рекомбинантная плазмидная днк pul83hcmv, обеспечивающая экспрессию в клетках бактерии escherichia coli рекомбинантного белка, содержащего иммунодоминантную часть фосфопротеина pp65 hcmv и фрагмент -галактозидазы
Классы МПК: | C12N15/70 векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для Ecoli C12N15/38 Herpetoviridae, например вирусы герпеса, ветряной оспы, Epstein-Barr, цитомегалии, псевдобешенства C07K14/045 вирус цитомегалии |
Автор(ы): | Суслопаров М.А., Суслопаров И.М. |
Патентообладатель(и): | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" |
Приоритеты: |
подача заявки:
2001-11-05 публикация патента:
10.12.2003 |
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и представляет собой сконструированную in vitro рекомбинантную плазмидную ДНК, содержащую фрагмент гена UL83 цитомегаловируса человека (HCMV), кодирующий иммунодоминантную часть фосфопротеина рр65 HCMV с 231 по 551 а. к. Конструкция обеспечивает в клетках бактерий Е.соli биосинтез рекомбинантного белка, содержащего фрагмент рр65 HCMV и фрагмент -галактозидазы, патент № 2218408" SRC="/images/patents/250/2218174/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-галактозидазы Е.соli с полигиотидиновым (6 His) трактом для аффинной очистки, обладающего антигенными свойствами цитомегаловируса человека. Этот очищенный рекомбинантный белок может быть использован в качестве HCMV-антигена для серологического тестирования HCMV в клинической практике. Использование этого антигена для выявления специфичных к вирусу иммуноглобулинов М (IgM-HCMV) показывает 98-99% чувствительности и специфичности в иммуноферментном анализе. 6 ил.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17
Формула изобретения
Рекомбинантная плазмидная ДНК pUL83HCMV размером 3700 п.о. и молекулярной массой 2,5 мегадальтон, обеспечивающая экспрессию в клетках бактерии Escherichia coli рекомбинантного белка размером 67 килодальтон, содержащего иммунодоминантную часть фосфопротеина рр65 HCMV штамма AD-169 с 6 молекулами гистидина на N-конце и фрагмент -галактозидазы, патент № 2218408" SRC="/images/patents/250/2218174/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-галактозидазы, включающая HindIII/Hpal - фрагмент ДНК векторной плазмиды pUR290; фрагмент гена UL83 цитомегаловируса человека размером 974 п.о., кодирующий иммунодоминантную часть фосфопротеина рр65 HCMV с 231 по 551 аминокислоту с 6 молекулами гистидина на N-конце; фрагмент гена -галактозидазы, патент № 2218408" SRC="/images/patents/250/2218174/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-галактозидазы, кодирующий фрагмент -галактозидазы, патент № 2218408" SRC="/images/patents/250/2218174/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-галактозидазы с 1 по 147 аминокислоту, содержит в качестве генетического маркера ген bla -галактозидазы, патент № 2218408" SRC="/images/patents/250/2218174/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-лактамазы, определяющий устойчивость трансформированных плазмидой pUL83HCMV клеток Escherichia coli к ампициллину; уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющие следующие координаты: EcoRI (EcoRI)-1507 и 1689; Sal I (Sal I)-1627; Sma I (Sma I)-905 и 1617; EcoRV (EcoRV) -1029; Pst I (Pst I)-1046; HindIII (HindIII)-1105; Nco I (Bspl9I)-1247 и 1466; Cla I (Bsa 291)-1665; PvuII(PvuII)-55 и 323.Описание изобретения к патенту
Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).Класс C12N15/70 векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для Ecoli
Класс C12N15/38 Herpetoviridae, например вирусы герпеса, ветряной оспы, Epstein-Barr, цитомегалии, псевдобешенства