способ превращения фитата в неорганический фосфат, способ получения корма для животных и способ получения пищи для человека

Формула изобретения

1. Способ превращения фитата в продукте в неорганический фосфат, предусматривающий стадии приготовления суспензии, содержащей фитазу, фитатсодержащий продукт и жидкость, механического перемешивания суспензии и сушки продукта, отличающийся тем, что приготавливают суспензию с рН 2,0-8,0, в которой на 100 вес.ч. фитатсодержащего продукта приходится 60-1000 вес.ч. жидкости, в качестве которой используют смесь, содержащую воду и не смешивающийся с водой органический растворитель с температурой кипения 20-100С, причем не смешивающийся с водой органический растворитель содержится в указанной смеси в количестве 20-85 вес.ч. на каждые 100 вес.ч. указанной смеси, а органический растворитель удаляют при сушке продукта.

2. Способ по п.1, в котором не смешивающийся с водой органический растворитель содержится в количестве 40-75 вес.ч. на каждые 100 вес.ч. указанной смеси.

3. Способ по п.1 или 2, в котором суспензия дополнительно содержит хелатирующий агент для катионов щелочноземельных металлов.

4. Способ по любому предшествующему пункту, в котором фитатсодержащий продукт для включения в суспензию получают смешиванием раздавленных масличных семян с не смешивающимся с водой органическим растворителем для экстракции масла из масличных семян и отделением раздавленных масличных семян с примесью растворителя от маслосодержащего растворителя.

5. Способ по п.4, в котором 10-80 вес.ч. раздавленных масличных семян смешивают с 90-20 вес.ч. органического растворителя.

6. Способ по п.4 или 5, в котором указанные раздавленные масличные семена содержат 15-65 вес.ч. растворителя на 85-35 вес.ч. раздавленных масличных семян.

7. Способ по любому из пп.4-6, в котором суспензию получают, смешивая 100 вес.ч. (включая одновременно присутствующий растворитель) раздавленных масличных семян с примесью растворителя, 10-10000 ед. фитазы на 1 кг раздавленных масличных семян, 30-350 вес.ч. воды и, возможно, дополнительный органический растворитель, так чтобы общее количество органического растворителя в суспензии составляло 30-850 вес.ч.

8. Способ по п.7, в котором указанная суспензия содержит 0,05-10 вес.ч. хелатирующего агента для катионов щелочноземельных металлов.

9. Способ по п.3 или 8, в котором хелатирующим агентом является аскорбиновая кислота, фталевая кислота, лимонная кислота или этилен-диамин-тетрауксусная кислота (ЭДТК).

10. Способ по любому из пп.4-9, в котором масличными семенами являются соевые бобы, семена подсолнечника, семена рапса, семена канолы, рис, рисовые отруби, маис, семена хлопчатника, арахис, семена сафлора, кокосы, копра, грецкие орехи или лесные орехи.

11. Способ по любому предшествующему пункту, в котором стадию смешивания (i) осуществляют в смесителе в течение периода от 5 мин до 2 ч при температуре 10-70С и при рН 2,0-8,0.

12. Способ по любому предшествующему пункту, в котором органическим растворителем является пентан, гексан или гептан.

13. Способ по любому предшествующему пункту, в котором суспензия дополнительно включает один или более видов зерен хлебных злаков, муку из хлебных злаков, жиры, витамины, аминокислоты или один или более ферментов.

14. Способ по п.13, в котором один или более ферментов выбирают из протеазы, карбоксипептидазы, целлюлазы, ксиланазы, маннаназы, амилазы, -галактозидазы, пектиназы, -глюканазы или эстеразы.

15. Способ получения корма для животных, предусматривающий стадии конверсии фитата в корме в неорганический фосфат по любому из пп.1-14 и смешивание полученного обогащенного неорганическим фосфатом продукта с одним или более другими продуктами.

16. Способ получения пищи для человека, предусматривающий стадии конверсии фитата в пище в неорганический фосфат по любому из пп.1-14 и смешивание полученного обогащенного неорганическим фосфатом продукта с одним или более другими продуктами.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение касается способа превращения фитата в неорганический фосфат, который может быть использован в способах получения корма или пищи. В частности, оно касается способа, который может быть добавлен к традиционным процессам экстракции масла из масличных семян.

Установлено, что фитат [миоинозит-1,2,3,4,5,6-гексакис (первичный кислый фосфат)] у всех растений в различной степени является основной формой накопления фосфора. От 60 до 80% всего фосфора в растениях находится в форме фитата. Часто фитат находится в растениях в форме комплексов с такими катионами, как кальций, магний или калий. Образующиеся комплексы иногда называют фитином. В частности, термин фитат, как он используется здесь, включает такие фитиновые комплексы.

Фитат плохо усваивается животными с однокамерным желудком. В результате этого животные с однокамерным желудком, получающие богатые фитатом корма, могут все же страдать заболеваниями, вызываемыми недостатком фосфора. Это происходит из-за того, что фосфор фитата недоступен биологически и поэтому потребляемый животными с однокамерным желудком фитат проходит по всему желудочно-кишечному тракту и выделяется с фекалиями. Такая экскреция вызывает, в частности, озабоченность в области промышленного животноводства, так как избыточные количества обогащенного фосфором навоза могут нанести вред окружающей среде.

Еще одна проблема, связанная с присутствием фитата в корме или в пище, состоит в том, что он образует комплексы с многовалентными катионами металлов. Это может повлиять на биологическую доступность таких катионов для животных и человека. Это может привести к нарушениям, связанным с дефицитом металлов, или неадекватной минерализации костей, особенно в случае вегетарианцев, детей и пожилых людей.

Недостаток фитата состоит также в том, что он ингибирует различные ферменты желудочно-кишечного тракта, включая пепсин и трипсин. Он также образует комплексы с белками, препятствуя их усвоению. Из этих соображений наличие фитата в пище является антипитательным, поскольку он снижает перевариваемость присутствующих с ним белков.

Одно из решений вышеуказанных проблем состоит в превращении фитата в неорганический фосфат. Фосфор в неорганическом фосфате биологически доступен для животных с однокамерным желудком. Это снижает содержание фосфора в фекалиях, высвобождает закомплексованные фитатом катионы, способствует усвоению белка и препятствует ингибированию фитатом ферментов желудочно-кишечного тракта. Известно, что конверсию осуществляют путем обработки фитата in vitro или in vivo фосфатазным ферментом, называемым фитазой. Продуктами реакций этого превращения являются миоинозитол и ортофосфат, который в данном описании считается неорганическим фосфатом.

Конверсию in vivo осуществляют, добавляя фитазу к фитатсодержащему продукту. В результате как фитат, так и фитаза одновременно присутствуют в желудочно-кишечном тракте, где по крайней мере теоретически фитаза может превращать фитат в неорганический фосфат. Оказалось, однако, что это эффективно лишь в некоторой степени, и в лучшем случае приводит не более чем к 55%-ной конверсии фосфора фитата в неорганический фосфат, а обычно даже значительно меньше. Неполная конверсия в первую очередь является следствием условий внутри желудочно-кишечного тракта, совершенно отличающихся от оптимальных для фитазной активности. Температура, рН, влажность и содержание минералов ("золы") в перевариваемой пище таковы, что фитаза лишь частично эффективна в желудочно-кишечном тракте в течение времени, за которое перевариваемая пища проходит через желудочно-кишечный тракт.

Найдено, что второй способ гидролиза фитатсодержащего продукта фитазой -in vitro- более эффективен, чем вышеуказанная конверсия in vivo. Это происходит по той причине, что условия реакции in vitro могут строго выдерживаться такими, при которых фитаза проявляет оптимальную активность. ЕР-А-0380343 описывает один пример такого способа, согласно которому фитат, присутствующий в изолятах соевого белка, превращают в неорганический фосфат. Конверсию осуществляют в водном растворителе, используя бактериальную фитазу при рН 2-6 и при температуре 20-60С.

Установлено, однако, что даже такая обработка неудовлетворительна. Во-первых, суспензию, полученную при такой обработке, требуется сушить с удалением значительного количества содержащейся в ней воды. Хотя сушка является сравнительно простой стадией обработки, ее, тем не менее, дорого осуществлять из-за того, что обычно используется большой объем воды. Такой объем необходим прежде всего для обеспечения водной среды, необходимой для каталитической активности фитазы, и, во-вторых, для облегчения перемешивания суспензии, которая иначе образует сравнительно вязкую массу. Из-за этой проблемы, связанной с сушкой, такие способы in vitro пользуются ограниченным коммерческим успехом. Вторая обнаруженная проблема состоит в том, что превращение фитата в неорганический фосфат а этих in vitro способах все же далеко не полное, за исключением случаев, когда используют очень высокие концентрации фитазы (что относительно дорого). Авторы настоящего изобретения обнаружили, что это происходит по той причине, что фитат существует в двух формах, одна из которых восприимчива к фитазе, а другая является неорганически связанной, устойчивой к фитазе формой. Найдено, что в устойчивой к фитазе форме фитат находится в форме комплекса с катионами щелочноземельных металлов, таких как Мg²⁺ и Са²⁺.

Таким образом, главная задача изобретения состоит в разработке коммерчески приемлемого in vitro способа конверсии фитата, содержащегося в пище, в неорганический фосфат. Другая задача состоит в разработке такого коммерчески приемлемого способа, при котором порядка 50 мол.% или более фитата превращается в неорганический фосфат. Третья задача состоит в том, чтобы добавить этот способ к традиционным процессам экстракции масла из масличных семян с целью получения в качестве побочного продукта - муки крупного помола, богатой неорганическим фосфатом, пригодной для включения в корм животным или в различные продукты питания.

Согласно одному из объектов изобретения предложен способ превращения фитата в продукте в неорганический фосфат, предусматривающий стадии: (i) механического перемешивания суспензии, включающей (а) 100 вес. частей фитатсодержащей пищи, (b) 60-1000 вес. частей смеси растворителей, которая включает воду и несмешивающийся с водой органический растворитель с температурой кипения 20-100С, причем несмешиваюшийся с водой органический растворитель составляет 20-85 вес.% от смеси растворителей, и (с) фитазу; и (ii) сушки продукта для удаления органического растворителя.

Предпочтительно суспензия содержит 150-750 вес. частей смеси растворителей, предпочтительно 250-600 вес. частей и наиболее предпочтительно 325-475 вес. частей.

Вышеуказанный способ позволяет превращать присутствующий в продукте фитат в неорганический фосфат с меньшими затратами по сравнению с известными in vitro способами и с высоким выходом. Фитаза требует одновременного присутствия значительного содержания растворителя для эффективного катализа конверсии фитата в неорганический фосфат. Хотя в уровне техники уже высказывалось предположение, что этот растворитель должен быть исключительно водой, настоящие заявители неожиданно обнаружили, что значительная часть этой воды может быть заменена на несмешивающийся с водой органический растворитель без существенного ухудшения способности фитазы катализировать конверсию фитата в неорганический фосфат. Использование системы растворителей, которая включает 20-85 вес.%, предпочтительно 40-75 вес.% и наиболее предпочтительно 50-70 вес.% несмешивающегося с водой органического растворителя, способно поддерживать активность фитазы, обеспечивая преимущество в том, что высушивание суспензии после катализируемой фитазой конверсии до приемлемого содержания влаги менее 20 вес.% осуществлять значительно легче, чем высушивание обычной суспензии, в которой растворитель состоит только из воды. Это происходит потому, что для смеси растворителей, используемой по изобретению, требуется меньше энергии на ее выпаривание из суспензии. Механически перемешиваемая суспензия предпочтительно дополнительно включает хелатирующий агент (хелатную добавку) для катионов щелочноземельных металлов. Такой хелатирующий агент конкурирует с фитатом за связывание неорганических катионов, в частности катионов щелочноземельных металлов, таких как Са²⁺ и Мg²⁺. Это связывание неорганических катионов хелатирующим агентом выражается в превращении устойчивого к фитазе фитата в восприимчивый к фитазе фитат, который затем в свою очередь способен превращаться в неорганический фосфат под воздействием одновременно присутствующей фитазы.

Продукт, который можно обрабатывать способом по изобретению, может быть любым содержащим фитат пищевым (кормовым) продуктом. Такими продуктами обычно являются продукты, получаемые из растений. Согласно особенно предпочтительному варианту изобретения указанным продуктом является продукт, полученный смешиванием раздавленных масличных семян с органическим растворителем для экстракции масла из масличных семян и затем отделением содержащих растворитель раздавленных масличных семян от содержащего масло растворителя. Это обычные стадии, используемые для экстракции масла, например, из соевых бобов, семян подсолнечника, рапса, канолы, риса, рисовых отрубей, кукурузы, семян хлопчатника, арахиса, семян сафлора, кокосов, копры, грецких орехов или лесных орехов, либо любых их производных, прошедших обработку, таких как обезжиренные соевые бобы. Другие источники фитата, которые могут подвергаться переработке, включают зерна, такие как пшеничные, ячменные, тритикале, ржи, сорго или овса.

При экстракции масла из вышеперечисленных семян 10-80 вес.% (более предпочтительно 35-60 вес.%) раздавленных масличных семян смешивают с 90-20 вес.% (более предпочтительно 65-40 вес.%) органического растворителя, которым обычно является н-гексан, хотя может использоваться любой другой несмешиваемый с водой органический растворитель с температурой кипения 20-100°С. После интенсивного перемешивания масло из раздавленных масличных семян переходит в гексан, после чего обогащенный маслом гексан отделяют от раздавленных масличных семян, в которых остается часть гексанового растворителя. Раздавленные масличные семена с примесью растворителя содержат обычно 15-65 вес.% растворителя и 85-35 вес.% раздавленных масличных семян, более предпочтительно 25-50 вес.% растворителя и 75-50 вес.% раздавленных масличных семян и наиболее желательно 35-45 вес.% растворителя и 65-55 вес.% раздавленных масличных семян. В данной технологии раздавленные масличные семена с примесью растворителя иногда упоминаются как жмых или белая крошка.

В типичном способе уровня техники для экстракции масла из масличных семян раздавленные масличные семена с примесью растворителя должны быть высушены на этой стадии до удаления всех следов органического растворителя. Это не относится к способу по изобретению, в котором указанные раздавленные масличные семена с примесью растворителя затем обрабатывают для превращения присутствующего фитата в неорганический фосфат. Конкретнее, 100 вес. частей (включая растворитель) раздавленных масличных семян с примесью органического растворителя перемешивают до получения суспензии, содержащей 10-10000 ед. фитазы на 1 кг раздавленных масличных семян, 30-350 вес. частей (предпочтительнее 100-250 вес. частей, наиболее предпочтительно 120-180 вес. частей) воды и, возможно, дополнительный не смешивающийся с водой органический растворитель с температурой кипения в интервале от 20 до 100С, который может быть тем же или другим органическим растворителем, используемым на стадии экстракции масла, так чтобы общее количество органического растворителя составляло 30-850 вес. частей (предпочтительнее 125-500 вес. частей, наиболее предпочтительно 200-300 вес. частей). Эту суспензию подвергают механическому перемешиванию, например, в смесителе Хоббарта, во время которого фитаза превращает присутствующий в раздавленных масличных семенах фитат в неорганический фосфат.

Вышеуказанная суспензия может, кроме того, содержать 0,05-10 вес. частей хелатирующего агента. Как упомянуто выше, этот агент конкурирует с фитатом за связывание неорганических катионов, тем самым превращая устойчивый к фитазе фитат в восприимчивый к фитазе фитат. Хелатирующим агентом является любое вещество, способное хелатно связывать катионы щелочноземельных металлов. Характерными примерами таких хелатирующих агентов служат ди-, три- или тетра-карбоновые кислоты, такие как аскорбиновая кислота, фталевая кислота, лимонная кислота или EDTA (ЭДТК).

Предпочтительно на этой стадии 100 вес. частей (включая растворитель) масличных семян смешивают с 0,5-5 вес. частями хелатирующего агента и 100-1000 ед. фитазы на 1 кг раздавленных масличных семян.

Суспензия предпочтительно реагирует в смесителе, в котором фитат превращается в неорганический фосфат под каталитическим воздействием фитазы в течение периода от 5 минут до 2 часов, предпочтительно 15-90 минут и наиболее предпочтительно 30-75 минут, и предпочтительно при температуре 10-70С, более предпочтительно 20-65С и наиболее предпочтительно 40-60С. рН суспензии предпочтительно составляет 2-8, более предпочтительно 3-6 и наиболее предпочтительно 4,5-5,5. Кислый уровень рН суспензии может обеспечиваться присутствием кислотного хелатирующего агента, хотя неорганическая кислота, такая как НСl или Н₃РO₄, может быть альтернативно или дополнительно включена в суспензию для доведения ее рН до оптимального для активности фитазы значения.

Может использоваться любой органический несмешивающийся с водой растворитель при условии, что он имеет температуру кипения в пределах 20-100С. Растворители с более высокой температурой кипения нежелательны, поскольку их трудно выпаривать или отгонять от суспензии. Естественно, что выбранный органический растворитель должен иметь собственную температуру кипения выше той температуры, при которой осуществляется превращение фитата в неорганический фосфат. Характерными примерами органических растворителей с требуемой температурой кипения служат алифатические растворители, имеющие, по меньшей мере, 5 углеродных атомов, а предпочтительными растворителями являются пентан, гексан и гептан, их структурные изомеры и изооктан.

В предпочтительном варианте изобретения суспензия дополнительно включает один или более компонентов, выбранных из зерна злаковых, муки из такого зерна, жира, витаминов, аминокислот или одного или более ферментов. Зерна злаков и мука из них содержат фитат, который с успехом превращается в неорганический фосфат при обработке фитазой. Также желательно наличие одного или более ферментов, таких как протеаза, карбоксипептидаза, целлюлаза, ксиланаза, маннаназа, амилаза, -галактозидаза, пектиназа, -глюканаза или эстераза. Это объясняется тем, что такие ферменты могут облегчить выделение фитата из растительной массы, делая его более восприимчивым к действию фитазы, и/или воздействовать на другие пищевые компоненты, улучшая их перевариваемость.

На следующей стадии продукт сушат с целью удаления, по меньшей мере, органического растворителя и предпочтительно по меньшей мере части водного растворителя. Это может осуществляться путем удаления растворителей из продукта, например, нагреванием или распылительной сушкой. Получающемуся в результате сухому продукту предпочтительно соответствует содержание органического растворителя менее 0,1 вес.%, более предпочтительно менее 0,04 вес.%, а содержание влаги - менее 20 вес.%, более предпочтительно менее 15 вес.%.

Полученный обогащенный неорганическим фосфатом продукт может быть затем переработан в корм для животных или пищу для человека путем смешивания его по мере надобности с одной или более дополнительными пищевыми добавками.

Этот обогащенный неорганическим фосфатом продукт имеет значительно большую ценность для человека и домашних животных всех видов по сравнению с исходным продуктом. В частности, полученный обогащенный неорганическим фосфатом продукт может быть включен в корм таких домашних животных, как куры, индейки, свиньи, крупный рогатый скот, рыбы и овцы. Поскольку полученный продукт имеет сравнительно низкое или незначительное содержание фитата, он также способствует повышению минеральной и белковой биологической ценности корма или пищевых продуктов, в которые он включен. В частности, катионы, которые становятся комплексно связанными с хелатирующим агентом, становятся биологически доступными, поскольку образующиеся соли растворимы в воде. Улучшается также биологическая доступность белков пищи, поскольку фитат уже не удерживает их в белково-фитатных комплексах.

Фитаза, которая может быть использована по изобретению, продуцируется различными микроорганизмами, такими как Aspergillus spp., Rhizopus spp. и некоторыми дрожжами. Фитаза продуцируется также различными посевными материалами, например пшеницей, во время ее проращивания. Предпочтительные фитазы включают Natuphous^® фирмы BASF (ФРГ), Phytase Novo фирмы Novo Nordisk и Finase^®S фирмы Alko Ltd.

Требующееся количество фитазы будет зависеть от используемого препарата, содержания фитата в пищевом продукте и условий реакции. Подходящая доза легко может быть установлена специалистом в данной области. Фитазную активность можно определить, используя в качестве субстрата 1% фитат натрия (поставляемый Sigma St., Louis, Missouri). Ферментативную реакцию проводят при рН 5,5 и при температуре 40С. Фитаза высвобождает фосфатные группы из фитата. Определение высвобожденного неорганического фосфора основано на окраске, возникающей при восстановлении фосфомолибдатного комплекса.

Одновременное присутствие органического растворителя и воды не только облегчает высушивание суспензии, но и способствует значительному снижению вязкости суспензии. Установлено, что при отсутствии органического растворителя присутствующие в пищевом продукте водорастворимые белки служат причиной того, что суспензия становится настолько вязкой, что необходимое механическое перемешивание по существу становится невозможным без добавления значительного избытка воды.

Далее настоящее изобретение поясняется более подробно следующим примером. Этот пример показывает, как способ по изобретению может быть включен в традиционный способ экстракции масла из рапсового семени. Следует отметить, что этот пример ни в коем случае не должен рассматриваться как ограничивающий объем данного изобретения и прилагаемой формулы.

Пример

Переработка рапсового семени

Семена рапса содержат в своих клетках крошечные включения масляного вещества и рапс выращивают для продажи главным образом с целью получения этого масла. Собранные семена рапса чистят, сушат и осуществляют предварительный кондиционный отбор известным способом. Затем семена лущат вальцеванием, чтобы разрушить оболочку. Это осуществляют, пропуская рапсовое семя через захват пары гладких валков, вращающихся с различными скоростями. Действие этих валков состоит в раздавливании семян в хлопья, при этом разрывается часть клеток, содержащих капли масла.

Затем хлопья подвергают термическому кондиционированию приблизительно при 80С в течение времени порядка 1 часа, что разрушает остальные клетки, содержащие капли масла. Эта стадия также способствует повышению биологической доступности белка получаемой мучной продукции. Кондиционированные хлопья, содержащие порядка 42 вес.% масла и около 8 вес.% воды затем подают в ряд шнековых прессов непрерывного действия под низким давлением, где они подвергаются умеренному давлению. На этой стадии экстрагируется приблизительно половина имеющегося в наличии рапсового масла из рапсовых семян.

Выходящий из шнековых прессов жмых затем подают в Rotocell экстрактор с растворителем, где масло канолы экстрагируют техническим н-гексаном. Жмых вносят в экстрактор с растворителем через пароизолирующий блок, где его помещают в корзину. н-Гексан просачивается под действием тяжести через слой жмыха, так что он проникает внутрь кусочков жмыха и пропитывает их. Масло из рапсового семени перемещается в органический растворитель и затем содержащий масло растворитель вытекает через служащий опорой для жмыха грохот на дне корзины, обеспечивая разделение.

Давление паров н-гексана ограничивает температуру практической эксплуатации экстрактора с растворителем величиной порядка 55°С. Более высокая температура чрезмерно повышает количество паров растворителя, которое следует улавливать. Кроме того, если температура жмыха равна или близка температуре кипения растворителя, то возникает паровая фаза на границе раздела между кусочками жмыха и растворителя, которая эффективно препятствует диффузии жидкости. Таким путем экстрактор дает по существу жидкую фазу, содержащую масло канолы и н-гексан, и "твердую" фазу подвергнутого масляной экстракции рапсового семени, загрязненного н-гексаном.

При обычной обработке рапсовых семян следующая стадия должна состоять в освобождении от растворителя загрязненных н-гексаном рапсовых семян. Однако согласно способу по изобретению семена рапса затем подвергают обработке фитазой для превращения фитата внутри семян в неорганический фосфат.

1 кг раздавленных рапсовых семян после экстракции масла, содержащего 0,38 моль общего количества фосфата в форме фитата, загрязненного 0,3 литрами н-гексана, переводят в суспензию с 750 единицами Natuphous^® фирмы BASF (Германия), 1 л воды и 1,1 л дополнительного н-гексана. Количество фитата, присутствующего в рапсовых семенах, после экстракции масла может быть определено по способу Tangkongchitr и др., описанному в Cereal Chem., 58, pp.226-228. Полученную суспензию затем закупоривают в плексигласовом сосуде, выдерживаемом при 50°С путем инкубации в водяной бане, и непрерывно перемешивают в течение 1 часа, используя тестомесильную систему с захватом. После завершения инкубационного периода получают муку крупного помола (образец 1), содержащую 0,17 моль неорганического фосфата, что эквивалентно конверсии 45 мол.% исходного фитата. Известно несколько способов анализа на неорганический фосфат, такие как способ Pons"a и Guthrie"a (Ind. Eng. Chem. Anal. Ed. 18, pp.184-186). Для сравнения осуществляют идентичную обработку 1 кг раздавленных рапсовых семян, за тем исключением, что не включают фитазу. Полученная мука крупного помола (образец 2) содержит только 0,019 моль неорганического фосфата, что эквивалентно конверсии всего 5 мол.% от исходного содержания фитата в рапсовых семенах после экстракции масла.

Далее 1 кг партию раздавленных семян обрабатывают, как и первый образец, за тем исключением, что к суспензии добавляют в качестве хелатирующего агента лимонную кислоту, получая конечную концентрацию лимонной кислоты в суспензии 0,5 вес.%. Лимонная кислота снижает рН смеси до 5,0. Такая обработка дает муку крупного помола (образец 3), содержащую 0,32 моль неорганического фосфата, что эквивалентно конверсии 85 мол.% исходного фитата. Образец 3 демонстрирует преимущества комбинированной обработки и органическим растворителем, и хелатирующим агентом. Подобные высокие значения конверсии фитата могут быть достигнуты применением альтернативных хелатирующих агентов, таких как EDTA (ЭДТК) или фталевая кислота.

Полученную муку, обогащенную неорганическим фосфатом, образцы 1 и 3, подвергают затем сушке с удалением растворителя. В процессе удаления растворителя н-гексан рециркулируется обратно на стадию экстракции масла путем выпаривания из муки вместе с частью воды. Полученная сухая мука может быть затем использована непосредственно в качестве добавки с высоким содержанием белка и неорганического фосфата в корм животным или в пищу для человека.