эмульсия перфторорганических соединений с газотранспортными свойствами

Формула изобретения

1. Эмульсия перфторорганических соединений с газотранспортными свойствами, содержащая перфторорганические соединения и фосфолипиды, отличающаяся тем, что она содержит быстровыводящееся перфторорганическое соединение в количестве 25-50 об.%, высокомолекулярную перфторированную добавку в количестве 2,5-20 об.%, фосфолипиды в количестве 2-10 мас.% и стабилизирующую добавку в количестве 0,05-0,25 мас.% широкого спектра, выбранную из группы жирные кислоты с С10 по С22 и/или их соли щелочных металлов, триглицериды, при этом соотношение содержания высокомолекулярной перфторированной добавки к содержанию быстровыводящегося перфторированного соединения составляет от 1:2 до 1:10.

2. Эмульсия перфторорганических соединений по п.1, отличающаяся тем, что в качестве быстровыводящегося перфторорганического соединения применяется перфтордекалин, а в качестве высокомолекулярной перфторированной добавки используют перфтор-n-метилциклогексилпиперидин.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и коллоидной химии и может быть использовано для получения кровезаменителей с газотранспортной функцией на основе эмульсий перфторорганических соединений (ПФС).

Предлагаемое изобретение может быть использовано в медицине и медицинской промышленности для получения высокодисперсных эмульсий перфторорганических соединений, служащих основой для приготовления газопереносящих кровезаменителей и перфузионных сред. Кроме того, оно может быть использовано в фармацевтической промышленности и косметике, а также в научно-исследовательской практике для приготовления высокодисперсных эмульсий на основе ПФС, служащих в качестве газопереносящих компонентов лекарственных и косметических мазей, кремов.

Эмульсии ПФС являются сложными коллоидными системами, состоящими из дисперсной среды - раствора поверхностно-активного вещества (ПАВ) в воде и дисперсной фазы - перфторорганического соединения или смеси нескольких ПФС. ПФС являются главным компонентом эмульсии. Они химически инертны. ПФС хорошо физически растворяют газы, в частности кислород и двуокись углерода, но они нерастворимы в воде, и их приходиться эмульгировать при изготовлении кровезаменителей и перфузионных сред. Частицы эмульсий ПФС фагоцитируются клетками ретикулоэндотелиальной системы и накапливаются в различных органах. Период полувыделения из организма ПФС является одним из показателей качества эмульсий ПФС. Количество аккумулированного в организме ПФС зависит от свойств ПФС (например, от давления паров, ратворимости в липидах и т.д.) и от величины введенной дозы.

В качестве ПАВ используются нетоксичные высокомолекулярные вещества, в частности проксанолы (зарубежные аналоги - плюроники) и фосфолипиды. Их количество в эмульсиях ПФС, по возможности, минимально и необходимо только для целей диспергирования и стабилизации ПФС.

Влияние эмульсий ПФС на организм, с одной стороны, опосредуется через физико-химическое воздействие ПАВ на клетки организма. С другой стороны, эмульсия как дисперсная система оказывает влияние и на весь организм в целом. В частности, эмульсия не должна содержать большого количества крупных частиц из-за опасности закупорки капилляров и возникновения эмболии.

Токсичность, реактогенность, средний диаметр частиц эмульсий ПФС и стабильность при хранении являются важными показателями качества эмульсий ПФС. Токсичность эмульсий ПФС оценивают по показателю LD₅₀, который представляет дозу введенной эмульсии в мл на кг массы тела животного, при которой выживает 50% животных. Эмульсии ПФС должны иметь длительный срок хранения, а условия хранения должны быть простыми. Показателем хранения эмульсий ПФС является изменение среднего диаметра частиц при хранении в течение 1-2 лет. Дисперсность и стабильность эмульсий ПФС зависит как от свойств ПАВ, так и от сродства ПФС к ПАВ. Например, при использовании фосфолипидов в качестве ПАВ имеет значение температура растворения ПФС в гексане, которая служит мерой липофильности ПФС. Таким образом, нижеследующие показатели являются определяющими при характеристике эмульсий ПФС:

1) токсичность, мерой которой служит величина LD ₅₀;

2) период полувыведения ПФС из организма;

3) кислородная емкость эмульсии;

4) средний диаметр частиц эмульсии;

5) изменение среднего диаметра частиц эмульсии при стерилизации автоклавированием;

6) изменение среднего диаметра частиц эмульсии за 12 месяцев при постоянной температуре хранения в пределах от +4 до +30 градусов Цельсия;

7) дисперсность эмульсии и изменение дисперсности при хранении.

На основании этих показателей можно определить преимущество одной эмульсии ПФС перед другой.

В настоящее время известны эмульсии ПФС "первого" и "второго" поколений. Эмульсии ПФС "первого" поколения разработаны на основе неионогенных ПАВ или на основе неионогенных ПАВ с небольшими добавками фосфолипидов и имели концентрацию ПФС не более 20 об.%. Отсюда проистекает ограниченность их кислородной емкости - не более 12 об.%. Добиться большей концентрации ПФС в эмульсиях "первого" поколения не удается из-за резкого возрастания вязкости. Поэтому в клинической практике нашли применение лишь эмульсии "первого" поколения, в которых концентрация ПФС не превышает 10 об.%. Примером является препарат Перфторан (Россия) [1]. Эмульсии "второго" поколения разработаны на основе фосфолипидных ПАВ и имеют концентрацию ПФС до 50 об.%. Несмотря на большую концентрацию ПФС, они характеризуются достаточно низкой вязкостью. Кислородную емкость таких эмульсий может достигать 26 об.%.

Однако одним из недостатков этих эмульсий является сравнительно больший средний диаметр частиц и недостаточно высокая стабильность.

Перфтордекалин (ПФД) является наиболее распространенным и легко доступным перфторорганическим соединением, применяемым для медикобиологических целей. Широко известны эмульсии ПФС, содержащие перфтордекалин в количестве 10-20 об.% и стабилизированные проксанолами (плюрониками) и фосфолипидами [2, 3]. Эти эмульсии относится к эмульсиям "первого" поколения. Введенный внутривенно эмульгированный ПФД, как и другие перфторуглероды, накапливается в печени, селезенке и костном мозге, при этом не метаболизируется в биохимических реакциях. Из организма неизменные молекулы ПФД выводятся с выдыхаемым воздухом с периодом полувыведения 7 суток. Относительная безвредность перфторуглеродных эмульсий, содержащих ПФД, показана многочисленными экспериментами, начиная с исследований Р.Гейера [4], продемонстрировавших возможность выживания крыс при тотальной замене крови на эмульсию.

Однако хорошо известно, что эмульсия ПФД, стабилизированная 3-4% раствором проксанола 268, слабо устойчива во времени и расслаивается через несколько дней хранения при температуре +4°С. Эмульсия ПФД, стабилизированная комбинированными ПАВ - проксанолом и фосфолипидами, имеет несколько лучшую стабильность, однако, в целом, имеет те же недостатки.

Было установлено, что добавки к ПФД некоторых других перфторуглеродных соединений увеличивают срок хранения эмульсий. В эмульсиях ПФС, содержащих смесь двух перфторуглеродов (так называемые бинарные смеси ПФС), один из компонентов является быстро выводящимся ПФС, а второй выводится из организма относительно медленно. Медленно выводящийся компонент улучшает стабильность эмульсий при хранении и снижает показатели токсичности.

Известна эмульсия ПФС "первого" поколения, содержащая ПФД в количестве 20 мас.% и высокомолекулярную добавку С16 НВРО (перфторпергидрофлюороантрен) в количестве 1 мас.%, стабилизированная плюроником F68 в количестве 4 мас.% [5, 6]. Небольшое количество перфорированного полициклического углеводорода С16 НВРО с более высокой температурой кипения, чем у основного перфторуглурода (ПФД), несколько повышает срок хранения этой эмульсии (более 1 месяца при температуре +4°С).

Однако, в целом, эта эмульсия ПФД с добавкой С16 НВРО имеет те же недостатки, которые присущи эмульсиям ПФД, а именно:

- низкую стабильность при хранении;

- низкую кислородную емкость;

- является реактогенной.

Известна эмульсия ПФС, содержащая ПФД и перфтор-n-метилциклогексилпиперидин (ПФМЦП) в соотношении ПФД:ПФМЦП=2:1 с концентрацией дисперсной фазы 10-20 об.% и стабилизированная проксанолом 268 в количестве 4-8 мас.% или проксанолом 268 в количестве 4-8 мас.% вместе с фосфолипидами яичного желтка (лецитин яичного желтка) в количестве 0,5 мас.% [7]. Эмульсия имеет средний размер частиц 0,06-0,126 мкм и разброс диаметров частиц от 0,05 до 0,3 мкм. Содержание ионов фтора в эмульсии не более 2,3·10^-6 моль/л. Эмульсия имеет токсичность ЛД₅₀=136 мл/кг для мышей.

Известна эмульсия, содержащая ПФД и ПФМЦП в соотношении ПФД:ПФМЦП=2:1 с концентрацией дисперсной фазы 10-20 об.% и стабилизированная проксанолом 268 в количестве 4-8 мас.% [1]. Торговое название этой эмульсии "Перфторан". Эта эмульсия сразу после изготовления имеет средний размер частиц 0,06-0,11 мкм и разброс диаметров частиц от менее 0,1 до 0,3 мкм. Содержание ионов фтора в эмульсии 11-12-10 моль/л, эмульсия имеет токсичность ЛД ₅₀=136-158 мл/кг для мышей.

Эта эмульсия имеет следующие недостатки:

- невысокую кислородную емкость;

- низкую стабильность эмульсии при хранении - не более 30 дней в условиях - холодильника при +4°С;

- для длительного хранения необходимо замораживание (не менее -18°С);

- является реактогенной.

В настоящее время созданы эмульсии "второго" поколения, в которых используются либо уже известные, либо новые ПФС, для эмульгирования которых используются только фосфолипиды. Использование фосфолипидов в качестве эмульгаторов позволяет получать эмульсии с высоким содержанием фторуглеродной фазы при достаточно низкой вязкости и высокой кислородной емкости. Эти эмульсии имеют меньшую реактогенность.

К эмульсиям "второго" поколения относится эмульсия ПФС, содержащая перфтороктилбромид (ПФОБ) в количестве от 20 до 125 мас.% и стабилизированная фосфолипидами в количестве 5 мас.% [8]. Период полувыведения ПФОБ - 4 суток. Средний диаметр частиц эмульсии ПФОБ равен 277 нм, а 95% частиц имеют размер частиц менее 400 нм. Она стабильна в течение 18 месяцев при температуре +4 градуса. Через 15 месяцев и 22 дня средний диаметр частиц увеличивается до 406 нм. Индекс стабильности - D_t/D₀, обозначающий, во сколько раз увеличился средний диаметр частиц эмульсии после t месяцев хранения, для этой эмульсии равен 1,4. Препарат, приготовленный на основе этой эмульсии, известен под названием Oxygent (США). Он имеет кислородную емкость, равную 21 об.%.

Эмульсия Oxygent имеет следующие недостатки:

- относительно большой средний диаметр частиц эмульсии (более 250 нм);

- недостаточно высокая стабильность при хранении.

Наиболее близкой по сущности к заявляемой эмульсии ПФС является эмульсия, описанная в патенте №2088217 [9] и взятая нами за прототип. Эта эмульсия ПФС является эмульсией "второго" поколения. Она содержит ПФД или ПФОБ в количестве 40-50 об.% и ПФМЦП в количестве 1-10 об.% и стабилизирована фосфолипидами в количестве 2-6 об.%. Средний диаметр частиц этой эмульсии равен 232 нм. Через 11 месяцев хранения в холодильнике при температуре +4°С средний диаметр частиц этой эмульсии увеличивается на 23%, то есть индекс стабильности равен 1,23. Эмульсия имеет кислородную емкость до 22 об.%.

Эмульсия имеет следующие недостатки:

- большой средний диаметр частиц;

- высокое содержание крупных частиц (14,9% частиц имеют диаметр более 400 нм, см. таблицу 1);

- недостаточно высокая стабильность при хранении.

Целью изобретения является снижение среднего размера частиц, увеличение дисперсности эмульсии, увеличение стабильности эмульсии при хранении, а также понижение требований к условиям хранения.

Поставленная цель достигается тем, что предложенная эмульсия содержит специальную стабилизирующую добавку широкого спектра, быстровыводящееся перфторорганическое соединение в количестве 25-50 об.%, высокомолекулярную перфторированную добавку в количестве 2,5-20 об.% и фосфолипиды в количестве 2-10 мас%. При этом соотношение содержания высокомолекулярной перфторированной добавки к содержанию быстровыводящегося перфторированного соединения составляет от 1:2 до 1:10. В качестве стабилизирующей добавки широкого спектра используются жирные кислоты с С10 по С22 и/или их соли или триглицериды. В предлагаемой эмульсии ПФД -быстровыводящееся перфторорганическое соединение является основой перфторуглеродной фазы, и им осуществляется перенос основного количества растворенных газов. Второй перфторуглеродный компонент ПФМЦП - высокомолекулярная перфторированная добавка применяется как в качестве переносчика газов, так и стабилизатора эмульсии. В качестве эмульгатора перфторуглеродов используются фосфолипиды яичного желтка или сои. Специальные стабилизирующие добавки введены для снижения среднего диаметра частиц эмульсии, увеличения дисперсности и стабильности при длительном хранении. В состав эмульсии входит антиоксидант, например альфа-токоферол в концентрации от 0,01 до 0,05 г/л. Кроме того, в состав эмульсии могут входить соли (г/л): хлорид натрия - 6; хлорид калия - 0,39; хлорид магния - 0,19; гидрокарбонат натрия - 0,65; гидрофосфат натрия - 0,2 и глюкоза - 2 г/л.

Ввиду неполного представления характеристик прототипа (не приведены кривые распределения частиц по диаметрам, нет данных по хранению при комнатной температуре (20-24°С) и при температуре тела эксперментальных животных (примерно +40°С)), нами приготавливалась также контрольная эмульсия, в соответствии с составом и способом приготовления прототипа.

Контрольная эмульсия, как и предлагаемая эмульсия, приготовлялись на гомогенизаторе высокого давления при давлении в диапазоне 40-60 МПа в асептических условиях, обеспечивающих стерильность и апирогенность эмульсии. Средний диаметр частиц эмульсий и распределение частиц по диаметрам измерялись на фотонно-корреляционном спектрометре "Autosizer II" фирмы "Malvern" (Великобритания). Приготовленные эмульсии стерилизовались автоклавированием при избыточном давлении 1 атм (нагрев до +120°С) в течение 60 мин, и далее хранились: (а) в холодильнике при +4°С, (б) в комнате при +20-24°С и (в) в термостатируемом шкафу при +40°С. Острая токсичность (LD₅₀) эмульсий определялась на мышах по стандартной методике.

Описание чертежей

Фиг.1. Представлены примеры кривых зависимости среднего диаметра частиц различных эмульсий от времени хранения этих эмульсий в условиях холодильника при температуре +4°С. По горизонтальной оси отложено время хранения эмульсий в сутках, по вертикальной - средний диаметр частиц эмульсий в нанометрах. Кривая 1 - зависимость среднего диаметра частиц эмульсии прототипа, взятая из данных работы [9]. Кривая 2 - зависимость среднего диаметра частиц эмульсии, по составу полностью аналогичной эмульсии по прототипу, обозначенная нами как контрольная эмульсия: концентрация ПФД -36 об.%, концентрация ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизирована фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.%. Кривая 3 - зависимость среднего диаметра частиц эмульсии, имеющей в составе ПФД - 36 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированной фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой пальмитиновой кислотой в количестве 0,1 мас.%. Кривая 4 - зависимость среднего диаметра частиц эмульсии, имеющей в составе ПФД - 36 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированной фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой пальмитатом натрия в количестве 0,1 мас.%.

Из чертежа видно, что образцы предлагаемой эмульсии имеют меньший диаметр частиц и меньшую скорость укрупнения в сравнении как с прототипом, так и контрольной эмульсией.

Фиг.2. Представлены примеры кривых зависимости среднего диаметра частиц различных эмульсий от времени хранения этих эмульсий в условиях комнатной температуры +20-24°С. Обозначения те же, что и на фиг.1.

Из чертежа видно, что образцы предлагаемой эмульсии имеют меньший диаметр частиц и меньшую скорость укрупнения в сравнении с теми же показателями для контрольной эмульсии.

Фиг.3. Представлены примеры кривых зависимости среднего диаметра частиц различных эмульсий от времени хранения этих эмульсий в условиях в термостатируемом шкафу при температуре 40°С. Обозначения те же, что и на фиг.1.

Из чертежа видно, что образцы предлагаемой эмульсии имеют меньший диаметр частиц и меньшую скорость укрупнения в сравнении с теми же показателями для контрольной эмульсии.

Фиг.4. Представлены примеры кривых распределения частиц свежеприготовленных эмульсий. Кривая 1 – эмульсия, по составу полностью аналогичная эмульсии по прототипу (контрольная эмульсия): концентрация ПФД - 36 об.%, концентрация ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизирована фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.%. Кривая 2 - эмульсия, имеющая в составе ПФД - 32 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированная фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой - пальмитиновой кислотой в количестве 0,1 мас.%. По горизонтальной оси отложена величина среднего диаметра частиц эмульсий (в нанометрах), по вертикальной - количество соответствующих этому диаметру частиц (в %).

Из чертежа видно, что образец предлагаемой эмульсии имеет более узкое распределение и меньшее количество крупных частиц в сравнении с контрольной эмульсией.

Фиг.5. Представлены примеры кривых распределения частиц свежеприготовленных эмульсий. Кривая 1 – эмульсия, по составу полностью аналогичная эмульсии по прототипу (контрольная эмульсия): концентрация ПФД - 36 об.%, концентрация ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизирована фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.%. Кривая 2 - эмульсия, имеющая в составе ПФД - 36 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированная фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой - пальмитатом натрия в количестве 0,1 мас.%. Обозначения осей те же, что и на фиг.4.

Из чертежа видно, что образец предлагаемой эмульсии имеет более узкое распределение и меньшее количество крупных частиц в сравнении с контрольной эмульсией.

Фиг.6. Представлены примеры кривых распределения частиц эмульсий после 12 месяцев хранения их в условиях комнатной температуры +20-24°С. Кривая 1 – эмульсия, по составу полностью аналогичная эмульсии по прототипу (контрольная эмульсия): концентрация ПФД - 36 об.%, концентрация ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизирована фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.%. Кривая 2 - эмульсия, имеющая в составе ПФД - 36 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированная фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой - пальмитиновой кислотой в количестве 0,1 мас.%. Обозначения осей те же, что и на фиг.4.

Из чертежа видно, что образец предлагаемой эмульсии имеет более узкое распределение и меньшее количество крупных частиц в сравнении с контрольной эмульсией.

Таблица 1. Сравнительный анализ прототипа и предлагаемой эмульсии. Обозначения: D₀ - средний диаметр частиц свежеприготовленных эмульсий; D₁₂ - средний диаметр частиц эмульсий после 12 месяцев хранения при +4°С, +20-24°С и +40°С соответственно; D₁₂/D₀ - индекс стабильности (обозначает, во сколько раз увеличился средний диаметр частиц эмульсии после 12 месяцев хранения при +4°С, +20-24°С, и +40°С соответственно); контрольная эмульсия – эмульсия, по составу полностью аналогичная эмульсии по прототипу: концентрация ПФД - 36 об.%, концентрация ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизирована фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.%; предлагаемая эмульсия с пальмитиновой кислотой - эмульсия, имеющая в составе ПФД - 36 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированная фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой - пальмитиновой кислотой в количестве 0,1 мас.%; предлагаемая эмульсия с пальмитатом натрия - эмульсия, имеющая в составе ПФД - 36 об.%, ПФМЦП - 4 об.%, соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9, стабилизированная фосфолипидами яичного желтка в количестве 5 мас.% и стабилизирующей добавкой - пальмитатом натрия в количестве 0,1 мас.%.

Из данных таблицы 1 видно, что средний диаметр частиц образцов эмульсии прототипа и контрольной эмульсии за 12 месяцев хранения при +4°С увеличился на 23% и 18% соответственно, в то время как средний диаметр частиц эмульсий образцов увеличился только на 4% и 8% соответственно. Таким образом, средняя скорость укрупнения частиц образцов предлагаемой эмульсии при хранении оказалась в несколько раз (примерно в 3-6 раз) ниже средней скорости укрупнения частиц эмульсии прототипа и примерно в 2-5 раз ниже скорости укрупнения частиц контрольной эмульсии. Аналогичный результат получен и при хранении эмульсий при более жестких условиях - при температурах от +20 до +40°С. Так, хранение как при температуре +40°С, так и при температуре +24°С, снизило среднюю скорость укрупнения частиц образцов предлагаемой эмульсии примерно в 2 раза по сравнению с контрольной эмульсией. Сравнение предлагаемой эмульсии с эмульсией прототипа в аналогичных условиях оказалось невозможным ввиду отсутствия соответствующих данных по прототипу. Аналогичные описанным результаты были получены и для других образцов предлагаемой эмульсии - эмульсий с использованием других стабилизирующих добавок, данные по которым в таблице 1 не приведены. Из данных таблицы 1 видно также, что образцы предлагаемой эмульсии по сравнению с контрольной эмульсией имеют как более низкие значения среднего диаметра частиц, так и более узкое распределение, что отражается в меньшем количестве крупных частиц, содержащихся в этих эмульсиях. Так, количество частиц, диаметр которых превышает 400 нм, в представленных образцах предлагаемой эмульсии примерно в 2-4 раза ниже, чем в контрольной эмульсии. Аналогичные результаты были получены и для других образцов предлагаемой эмульсии. Таким образом, применение добавок существенно увеличивает стабильность эмульсий при хранении.

Ниже приведены конкретные примеры состава и способ приготовления предлагаемой перфторуглеродной эмульсии с газотранспортными свойствами.

Пример 1. В эмульсию с концентрацией ПФД 32 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 8 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/4), стабилизированную фосфолипидным ПАВ, а именно лецитином яичного желтка в количестве 5 мас.%, введена стабилизирующая добавка - пальмитиновая кислота в количестве 0,1 мас.%. Эмульсия приготавливалась следующим образом. После выпаривания на роторном испарителе 10-процентного раствора лецитина производилась гидратация сухой лецитиновой пленки солевым раствором, в который предварительно была добавлена пальмитиновая кислота. В процессе гидратации был введен также альфатокоферол в концентрации 0,02 г/л. Затем эта смесь гомогенизировалась на плунжерном гомогенизаторе при капельном введении смеси ПФОС под давлением 60 МПа (600 кг/см²) в течение некоторого времени, которое соответствует 10-20-кратному пропусканию через гомогенизирующее устройство. В результате гомогенизации была получена эмульсия, средний диаметр частиц которой был равен 198 нм. После стерилизации автоклавированием при избыточном давлении 1 атм (нагрев до +120°С) в течение 60 мин эмульсия имела средний диаметр частиц 201 нм. Через 12 месяцев хранения при комнатной температуре средний диаметр частиц эмульсии стал 221 нм, т.е. индекс стабильности этой эмульсии равен 1,09. LD ₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 140 мл/кг. Для контрольной эмульсии она был равен 136 мл/кг.

Пример 2. В эмульсию с концентрацией ПФД 32 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 8 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/4), стабилизированную лецитином яичного желтка в количестве 5 мас.%, введена стабилизирующая добавка пальмитат натрия в количестве 0,1 мас.%. Эмульсия приготавливалась аналогично способу, описанному в Примере 1. После приготовления средний диаметр частиц этой эмульсии был 195 нм. Через 12 месяцев хранения средний диаметр частиц эмульсии стал 219 нм, т.е. годовой индекс стабильности этой эмульсии составляет 1,12. LD₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 146 мл/кг. Для контрольной эмульсии LD₅₀ был равен 136 мл/кг.

Пример 3. В эмульсию с концентрацией ПФД 32 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 8 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/4), стабилизированную лецитином яичного желтка в количестве 5 мас.%, введена стабилизирующая добавка триолеат глицерина в количестве 0,1 мас.%. Эмульсия приготавливалась аналогично способу, описанному в Примере 1. После приготовления средний диаметр частиц этой эмульсии был равен 210 нм. Через 12 месяцев хранения при комнатной температуре средний диаметр частиц эмульсии увеличился до 238 нм, т.е. годовой индекс стабильности этой эмульсии составил 1,13. LD₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 146 мл/кг. Для контрольной эмульсии LD₅₀ был равен 136 мл/кг.

Пример 4. В эмульсию с концентрацией ПФД 20 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 5 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/4), стабилизированную лецитином яичного желтка в количестве 2 мас.%, введена стабилизирующая добавка пальмитиновая кислота в количестве 0,05 мас.%. Эмульсия приготавливалась аналогично способу, описанному в Примере 1. После приготовления средний диаметр частиц был равен 221 нм. Через 12 месяцев хранения при комнатной температуре средний диаметр частиц эмульсии увеличился до 265 нм, т.е. годовой индекс стабильности этой эмульсии составляет 1,2. LD₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 158 мл/кг. Для контрольной эмульсии LD₅₀ был равен 136 мл/кг.

Пример 5. В эмульсию с концентрацией ПФД 40 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 10 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/4), стабилизированную лецитином яичного желтка в количестве 10 мас.%, введена стабилизирующая добавка пальмитат натрия в количестве 0,25 мас.%. Эмульсия приготавливалась аналогично способу, описанному в Примере 1. После приготовления средний диаметр частиц был равен 190 нм. Через 12 месяцев хранения при комнатной температуре средний диаметр частиц эмульсии увеличился до 205 нм, т.е. годовой индекс стабильности этой эмульсии составляет 1,08. LD₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 138 мл/кг. Для контрольной эмульсии LD₅₀ был равен 136 мл/кг.

Пример 6. В эмульсию с концентрацией ПФД 36 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 4 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/9), стабилизированную лецитином яичного желтка в количестве 6 мас.%, введена стабилизирующая добавка триолеат глицерина в количестве 0,2 мас.%. Эмульсия приготавливалась аналогично способу, описанному в Примере 1. После приготовления средний диаметр частиц был равен 213 нм. Через 12 месяцев хранения при комнатной температуре средний диаметр частиц эмульсии увеличился до 245 нм, т.е. годовой индекс стабильности этой эмульсии составляет 1,15. LD₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 150 мл/кг. Для контрольной эмульсии LD₅₀ был равен 136 мл/кг.

Пример 7. В эмульсию с концентрацией ПФД 30 об.% и концентрацией ПФМЦП в количестве 10 об.% (соотношение ПФМЦП/ПФД=1/3), стабилизированную лецитином яичного желтка в количестве 8 мас.%, введена стабилизирующая добавка пальмитат натрия в количестве 0,125 мас.% и стабилизирующая добавка пальмитиновая кислота в количестве 0,125 мас.%. Эмульсия приготавливалась аналогично способу, описанному в Примере 1. После приготовления средний диаметр частиц был равен 185 нм. Через 12 месяцев хранения при комнатной температуре средний диаметр частиц эмульсии увеличился до 196 нм, т.е. годовой индекс стабильности этой эмульсии составляет 1,06. LD₅₀ этой эмульсии для мышей равнялся 140 мл/кг. Для контрольной эмульсии LD ₅₀ был равен 136 мл/кг.

Как видно из вышеприведенных чертежей, таблицы и примеров, предлагаемая перфторуглеродная эмульсия с газотранспортными свойствами имеет следующие преимущества:

- меньший средний диаметр частиц;

- более высокую дисперсность (более узкое распределение);

- более высокую стабильность при хранении (более высокий индекс стабильности);

- низкую токсичность;

- стерилизуется автоклавированием, причем средний диаметр частиц в результате нагрева до 120°С в течение 60 мин практически не изменяется;

- не требует специального оборудования для длительного хранения;

является недорогой в изготовлении, так как состоит из легко синтезируемых ПФС.

Список литературы

1. Патент РФ № 2070033, кл. А 61 К 9/10, 1994.

2. Патент Великобритании № 1361068, кл. А 61 К 27/00, 1974.

3. Clark L.C. и др. Ring versus straight chain perfluorocarbon emulsions for perfusion media, Microvascular Research, 1974, 8, p.320-340.

4. Federat. Proc., 1975, v. 34, р.1499-1505.

5. Патент Великобритании № 2171330, кл. В 01 F 17/42, 1986.

6. K.C. Lowe. Emulsified perfluorochemicals for oxygen-transport to tissues: effects on lymphoid sistem and immunological competence. Oxygen Transport to Tissue X. Plenum Press N.Y.-L., 1988, p.655-663.

7. Авторское свидетельство СССР № 1298976, кл. А 61 К 9/10, 1987

8. Патент ЕПВ № 0231070, кл. А 61 К 9/10, 1987.

9. Патент РФ № 2088217, кл. А 61 К 9/10, 31/02 (прототип).