способ определения оптимального времени инкубирования плазмы крови с сорбентом

Формула изобретения

Способ определения оптимального времени инкубации плазмы крови с сорбентом при очистке организма от маркерного вещества с помощью плазмосорбции, заключающийся в заборе у пациента крови, отделении клеток крови от плазмы, возвращении клеточной массы в организм пациента, измерение исходной концентрации маркерного вещества в полученной плазме (С₀) и инкубирование плазмы с сорбентом, отличающийся тем, что плазму разливают в равных объемах в четыре пробирки и засыпают в них равное количество сорбента, инкубируют плазму с сорбентом при осторожном перемешивании, затем плазму извлекают из пробирок и определяют концентрацию маркерного вещества (С₁): из первой пробирки через 5 мин инкубации с сорбентом (С₁), из второй через 10 мин (С₂), из третьей через 15 мин (С₃), из четвертой через 20 мин (С₄); затем вычисляют значения разностей концентраций по формуле

S_i = C_i - С_i-1,

где i - индекс, варьируемый от 1 до 4; затем ищут наименьшее значение индекса i в (интервале от 1 до 3), для которого выполняется хотя бы одно из соотношений

S_i+1 < 0

|S_i|/10>|S_i+1|,

если такое значение индекса i существует, то время инкубации вычисляют как выбранное значение индекса i, умноженное на 5 мин, если такого значения индекса i не существует, то время инкубации определяют равным 20 мин.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к клинической медицине, в частности к эфферентной терапии, и может быть использовано для очистки плазмы от эндогенных и экзогенных токсинов, а также веществ, в избытке накопившихся в организме, с помощью плазмосорбции.

Известен способ определения показаний к проведению эфферентной терапии путем биохимического исследования [1], когда у пациента забирают кровь, получают из нее сыворотку, определяют эффективную концентрацию альбумина, время полувыведения и клиренс антипирина, и на основании измеренных значений принимают решение о проведении гемосорбции. Указанный способ является аналогом предлагаемому в части проведения биохимического анализа, однако указанный способ только определяет возможность проведения эфферентной терапии, но не оптимальное время ее проведения.

Известен способ проведения эфферентной терапии [2], когда у пациента из артерии в течение 30-40 минут забирают 700-800 мл крови, которую заменяют на донорскую, затем кровь в течение 10-15 минут инкубируют с сорбентом. При этом происходит сорбция растворимых компонентов крови, и таким образом она очищается от токсинов и веществ, в избытке накопившихся в организме. После инкубации с сорбентом кровь возвращают пациенту. Эффективность очистки организма оценивают по степени снижения концентрации вещества, которое требовалось вывести из организма. Указанный способ является аналогом предлагаемому в части проведения процедуры инкубации биологической жидкости с сорбентом и выбран нами в качестве прототипа.

Недостатком прототипа является то, что время инкубации берется независимо от того, какое вещество требуется вывести из организма, в то время как для разных веществ оптимальное время сорбции может отличаться. Кроме этого, различие во времени 10 минут и 15 минут незначительно при одноразовом инкубировании, если же при проведении процедуры плазмосорбции инкубирование плазмы с сорбентом производится многократно, то увеличение времени инкубации с 10 минут до 15 минут в каждой порции может существенно увеличить общее время процедуры плазмосорбции, что нежелательно.

Настоящее изобретение направлено на повышение эффективности очистки плазмы путем определения оптимального время инкубации плазмы с сорбентом.

Поставленная цель достигается следующим образом.

В соответствии с характером заболевания выбирают конкретное вещество, которое требуется вывести из организма, называемое в дальнейшем маркерным (например, мочевая кислота при подагре).

Затем у пациента определяют объем циркулирующей крови (ОЦК) и объем циркулирующей плазмы (ОЦП).

В соответствии с [3] ОЦК вычисляют по формуле:

ОЦК=МТ75 [мл], (1)

где МТ - масса тела, 75 - средний объем крови на 1 кг МТ.

ОЦП вычисляют по формуле:

ОЦП=ОЦК(100-Ht) [мл], (2)

где Ht - уровень гематокрита (%).

Затем у пациента из периферической вены забирают кровь в объеме, необходимом для проведения указанных ниже биохимических анализов, в стерильный укупоренный флакон объемом 100 мл с добавлением гепарина из расчета 5 ЕД на 1 мл. Флакон с кровью центрифугируют и отбирают плазму в химически чистую посуду. Цитомассу ресуспензируют стерильным раствором NaCl изотонической концентрации и реинфузируют пациенту.

Из полученной таким образом плазмы отбирают пробу для измерения исходной концентрации вещества (С₀), снижение которого ожидают при проведении плазмосорбции (маркерное вещество). Оставшуюся плазму разливают равными частями в 4 пробирки, пронумерованные от 1 до 4. В каждую из этих пробирок вносят одинаковое количество сорбента, так чтобы отношение плазмы и сорбента было таким же, как и при проведении последующей плазмосорбции, например, по методу [2] . Затем инкубируют плазму с сорбентом при осторожном перемешивании, так чтобы не разрушались гранулы сорбента.

Из пробирок через разные промежутки времени забирают плазму для определения концентрации маркерного вещества, оставшегося в плазме (С_i): из пробирки 1 - через 5 мин (С₁), из пробирки 2 - через 10 мин (С₂), из пробирки 3 - через 15 мин (С₃), из пробирки 4 - через 20 мин (C₄)

Затем производят вычисление разности концентраций S_i, (индекс i варьируется от одного до четырех) по формуле:

S_i-=C_i-C_i-1 (3)

Затем ищут наименьшее значение индекса i в (интервале от 1 до 3) для которого выполняется хотя бы одно из соотношений (4) или (5):

S_i+1 <0 (4)

|S_i|/10>|S_i+1|. (5)

Если такое значение индекса i существует, то время инкубации вычисляют как выбранное значение индекса i, умноженное на 5 минут.

Выполнение соотношения (4) означает, что сорбент достиг насыщения и дальнейшая инкубация может приводить к обратному эффекту - смывания маркерного вещества с сорбента. Выполнение соотношения (5) означает, что хотя сорбция маркерного вещества продолжается, ее скорость мала, и процесс лучше остановить, поскольку дальнейшее проведение плазмосорбции не даст заметного эффекта, но излишне удлинит процедуру, что нежелательно.

Если такого значения индекса i не существует, то время инкубации определяют равным 20 минутам, поскольку дальнейшее увеличение времени плазмосорбции нежелательно.

ПРИМЕР

Больной Б. В. А., 45 лет, поступил в клинику 23.02.2001 г. с диагнозом: хронический гломерулонефрит, ремиссия. Вторичная подагра, хронический подагрический полиартрит, обострение.

При поступлении жалобы на ноющие боли в области первых плюснефаланговых, голеностопных суставов с обеих сторон, общую слабость, быструю утомляемость.

При осмотре: состояние удовлетворительное, кожные покровы обычной окраски, отеков нет. В области голеностопных суставов определяется припухлость, цвет кожи над ними не изменен.

При лабораторном исследовании от 24.02.2001 г. концентрация мочевой кислоты (МК) составляла 730 мкмоль/л; гематокрит равен 41%.

С целью купирования суставного синдрома, снижения уровня урикемии было решено провести курс плазмосорбции на гемосорбенте "ФАС" с сорбцией за процедуру 1 ОЦП. Была проведена первая процедура плазмосорбции (26.03.2001) путем непрерывной трансфузии плазмы через сорбент по методике [4]. При лабораторном контроле концентрации МК после плазмосорбции было выявлено снижение концентрации МК на 15% (620 мкмоль/л).

Ввиду отсутствия отчетливой положительной лабораторной динамики уровня урикемии было решено провести плазмосорбцию способом [2] в модифицированном варианте, включающем многократное инкубирование плазмы с сорбентом.

Перед плазмосорбцией провели определение оптимального времени сорбции маркерного вещества предлагаемым методом. Маркерным веществом была выбрана мочевая кислота (МК).

Масса пациента составляла 75 кг, ОЦК - 5625 мл, ОЦП - 3320 мл.

У пациента было забрано 40 мл крови, после центрифугирования получилось 23,5 мл сыворотки. Цитомасса была ресуспензирована раствором NaCI физиологической концентрации и реинфузирована пациенту. Для определения исходной концентрации (С₀) было взято 3,5 мл сыворотки. Затем в 4 пробирки было разлито по 5,0 мл плазмы и добавлено по 0,45 мл сорбента - активированного угля марки "ФАС". В первой пробирке проводили инкубацию - 5 мин, во второй - 10 мин, в третьей - 15 мин, в четвертой -20 мин. При инкубации раствор в пробирках перемешивали путем медленного покачивания. После инкубации плазму сливали и использовали для стандартного анализа.

Полученные данные приведены в таблице.

Как видно из представленных данных, ни для одного значения индекса i не выполняется соотношение (5), а соотношение (4) выполняется для i, равного трем, соответственно оптимальное время инкубации было выбрано равным 15 минутам. Дальнейшее увеличение времени инкубации приводит к смыванию МК с сорбента (десорбция) и уменьшению количества сорбированной мочевой кислоты и, следовательно, к уменьшению эффективности процедуры.

На основании полученных результатов была проведена вторая процедура плазмосорбции (30.03.2001) способом [2] в модифицированном варианте, включающем многократное инкубирование плазмы с сорбентом. Было проведено 12 циклов сорбции, время сорбции каждой порции плазмы составляло 15 минут, общее время сорбции составило 180 минут. За каждый цикл сорбировалось 276 мл плазмы. При лабораторном контроле концентрации МК после ПС было выявлено снижение концентрации МК на 36% (467,2 мкмоль/л). Через 2 дня после второй процедуры уровень МК составлял 452,3 мкмоль/л, появилась отчетливая тенденция к купированию суставного синдрома.

Из приведенного примера видно, что инкубирование плазмы данного больного в течение 15 минут за цикл привело к существенному снижению концентрации МК.

Источники информации

1. Кузнецова Э. Э. и др. Способ определения показаний к проведению эфферентной терапии // Заявка на патент РФ 96120708А от 14.10.1996 г. МКП 6 G 01 N 33/48.

2. Лопухин Ю. М., Молоденков М.Н. Гемосорбция // М.: Медицина 1978, с. 73.

3. Пропедевтика внутренних болезней // под ред. В.Х. Василенко и А.Л. Гребенева.- М.: Медицина, - 1982. - С. 253.

4. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н. Гемосорбция. // М.: Медицина 1978, с. 65.