ферментативное расщепление селективных модуляторов рецепторов эстрогена

Формула изобретения

1. Способ получения (-)-(цис)-6(S)-фенил-5(R)-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси)фенил]-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ола формулы VII



который включает селективное деацетилирование соединения формулы VIII



где R¹ представляет собой (C₁-С₆)алкил, (С₂-С₆)алкенил, (С₂-С₆)алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена,

в присутствии гидролитического фермента и водного буферного раствора.

2. Способ по п.1, где гидролитический фермент представляет собой липазу.

3. Способ по п.1, где гидролитический фермент представляет собой эстеразу.

4. Способ по п.1, где гидролитический фермент представляет собой печеночный ацетоновый порошок.

5. Способ по п.1, где гидролитический фермент представляет собой липазу из Porcine pancreas, холестеринэстеразу из Pseudomonas fluorеscens и холестеринэстеразу Porcine pancreas.

6. Способ по п.2, где липаза представляет собой GC-4, PS30, AY30, PGE, АК, N, L-10, АР-12, FAP-15, R-10, G, MAP10 и SАМ II, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Candida cylindracea, Lip-300, липазу из Chromobacterium viscosum, липазу из Mucor miehei, липазу из Pancreatic, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Rhizopus niveus, PPL, тип II, липазу из Wheat germ, липазу из Rhizopus arrhizus, липазу из Mucor javanicus, липазу из Pseudomonas cepacia, липазу из Cadia lipolytica, липазу из Penicillium roqueforti, липопротеидлипазу са# 70-6571-01, липазу из Porcine pancreas и липопротеидлипазу са# 70-1481-01.

7. Способ по п. 3, где эстераза представляет собой PLA-A, иммобилизованную, свиную печеночную эстеразу из Hog pancreas, Porcine liver E-3128, холестеринэстеразу, холестеринэстеразу из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстеразу из Porcine pancreas, холестеринэстеразу из Bovine pancreas, холестеринэстеразу из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстеразу из Porcine liver, холестеринэстеразу из Rabbit liver, холинэстеразу, холинэстеразу из Electric eel, холинэстеразу, холоилглицингидролазу, эстеразу из Thermoanaerobium brockii, эстеразу из Bacillus sp. и эстеразу из Mucor miehi.

8. Способ по п.4, где печеночный ацетоновый порошок представляет собой кошачий I-1256, собачий I7379, угоревый I-1266, лошадиный I9627, телячий I7876, морской свинки I1631, мышиный I8254, козлиный I2635, цыплячий I8001, овечий I0132, голубиный I8376, тюлений I7627, гремучей змеи I9885, форели I1531, черепаховый I-0757, крысиный I1380, двоякодышащей рыбы I7377, лососевый I7502, угоревый (electrophorus elextricus) I8380 и острозубой акулы I1130.

9. Способ по п.1, где гидролитический фермент иммобилизован на твердой подложке.

10. Способ по п.1, где гидролитический фермент представляет собой сшитый фермент.

11. Способ по п.2, где липаза находится в чистой кристаллической форме.

12. Способ по п.1, где водный буферный раствор представляет собой фосфатный, лимоннокислый или бороновокислый раствор.

13. Способ по п.1, где водный буферный раствор имеет значение рН приблизительно между 6 и 8.

Описание изобретения к патенту

Уровень техники

Настоящее изобретение относится к способу получения 5-замещенных 6-циклических 5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-олов, полезных в качестве агонистов эстрогена.

Значение природных эстрогенов и синтетических соединений, проявляющих "эстрогенную" активность, заключается в их медицинском и терапевтическом применении. Традиционный перечень терапевтического применения для одних эстрагенов или в комбинации с другими активными агентами включает: оральную контрацепцию; ослабление симптомов менопаузы; предупреждение угрожающего или привычного выкидыша; ослабление дисменореи; ослабление дисфункционального маточного кровотечения; как вспомогательное средство для развития яичников; лечение прыщей; уменьшение избыточного роста волос на теле у женщин (гирсутизм); профилактику сердечно-сосудистых заболеваний; лечение остеопороза; лечение рака простаты и подавление послеродовой лактации (Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Seventh Edition) Macmillan Publishing Company, 1985, pages 1421-1423). Таким образом, существует постоянно растущий интерес к поиску вновь синтезированных соединений и новому применению ранее известных соединений, которые являются доказуемо эстрогенными, то есть, способными имитировать действие эстрогена в эстрогенвосприимчивой ткани.

С точки зрения фармакологов, заинтересованных в разработке новых лекарственных средств, полезных для лечения заболеваний человека и специфических патологических состояний, наиболее важно получить соединения с некоторой доказуемо эстрогеноподобной функцией, но которые лишены пролиферативных побочных эффектов. Примером последней позиции является остеопороз - заболевание, при котором кость становится значительно более хрупкой, которое обычно лечат путем использования полностью активных эстрогенов; однако, вследствие установленного повышенного риска возникновения рака матки у пациентов, постоянно подвергающихся лечению активными эстрогенами, клинически не считается разумным лечить остеопороз у здоровых женщин с помощью полностью активных эстрогенов в течение длительного периода. Следовательно, агонисты эстрогенл вызывают интерес в первую очередь.

Остеопороз представляет собой системное заболевание скелета, характеризующееся пониженной костной массой и истощением костной ткани с последующим повышением хрупкости костей и чувствительности к переломам. В США этому состоянию подвержено более чем 25 миллионов людей, и оно приводит более чем к 1,3 миллионам переломов каждый год, включая 500000 переломов позвоночника, 250000 переломов тазобедренного сустава и 240000 переломов запястий ежегодно. Это стоит государству свыше 10 миллиардов долларов. Переломы тазобедренного сустава являются наиболее серьезными, причем 5-20% пациентов умирает в течение одного года и свыше 50% оставшихся в живых становятся нетрудоспособными.

Пожилые люди повергаются наибольшему риску развития остеопороза, и, следовательно, проблема, как предполагается, значительно возрастет при старении населения. Прогнозируют увеличение количества переломов во всем мире в 4 раза в течение следующих 60 лет, и, по оценкам одного исследования, в 2050 году во всем мире будет насчитываться 4,5 миллионов переломов тазобедренного сустава.

Женщины в большей степени подвержены остеопорозу, чем мужчины. У женщин имеет место резкое ускорение разрежения костей в течение пяти лет после менопаузы. К другим факторам, которые повышают риск, относятся курение, алкогольная зависимость, сидячий образ жизни и низкое потребление кальция.

Эстроген является агентом для предупреждения остеопороза или разрежения костей у женщин после менопаузы; это единственное лечение, которое однозначно снижает вероятность перелома. Однако эстрогбн стимулирует матку и ассоциируется с повышенным риском внутриматочного рака. Хотя риск внутриматочного рака, как считается, снижается при совместном применении прогестогена, все еще предполагается высокая опасность рака молочной железы при применении эстрогена.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к способу (Способ А) получения соединения формулы I



где А выбирают из CH₂ и NR;

В, D и Е независимо выбирают из СН и N;

Y представляет собой

(a) фенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(b) нафтил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(c) С₃-С₈циклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(d) С₃-С₈циклоалкинил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(e) пятичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(f) шестичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴, или

(g) бициклическую систему, состоящую из пяти- или шестичленного гетероциклического кольца, конденсированного с фенильным кольцом, причем указанное гетероциклическое кольцо содержит до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²-, NR²- и -S(O)_n-, и необязательно замещено 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ представляет собой

(a) -(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(b) -O(CH₂)_pCR⁵R⁶-;

(c) -O(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(d) -OCHR²CHR³- или

(e) -SCHR²CHR³-;

G представляет собой

(a) -NR⁷R⁸;

(b)



где n равно 0, 1 или 2; m равно 1, 2 или 3; Z² представляет собой -NH-, -О-, -S- или -CH₂-; необязательно конденсированный у соседних атомов углерода с одним или двумя фенильными кольцами, и необязательно независимо замещенный у атома углерода одним-тремя заместителями, и необязательно, независимо замещенный у атома азота химически подходящим заместителем, выбираемым из R⁴, или

(с) бициклический амин, содержащий от пяти до двенадцати атомов углерода, как мостиковый, так и конденсированный, и необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ и G в комбинации могут представлять собой



W представляет собой

(a) -СН₂-;

(b) -СН=СН-;

(c) -О-;

(d) -NR²-;

(e) -S(O)_n-;



(g) -CR²(OH)-;

(h) -CONR²-;

(i) -NR²CO-;





R представляет собой водород или C₁-С₆алкил;

R² и R³ независимо представляют собой

(а) водород или

(b) С₁-С₄алкил;

R⁴ представляет собой

(a) водород;

(b) галоген;

(c) C₁-С₆алкил;

(d) С₁-С₄алкокси;

(e) С₁-С₄ацилокси;

(f) С₁-С₄алкилтио;

(g) С₁-С₄алкилсульфинил;

(h) С₁-С₄алкилсульфонил;

(i) гидрокси(C₁-C₄)алкил;

(j) арил (C₁-C₄)алкил;

(k) -СО₂Н;

(l) -CN;

(m) -CONHOR;

(n) -SO₂NHR;

(o) -NH₂;

(p) С₁-С₄-алкиламино;

(q) C₁-C₄-диалкиламино;

(r) -NHSO₂R;

(s) -NO₂;

(t) -арил или

(u) -ОН;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой C₁-С₈алкил или вместе образуют С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо представляют собой

(a) фенил;

(b) С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо, насыщенное или ненасыщенное;

(c) С₃-С₁₀гетероциклическое кольцо, содержащее до двух гетероатомов, выбираемых из -О-, -N- или -S-;

(d) Н;

(e) C₁-С₆алкил или

(f) образуют 3-8-членное азотсодержащее кольцо с заместителями R⁵ или R⁶;

R⁷ и R⁸ или в линейной, или в циклической форме могут быть необязательно замещены заместителями в количестве до трех, независимо выбираемых из C₁-С₆алкила, галогена, алкокси-, гидрокси- и карбоксигрупп;

образуемое R⁷ и R⁸ кольцо может быть необязательно конденсировано с фенильным кольцом;

е равно 0, 1 или 2;

m равно 1, 2 или 3;

n равно 0, 1 или 2;

р равно 0, 1, 2 или 3;

q равно 0, 1, 2 или 3;

а также его оптических и геометрических изомеров;

который включает селективное деацетилирование соединения формулы



где R¹ представляет собой (C₁-C₆) алкил, (С₂-С₆) алкенил, (С₂-С₆) алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена, в присутствии гидролитического фермента и водного буферного раствора.

Определения "GC-4, PS30, AY30, PGE, АК, N, L-10, АР-12, FAP-15, R-10, G, МАР10 и SAM II" представляют собой названия липазных ферментов, используемых в настоящем изобретении и продаваемых фирмой Amano Chemical Co., 1157, North Main Street, Lombard, IL 60148.

Определения "липаза из Pseudomonas fluorescens, липаза из Candida cylindracea, липаза из Мucor miehei, липаза из Wheat germ, липаза из Rhizopus arrhizus, липаза из Мucor javanicus, липаза из Pseudomonas cepacia, липаза из Cadia lipolytica и липаза из Penicillium roqueforti" являются названиями липазных ферментов, используемых в изобретении и продаваемых фирмой Fluka Chemical Co., 1001, West St. Paul Avenue, Milwaukee, WI 53233.

Определения "липопротеидлипаза са# 70-6571-01 и липопротеидлипаза са# 70-1481-01" являются названиями липазных ферментов, используемых в изобретении и продаваемых фирмой Genzyme Chemical Co., One Kendall Square, Chembridge, MA 02139.

Определение "липаза из Candida cylindracea, липаза из Chromobacterium viscosum, липаза из Мucor miehei, липаза из Pancreatic, липаза из Pseudomonas fluorescens и липаза из Rhizopus niveus" являются названиями липазных ферментов, используемых в настоящем изобретении и продаваемых фирмой Recombinant Biocatalysis Chemical Co., 512 Elmwood Avenue, Sharon Hill, PA 19079.

Определение "PPL, тип II" представляет собой название липазного фермента, используемого в данном изобретении и продаваемого фирмой Sigma Chemical Co., P.O. Box 14508, St. Louis, МО 63178.

Определение "Lip-300" представляет собой название липазного фермента, используемого в данном изобретении и продаваемого фирмой TOYOBO Chemical Co. , 1450 Broadway, New York, NY 10018.

Определения "иммобилизованная, свиная печеночная эстераза из Hog pancreas, эстераза из Thermoanaerobium Brockii, эстераза из Bacillus sp. и эстераза из Mucor miehi" являются названиями эстеразных ферментов, используемых в настоящем изобретении и продаваемых фирмой Fluka Chemical Co., 1001, West St. Paul Avenue, Milwaukee, WI 53233.

Определения "холестеринэстераза из Porcine pancreas, холестеринэстераза из Bovine pancreas, холестеринэстераза из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстераза из Porcine liver, холестеринэстераза из Rabbit liver, холинэстераза, холинэстераза из Electric eel, холинэстераза, холоил-глицингидролаза и Porcine liver E-3128" являются названиями эстеразных ферментов, используемых в настоящем изобретении и продаваемых фирмой Sigma Chemical Co., P.O. Box 14508, St. Louis, МО 63178.

Определения "холестеринэстераза и холестеринэстераза из Pseudonomas fluorescens" представляют собой названия эстеразных ферментов, используемых в данном изобретении и продаваемых фирмой Boehringer Mannheim Chemical Co., 9115 Hague Road, Indianapolis, IN 46250.

Определения "кошачий I-1256, собачий I7379, угоревый I-1266, лошадиный I9627, телячий I7876, морской свинки I1631, мышиный I8254, козлиный I2635, цыплячий I8001, овечий I0132, голубиный I8376, тюлений I7627, гремучей змеи I9885, форелевый I1531, черепаховый I-0757, крысиный I1380, двоякодышащей рыбы I7377, лососевый I7502, угоревый (electrophorus elextricus) I8380 и острозубой акулы I1130" представляют собой названия ферментов печеночного ацетонового порошка, используемых в настоящем изобретении и продаваемых фирмой Sigma Chemical Co., P.O. Box 14508, St. Louis, МО 63178.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, в котором гидролитический фермент представляет собой липазу.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, в котором гидролитический фермент представляет собой эстеразу.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, в котором гидролитический фермент представляет собой печеночный ацетоновый порошок.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, в котором липаза представляет собой GC-4, PS30, AY30, PGE, АК, N, L-10, АР-12, FAP-15, R-10, G, MAP10 и SAM II, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Candida cylindracea, Lip-300, липазу из Chromobacterium viscosum, липазу из Мucor miehei, липазу из Pancreatic, Pseudomonas fluorescens, липазу из Rhizopus niveus, PPL, тип II, липазу из Wheat germ, липазу из Rhizopus arrhizus, липазу из Мucor javanicus, липазу из Pseudomonas cepacia, липазу из Cadia lipolytica, липазу из Penicillium roqueforti, липопротеидлипазу са#70-6571-01, липазу из Porcine pancreas и липопротеидлипазу са#70-1481-01.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, где эстераза представляет собой PLA-A, иммобилизованную, свиную печеночную эстеразу из Hog pancreas. Porcine liver E-3128, холестеринэстеразу, холестеринэстеразу из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстеразу из Porcine pancreas, холестеринэстеразу из Bovine pancreas, холестеринэстеразу из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстеразу из Porcine liver, холестеринэстеразу из Rabbit liver, холинэстеразу, холинэстеразу из Electric eel, холинэстеразу, холоилглицингидролазу, эстеразу из Thermoanaerobium Brockii, эстеразу из Bacillus sp. и эстеразу из Мucor miehi.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, где печеночный ацетоновый порошок представляет собой кошачий I-1256, собачий I7379, угоревый I-1266, лошадиный I9627, телячий I7876, морской свинки I1631, мышиный I8254, козлиный I2635, цыплячий I8001, овечий I0132, голубиный I8376, тюлений I7627, гремучей змеи I9885, форели I1531, черепаховый I-0757, крысиный I1380, двоякодышащей рыбы I7377, лососевый I7502, угоревый (electrophorus elextricus) I8380 и острозубой акулы I1130.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, в котором гидролитический фермент иммобилизован на твердой подложке.

Настоящее изобретение также относится к Способу А, где гидролитический фермент находится в чистой кристаллической форме.

Настоящее изобретение относится в Способу А, в котором водный буферный раствор представляет собой раствор фосфата, лимонной кислоты или бороновой кислоты.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу А, в котором водный буферный раствор имеет рН между 6 и 8.

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы



который включает селективное деацетилирование соединения формулы



где R представляет собой (C₁-C₆) алкил, (С₂-С₆) алкенил, (С₂-С₆) алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена, в присутствии гидролитического фермента и водного буферного раствора.

Настоящее изобретение относится к способу (Способ В) получения соединения формулы



где А выбирают из CH₂ и NR;

В, D и Е независимо выбирают из СН и N;

Y представляет собой

(a) фенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(b) нафтил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(c) С₃-С₈циклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(d) С₃-С₈циклоалкинил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(e) пятичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(f) шестичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴, или

(g) бициклическую кольцевую систему, состоящую из пяти- или шестичленного гетероциклического кольца, конденсированного с фенильным кольцом, причем указанное гетероциклическое кольцо содержит до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²-, NR²- и -S(O)_n-, и необязательно замещено 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ представляет собой

(a) -(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(b) -O(CH₂)_pСR⁵R⁶-;

(c) -O(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(d) -OCHR²CHR³- или

(e) -SCHR²CHR³-;

G представляет собой

(a) -NR⁷R⁸;



где n равно 0, 1 или 2; m равно 1, 2 или 3; Z² представляет собой -NH-, -О-, -S- или -СН₂-; необязательно конденсированный у соседних атомов углерода с одним или двумя фенильными кольцами, и необязательно независимо замещенный у атома углерода одним-тремя заместителями, и необязательно, независимо замещенный у атома азота химически подходящим заместителем, выбираемым из R⁴, или

(с) бициклический амин, содержащий от пяти до двенадцати атомов углерода, как мостиковый, так и конденсированный, и необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z₁ и G в комбинации могут представлять собой



W представляет собой

(а) -СН₂-;

(b) -СH=СН-;

(c) -O-;

(d) -NR²-;

(e) -S(O)_n-;



(g) -CR²(OH)-;

(h) -CONR²-;

(i) -NR²CO-;





R представляет собой водород или С₁-С₆алкил;

R² и R³ независимо представляют собой

(a) водород или

(b) С₁-С₄алкил;

R⁴ представляет собой

(a) водород;

(b) галоген;

(c) C₁-С₆алкил;

(d) С₁-С₄алкокси;

(e) С₁-С₄ацилокси;

(f) С₁-С₄алкилтио;

(g) С₁-С₄алкилсульфинил;

(h) С₁-С₄алкилсульфонил;

(i) гидрокси (C₁-C₄) алкил;

(j) арил (C₁-C₄) алкил;

(k) -CO₂H;

(l) -CN;

(m) -CONHOR;

(n) -SO₂NHR;

(о) -NH₂;

(p) С₁-С₄алкиламино;

(q) С₁-С₄диалкиламино;

(r) -NHSO₂R;

(s) -NO₂;

(t) -арил или

(u) -ОН;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой C₁-С₈алкил или вместе образуют С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо представляют собой

(а) фенил;

(b) С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо, насыщенное или ненасыщенное;

(c) С₃-С₁₀гетероциклическое кольцо, содержащее до двух гетероатомов, выбираемых из -О-, -N- или -S-;

(d) Н;

(e) C₁-С₆алкил или

(f) образуют 3-8-членное азотсодержащее кольцо с заместителями R⁵ или R⁶;

R⁷ и R⁸ или в линейной, или в циклической форме могут быть необязательно замещены заместителями в количестве до трех, независимо выбираемых из C₁-С₆алкила, галогена, алкокси-, гидрокси- и карбоксигрупп;

образуемое R⁷ и R⁸ кольцо может быть необязательно конденсировано с фенильным кольцом;

е равно 0, 1 или 2;

m равно 1, 2 или 3;

n равно 0, 1 или 2;

р равно 0, 1, 2 или 3;

q равно 0, 1, 2 или 3;

а также его оптических и геометрических изомеров;

который включает ферментативное расщепление соединения формулы



где R¹ представляет собой (C₁-C₆) алкил, (C₂-C₆) алкенил, (С₂-С₆)алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена, в присутствии липазы и водного буферного раствора; и (b) взаимодействие образующегося таким образом соединения формулы IV



где R¹ принимает определенные выше значения, с основанием в присутствии полярного протонного растворителя.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором водный буферный раствор представляет собой раствор фосфата, лимонной кислоты или бороновой кислоты.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором липаза представляет собой липазу из Mucor miehei.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором основание представляет собой метилат натрия, гидроксид натрия, гидроксид лития или гидроксид калия.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором полярный протонный растворитель представляет собой метанол, этанол или воду.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором липаза иммобилизована на твердой подложке.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором липаза является сшитым ферментом.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу В, в котором липаза находится в чистой кристаллической форме.

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы



который включает ферментативное расщепление соединения формулы



где R¹ представляет собой (C₁-C₆) алкил, (C₂-C₆) алкенил, (С₂-С₆)алкинил, где алкильные, алкенильные или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена, в присутствии липазы и водного буферного раствора; и (b) взаимодействие образующегося таким образом соединения формулы Х



где R принимает описанные выше значения, с основанием в присутствии полярного протонного растворителя.

Настоящее изобретение относится к способу (Способ С) получения соединения формулы



где А выбирают из СН₂ и NR;

В, D и Е независимо друг от друга выбирают из СН и N;

Y представляет собой

(a) фенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(b) нафтил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(c) С₃-С₈циклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(d) С₃-С₈циклоалкинил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(e) пятичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(f) шестичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴, или

(g) бициклическую кольцевую систему, состоящую из пяти- или шестичленного гетероциклического кольца, конденсированного с фенильным кольцом, причем указанное гетероциклическое кольцо содержит до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²-, NR²- и -S(O)_n-, и необязательно замещено 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ представляет собой

(a) -(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(b) -O(CH₂)_pCR⁵R⁶-;

(c) -O(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(d) -OCHR²CHR³- или

(e) -SCHR²CHR³-;

G представляет собой

(a) -NR⁷R⁸;



где n равно 0, 1 или 2; m равно 1, 2 или 3; Z² представляет собой -NH-, -О-, -S- или -СН₂-; необязательно конденсированный у соседних атомов углерода с одним или двумя фенильными кольцами, и необязательно независимо замещенный у атома углерода одним-тремя заместителями, и необязательно, независимо замещенный у атома азота химически подходящим заместителем, выбираемым из R⁴, или

(c) бициклический амин, содержащий от пяти до двенадцати атомов углерода, как мостиковый, так и конденсированный, и необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ и G в комбинации могут представлять собой



W представляет собой

(a) -СН₂-;

(b) -СН=СН-;

(c) -О-;

(d) -NR²-;

(e) -S(O)_n-;



(g) -CR²(OH)-;

(h) -CONR²-;

(i) -NR²CO-;





R представляет собой водород или C₁-С₆алкил;

R² и R³ независимо представляют собой

(а) водород или

(b) С₁-С₄алкил;

R⁴ представляет собой

(a) водород;

(b) галоген;

(c) C₁-С₆алкил;

(d) С₁-С₄алкокси;

(e) С₁-С₄ацилокси;

(f) С₁-С₄алкилтио;

(g) С₁-С₄алкилсульфинил;

(h) С₁-С₄алкилсульфонил;

(i) гидрокси (C₁-C₄) алкил;

(j) арил (C₁-C₄) алкил;

(k) -CO₂H;

(l) -CN;

(m) -CONHOR;

(n) -SO₂NHR;

(o) -NH₂;

(p) С₁-С₄алкиламино;

(q) С₁-С₄диалкиламино;

(r) -NHSO₂R;

(s) -NO₂;

(t) -арил или

(u) -ОН;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой C₁-С₈алкил или вместе образуют С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо представляют собой

(a) фенил;

(b) С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо, насыщенное или ненасыщенное;

(c) С₃-С₁₀гетероциклическое кольцо, содержащее до двух гетероатомов, выбираемых из -О-, -N- или -S-;

(d) Н;

(e) C₁-C₆-алкил или

(f) образуют 3-8-членное азотсодержащее кольцо с заместителями R⁵ или R⁶;

R⁷ и R⁸ или в линейной, или в циклической форме могут быть необязательно замещены заместителями в количестве до трех, независимо выбираемых из C₁-С₆алкила, галогена, алкокси-, гидрокси- и карбоксигрупп;

образуемое R⁷ и R⁸ кольцо может быть необязательно конденсировано с фенильным кольцом;

е равно 0, 1 или 2;

m равно 1, 2 или 3;

n равно 0, 1 или 2;

р равно 0, 1, 2 или 3;

q равно 0, 1, 2 или 3;

а также его оптических и геометрических изомеров;

который включает ферментативное расщепление соединения формулы



в присутствии липазы и ацетилирующего агента; и (b) взаимодействие образующегося таким образом соединения формулы IV



где R¹ представляет собой (C₁-C₆) алкил, (С₂-С₆) алкенил, (С₂-С₆) алкинил, и алкильные, алкенильные или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена, с основанием в присутствии полярного протонного растворителя.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором гидролитический фермент представляет собой липазу.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором липаза представляет собой GC-4, PS30, AY30, PGE, АК, N, L-10, АР-12, FAP-15, R-10, G, MAP10 и SAM II, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Candida cylindracea, Lip-300, липазу из Chromobacterium viscosum, липазу из Мucor miehei, липазу из Pancreatic, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Rhizopus niveus, PPL, тип II, липазу из Wheat germ, липазу из Rhizopus arrhizus, липазу из Мисог javanicus, липазу из Pseudomonas cepacia, липазу из Cadia lipolytica, липазу из Penicillium roqueforti, липопротеидлипазу са# 70-6571-01, липазу из Porcine pancreas и липопротеидлипазу са# 70-1481-01.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором ацетилирующий агент представляет собой этилацетат, винилацетат, хлорацетат и трифторацетат.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором основание представляет собой метилат натрия, гидроксид натрия, гидроксид лития или гидроксид калия.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором полярный протонный растворитель представляет собой метанол, этанол или воду.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором липаза иммобилизована на твердой подложке.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором липаза является сшитым ферментом.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу С, в котором липаза находится в чистой кристаллической форме.

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы



который включает ферментативное расщепление соединения формулы



в присутствии липазы и ацетилирующего агента; и (b) взаимодействие образующегося таким образом соединения формулы Х



где R¹ представляет собой (C₁-C₆) алкил, (C₂-C₆) алкенил, (С₂-С₆)алкинил, где алкильные, алкенильньге или алкинильные группы необязательно замещены одним-тремя атомами галогена, с основанием в присутствии полярного протонного растворителя.

Настоящее изобретение относится к способу (Способ D) получения соединения формулы



где А выбирают из CH₂ и NR;

В, D и Е независимо друг от друга выбирают из СН и N;

Y представляет собой

(а) фенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(b) нафтил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(c) С₃-С₈циклоалкил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(d) С₃-С₈циклоалкинил, необязательно замещенный 1-2 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(e) пятичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

(f) шестичленный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²- и -S(O)_n-, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴, или

(g) бициклическую кольцевую систему, состоящую из пяти- или шестичленного гетероциклического кольца, конденсированного с фенильным кольцом, причем указанное гетероциклическое кольцо содержит до дзух гетероатомов, выбираемых из группы, включающей -О-, -NR²-, NR²- и -S(O)_n-, и необязательно замещено 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ представляет собой

(a) -(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(b) -O(CH₂)_pCR⁵R⁶-;

(c) -O(CH₂)_pW(CH₂)_q-;

(d) -OCHR²CHR³- или

(e) -SCHR²CHR³-;

G представляет собой

(a) -NR⁷R⁸;



где n равно 0, 1 или 2; m равно 1, 2 или 3; Z² представляет собой -NH-, -O-, -S- или -CH₂-; необязательно конденсированный у соседних атомов углерода с одним или двумя фенильными кольцами, и необязательно независимо замещенный у атома углерода одним-тремя заместителями, и необязательно, независимо замещенный у атома азота химически подходящим заместителем, выбираемым из R⁴, или

(с) бициклический амин, содержащий от пяти до двенадцати атомов углерода, как мостиковый, так и конденсированный, и необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбираемыми из R⁴;

Z¹ и G в комбинации могут представлять собой



W представляет собой

(a) -СН₂-;

(b) -СН=СН-;

(c) -O-;

(d) -NR²-;

(e) -S(O)_n-;



(g) -CR²(OH)-;

(h) -CONR²-;

(i) -NR²CO-;





R представляет собой водород или С₁-С₆алкил;

R² и R³ независимо представляют собой

(a) водород или

(b) С₁-С₄алкил;

R⁴ представляет собой

(a) водород;

(b) галоген;

(c) C₁-С₆алкил;

(d) С₁-С₄алкокси;

(e) С₁-С₄ацилокси;

(f) С₁-С₄алкилтио;

(g) С₁-С₄алкилсульфинил;

(h) С₁-С₄алкилсульфонил;

(i) гидрокси(С₁-С₄) алкил;

(j) арил (C₁-C₄) алкил;

(k) -СО₂Н;

(l) -CN;

(m) -CONHOR;

(n) -SO₂NHR;

(o) -NH₂;

(p) С₁-С₄алкиламино;

(q) С₁-С₄диалкиламино;

(r) -NHSO₂R;

(s) -NO₂;

(t) -арил или

(u) -ОН;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой C₁-С₈алкил или вместе образуют С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо;

R⁷ и R⁸ независимо представляют собой

(a) фенил;

(b) С₃-С₁₀карбоциклическое кольцо, насыщенное или ненасыщенное;

(c) С₃-С₁₀гетероциклическое кольцо, содержащее до двух гетероатомов, выбираемых из -О-, -N- или -S-;

(d) Н;

(e) C₁-С₆алкил или

(f) образуют 3-8-членное азотсодержащее кольцо с заместителями R⁵ или R⁶;

R⁷ и R⁸ или в линейной, или в циклической форме могут быть необязательно замещены заместителями в количестве до трех, независимо выбираемых из C₁-С₆алкила, галогена, алкокси-, гидрокси- и карбоксигрупп;

образуемое R⁷ и R⁸ кольцо может быть необязательно конденсировано с фенильным кольцом;

е равно 0, 1 или 2;

m равно 1, 2 или 3;

n равно 0, 1 или 2;

р равно 0, 1, 2 или 3;

q равно 0, 1, 2 или 3;

а также его оптических и геометрических изомеров;

который включает ферментативное расщепление соединения формулы



в присутствии липазы.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу D, в котором липаза представляет собой липазу из Mucor miehei.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу D, в котором липаза иммобилизована на твердой подложке.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу D, в котором липаза является сшитым ферментом.

Кроме того, настоящее изобретение относится к Способу D, в котором липаза находится в чистой кристаллической форме.

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы



который включает ферментативное расщепление соединения формулы



в присутствии липазы.

Исходные материалы для настоящего изобретения получают в соответствии с патентом США 5552412, который включен в данное описание в качестве справочного материала.

В реакции 1 Схемы 1 (схемы 1-5 см. в конце описания) соединение формулы II превращают в соответствующие соединения формул I и III путем ферментативного расщепления II в присутствии гидролитического фермента, мобилизованного или иммобилизованного на различной твердой подложке, фермента или кристаллизованного фермента. Гидролитические ферменты представляют собой: (а) липазу (GC-4, PS30, AY30, PGE, АК, W, L-10, АР-12, FAP-15, R-10, G, МАР10 и SАМ II, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Candida cylindracea, Lip-300, липазу из Chromobacterium viscosum, липазу из Mucor miehei, липазу из Pancreatic, липазу из Pseudomonas fluorescens, липазу из Rhizopus niveus, PPL, тип II, липазу из Wheat germ, липазу из Rhizopus arrhizus, липазу из Mucor javanicus, липазу из Pseudomonas cepacia, липазу из Cadia lipolytica, липазу из Penicillium roqveforti, липопротеидлипазу са#70-6571-01, липазу из Porcine pancreas и липопротеидлипазу са#70-1481-01); б) эстеразу (PLE-A, иммобилизованную свиную печеночную эстеразу из Hog pancreas, Porcine liver E-3128, холестерин-эстеразу, холестеринэстеразу из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстеразу из Porcine pancreas, холестеринэстеразу из Bovine pancreas, холестеринэстеразу из Pseudonomas fluorescens, холестеринэстеразу из Porcine liver, холестеринэстеразу из Rabbit liver, холинэстеразу, холинэстеразу из Electric eel, холинэстеразу, холоилглицингидролазу, эстеразу из Thermoanaerobium brockii, эстеразу из Bacillus sp. и эстеразу из Mucor miehi) или (в) печеночный ацетоновый порошок (кошачий I-1256, собачий I7379, угоревый I-1266, лошадиный I9627, телячий I7876, морской свинки I1631, мышиный I8254, козлиный I2635, цыплячий I8001, овечий I0132, голубиный I8376, тюлений I7627, гремучей змеи I9885, форели I1531, черепаховый I-0757, крысиный I1380, двоякодышащей рыбы I7377, лососевый I7502, угоревый (electrophorus elextricus) I8380 и острозубой акулы I1130). Реакцию проводят в водном буферном растворе, таком как фосфатный, лимоннокислый или бороновокислый буфер, с органическим растворителем или без органического растворителя, такого как метиленхлорид, тетрагидрофуран, ацетон, диметилформамид и диоксан. Буферный раствор имеет значение рН приблизительно от 6 до 8, предпочтительно рН разно приблизительно 7. Реакционную смесь перемешивают при температуре от комнатной и до приблизительно 65^oС, предпочтительно при температуре приблизительно от 25 до 40^oС, в течение временного периода, который зависит от используемого фермента и конверсии рацемической смеси до желаемого энантиомерного избытка.

В реакции I Схемы 2 соединение формулы II превращают в соответствующие соединения формул IV и V путем ферментативного расщепления соединения II с помощью липазы из Mucor miehei, в соответствии с методикой, описанной для реакции I Схемы 1.

В реакции I Схемы 3 соединение формулы VI превращают в соответствующие соединения формул IV и V путем ферментативного расщепления соединения VI с помощью липазы (GC-4, РS30, AY30, PGE, АК, N, L-10, АР-12, FAP-15, R-10, G, МАР10 и SAM II, липазы из Pseudomonas fluorescens, липазы из Candida cylindracea, Lip-300, липазы из Chromobacterium viscosum, липазы из Mucor miehei, липазы из Pancreatic, липазы из Pseudomonas fluorescens, липазы из Rhizopus niveus, PPL, тип II, липазы из Wheat germ, липазы из Rhizopus arrhizus, липазы из Mucor javanicus, липазы из Pseudomonas cepacia, липазы из Cadia lipolytica, липазы из Penicillium roqueforti, липопротеидлипазы са# 70-6571-01, липазы из Porcine pancreas и липопротеидлипазы са#70-1481-01) в присутствии ацетилирующего агента, такого как этилацетат, винилацетат, хлорацетат или трифторацетат. Реакционную смесь перемешивают в апротонном растворителе, таком как метиленхлорид, этиленгликоль, диметиловый эфир, дихлорэтан, гексан, тетрагидрофуран и диоксан, при температуре от комнатной до приблизительно 65^oС, предпочтительно при температуре приблизительно от 25 до 40^oС, в течение временного периода, который зависит от используемого фермента и конверсии рацемической смеси до желаемого энантиомерного избытка.

В реакции I Схемы 4 соединение формулы VI превращают в соответствующие соединения формул I и III путем ферментативного расщепления соединения II с помощью липазы, такой как Mucor miehei. Реакционную смесь перемешивают в апротонном растворителе, таком как метиленхлорид, этиленгликоль, диметиловый эфир, дихлорэтан, гексан, тетрагидрофуран и диоксан, при температуре от комнатной до приблизительно 65^oС, предпочтительно при температуре приблизительно от 25 до 40^oС, в течение временного периода, который зависит от используемого фермента и конверсии рацемической смеси до желаемого энантиомерного избытка.

В реакции 1 Схемы 5 соединение формулы IV превращают в соответствующее соединение формулы I путем деацетилирования соединения IV с помощью основания, такого как метилат натрия, гидроксид натрия, гидроксид лития или гидроксид калия, в полярном протонном растворителе, таком как метанол, этанол или вода. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно от 1 до 24 ч, предпочтительно в течение 6 ч.

Пример 1

(-)-Цис-6(S)-Фенил-5(R)-[4-(2-пирролидин-1-ил-этокси) фенил] -5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол

Смесь рацемического ацетилата, соответствующего названному соединению, холестеринэстеразы из Porcine pancreas (С-9530), продаваемой фирмой SIGMA, и 0,1 М фосфатного буфера, имеющего рН 7, перемешивают при комнатной температуре. Ферментативное расщепление останавливают при степени конверсии 30-50%, контролируя с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Раствор затем экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, затем насыщенным раствором соли, сушат сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, получая коричневое твердое вещество. Полученный остаток растворяют в метиленхлориде и очищают флэш-хроматографией на SiO₂ с использованием в качестве элюента смеси метиленхлорид/метанол (соотношение 9:1) и нескольких капель NH₄ОH, получая продукт в виде почти белой пены.

Спектр ¹H ЯМР (250 МГц, СDСl₃), : 7,04 (м, 3Н), 6,74 (м, 2Н), 6,63 (д, J=8,3 Гц, 2Н), 6,50 (м, 3Н), 6,28 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 4,14 (д, J=4,9 Гц, 1Н), 3,94 (т, J= 5,3 Гц, 2Н), 3,24 (дд, J=12,5, 4,1 Гц, 1Н), 2,59 (м, 4Н), 2,78 (м, 1Н), 1,88 (м, 4Н), 1,68 (с, 1Н). Оптическую чистоту продукта определяют с помощью хиральной ВЭЖХ.