суспензию 5-этил-9-фтор-4,5-дигидро-5,10-дигидрокси-1H-оксепино[3", 4": 6,7] индолизино [1,2-b]хинолин-3,15 (4Н, 13Н)-диона (200 мг, полученного по получению 20) в уксусной кислоте (5 мл) обрабатывают 1,3,5-трибензилгексагидротриазином (285 мг). Реакционную смесь перемешивают при 70^oС в течение 30 минут, затем упаривают в вакууме. Остаток помещают в этанол, фильтруют и промывают эфиром. Получают твердый продукт, т.пл. >250^oС.

ЯМР-1Н (ДМСО): 0,85 (т, 3Н); 1,85 (к, 2Н); 3,05 (д, 1H); 3,48 (д, 1H); 3,95 (с, 2Н); 4,45 (с, 2Н); 5,20 (с, 4Н); 5,45 (дд, 2Н); 6,05 (с, 1H); 7,40 (c, 7Н); 7,90 (д, 1H); 8,45 (с, 1H).

ИК (KBr): 1248; 1451; 1501; 1598; 1657; 1727.

Фармакологические исследования продуктов согласно изобретению

Исследование релаксационной активности ДНК, индуцированной топоизомеразой 1.

Все реакции проводили в 20 мкл реакционного буфера, состоящего из 50 мМ Трис-НСl (рН 7,5), 50 мМ КС1, 0,5 мМ дитиотреитола, 10 мМ MgCl₂, 0,1 мМ этилдиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК), 30 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 300 нг сверхскрученного pUC19 (Pharmacia Biotech, Orsay, France) в присутствии или в отсутствие исследуемых соединений при определенных концентрациях. Все испытуемые соединения первоначально растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) или воде, в случае водорастворимых соединений, другие разбавления осуществляли с помощью дистиллированной воды. Конечная концентрация ДМСО не должна превышать 1% (об./об.). Реакцию инициировали добавлением единицы ДНК топоизомеразы 1 из очищенной телячьей зобной железы (Life Technologies /Gibco-BRL, Paisley, United Kingdom) таким образом, что реакция завершалась за 15 минут при 37^oС. Реакцию останавливали добавлением 3 мкл смеси, содержащей 1% додецилсульфата натрия с концентрацией 1%, 20 мМ ЭДТК и 500 мкг/мл протеиназы К (Boehringer Mannheim, Meylan, France). После дополнительного инкубационного периода в течение 30 минут при 37^oС к образцам добавляли 2 мкл буфера, содержащего 10 мМ Na₂HPO₄, 0,3% бромфенола голубого и 16% фиколла, которые подвергали электрофорезу на агарозном геле при 1,2% при 1 В/см в течение 20 часов в буфере, содержащем 36 мМ Трис-НСl при рН 7,8, 30 мМ Na₂HPO₄, 1 мМ ЭДТК и 2 мкг/мл хлороквина. Гели проявляли 2 мкг/мл этидиум бромида, фотографировали в ультрафиолетовом свете при 312 нм с помощью камеры на приборах с зарядовой связью (ПЗС) и интенсивность флуоресценции измеряли с использованием видеоанализатора bioProfil (Vilber Lourmat, Lyon, France) для определения процента релаксированной ДНК.

В каждом эксперименте сверхскрученную плазмиду ДНК инкубировали саму по себе или в присутствии топоизомеразы 1. Реакция завершается за 15 минут, для каждого исследуемого соединения или контроля (носитель сам по себе называется контролем) сверхскрученную плазмиду ДНК инкубировали в присутствии максимальной концентрации исследуемого соединения, выбранной для эксперимента, или контроля без фермента, или в присутствии исследуемого соединения в концентрациях в диапазоне от 1 мкМ до 200 мкМ, или контроля в присутствии ферментов. Как указано в таблице, соединения примеров 3-6 ингибируют концентрационно-зависимым образом релаксационную активность, вызываемую топоизомеразой 1.