способ изготовления вакцины против вирусной гемморрагической болезни кроликов

Формула изобретения

Способ изготовления вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов, включающий приготовление суспензии печени кроликов, павших после заражения вирулентным вирусом вирусной геморрагической болезни, инактивацию, отличающийся тем, что используют штамм вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенный из местного эпизоотического очага, выращивание его проводят путем заражения не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов, от павших кроликов готовят 10-15%-ную суспензию печени, инактивируют сырье теотропином из расчета 1 г препарата на 1000 мл, выдерживают в течение 48 ч при 37С, вносят 1-2% алюмокалиевых квасцов, фасуют и укупоривают.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной медицине.

Известны способы изготовления вакцин против инфекционных болезней сельскохозяйственных животных на основе органных материалов зараженных животных: лапинизированная вакцина против ящура (авт.св. СССР № 561732, 1977), вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов (Китай, Гу Чжэньдэ и др., 1986, т.12, № 12; авт.св. ЧССР, № 8808644, 1988; патенты РФ № 2039570, 2054294, 1992, авторы Шевченко А.А. и др.).

Кроме того, известен способ изготовления тканевой гидроокисьалюминиевой формолвакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов (Временная инструкция по изготовлению и контролю тканевой формолвакцины гидроокисьалюминиевой против вирусной геморрагической болезни кроликов, утвержденная Главным управлением ветеринарии СССР 05 июля 1990 г. - прототип). В качестве вирусного сырья используют 2,5-12%-ную суспензию печени кроликов, павших от заражения вирусом геморрагической болезни кроликов штамм “Воронежский-87”. Суспензию готовят на забуференном физиологическом растворе (рН 7,2-7,4) с антибиотиками (пенициллин и стрептомицин по 200 ед/мл) и мертиолятом (1:100000). Вирус экстрагируют при 22-24С в течение 1-3 часов. Клеточный детрит осаждают путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 мин или сепарированием. Вирусную суспензию инактивируют 0,1-0,14%-ным формальдегидом при 27-28С в течение 3-4 суток. Остаточный формальдегид нейтрализуют метабисульфитом натрия, затем добавляют 10-15% геля гидроокиси алюминия. Такая вакцина сохраняет свои биологические свойства в течение 12 мес. Иммунитет формируется через 3 суток после однократного внутримышечного введения в дозе 0,5 мл, продолжительностью 7 месяцев. Однако после иммунизации у кроликов отмечаются поствакцинальные осложнения (угнетение, отказ от корма в течение 2-3 дней, на месте введения вакцины появляются воспалительные процессы и др.).

Техническим решением задачи изобретения является изготовление специфичной, безвредной, высокоиммуногенной, инактивированной вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов, стабильной при хранении.

Поставленная задача достигается тем, что используют штамм вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенный из местного эпизоотического очага, выращивание его проводят путем заражения кроликов, не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов, от павших кроликов готовят 10-15%-ную суспензию печени, инактивируют сырье теотропином из расчета 1 г препарата на 1000 мл, выдерживают в течение 48 часов при 37С, вносят 1-2% алюмокалиевых квасцов, фасуют и укупоривают.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что для получения специфичного вирусного сырья не привитых кроликов против вирусной геморрагической болезни заражают штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенного из местного эпизоотического очага, проводят трехкратное экстрагирование вируса из 10-15% -ной суспензии печени павших кроликов при температуре 4-6С в течение 10-12 часов при периодическом перемешивании и освобождение от клеточного детрита фильтрованием через два слоя марли, что позволяет увеличить выход вирусного сырья в два-три раза. Инактивирование сырья теотропином из расчета 1 г препарата на 1000 мл при температуре 37С в течение 48 часов позволяет подавить патогенность вируса и сохранить иммунобиологические свойства в течение 24 месяцев хранения. Использование 1-2% алюмокалиевых квасцов позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета у привитых кроликов, продолжительностью 12 месяцев. Вакцина, изготовленная по предлагаемому способу, после однократного введения кроликам внутримышечно или подкожно не вызывает поствакцинальных осложнений.

По данным научно-технической и патентной литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне предложения.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что для заражения не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов используют вирулентный штамм вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенный из эпизоотического очага, которые погибают через 48-72 часа. От павших кроликов получают печень, приготавливают 10-15%-ную суспензию на физиологическом растворе (рН 7,2), проводят трехкратное экстрагирование вируса при температуре 4-6С в течение 10-12 часов при периодическом перемешивании, фильтруют через два слоя марли, инактивируют теотропином из расчета 1 г препарата на 1000 мл сырья, затем добавляют 1-2% алюмокалиевых квасцов, фасуют во флаконы и укупоривают.

Пример конкретного осуществления способа изготовления вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов. Для изготовления вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов используют не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов, массой не менее 1,5 кг, заражают их вирулентным штаммом вируса вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью 10³ ЛД50/мл. Через 48-72 часа кролики погибают, от павших берут печень в целлофановые пакеты, замораживают, измельчают ножницами и на гомогенизаторе. Полученное сырье доводят физраствором (рН 7,2) до 10-15%-ной суспензии, затем экстрагируют вирус при температуре 4-6С в течение 10-12 часов, периодически перемешивая, декантируют надосадочную жидкость, к осадку добавляют физраствор 1:1, перемешивают и повторяют эту операцию трижды. Для освобождения от клеточного детрита проводили фильтрование через два слоя стерильной марли.

Использование трехкратного экстрагирования вируса и фильтрование через два слоя марлевого фильтра позволяет увеличить выход вирусного сырья в 2-3 раза при изготовлении вакцины по предлагаемому способу в сравнении с прототипом (таблица 1).

Затем отфильтрованное вирусное сырье сливают в емкость и проводят инактивацию путем внесения теотропина из расчета 1 г препарата на 1000 мл сырья, при температуре 37С в течение 48 часов при периодическом перемешивании. Для сохранения иммунобиологических свойств и быстрого формирования иммунитета в инактивированный материал добавляют 1-2% алюмокалиевых квасцов, тщательно смешивают, оставляют на 2-3 часа при комнатной температуре, затем фасуют в стерильные флаконы и укупоривают.

Результаты по сравнительной характеристике вакцин против вирусной геморрагической болезни кроликов по предлагаемому способу и прототипу представлены в таблице 2.

Таким образом, использование эпизоотического штамма вирусной геморрагической болезни кроликов позволяет получать из эпизоотического очага специфичное сырье для изготовления вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов. Предлагаемая 10-15%-ная концентрация сырья, трехкратное экстрагирование вируса, освобождение от клеточного детрита фильтрованием через марлевый фильтр позволяют повысить выход сырья в 2-3 раза, его качество и специфичность. Инактивирование вирусного сырья теотропином при 37С в течение 48 часов позволяет подавить патогенность и сохранить иммуногенные свойства в течение 2 лет. Использование алюмокалиевых квасцов позволяет в течение 3-х суток обеспечить у привитых кроликов формирование напряженного иммунитета, продолжительностью 12 месяцев. Такая вакцина после однократного введения кроликам внутримышечно или подкожно не вызывает поствакцинальных осложнений у привитых животных.

Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.