способ получения баккатина и/или производных баккатина 10- гидрокситаксо-о-ацетилтрансфераза для его осуществления, способ получения этой ацетилтрансферазы и способ получения таксола и/или производных таксола

Формула изобретения

1. Способ получения баккатина и/или производных баккатина, отличающийся тем, что 10-дезацетилбаккатин или производное 10-дезацетилбаккатина превращают в присутствии выделенного фермента и донора ацетильной группы, причем в качестве фермента используют 10-гидрокситаксо-О-ацетилтрансферазу, выделенную из Taxus chinensis, характеризующуюся следующими свойствами: субстратная специфичность; ацетилирует 10-дезацетилбаккатин-Ш селективно в положении 10 в присутствии донора ацетильной группы, в особенности ацетил-КоА; молекулярная масса; 70-72 кДа при определении методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия; изоэлектрическая точка; при рН 5,4 до 5,8; константа Михаэлиса-Ментена; К_м 55-65 мкМ для ацетил-КоА; рН-оптимум; от 5 до 11 (в Трис буфере при 35°С в течение 25 мин, субстрат 10-дезацитилтаксоюнаннин).

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что баккатин-Ш получают из 10-дезацетилбаккатина-Ш.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что 14-гидроксибаккатин-Ш получают из 14-гидрокси-10-дезацетилбаккатина-Ш.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что таксоюнаннин С получают из 10-дезацетилтаксоюнаннина С.

5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что превращение осуществляют в присутствии ацетил-КоА в качестве донора ацетильной группы.

6. 10-гидрокситаксо-О-ацетилтрансфераза, выделенная из Taxus chinensis, характеризующаяся следующими свойствами: субстратная специфичность; ацетилирует 10-дезацетилбаккатин-Ш селективно в положении 10 в присутствии донора ацетильной группы, в особенности ацетил-КоА; молекулярная масса; 70-72 кДа при определении методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия; изоэлектрическая точка; при рН 5,4 до 5,8; константа Михаэлиса-Ментена; К_м 55-65 мкМ для ацетил-КоА; рН-оптимум; от 5 до 11 (в Трис буфере при 35°С в течение 25 мин, субстрат 10-дезацитилтаксоюнаннин).

7. Способ получения фермента по п.6, отличающийся тем, что его выделяют из клеточной культуры Taxus chinensis путем очистки и после каждой очистки устанавливают фракции, в которых находится фермент, добавляя 10-дезацетилбаккатин или производное 10-дезацетилбаккатина и донор ацетильной группы и обнаруживают образовавшийся продукт ацетилирования.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что способы очистки включают использование HighQ-колонки.

9. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что для обнаружения содержащих фермент фракций используют 10-дезацетилбаккатин-Ш или 10-дезацетилтаксоюнаннин С.

10. Способ по любому из пп.7-9, отличающийся тем, что используют ацетил-КоА в качестве донора ацетильной группы.

11. Способ по любому из пп.7-10, отличающийся тем, что обнаружение образовавшегося продукта ацетилирования осуществляют путем радиоактивного мечения.

12. Способ по любому из пп.7-10, отличающийся тем, что обнаружение образовавшегося продукта ацетилирования осуществляют путем мечения с помощью тяжелого изотопа.

13. Способ получения таксола и/или производных таксола, отличающийся тем, что сначала получают баккатин или производное баккатина по любому из пп.1-5 и его путем этерификации гидроксильной группы в положении 13 производных баккатина с помощью пригодной кислоты превращают в таксол или производное таксола.

Описание изобретения к патенту

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть))