способ комплексной переработки внутренностей голотурий с получением биологически активных добавок к пище и биологически активные пищевые добавки "тингол-2" и "эрогол"

Формула изобретения

1. Способ комплексной переработки внутренностей голотурий для получения биологически активной добавки к пище, повышающей концентрацию и подвижность сперматозоидов у людей и животных и их физическую работоспособность, характеризующийся тем, что внутренности голотурий измельчают до частиц величиной не более 0,5 мм, экстрагируют 95-96% этиловым спиртом в соотношении этиловый спирт: внутренности голотурий от 1: 1 до 1: 3 при температуре от минус 5 до плюс 60^oС в течение от 5 ч до 10 суток, отделяют жидкую часть центрифугированием или фильтрованием с получением водно-спиртового экстракта, затем остаток внутренностей голотурий с содержанием воды от 55 до 75% высушивают при 60-75^oС в течение 2,5-4 ч, измельчают до порошкообразного состояния, таблетируют или капсулируют.

2. Биологически активная добавка к пище, повышающая концентрацию и подвижность сперматозоидов у людей и животных и их физическую работоспособность, характеризующаяся тем, что она представляет собой водно-спиртовой экстракт из внутренностей голотурий, полученный по п. 1, содержащий тритерпеновые гликозиды в количестве 700-3500 мкг/мл с содержанием спирта 10-50% и липидов 0,5-4%.

3. Биологически активная добавка к пище, повышающая концентрацию и подвижность сперматозоидов у людей и животных и их физическую работоспособность, характеризующаяся тем, что она представляет собой сухой порошок, полученный по п. 1, содержащий 3-12% воды, тритерпеновые гликозиды в количестве 800-4500 мкг/мл, белка 35-45%, марганца 13,5-24,5 мг/кг, цинка 44,0-82,0 мг/кг, железа 481,2-893,5 мг/кг, меди 5,6-10,4 мг/кг, никеля 2,4-4,2 мг/кг, а также суммы элементов кальция, магния, калия 6500-12000 мг/кг.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для переработки внутренностей голотурий с получением биологически активных добавок к пище "ТИНГОЛ-2" и "Эрогол" как общеукрепляющих средств при высоких физических нагрузках и повышении половой активности (потенции) и функции воспроизводства человека и животных.

Известен способ получения средства для стимуляции защитных сил организма из морских гидробионтов (заявка 97106885/13 от 22.04.97), включающий первичную экстракцию морских гидробионтов. В качестве источника берут цельные свежевыловленные особи трепангов японских, извлечение средств ведут с разбавленными растворами этанола при температуре 35^oС, полученное упаривают и очищают ступенчатой гидрофобной хроматографией с использованием воды и градиента концентраций этанола от 10, 20, 40, 50, 96%.

Известен способ приготовления пищевого лечебно-профилактического продукта из икры морского ежа (пат. РФ 2116039 от 08.07.97) Способ включает извлечение икры, промывку, подсушку, посол, измельчение, смешивание с компонентам. Лечебно-профилактический продукт включает икру морских ежей в количестве 15-25% и смесь растительных масел.

Известен способ получения липидной и каротиноидной фракции из голотурий, преимущественно Cucumaria frondosa (пат. США 6055936 от 02.05.2000), включающий извлечение внутренностей "морского огурца", подкисление до рН между 4 и 5,5 внутренностей "морского огурца", высушивание подкисленных внутренностей, экстракцию общей липидной фракции либо гексаном, либо сжиженным пропаном, либо суперкритическим диоксидом углерода, либо комбинацией вышеупомянутых веществ.

Получены несколько композиций веществ:

- композиция веществ, включающая липидные фракции "морского огурца" без каротиноидного материала, полученные следующими методами: а) контактированием красных каротиноидсодержащих липидных фракций "морского огурца" с активированной отбеливающей глиной, или подобным подходящим материалом, или материалом, который сорбирует пигменты; б) отделение этой отбеливающей глины от оставшейся липидной фракции, которая по существу освобождена от каротиноидов.

- композиция веществ, включающая каротиноидную липидную фракцию, полученную экстракцией ацетоном свежих подкисленных внутренностей "морского огурца".

Наиболее близким способом переработки голотурий является способ получения комплекса биологически активных продуктов из голотурии Cucumaria frondosa (пат. РФ 2112527 от 06.07.95), включающий гомогенизацию сырья, многократное экстрагирование, объединение экстрактов, очистку и последовательное выделение целевых продуктов. Экстрагирование биомассы проводят смесью этанол-хлороформа при их соотношении соответственно (1:2:2) - (1:1:2), повторное экстрагирование - этанолом при комнатной температуре и соотношении сырье: этанол (1:1) - (1:3), а последующее - этанолом при температуре кипения и соотношении сырье: этанол (1:3) - (1:5), плотный остаток, полученный после многократных экстракций, высушивают, измельчают и получают белковую кормовую добавку, а экстракты объединяют, фильтруют, упаривают, полученный при этом остаток многократно экстрагируют ацетоном при соотношении остаток: ацетон (1:5) - (1:10) и получают осадок, содержащий комплекс сапонинов и ацетоновый экстракт, содержащий каротиноиды, затем ацетоновый экстракт фильтруют и упаривают до сухого остатка, растворяют остаток в этаноле при соотношении остаток: этанол 1:3, фильтруют и упаривают до получения концентрата каротиноидов, а плотный осадок, содержащий комплекс сапонинов, растворяют при соотношении осадок : этанол 1:3, упаривают до одной трети исходного объема, фильтруют в горячем виде, фильтрат растворяют в бутаноле при соотношении фильтрат: бутанол (1:3) - (1:5), фильтруют в горячем виде и упаривают фильтрат до сухого остатка, затем остаток растворяют в этаноле при соотношении остаток: этанол (1:8) - (1:10), фильтруют раствор в горячем виде и фильтрат упаривают до сухого остатка - концентрата комплекса сапонинов, при этом полученный продукт дополнительно содержит каротиноиды.

Данный способ получения комплекса биологически активных продуктов из голотурии Cucumaria frondosa включает использование огнеопасных, экологически вредных веществ (хлороформ, ацетон, бутанол), длительную, трудоемкую, энергозатратную, многократную, многоступенчатую экстракцию, предполагает использование свежего сырья. Кроме того, данный способ предполагает получение химически извлеченных, очищенных каротиноидов и сапонинов и поэтому испытывает недостаток синергического действия микро- и макроэлементов, гликозидов, витаминов, аминосахаров и другого естественного состава, присутствующего в голотуриях.

Известно средство для лечения лучевой болезни (пат. РФ 2141833 от 16.07.97), где предложено применять тритерпеновые гликозиды (кукумариозиды) из дальневосточной голотурии Cucumaria japonica для лечения лучевой болезни. Вещества увеличивают выживаемость облученных животных, повышают сопротивляемость организма к последствиям воздействия ионизирующего излучения.

Известен пат. США 5993797 от 30.11.99 получения сульфатированного полисахарида из дальневосточного трепанга и использование этого вещества для лечения сосудистой гиперплазии.

Известны пат. США 5985330 от 16.11.99, 5989572 от 23.11.99, 5770205 от 23.06.98, 5876762 от 02.03.99, включающие получение фракций В1000 и Т2000 из эпительного слоя и "венчиков" "морского огурца" Cucumaria frondosa и использование этих фракций в различных концентрациях и вариациях для лечения различных артритных воспалительных ревматоидных процессов.

Известны общеукрепляющие средства, полученные из сырья животного происхождения. Пантокрин и рантарин - экстракты из пантов пятнистого оленя, изюбра, марала или экстракт из пантов северного оленя (Машковский М.Д. Лекарственные средства, т. 1., М.: ООО "Новая волна": Издатель С.Б.Дивов, 2001 с. 136). Пантогем (ТУ 429-021-001-92), активным началом которого является вытяжка из цельной крови пятнистых оленей.

Известен лечебно-профилактический бальзам "Витаген" (ТУ 9169-010-20785204-94), содержащий в своем составе 37 компонентов растительного и животного происхождения, в том числе женьшень, элеутерококк, лимонник, препараты из ламинарии, молок лососевых, мумие.

Эти средства применяются при реабилитации различных перенесенных заболеваний, снижении функций центральной нервной системы, снижении мышечной и умственной работоспособности.

Известен препарат МИГИ-К-ЛП, обладающий неспецифическими иммуномодулирующими свойствами (ТУ 15-16-28-94), представляющий собой гидролизат из мяса мидий, содержащий меланоидины с молекулярной массой до 5000 и свыше 5000 при их количественном соотношении (мг/мл раствора), равном 28 - 50:2-8, имеющем рН 5,0 - 5,8, содержащем 28-33 мас.% сухих веществ, и содержащий аминного азота 0,85-1,2% от общей массы продукта. Гидролизат из мидий и способ его получения защищен патентом РФ 2017439, кл. A 23 L 1/333 А 23 G 1/04. Гидролизат из мидий содержит полный набор незаменимых аминокислот, низкомолекулярные азотные соединения, микроэлементы (Со, Сu, Zn, Mn, Fe, Mo и др.), свободные жирные кислоты, а также ряд веществ меланоидной природы.

МИГИ-К-ЛП рекомендован лицам, контактирующим с ионизирующим излучением, получающим химиотерапию, больным с хроническими воспалительными процессами, иммунодефицитом, метаболическими нарушениями, при ожогах, для заживления ран в послеоперационный период.

МИГИ-К-ЛП принимают по 15-45 мл (1-3 столовые ложки) в сутки до, после или во время еды.

Известно средство для профилактики и лечения алеутской болезни норок (заявка RU 4891144/15 от 13.12.1990). Применяют кукумариозид - суммарную фракцию тритерпеновых гликозидов дальневосточной голотурии - кукумарии японской. Препарат вводят подкожно в 1 мл физ. раствора в дозе 1 мкг/кг массы животного однократно при лечении за 2 недели до начала гона и повторно в 1-й половине беременности, при профилактике - однократное подкожное введение в той же дозе.

Наиболее близким является пищевая общеукрепляющая лечебно-профилактическая добавка (пат. РФ 2117435 от 20.08.98), полученная из мышечной ткани кукумарии, содержащая сумму тритерпеновых гликозидов в количестве не менее 100 мкг/см³, с рН 6,3-7,0, массовой долей сухих веществ не менее 20%, массовой долей аминного азота не менее 0,7%, массовой долей поваренной соли не более 5%. Данную пищевую добавку получают из мышечной ткани кукумарии.

Однако при разделке голотурий потери достигают 65-70%, причем основные падают на долю внутренностей (35-40%). При промышленной переработке животных внутренности относят в отходы и считают их использование нерациональным. Между тем, как показывают многочисленные литературные данные и исследования, проведенные нами, внутренности голотурий представляют собой материал, биологическая активность которого довольна велика (Калинин В.И. и др., 1994; Зайцев и др. , 1980, Анисимов М.М.. 1987; Савватеева, Маслова, Володарский, 1983).

"ТИНГОЛ-2" и "Эрогол" являются новыми продуктами. Технология их получения разработана в ТИНРО-Центре, применение их неизвестно.

Сущность способа комплексной переработки внутренностей голотурии с получением биологически активных добавок к пище "ТИНГОЛа-2" и "Эрогола" заключается в следующем.

Измельченные (до величины частиц не более 0,5 мм) внутренности голотурии (кукумарии, трепанга) экстрагируют 95-96% этиловым спиртом в соотношении этиловый спирт: внутренности от 1:1 до 1:3 при температуре от минус 5 до плюс 60^oС в течение от 5 ч до 10 сут, отделяют жидкую часть центрифугированием (скорость вращения ротора 3000-5000 об/мин в течение 10-25 мин) или фильтрованием с получением водно-спиртового экстракта - биологически активной добавки к пище "ТИНГОЛ-2", затем остаток внутренностей голотурии с содержанием воды от 55 до 75% высушивают при температуре 60-75^oС в течение 2,5 - 4 ч, измельчают до порошкообразного состояния (таблетируют или капсулируют) с получением биологически активной добавки к пище "Эрогол".

Биологически активная добавка к пище "ТИНГОЛ-2", представляющая собой экстракт из внутренностей голотурий, содержащий тритерпеновые гликозиды в количестве 700-3500 мкг/мл, с содержанием спирта 10-50% и липидов 0,5-4%, обладающий биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и половой активности (потенции) человека и животных.

Биологически активная добавка к пище "Эрогол", представляющая собой сухой порошок, полученный путем высушивания материала после спиртовой экстракции внутренностей голотурии до содержания воды 3-12% и содержащий тритерпеновые гликозиды в количестве 800-4500 мкг/г, белка 35-45%, марганца 13,5 - 24,5 мг/кг, цинка 44,0 - 82,0 мг/кг, железа 481,2 - 893,5 мг/кг, меди 5,6 - 10,4 мг/кг, никеля 2,4 - 4,2 мг/кг, а также суммы элементов (кальций, магний, калий), регулирующих водно-солевой баланс организма 6500 - 12000 мг/кг, обладающий биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и половой активности (потенции) человека и животных.

Примеры, поясняющие сущность изобретения.

Пример 1.

К 1 кг измельченных внутренностей голотурии (Cucumaria japonica) добавляют 1 л 95-96% этилового спирта, экстрагируют при температуре минус 5^oС в течение 10 сут, центрифугируют или фильтруют с получением биологически активной добавки к пище "ТИНГОЛ-2".

"ТИНГОЛ-2", содержащий спирта 50%, липидов 0,5%, тритерпеновых гликозидов 700 мкг/мл, обладает биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и повышении половой активности (потенции) человека и животных.

"ТИНГОЛ-2" представляет собой прозрачную жидкость светло- соломенного цвета с запахом и вкусом морепродуктов, устойчив в хранении в течение 12 мес.

Остаток внутренностей голотурий с содержанием воды 55% высушивают при температуре 60^oС в течение 2,5 ч, измельчают (таблетируют или капсулируют), получают 190 г лечебно-профилактического продукта "Эрогол". "Эрогол" представляет собой сыпучий порошок коричневого цвета с содержанием воды 3%, тритерпеновых гликозидов 800 мкг/г, белка 45%, марганца 13,5 мг/кг, цинка 44,0 мг/кг, железа 481,2 мг/кг, меди 5,6 мг/кг, никеля 2,4 мг/кг и суммы элементов, регулирующих водно-солевой баланс 6500 мг/кг. Обладает биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и повышении половой активности (потенции) человека и животных.

Пример 2.

К 2 кг измельченных внутренностей голотурии (Cucumaria frondosa) добавляют 1 л 95-96% этилового спирта, экстрагируют при температуре 10^oС в течение 3 сут, центрифугируют или фильтруют с получением биологически активной добавки к пище "ТИНГОЛ-2".

"ТИНГОЛ-2", содержащий спирта 30%, липидов 2,5%, тритерпеновых гликозидов 2100 мкг/мл, обладает биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и повышении половой активности (потенции) человека и животных.

"ТИНГОЛ-2" представляет собой прозрачную жидкость соломенного цвета с запахом и вкусом морепродуктов, устойчив в хранении в течениие 12 мес.

Остаток внутренностей голотурий с содержанием воды 65% высушивают при температуре 65^oС в течение 3 ч, измельчают (таблетируют или капсулируют), получают 190 г лечебно-профилактического продукта "Эрогол". "Эрогол" представляет собой сыпучий порошок коричневого цвета с содержанием воды 7,5%, тритерпеновых гликозидов 2700 мкг/г, белка 40%, марганца 18,8 мг/кг, цинка 63,0 мг/кг, железа 690,0 мг/кг, меди 8,0 мг/кг, никеля 3,3 мг/кг и суммы элементов, регулирующих водно-солевой баланс 9300 мг/кг. Обладает биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и повышении половой активности (потенции) человека и животных.

Пример 3.

К 3 кг измельченных внутренностей голотурии (Stichopus japonicus) добавляют 1 л 95-96% этилового спирта, экстрагируют при температуре 60^oС в течение 5 ч, центрифугируют или фильтруют с получением биологически активной добавки к пище "ТИНГОЛ-2".

"ТИНГОЛ-2", содержащий спирта 10%, липидов 4,0%, тритерпеновых гликозидов 3500 мкг/мл, обладающий биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и повышении половой активности (потенции) человека и животных.

"ТИНГОЛ-2" представляет собой прозрачную жидкость желтого цвета с запахом и вкусом морепродуктов, устойчив в хранении в течение 12 мес.

Остаток внутренностей голотурий с содержанием воды 75% высушивают при температуре 75^oС в течение 4 ч, измельчают (таблетируют или капсулируют), получают 380 г лечебно-профилактического продукта "Эрогол". "Эрогол" представляет собой сыпучий порошок коричневого цвета с содержанием воды 12%, тритерпеновых гликозидов 4500 мкг/г, белка 35%, марганца 24,5 мг/кг, цинка 82,0 мг/кг, железа 893,5 мг/кг, меди 10,4 мг/кг, никеля 4,2 мг/кг и суммы элементов, регулирующих водно-солевой баланс 12000 мг/кг. Обладает биологической активностью, заключающейся в повышении физической работоспособности организма и повышении половой активности (потенции) человека и животных.

Пример 4.

Изучение влияния "ТИНГОЛа-2" на репродуктивную систему млекопитающих проводили на базе кафедры биологии ВГМУ.

Все животные с момента рождения содержались в стандартных условиях вивария. Исследования проводились на четырех группах нелинейных мышей-самцов:

1-я группа (контрольная, взрослые) получала нормативную пищевую смесь;

2-я группа - взрослые самцы получали "ТИНГОЛ-2" в виде одной ежедневной добавки к основному корму в количестве 0,03 мл на 1 кг веса тела;

3-я группа (контрольная, молодые) получала нормативную пищевую смесь;

4-я группа - молодые самцы получали "ТИНГОЛ-2" в виде ежедневной индивидуальной добавки к основному корму по 0,03 мл на 1 кг веса тела;

В течение всего периода проведения эксперимента животные содержались при обычном световом и температурном режимах, осуществлялось динамическое наблюдение за состоянием и поведением животных. Через 2 месяца всех животных забивали методом декапитации и проводили морфометрические, морфологические и биохимические испытания. Исследование семенников опытных животных как взрослых, так и молодых, получавших "ТИНГОЛ-2", выявило увеличение митотически делящихся сперматогониев по сравнению с контролем на 15% (у молодых животных) и на 26% (у взрослых животных). У самцов достоверно увеличивается по сравнению с контролем количество семенных канальцев со зрелыми сперматидами (12 этап сперматогенеза) в результате приема "ТИНГОЛа-2".

Каких-либо отклонений в поведений взрослых и молодых животных, получавших "ТИНГОЛ-2", по сравнению с контролем не выявлено.

Морфометрические параметры взрослых и молодых мышей (масса тела, печени, селезенки, семенников) после приема "ТИНГОЛа-2" не отличались от таковых у контрольных групп.

Пример 5.

Исследования по применению "ТИНГОЛа-2" при лечении больных, страдающих нарушением половой функции, проводились на базе поликлиники УВД Приморского края и Центра планирования семьи и репродукции г. Владивостока.

Критерием отбора служили мужчины (10 человек), имеющие функциональные нарушения эрекционной составляющей, снижение либидо. Возраст больных варьировал от 24 до 55 лет. Все испытуемые заполняли анонимные анкеты о развитии заболевания, проходили тестирование.

Проводились следующие предварительные лабораторные исследования: клинический анализ крови, общий анализ мочи, исследование белков крови, холестерин, исследование спермограммы, определение уровня тестостерона.

После предварительного лабораторного исследования испытуемые применяли "ТИНГОЛ-2" в дозе по 5 мл 3 раза в день в течение 21 дня. Указанная доза составляет 0,15 мл на 1 кг массы человека ежедневно. Ежедневно контролировалось общее состояние испытуемых (настроение, сон, работоспособность, либидо и т. д. ). После применения "ТИНГОЛа-2" проводились повторные лабораторные исследования: общий анализ крови, холестерина, белков крови, спермограмма, определялся уровень тестостерона в крови.

После лечения установлено, что "ТИНГОЛ-2" обладает выраженной биологической активностью, заключающейся в улучшении физической активности испытуемых, работоспособности, настроения, повышении либидо, спонтанной и адекватной эрекции, увеличении количества половых сношений, улучшении сна. У испытуемых увеличилось количество сперматозоидов в 1 мл спермы на 80,3%, подвижность сперматозоидов увеличилась на 61,0%, уровень неподвижных сперматозоидов уменьшился в 2 раза. Уровень тестостерона в крови увеличился на 18,3%.

Пример 6.

Исследования по применению "ТИНГОЛа-2" при лечении больных, страдающих нарушением половой функции, проводились на базе поликлиники УВД Приморского края и Центра планирования семьи и репродукции г. Владивостока.

Критерием отбора служили мужчины (15 человек), имеющие функциональные нарушения эрекционной составляющей, снижение либидо. Возраст больных варьировал от 23 до 61 года. Все испытуемые заполняли анонимные анкеты о развитии заболевания, проходили тестирование.

Проводилось исследованияе крови, общий анализ мочи, исследование белков крови, количества холестерина, тестостерона, исследование спермограммы.

После предварительного лабораторного исследования больные (5 человек) применяли "ТИНГОЛ-2" по 0,05 мл на 1 кг массы тела ежедневно в течение 42 дней (1 чайная ложка препарата 1 раз в день. Ежедневно контролировалось общее состояние испытуемых (настроение, физическая и умственная работоспособность, либидо и т.д.).

Установлено, что "ТИНГОЛ-2" обладает активностью, которая заключается в повышении физической и умственной работоспособности, повышении либидо, спонтанной и адекватной эрекции, увеличении количества половых сношений. Уровень тестостерона в крови увеличился на 7,7%, количество сперматозоидов, имеющих быстрое поступательное движение, увеличилось на 22,3 %.

Больные (10 человек), получающие "ТИНГОЛ-2" по 5 чайных ложек ежедневно (0,25 мл на 1 кг массы человека), отмечали в некоторых случаях (3-е человек) небольшое перевозбуждение к вечеру, что выражалось иногда в трудностях засыпания. Уровень тестостерона через 20 дней лечения у этих больных повысился по сравнению с контрольными показателями на 20,1%, количество сперматозоидов с отсутствием поступательного движения уменьшилось на 40%, а число сперматозоидов с медленным поступательным движением уменьшилось на 49%, количество сперматозоидов с быстрым поступательным движением увеличилось в 1,5 раза, общее количество эякулята увеличилось на 63%.

Пример 7.

Применение "Эрогола" в качестве лечебно-профилактической добавки при лечении больных, страдающих нарушениями половой функции.

Группа больных (15 человек) была сформирована на базе поликлиники УВД Приморского края и Центра планирования семьи и репродукции г. Владивостока. Все испытуемые заполняли анонимные анкеты о развитии заболевания, проходили тестирование. Проводились следующие предварительные лабораторные исследования: клинический анализ крови, общий анализ мочи, исследование белков крови, холестерин, исследование спермограммы, определение уровня тестостерона, пролактина, ФСГ, АГ. После предварительного лабораторного исследования испытуемые применяли "Эрогол" в дозе от 2 капсул 2 раза в день до 3 капсул 3 раза в день, т.е. от 0,03 до 0,06 г на 1 кг массы тела в течение 21 дня. Ежедневно контролировалось общее состояние испытуемых (настроение, сон, работоспособность, либидо и т.д.). После применения "Эрогола" проводились повторные лабораторные исследования: общий анализ крови, холестерина, белков крови, мочи, определялся уровень тестостерона, пролактина, ФСГ, АГ в сыворотке крови, спермограмма.

Наблюдалось улучшение физической активности, работоспособности, настроения, спонтанной и адекватной эрекции, повышение либидо, увеличение количества половых сношений, улучшение сна. Подвижность сперматозоидов увеличилась на 78%, количество неподвижных сперматозоидов уменьшилось в 2,3 раза; общее количество сперматозоидов в 1 мл спермы увеличилось от 146,4 млн до 164,7 млн. Уровень тестостерона в крови увеличился в среднем на 38,9%.