способ получения желточной эмульсии для определения лецитиназной активности микроорганизмов
Классы МПК: | C12Q1/10 Enterobacteria C12N1/20 бактерии; питательные среды для них |
Автор(ы): | Султанов З.З., Кулакова Л.С., Перепелица Л.Г., Абдулганиева С.К. |
Патентообладатель(и): | Научно-производственное объединение "Питательные среды" |
Приоритеты: |
подача заявки:
2001-08-14 публикация патента:
10.05.2003 |
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды. Желтки яиц смешивают с физиологическим раствором, к полученной смеси добавляют 1,0-2,0% хлороформа, выдерживают при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем дважды прогревают при 56-58oС в течение 2 ч. Изобретение обеспечивает стабильность и длительность сроков хранения препарата, что сокращает сроки предварительной подготовки к проведению бактериологического анализа. 2 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2
Формула изобретения
Способ получения желточной эмульсии для определения лецитиназной активности микроорганизмов путем смешивания желтков яиц с физиологическим раствором, отличающийся тем, что после смешивания к смеси добавляют 1,0-2,0% хлороформа, выдерживают при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем дважды прогревают при 56-58oС в течение 2 ч.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды. Определение лецитиназной активности является одним из диагностических тестов при выделении родов Clostridium, Bacillus, Staphylococcus, Anthracis. Продукция фермента лецитиназы исследуется на средах с добавлением желточной эмульсии. Желточная эмульсия в качестве компонента входит в состав таких сред, как Baird Parker agar, Cereus Selective agar, Sodium Aside Egg-York Pyruvate agar, желточно-солевой агар [1, 2]. Известен способ получения желточной эмульсии путем смешивания желтка яиц с солевыми растворами с последующей фильтрацией [3]. Недостатками данного способа являются большая вероятность прохождения микроорганизмов через фильтр, возможность бактериального пророста, низкая емкость и необходимость наличия специального оборудования. Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является способ получения желточной эмульсии, заключающийся в смешивании желтка яиц с физиологическим раствором [4]. К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известного способа, принятого за прототип, является обсеменение желточной эмульсии микроорганизмами, что ограничивает срок хранения препарата до нескольких дней. Кроме того, наличие микроорганизмов в желточной эмульсии препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяет состав среды. Указанные недостатки известного способа приводят к необходимости приготовления желточной эмульсии непосредственно перед проведением бактериологических исследований, что удлиняет сроки предварительной подготовки к анализу. Задача предлагаемого изобретения - повышение стабильности и увеличение срока хранения желточной эмульсии. Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что после смешивания желтка яиц с физиологическим раствором к смеси добавляют 1,0-2,0% хлороформа, выдерживают при температуре окружающей среды в течение 24 ч, а затем дважды прогревают при 56-58oС в течение 2 ч. Обработка желточной эмульсии хлороформом, обладающим высокой бактерицидной активностью, и последующее прогревание позволяет получить стерильный препарат с длительным сроком хранения и обеспечивает проявление лецитиназной активности микроорганизмов. Способ осуществляется следующим образом. Пример 1. Свежие яйца моют щеткой с мылом, ополаскивают дистиллированной водой, дают обсохнуть, обтирают спиртом. Яйца разбивают, отделяют желтки и к 300 мл желтка добавляют 700 мл физиологического раствора, смесь размешивают до получения гомогенной эмульсии и фильтруют через воронку с 4 слоями стерильной марли. Отфильтрованную эмульсию разливают в стерильные флаконы, добавляют 1% хлороформа, закрывают стерильной ватно-марлевой пробкой и оставляют на сутки при температуре окружающей среды. Затем прогревают на водяной бане при 56-58oС в течение 2 ч, предварительно сняв ватно-марлевую пробку и закрыв флакон стерильной марлей. После чего, флаконы закрывают пробками, предварительно простерилизованными, плотно герметизируют металлическими колпачками и еще раз прогревают при тех же температурах и времени. Контроль стерильности полученной желточной эмульсии определяют путем посева 0,1 мл желточной эмульсии из разведения 1:10 на стерильный питательный агар с последующей инкубацией посевов при (37![способ получения желточной эмульсии для определения лецитиназной активности микроорганизмов, патент № 2203958](/images/patents/267/2203035/177.gif)
![способ получения желточной эмульсии для определения лецитиназной активности микроорганизмов, патент № 2203958](/images/patents/267/2203035/177.gif)
1. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. - М.: Медицина, 1979, с. 358. 2. Microbiology Manual MERCK. 1990, s. 51-52; 74-75; 164. 3. The Oxoid Manual FIFTH Edition. 1982, s. 128-129. 3. Санитарная микробиология. / Под. ред. Калины Г.П. - М.: Медицина, 1969, с. 99 (прототип).
Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них