способ моделирования гемолитической анемии

Формула изобретения

Способ моделирования гемолитической анемии путем однократного внутрибрюшинного введения экзогенного фактора лабораторным животным, отличающийся тем, что вводят высокомолекулярный полиэтиленоксид с молекулярной массой 3-6·10⁶ Дальтон в дозах 0,6-1,5 мг/кг.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной гематологии, и касается способа моделирования гемолитической анемии.

Известны способы моделирования гемолитической анемии путем применения экзогенных гемолитических факторов, к которым относится змеиный, грибной яд, сапонины, мышьяковистый водород, фенилгидразин, ацетилфенилгидразин, фосфор и др. [1].

Однако гемолитические экзогенные факторы, воздействуя на мембраны и ферментативную систему эритроцитов и вызывая острый внутрисосудистый гемолиз, обладают выраженным токсическим действием на важные системы и органы (печень, почки, легкие, ЦНС, сердечно-сосудистую систему и др.) [2, 3].

Наиболее близким (прототипом) является чаще всего используемый способ получения экспериментальной гемолитической анемии путем однократного внутрибрюшинного введения фенилгидразина, гемолитического яда замедленного действия морским свинкам и крысам в виде 2-5 % раствора в дозах 20-150 мг/кг и наблюдения за картиной периферической крови (максимум изменений на 2-5 сут) в течение 2-3 недель [3, 4).

Однако при применении данного способа также наблюдаются побочные эффекты со стороны внутренних органов: некробиотические изменения в печени, почках, головном мозгу и других органах [3].

Задачей, решаемой данным изобретением, является создание модели гемолитической анемии с другим механизмом действия и малотоксичной.

Поставленная задача решается путем однократного внутрибрюшинного введения в дозах от 0,6 до 1,5 мг/кг высокомолекулярного полиэтиленоксида (ВМПЭО) с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон.

Новым является то, что вводят лабораторным животным высокомолекулярный полиэтиленоксид (ВМПЭО) с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон.

В проанализированной авторами научно-медицинской и патентной литературе не найдено данных отличительных признаков, приводящих к новой поставленной технической задаче. Данный способ моделирования прошел испытания в НИИ фармакологии. Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения “новизна”, “изобретательский уровень”, “промышленно применимо”.

Способ осуществляют следующим образом: экспериментальному животному (крыса) вводят однократно внутрибрюшинно ВМПЭО с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон в дозах 0,6-1,5 мг/кг. При исследовании показателей периферической крови (гемоглобин, эритроциты, гематокрит, ретикулоциты, гемолитическая резистентность эритроцитов), костного мозга (содержание эритронормобластов), билирубина в сыворотке крови через 6 ч на 2, 5, 7 и 9 сут выявляются признаки гемолитической анемии (снижение гемоглобина, эритроцитов, гематокритного числа, увеличение числа ретикулоцитов, гемолиза эритроцитов, билирубина в периферической крови и эритронормобластов в костном мозге). Максимум перечисленных изменений наблюдается на 2-5 сут.

Конкретное выполнение способа.

Эксперименты проведены на 120 неинбредных крысах-самцах. При введении им высокомолекулярного полиэтиленоксида (ВМПЭО), линейного полимера с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон, однократно внутрибрюшинно в дозах 0,6, 1,0, 1,5 и 2,0 мг/кг наблюдается дозозависимое развитие анемии (снижение содержания гемоглобина, эритроцитов, гематокрита) регенераторного характера (увеличение числа ретикулоцитов и в костном мозге содержания эритронормобластов) с максимумом изменений на 2-5 сут опыта (см. таблицу). Доза для моделирования гемолитической анемии выбрана экспериментально. Введение ВМПЭО с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон в дозе менее 0,6 мг/кг не приводит к развитию анемии, в дозе 2,0 мг/кг вызывает развитие сгущения крови и высокий процент гибели (более 60%) животных в первые сутки опыта.

Для подтверждения гемолитического характера анемии определялась гемолитическая резистентность эритроцитов, содержание общего билирубина в сыворотке крови, проводили подсчет миелограмм костного мозга. Было показано при введении ВМПЭО с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон увеличение уровня гемолиза эритроцитов, содержания общего билирубина в сыворотке крови и процента эритронормобластов в костном мозге, что подтверждает гемолитический характер развивающейся анемии.

Эти данные приведены в таблице для максимально переносимой дозы (1,5 мг кг).

Обоснование способа: предлагаемый способ изучения позволяет осуществить моделирование гемолитической анемии путем применения ВМПЭО с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон, обладающего меньшей токсичностью и другим механизмом действия, нежели фенилгидразин. ВМПЭО с молекулярной массой 3-610⁶ дальтон обладает способностью вызывать развитие внутрисосудистого гемолиза эритроцитов в результате влияния на микроциркуляцию и сопротивление крови [5]. Способ позволяет получить стойкую анемию со стабильно низким уровнем гематокрита, гемоглобина и эритроцитов (2-5 сут). Таким образом, предлагаемый способ менее токсичен и обладает другим механизмом действия.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология. - Москва: Медицина, 1970. - С.259-260.

2. Рашевская А.М., Зорина Л.А. Профессиональные заболевания системы крови химической этиологии. - Москва: Медицина, 1968. - 304с.

3. Малышева Н.М., Тетерина В.И. Картина крови, костномозговое кроветворение и патогистологические изменения при фенилгидразиновой анемии //Материалы теоретической и клинической медицины. - Томск, 1964, вып 4. - С.42-47.

4. Шперлинг И.Г. Морфофункциональный статус эритроцитов при экспериментальных метгемоглобинемиях: Дисс...к. м. н. - Томск, 2002. - 182с.

5. Чернышева Г.А., Плотников М.Б., Смольякова В.И., Фомина Т.И. Механизмы токсических эффектов высокомолекулярного полиэтиленоксида //Бюл.. эксперим. и клин. мед. - 2002, Приложение №1.-С.31-34.