способ лечения ограниченного перитонита в эксперименте

Формула изобретения

Способ лечения ограниченного перитонита в эксперименте, включающий введение в брюшную полость сорбентов, отличающийся тем, что, начиная с шестых суток от момента моделирования, экспериментальным животным в желудок через зонд вводят глутамат хитозана молекулярной массой 100-120 кД, степенью дезацетилирования 95%, в количестве 13,2 мл на 1 кг массы тела, 3 раза в день с интервалом 3 часа в течение 12 дней.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано в клинических условиях.

Известные способы лечения ограниченного перитонита предусматривают введение внутрибрюшинно карбоксиметилхитозана [(Kennedy R., Costain D., McAlister V.C.. Lee N.D. Prevention of experimental postoperative peritoneal adhesions by N, 0-carboxymethyl chitosan. Surgery. 1996. - Vol. 120. - №5. - P. 866-870; Costain D.J., Kennedy R., Ciona C., Me Alister V.C„ Lee T.D. Prevention of post surgical adhesions N,O-carboxymethyl adhesions with N,О-carboxymethyl chitosan: examination of the most ctticacious preparation and the effect of N,O-carpoxymethyl chitosan on post surgical healing. Surgery. 1997. - Vol. 121. - №3. - Р.314-319; Krause T.J., Goldsmith N.K., Ebner S., Zazanis G.A., Me kinnon R.D. An inhibitor of cell proliferation associated with adhesion formation is suppressed by N,О-carboxymethyl chitosan. J. Invest. Surg. 1998. - Vol. 11 - №2. - Р.105-113.)]. Однако такая формула полимера кроме свободных аминогрупп (-NH⁺₂) имеет в наличии множество карбоксильных (-СООН) и метальных (-СН₃) групп, что способствует изменению суммарного заряда полимера, приближая его к нейтральному. Изменение суммарного заряда полимера ведет к ряду физико-химических изменений его активности и взаимодействия с сорбатами, ослабляя мукоадгезивный эффект (эффект прилипания). Авторы (Kennedy R., Costain D., McAlister V.C., Lee N.D. Prevention of experimental postoperative peritoneal adhesions by N,O-carboxymethyl chitosan. Suryery. 1996. - Vol. 120. -№5. - P. 866-870) после оперативного разреза на матке у белых крыс формировали спаечный процесс после внутрибрюшинного введения карбоксиметилхитозана, изучали размеры и протяженность спайкообразования. Результаты показали, что карбоксиметилхитозан является более эффективным препаратом в отличие от применяемой в контрольной группе гиалуроновой кислоты, способствует на 14-й день разобщению спайкообразования. Недостатком этого способа является слабый мукоадгезивный эффект за счет нейтрализации разнозарядовых химических группировок, а также инвазивный способ введения полимера. Предлагаемый способ предусматривает введение энтерально (неинвазивно) высокодезацетилированного хитозана при ограниченной форме перитонита в эксперименте. Большое количество свободных аминогрупп придает полимеру положительный заряд, вызывая высокий мукоадгезивный эффект. Растворенный в глутаминовой кислоте (глутамат хитозана) полимер приобретает способность высокой текучести, что позволяет хорошо перемещаться по просвету кишечной трубки и обволакивать эпителиальную выстилку поверхностно-активной пленкой, увеличивая площадь сорбции токсических веществ и сорбционную емкость полимера.

Задача изобретения - получение картины деградации аппендикулярного инфильтрата при использовании сеансов энтеросорбции продуктом дезацетилированного хитина в эксперименте. Поставленную задачу осуществляют за счет того, что, начиная с 6-х суток от момента моделирования, экспериментальным животным в желудок через зонд вводят глутамат хитозана, молекулярной массы 100-120 кД, степенью дезацетилирования 95%, в количестве 13,2 мл на 1 кг массы тела, 3 раза в день с интервалом 3 часа, в течение 12 дней. Способ проводят следующим образом: у белых крыс массой 150 г путем перевязки слепой кишки у ее основания шелковой лигатурой, вводят в замкнутую полость слепой кишки ниже перевязки 0,4 мл 10% раствора СаСl₂ и 0,4 мл 1,5 мл 1 млрд. взвеси/мл St.aureus штамма 209Р формируется плотный аппендикулярный инфильтрат. Начиная с 6-х суток, опытная группа животных через желудочный зонд получала по 1,5 мл 2% раствора глутамата хитозана (степень дезацетилирования 95%, молекулярная масса 100-120 кД) (5 животных) 3 раза в день с интервалом 3 часа в течение 12 дней. Контрольная группа животных (5 животных) получала через желудочный зонд по 1,5 мл 0,9% раствора NaCl в том же объемном и временном режиме. У опытной и контрольной групп регистрировали наличие свободного выпота в брюшной полости, морфологическую картину гистологических срезов воспалительного инфильтрата.

Результаты. На 6-е сутки у животных формируется плотный ограниченный инфильтрат, занимающий до 25% объема брюшной полости с наличием мутного выпота в брюшной полости. Результаты показали, что на 12-е сутки от момента моделирования заболевания в контрольной группе инфильтрат плотный, занимает до 25% объема брюшной полости, имеется наличие массивных фибринозных межпетельных наслоений, свободного выпота в брюшной полости воспалительного характера в незначительном количестве, десерозирование покрова кишечных петель при попытке их разъединения. У животных, получавших хитозановую диету, на 12-е сутки от момента моделирования инфильтрат в объемном отношении мало изменен, свободного выпота в брюшной полости нет. На 18-е сутки конгломерат отсутствует, слепая кишка в опытной группе лежит свободно в брюшной полости, отмечаются небольшие участки спаянных петель тонкой кишки. Выпота в брюшной полости нет. На 25-е сутки развития инфильтрата в контрольной группе животных, получавших в течение 12 дней физраствор (18-е сутки развития), отмечается наличие воспалительного конгломерата, занимающего до 20-25% объема брюшной полости с наличием воспалительного выпота. Доступ к слепой кишке технически невозможен (попытка разъединения петель кишки приводит к десерозированию). На 25-е сутки в опытной группе животных слепая кишка не спаяна с соседними петлями, фибринозные наслоения отсутствуют, выпота в брюшной полости нет.

На основании полученных данных можно заключить, что хитозановая диета способствует существенной деградации воспалительного конгломерата, сопровождающейся снижением воспалительной инфильтрации тканей, входящих в инфильтрат, исчезновением серозно-фибринозного экссудата, активацией фагоцитарной (макрофагальной) реакции на висцеральной брюшине и сокращению сроков деградации ограниченного перитонита на 12 дней.

Способ лечения ограниченного перитонита в эксперименте

Гистологическая характеристика срезов инфильтрата на разных стадиях развития

Фиг. 1. Интактная слепая кишка. Слои сохранены и хорошо выражены. Кишечные крипты одинаковой глубины. Эпителий слизистой оболочки представлен однорядным призматическим эпителием, расположенным на базальной мембране. Собственная мышечная пластика слизистой оболочки представлена пучками гладкомышечных волокон с примесью коллагеновых. Подслизистая основа содержит полнокровные сосуды. Мышечная оболочка представлена пучками гладкомышечных волокон. Серозная оболочка тонкая, бедна клетками и сосудами.

Фиг. 2. Аппендикулярный инфильтрат (6-е сутки развития). Некроз слизистого слоя с деструкцией собственной мышечной пластинки. В подслизистом слое отек, паралитически расширенные сосуды, лейкодиапедез. Мышечный слой инфильтрирован лейкоцитами. Серозная оболочка утолщена, хорошо васкуляризирована, диффузно инфильтрирована лейкоцитами. Клеточные перфузаты содержат зозинофилы, лимфоциты, плазматические клетки.

Фиг. 3. Аппендикулярный инфильтрат (12-е сутки развития). Контроль. Обширные очаги некроза слизистой оболочки с микробизмом. Диффузная лейкоцитарная инфильтрация подслизистого и мышечного слоев. Серозная оболочка утолщена, полнокровна с периваскулярными лейкоцитарными инфильтратами.

Фиг. 4. Аппендикулярный инфильтрат (12-е сутки развития, 6 дней лечения хитозаном (энтеросорбция)). Очаги регенерации в слизистой оболочке слепой кишки, большое количество бокаловидных клеток с гиперсекрецией слизи. Собственная мышечная пластинка утолщена, отечна. В подслизистом слое отек, парез сосудов, лейкоцитарная инфильтрация. В серозной оболочке микроабсцессы.

Фиг. 5. Аппендикулярный инфильтрат (18-е сутки развития). Контроль. Выраженный отек псдслизистого слоя. В слизистой оболочке очаги некроза и лейкоцитарной инфильтрации, полнокровие. В мышечном слое очаговые лимфолейкоцитарные инфильтраты. В серозной оболочке полнокровные сосуды, очаговые лейкоцитарные инфильтраты, разрастание грануляционной ткани. На серозной оболочке фибрин.

Фиг. 6. Аппендикулярный инфильтрат (18-е сутки развития, 12 дней лечения хитозаном (энтеросорбция)). Опыт. Все слои восстановлены, в подслизистом слое периваскулярные инфильтраты лимфогистиоцитарные. В серозной оболочке созревающая грануляционная ткань, уменьшение клеток воспалительного инфильтрата. Серозная оболочка бедна сосудами и клетками. Стенка кишки не спаяна с другими петлями кишки, фибрина нет. На серозной оболочке активная макрофагальная реакция.

Фиг. 7. Аппендикулярный инфильтрат (25-е сутки развития). Контроль. Слизистая оболочка сохранена. Собственная пластинка слизистой оболочки сохранена, восстановлена. Отмечается инфильтрация в подслизистом и мышечном слоях. На серозной оболочке серозно-фибринозный выпот, грануляционная ткань.

Фиг. 8. Аппендикулярный инфильтрат (25-е сутки развития. 12 дней (энтеросорбции). Опыт. Все слой кишки восстановлены. На серозной оболочке единичные очаги грануляционной ткани.