способ лечения злокачественных опухолей головного мозга

Формула изобретения

Способ лечения злокачественных опухолей головного мозга путем иммунотерапии, отличающийся тем, что из периферической крови больного выделяют моноциты и культивируют с ростовыми факторами, далее в среду к полученным из моноцитов дендритным клеткам, а также путем электрокорпорации внутрь клеток добавляют антигенный материал, приготовленный из опухоли больного, затем дендритные клетки вводят внутрикожно, дополнительно проводят иммуномодуляцию, используя активированные с помощью фитогемагглютинина лимфоциты больного.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии и иммунологии, и может быть использовано при лечении злокачественных опухолей головного мозга.

Известен способ лечения злокачественных опухолей головного мозга включающий химиолучевую терапию (патент РФ 2125871, А 61 К 31/17, A 61 N 5/10, 1999), в котором в качестве химиотерапевтического препарата используют белустин в ежедневной дозе 40 мг до суммарной дозы 200-280 мг в сочетании с лучевой терапией. Для повышения эффективности лечения дополнительно вводят альфа-2-интерферон. Недостатки способа - развитие панцитопении и иммуносупрессии.

Известен способ лечения злокачественных опухолей головного мозга с использованием цитокиновой терапии (патент РФ 2133624, А 61 К 38/20, А 61 К 38/21, А 61 В 17/00, 1999), принятый нами за прототип. При этом осуществляют внутривенное введение дрожжевого рекомбинантного интерлейкина-2 в дозе до 20 ME. Затем проводят курс внутривенного введения лимфокин-активированных киллерных клеток вместе с дрожжевым рекомбинантным интерлейкином-2. Недостатки прототипа - неспецифичность способа, имеет осложнения, связанные с введением интерлейкина-2 (например - отеки), при этом интерлейкин-2 быстро разрушается в организме.

Изобретение направлено на создание способа лечения злокачественных опухолей головного мозга, позволяющего сократить побочные эффекты и осложнения, увеличить при этом продолжительность жизни пациентов, сохранить качество жизни. Это достигается за счет предложения Т-лимфоцитам опухолевого антигена "профессиональными" антиген-представляющими клетками организма - дендритными клетками, которые содержат опухолевый антиген, введенный им in vitro, обеспечивая, таким образом, специфичность способа. Дополнительно вводят активированные аутологичные лимфоциты, обеспечивающие продукцию интерлейкинов (в том числе и интерлейкин-2), что позволяет катализировать иммунологический противоопухолевый ответ.

Сущность способа заключается в следующем: фрагмент опухоли, взятый во время операции, диссоциируют на экстракт белков, используемый в дальнейшем как антиген. Из периферической крови, взятой у пациента, выделяют моноциты и культивируют с ростовыми факторами. Вначале к моноцитам, а затем к полученным из них дендритным клеткам добавляют антигенный материал. Далее дендритные клетки вводят внутрикожно больному. Параллельно проводят иммуномодуляцию с использованием активированных лимфоцитов, которые получают из мононуклеарных лейкоцитов больного, активированных с помощью фитогемагглютинина. Активированные лимфоциты также вводят внутрикожно.

Таким образом, адекватно показанный иммунокомпетентным клеткам опухолевый антиген в сочетании с неспецифическим иммуностимулирующим эффектом (за счет активированных лимфоцитов) позволяет активизировать специфический противоопухолевый иммунитет и дает возможность использования данного способа в качестве адъювантного лечения в составе комплексного противоопухолевого лечения.

Заявляемый способ отличается от прототипа тем, что из периферической крови больного выделяют моноциты и культивируют с ростовыми факторами, далее в среду к полученным из моноцитов дендритным клеткам, а также путем электропорации внутрь клеток добавляют антигенный материал, приготовленный из опухоли больного, затем дендритные клетки вводят внутрикожно, дополнительно проводят иммуномодуляцию, используя активированные с помощью фитогемагглютинина лимфоциты больного.

Способ осуществляется следующим образом. Во время хирургической операции забирают фрагмент опухоли не менее 3 см³, содержащий живые опухолевые клетки и по возможности не содержащий нормальные и некротизированные ткани. Фрагмент опухоли помещают в стерильный раствор и передают для изготовления антигенного материала в течение 1 суток. Для приготовления антигена фрагмент опухоли облучают в дозе 200 Гр, диссоциируют на клетки. Полученные опухолевые клетки отмывают и разрушают путем повышения РН среды, в которой находятся клетки до РН 11,5, с последующим понижением РН до 6,5. Полученный из них экстракт белков используют как антиген для предоставления дендритным клеткам. Перед каждым раундом лечения производят забор 40-60 мл периферической крови больного в шприц, содержащий раствор гепарина. Конечная концентрация гепарина 30 единиц на 1 мл. Кровь поступает на обработку не позднее 6 часов после забора. Из взятой крови выделяют моноциты, которые культивируются в течение 7 дней с ростовыми факторами (гранулоцит-макрофаг колониестимулирующий фактор и интерлейкин-4 в количестве 1000 ед/мл) с постоянным контролем и сменой среды. На 6 день к дендритным клеткам добавляют приготовленный из опухоли данного больного антигенный материал и в этот же день антигенный материал вводят внутрь полученных дендритных клеток с помощью электрического разряда (электропорация).

Забор периферической крови для приготовления активированных лимфоцитов производят, как и для дендритных клеток, но в количестве 15-20 мл. Для приготовления активированных лимфоцитов из крови выделяют мононуклеарные лейкоциты, которые активируют к пролиферации с помощью фитогемагглютинина и на 4 сутки вводят внутрикожно. Цель процедур - активация возможно большего числа Т-лимфоцитов при преимущественной стимуляции Th-1 клеточного пути иммунного ответа.

На 8 сутки больному вводят внутрикожно дендритные клетки. Количество вводимых клеток варьирует от 210⁵-10⁷ Курс лечения включает 2 лечебных цикла в первый месяц, цикл включает в себя инъекцию активированных лимфоцитов на 4 сутки и дендритных клеток на 8 сутки, и в последующем один лечебный цикл каждые 2 месяца.

Заявленный способ разработан в РНХИ им. профессора А.Л. Поленова и ПИЯФ им. Б.П. Константинова и прошел клинические испытания при лечении 3 больных со злокачественными опухолями головного мозга.

Приводим пример - выписку из истории болезни 76/2000. Больной И., 54 лет, диагноз: Глиобластома правых лобной и теменной долей мозга. Продолженный рост опухоли. Операции в 1996, 1998, 1999 гг., 2 курса лучевого лечения, 3 курса полихимиотерапии.

19.01.2000 сделана повторная (4) операция костно-пластическая трепанация черепа в правой лобно-темено-височной области, субтотальное удаление опухоли. Согласно заявляемому способу во время операции у больного был взят фрагмент опухоли объемом 10 см³, а после операции проводились заборы 60 и 20 мл периферической крови. Используя опухоль и мононуклеарные клетки периферической крови больного, а также используя активированные лимфоциты больного, проводилось лечение в виде 2 внутрикожных инъекций (одна инъекция активированных лимфоцитов, через 4 суток инъекция дендритных клеток с опухолевым антигеном) каждые 2 недели в течение 1 месяца, а затем раз в 2 месяца.

В период проведения лечения у больного несколько регрессировал левосторонний гемипарез по сравнению с дооперационным уровнем, показатель социальной адаптации дооперации соответствовал 50 баллам по шкале Карновского, в процессе лечения составил 70 баллов и сохраняется на протяжении всего периода наблюдения после операции. По данным КТ головного мозга спустя 5 месяцев после операции данных за продолженный рост опухоли нет. Сохраняется хорошее самочувствие больного, в основном себя обслуживает самостоятельно, выполняет мелкую домашнюю работу, с интересом читает книги, смотрит телепередачи, жалоб активно не предъявляет.

Использование данного способа позволило

- избежать осложнений, связанных с введением IL-2

- улучшить и стабилизировать состояние больного по шкале социальной адаптации Карновского

- сохранить хорошее самочувствие больного

достичь пятимесячного периода свободного от прогрессии опухоли.