производные тиоамида и фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Производные тиоамида формулы I

где Х обозначает группу формулы

где R₁₅ обозначает галоген, (низш.)алкил и перфтор(низш.)алкил;

R₁₆ обозначает водород, галоген и (низш.)алкил;

или Х обозначает группу формулы Х-2

где Het обозначает 5- или 6-членное гетеароматическое кольцо, содержащее 1 или 2 гетероатома, в качестве которого выбран N;

R₁₅ и R₁₆ имеют значения, указанные выше для Х-1;

R₃₀ обозначает водород или (низш.)алкил;

p обозначает целое число от 0 до 1;

или Х обозначает группу формулы Х-3

где R₁₈ обозначает арил;

R₁₉ обозначает незамещенный арилалкил или гетероарилалкил, представляющий собой 6-членное гетероароматическое кольцо, содержащее в качетсве гетероатома атом N;

R₂₀ обозначает незамещенный (низш.)алканоил;

Y обозначает группу формулы Y-1

где R₂₂ и R₂₃ независимо друг от друга обозначают водород, (низш.)алкил, галоген или перфтор(низш.)алкил и по крайней мере один из радикалов R₂₂ и R₂₃ не обозначает водород;

R₂₄ обозначает водород,

или Y обозначает группу Y-3

где R₂₅ обозначает группу формулы R₂₆ -(CH₂)_e-,

R₂₆ обозначает (низш.)алкокси, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил или R ₂₆ обозначает группу формулы -NR₂₈R₂₉ , где R₂₈ обозначает водород, R₂₉ обозначает (низш.)алканоил или (низш.)алкиламинокарбонил,

Q обозначает -(СН₂)_f-;

е обозначает целое число от 0 до 4;

f обозначает целое число от 1 до 3;

связь, обозначенная пунктирной линией, необязательно может быть гидрирована;

и его фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры.

2. Соединение по п.1, где Х обозначает группу формулы

и Y, R₁₅ и R₁₆ имеют значения, указанные в п.1.

3. Соединение по п.2, в котором R₁₅ и R₁₆ независимо друг от друга обозначают хлор или фтор.

4. Соединение по п.2, в котором Х-1 выбирают из группы

5. Соединение по п.1, в котором Х обозначает группу Х-2

где p, Y, R₁₅, R₁₆ и R₃₀ имеют значения, указанные в п.1.

6. Соединение по п.5, в котором Х-2 выбирают из группы

7. Соединение по п.1, в котором Х обозначает

и Y, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют значения, указанные в п.1.

8. Соединение по п.7, в котором R₁₈ обозначает фенил.

9. Соединение по п.7, в котором R₁₉ обозначает (низш.)алкил, который замещен пиридилом или фенилом.

10. Соединение по п.7, в котором R₁₈ обозначает фенил, R₁₉ обозначает (низш.)алкил, который замещен пиридилом или фенилом, и R₂₀ обозначает (низш.) алканоил.

11. Соединение по п.7, в котором R ₁₈ обозначает фенил, который может быть незамещен или замещен галогеном или (низш.)алкоксигруппой, и R₁₉ обозначает фенил(низш.)алкил.

12. Соединение по п.11, в котором Х-3 выбирают из группы

13. Соединение по п.1, в котором Y обозначает

и X, R₂₂, R₂₃ и R₂₄ имеют значения, указанные в п.1.

14. Соединение по п.13, в котором Y-1 выбирают из группы

15. Соединение по п.1, в котором Y обозначает группу формулы Y-3

и Y, R₂₅ и Q имеют значения, указанные в п.1; и связь, обозначенная пунктирной линией, необязательно может быть гидрирована.

16. Соединение по п.15, в котором связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована.

17. Соединение по п.15, в котором Y-3 выбирают из группы

и

18. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-бромфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил])-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-фторфенил)тиоксометил])-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-пиридинил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил]-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин,

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[2-(ацетиламино)этил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

[[1-[2-[[(метиламино)карбонил]амино]этил]циклопентил]тиоксометил]-4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(3-метилтио)пропил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(3-метилсульфонил)пропил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[(2,6-диметил-3-пиридинилкарбонил)амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[[4-(трифторметил)-5-пиримидинил]карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[[(2,4-диметил)-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

4-[(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-фенил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил]-N-[[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин или

4-[(2R,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-фенил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил]-N-[[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин.

19. Соединение по любому из пп.1-18, предназначенное для применения в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики ревматоидного артрита, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника и астмы.

20. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения или профилактики ревматоидного артрита, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника и астмы, содержащая соединение по любому из пп.1-18, или его фармацевтически приемлемую соль, или сложный эфир в сочетании с совместимым фармацевтическим носителем.

Описание изобретения к патенту

Фактор адгезии 1 клеток сосудов (VCAM-1), являющийся представителем семейства супергенов иммуноглобулина (Ig), экспрессируется на активированном, но не экспрессируется на покоящемся эндотелии. Интегрин VLA-4 (a₄b₁), который экспрессируется на поверхности многих типов клеток, включая находящиеся в кровотоке лимфоциты, эозинофилы, базофилы и моноциты, но не экспрессируется на нейтрофилах, является основным рецептором VCAM-1. Антитела к VCAM-1 или VLA-4 могут in vitro блокировать адгезию этих мононуклеарных лейкоцитов, а также клеток меланомы, с активированным эндотелием. На нескольких созданных с использованием животных моделях воспаления было установлено, что антитела к любому протеину обладают эффективностью в отношении ингибирования инфильтрации лейкоцитов и предупреждения повреждения ткани. Было установлено, что моноклональные антитела (МАт) к VLA-4 блокируют Т-клеточную эмиграцию при индуцированном адъювантом артрите, препятствуют накоплению эозинофилов и бронхостенозу при моделировании астмы и уменьшают паралич и ингибируют инфильтрацию моноцитов и лимфоцитов при экспериментальном аутоиммунном энцефалите (ЭАЭ). Было установлено, что моноклональные антитила к VCAM-1 пролонгируют время выживания сердечных аллотрансплантатов. В современных исследованиях продемонстрировано, что МАт к VLA-4 могут предупреждать инсульт и диабет у мышей-диабетиков, не страдающих ожирением, и существенно уменьшать воспаление при моделировании колита с использованием тамарина, внесенного с помощью ватного тампона.

Таким образом, соединения, ингибирующие взаимодействие между содержащими ₄ интегринами и VCAM-1, могут применяться в качестве терапевтических агентов для лечения хронических воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, рассеянный склероз (PC), астма и воспалительное заболевание кишечника (ВЗК).

Одним из объектов настоящего изобретения являются соединения формулы:

где Х обозначает группу формулы

где

R₁₅ обозначает галоген, нитро, (низш.)алкилсульфонил, циано, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, карбокси, (низш.)алкиламиносульфонил, перфтор(низш.)алкил, (низш.)алкилтио, гидрокси(низш.)алкил, алкокси(низш.)алкил, (низш.)алкилтио-(низш.)алкил, (низш.)алкилсульфинил-(низш.)алкил, (низш.)алкилсульфонил-(низш.)алкил, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алканоил, ароил, арил, арилокси;

R₁₆ обозначает водород, галоген, нитро, циано, (низш.)алкил, ОН, перфтор(низш.)алкил или (низш.)алкилтио;

или Х обозначает группу формулы Х-2

где Het обозначает 5- или 6-членное гетеароматическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из N, О и S, или

Het обозначает 9- или 10-членное бициклическое гетероароматическое кольцо, содержащее 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из О, S и N;

R₁₅ и R₁₆ имеют значения, указанные выше для Х-1, и

R₃₀ обозначает водород или (низш.)алкил, р обозначает целое число от 0 до 1;

или Х обозначает группу формулы Х-3

где

R₁₈ обозначает арил, гетероарил, арил(низш.)алкил, гетероарил(низш.)алкил,

R₁₉ обозначает замещенный или незамещенный (низш.)алкил, арил, гетероарил, арилалкил, гетероарилалкил и

R₂₀ обозначает замещенный или незамещенный (низш.)алканоил или ароил;

и Y обозначает группу формулы Y-1

где R₂₂ и R₂₃ независимо друг от друга обозначают водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, циклоалкил, арил, арилалкил, нитро, циано, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алканоил, галоген или перфтор(низш.)алкил и по крайней мере один из радикалов R₂₂ и R₂₃ не обозначает водород, и

R₂₄ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, арил, нитро, циано, (низш.)алкилсульфонил или галоген, или

Y-2 обозначает группу формулы

где Het обозначает 5-или 6-членное гетероароматическое кольцо, связанное через атом углерода, причем это кольцо содержит 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из ряда, включающего N, О или S, R₃₀ и R₃₁ независимо друг от друга обозначают водород, (низш.)алкил, циклоалкил, галоген, циано, перфторалкил или арил и по меньшей мере один из радикалов R₃₀ и R₃₁ является соседним по отношению к точке присоединения, р обозначает целое число 0 или 1,

или Y обозначает группу Y-3

где:

R₂₅ обозначает (низш.)алкил, незамещенный или замещенный фтором (низш.)алкенил, или группу формулы R ₂₆-(CH₂)_e-,

R₂₆ обозначает арил, гетероарил, азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор(низш.)алканоил, нитро или R ₂₆ обозначает группу формулы -NR₂₆R₂₉ ,

где R₂₈ обозначает Н или (низш.)алкил,

R₂₉ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, ароил, перфтор(низш.)алканоиламино, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкиламинокарбонил, ариламинокарбонил, или

R ₂₈ и R₂₉ вместе образуют 4-, 5- или 6-членное насыщенное карбоциклическое кольцо, необязательно включающее 1 гетероатом, выбранный из О, S и N; причем атомы углерода в кольце могут быть незамещены или замещены (низш.)алкилом или галогеном,

Q обозначает -(СН₂)_fО-, -(CH₂)_fS-, - (СН₂)_f N(R₂₇), -(СН₂)_f- или связь;

R₂₇ обозначает Н, (низш.)алкил, арил, (низш.)алканоил, ароил или (низш.)алкоксикарбонил;

е обозначает целое число от 0 до 4;

f обозначает целое число от 1 до 3; и

связь, обозначенная пунктирной линией, необязательно может быть гидрирована;

и их фармацевтически приемлемые соли и сложные эфиры.

В контексте настоящего описания понятия имеют следующие значения:

Понятие "галоген" обозначает бром, хлор, фтор или йод, а понятие "гало" обозначает галоген в качестве заместителя.

Понятие "перфтор", например, в перфтор(низш.)алкиле, перфтор(низш.)алканоиле и перфторалканоиламиногруппе, обозначает полное замещение всех атомов углерода фтором. Примером является трифторметил.

Понятие "(низш.)алкил", индивидуально или в сочетании (например, как часть (низш.)алканоила, ниже), обозначает алкильную группу с прямой цепью или с разветвленной цепью, содержащую максимум 6 атомов углерода, такую как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил и т.п. (Низш.)алкильные группы могут быть незамещенными или могут быть замещены одной или несколькими группами, независимо друг от друга выбранными из ряда, включающего циклоалкил, нитро, арилокси, арил (предпочтительно фенил или пиридил), гидрокси ((низш.)алкилгидрокси или гидрокси (низш.)алкил), галоген, циано, (низш.)алкокси (алкокси(низш.)алкил или (низш.)алкилалкокси), (низш.)алканоил, (низш.)алкилтио ((низш.)алкилтио-(низш.)алкил), сульфинил ((низш.)алкилсульфинил), сульфинил(низш.)алкил ((низш.)алкилсульфинил-(низш.)алкил), сульфонил ((низш.)алкилсульфонил), сульфонил(низш.)алкил ((низш.)алкилсульфонил-(низш.)алкил), перфтор (перфтор(низш.)алкил) и замещенную аминогруппу, такую как аминосульфонил ((низш.)алкиламиносульфонил) или аминокарбонил ((низш.)алкиламинокарбонил). Примеры замещенных (низш.)алкильных групп включают 2-гидроксиэтил, 3-оксобутил, цианметил и 2-нитропропил.

Понятие "(низш.)алкилтио" обозначает (низш.)алкильную группу, связанную с двухвалентным атомом серы, например, метилмеркапто- или изопропилмеркаптогруппу.

Понятие "циклоалкил" обозначает незамещенное или замещенное 3-7-членное карбациклическое кольцо. Заместителями, пригодными согласно настоящему изобретению, являются гидрокси, галоген, циано, (низш.)алкокси, (низш.)алканоил, (низш.)алкил, ароил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, арил, гетероарил и замещенная аминогруппа.

Понятие "(низш.)алкокси" обозначает (низш.)алкильную группу, как она определена выше, присоединенную через атом кислорода. Примерами являются метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси и т.п.

Понятие "(низш.)алкенил" обозначает неароматическую, частично ненасыщенную углеводородную цепь, содержащую по меньшей мере одну двойную связь, которая содержит предпочтительно 1-10 и более предпочтительно 1-6 атомов углерода. Группа может быть незамещена или замещена обычными заместителями, предпочтительно фтором. Примерами являются винил, аллил, диметилаллил, бутенил, изобутенил, пентенил.

Понятие "арил" обозначает моно- или бициклическую ароматическую группу, такую как фенил или нафтил, которая является незамещенной или может быть замещена обычными заместителями. Предпочтительными заместителями являются (низш.)алкил, (низш.)алкокси, гидрокси(низш.)алкил, гидрокси, гидроксиалкокси, галоген, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, циано, нитро, перфторалкил, алканоил, ароил, арил, алкинил, (низш.)алкинил, аминоалкилкарбонил (ариламинокарбонил) и (низш.)алканоиламино. Особенно предпочтительными заместителями являются (низш.)алкил, гидрокси и перфтор(низш.)алкил. Примерами арильных групп, которые могут использоваться согласно изобретению, являются фенил, паратолил, параметоксифенил, парахлорфенил, метагидроксифенил, метаметилтиофенил, 2-метил-5-нитрофенил, 2,6-дихлорфенил, 1-нафтил и т.п.

Понятие "арилалкил" обозначает (низш.)алкильную группу, как она определена выше, в которой один или несколько атомов водорода замещен(ы) арильной группой, как она определен выше. Согласно данному изобретению может быть использован любой пригодный арилалкил, такой как бензил и т.п. Аналогично этому понятие "гетероарилалкил" имеет те же значения, что и аралильная группа, за исключением того, что вместо арильной группы находится гетероарильная группа, как она определена ниже. Любая из этих групп может быть незамещенной или может быть замещена на кольце обычными заместителями.

Понятие "гетероарил" обозначает незамещенное или замещенное 5- или 6-членное моноциклическое гетероароматическое кольцо или 9- или 10-членное бициклическое гетероароматическое кольцо, содержащее 1, 2, 3 или 4 гетероатома, которые независимо друг от друга могут представлять собой N, S или О. Примерами гетероарильных колец являются пиридин, бензимидазол, индол, имидазол, тиофен, изохинолин, хинзолин и т.п. Заместители гетероарила включают заместители, указанные выше для "арила". Понятие "гетероароматическое кольцо" может использоваться взаимозаменяемо с понятием "гетероарил".

Понятие "(низш.)алкоксикарбонил" обозначает (низш.)алкоксигруппу, связанную с карбонильной группой. Примерами алкоксикарбонильных групп являются этоксикарбонил и т.п.

Понятие "(низш.)алкилкарбонилокси" обозначает (низш.)алкилкарбонилоксигруппы, связанные с атомом кислорода, например ацетоксигруппу.

Понятие "(низш.)алканоил" обозначает (низш.)алкильные группы, связанные с карбонильной группой, и включает в контексте вышеуказанных определений такие группы, как ацетил, пропионил и т.п. "(Низш.)алканоильные" группы могут быть незамещены или замещены обычными заместителями, такими как алкокси, (низш.)алкил, гидрокси, арил и гетероарил.

Понятие "(низш.)алкилкарбониламино" обозначает (низш.)алкилкарбонильные группы, связанные с атомом азота, такие как ацетиламино.

Понятие "ароил" обозначает моно- или бициклическую арильную или гетероарильную группу, связанную с карбонильной группой. Примерами ароильных групп являются бензоил, 3-цианбензоил, 2-нафтил и т.п. Ароильные группы могут быть незамещены или замещены обычными заместителями.

Понятие "арилокси" обозначает арильную группу, как она определена выше, связанную с атомом кислорода. Предпочтительной арилоксигруппой является феноксигруппа.

Понятие "электронодефицитный заместитель" обозначает заместитель на ароматическом или гетероароматическом кольце, который имеет положительное значение сигмы Хамметта, как это определено, например, у Jerry March, Advanced Organic Chemistry, 2-е изд., McGraw Hill, 1977, стр. 246-253. Типичными электроноакцепторными группам являются циано, нитро, хлор, алкоксикарбонил, (низш.)алкилсульфонил и аминокарбонил.

В соединении формулы I Y предпочтительно обозначает группу Y-1, в результате изобретение включает соединение формулы:

где X, R₂₂, R₂₃ и R₂₄ имеют указанные выше значения.

В группе Y-1 предпочтительно R₂₂ обозначает водород, галоген,

(низш.)алкил, перфторалкил (предпочтительно трифторметил), R₂₃ обозначает галоген, (низш.)алкил, перфторалкил (предпочтительно трифторметил), R₂₄ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси или галоген; более предпочтительно R₂₂ и R₂₃ обозначают (низш.)алкил, трифторметил или галоген, наиболее предпочтительно R₂₂ и R₂₃ обозначают (низш.)алкил или галоген и R₂₄ предпочтительно обозначает водород.

Предпочтительными группами Y-1, в которых R₂₃ обозначает (низш.)алкил или галоген, являются следующие

, , , , , , , ,. , , , ,. ,

Когда Y обозначает группу Y-2, то "Het" предпочтительно обозначает 6-членное гетеароматическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 гетероатома, представляющих собой N; более предпочтительно Y-2 обозначает:

Когда Y обозначает группу Y-3, то Q предпочтительно обозначает -(СН₂)_fО-, -(CH₂)_f S-, -(CH₂)_fN(R₂₇) или -(СН ₂)_f-, более предпочтительно -(СН₂ )_f-; более предпочтительно Y обозначает:

где Q имеет указанные выше значения и связь, обозначенная пунктирной линией, необязательно может быть гидрирована, предпочтительно Q обозначает (СН₂)_f, связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована, R₂₅ обозначает R ₂₆-(CH₂)_e-; е обозначает 0-4, предпочтительно 2-4, и R₂₆ обозначает азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор (низш.)алканоил, нитро, (низш.)алкилтио, фенил или фенил, замещенный алкоксигруппой или галогеном, предпочтительно азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор (низш.)алканоил, нитро или (низш.)алкилтио, или R ₂₆ обозначает группу формулы -NHR₂₉; где R ₂₉ обозначает (низш.)алканоил, (низш.)алкоксикарбонил или (низш.)алкиламинокарбонил.

Более предпочтительно Y-3 обозначает 4-5- или 4-6-членное циклоалкильное кольцо (Q обозначает (СН ₂)_f, f обозначает 1, 2 или 3), R₂₅ обозначает R₂₆-(СН₂)_e-; е обозначает 0-4, предпочтительно 2-4, и R₂₆ обозначает алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилтио, фенил или фенил, замещенный алкоксигруппой или галогеном, предпочтительно алкокси, (низш.)алкилсульфонил или (низш.)алкилтио, или R₂₆ обозначает -NHR₂₉ ; где R₂₉ обозначает (низш.)алканоил, (низш.)алкоксикарбонил или (низш.)алкиламинокарбонил, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована.

Наиболее предпочтительно Y-3 обозначает группу формулы

В группе Х-1 радикалы R₁₅ и R₁₆ предпочтительно обозначают водород, (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилтио или перфтор(низш.)алкил, более предпочтительно R₁₅ обозначает (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилсульфонил или перфтор(низш.)алкил, и R₁₆ обозначает водород, (низш.)алкил, нитро, галоген (особенно предпочтительно хлор или фтор), перфтор(низш.)алкил, (низш.)алкилтио или циано. В частности, R₁₅ обозначает (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилсульфонил, перфтор(низш.)алкил (особенно предпочтительно трифторметил) и R₁₆ находится в орто-положении и обозначает водород, (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилтио или перфтор(низш.)алкил (особенно предпочтительно трифторметил).

Особенно предпочтительно R₁₅ и R₁₆ независимо друг от друга обозначают хлор или фтор.

Особенно предпочтительными группами Х-1 являются группы формулы:

В группе Х-2 "Het" предпочтительно обозначает 5- или 6-членное моноциклическое гетеароматическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 атома азота или атом азота и серы, или атом азота и кислорода. Когда Het обозначает бициклическое гетероароматическое кольцо, то оно предпочтительно содержит в качестве гетероатомов 1-3 атома азота. R₁₅ предпочтительно обозначает нитро, (низш.)алкилсульфонил, циано, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, перфтор(низш.)алкил, (низш.)алкилтио, (низш.)алканоил или арил (особенно предпочтительно незамещенный фенил); R₁₆ предпочтительно обозначает водород, галоген, нитро, циано, (низш.)алкил, перфтор(низш.)алкил; и R₃₀, если присутствует, предпочтительно обозначает водород или (низш.)алкил.

Особенно предпочтительно в группе Х-2 "Het" обозначает 6-членное моноциклическое гетеароматическое кольцо, содержащее 1 или 2 атома азота, предпочтительно пиридин или пиримидин, или 10-членное бициклическое гетеароматическое кольцо, содержащее 1 атом азота, R₁₅ обозначает (низш.)алкил или перфтор(низш.)алкил и R₁₆ обозначает водород, (низш.)алкил или перфтор(низш.)алкил и R₃₀ отсутствует.

Особенно предпочтительными группами Х-2 являются группы формулы:

, , , и

В группе Х-3 R₁₈ предпочтительно обозначает фенил. R₁₉ предпочтительно обозначает (низш.)алкил, который может быть незамещен или замещен пиридилом или фенилом. R₂₀ предпочтительно обозначает замещенный или более предпочтительно незамещенный (низш.)алканоил, причем наиболее предпочтительным является ацетил.

В предпочтительном варианте осуществления R₁₈ обозначает фенил, R₁₉ обозначает (низш.)алкил, который может быть незамещен или замещен пиридилом или фенилом, и R₂₀ обозначает (низш.)алканоил. В другом варианте осуществления Х-3 R₁₈ обозначает фенил, который может быть незамещен или замещен галогеном или (низш.)алкоксигруппой, R₁₉ обозначает фенил (низш.)алкил, который может быть незамещен или замещен (низш.)алкоксигруппой, пиридил(низш.)алкилом или (низш.)алкилом; и R₂₀ обозначает замещенный или более предпочтительно незамещенный (низш.)алканоил, причем наиболее предпочтительным является ацетил.

Особенно предпочтительными группами Х-3 являются группы формулы:

, , ,

, , , , , , , ,

Соединения по изобретению могут существовать в форме стереоизомеров и диастереоизомеров, при этом все они подпадают под объем настоящего изобретения.

В приведенных ниже вариантах осуществления приведены конкретные варианты соединений формулы I.

1.1. Одним из вариантов осуществления является указанное выше соединение формулы I, где Х обозначает группу формулы

и Y, R₁₅ и R₁₆ имеют указанные выше значения, в частности R₁₅ обозначает (низш.)алкил, нитро, галоген, перфторметил или циано и R₁₆ обозначает водород, (низш.)алкил, нитро, галоген, перфторметил или циано; особенно предпочтительно R₁₅ и R₁₆ независимо друг от друга обозначают хлор или фтор, особенно предпочтительно, где Х-1 выбирают из группы

1.2. Другим вариантом осуществления является соединение формулы I, где Х обозначает группу формулы Х-2

и р, Y, R₁₅, R₁₆ и R₃₀ имеют указанные выше значения, в частности, Het обозначает 5- или 6-членное моноциклическое гетеароматическое кольцо, содержащее 1, 2 или 3 атома азота или атом азота и серы, или атом азота и кислорода, или Het обозначает бициклическое гетероароматическое кольцо, содержащее 1-3 атома азота, наиболее предпочтительно R₁₅ обозначает нитро, (низш.)алкилсульфонил, циано, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, перфтор(низш.)алкил, (низш.)алкилтио, (низш.)алканоил или арил (особенно предпочтительно незамещенный фенил), в частности R₁₅ обозначает незамещенный фенил, и R₁₆ обозначает водород, галоген, нитро, циано, (низш.)алкил, перфтор(низш.)алкил; и R₃₀ обозначает водород или (низш.)алкил.

В этом варианте осуществления в другом конкретном случае Het обозначает 6-членное моноциклическое гетеароматическое кольцо, содержащее 1 или 2 атома азота, или 10-членное биклическое гетеароматическое кольцо, содержащее 1 атом азота, R₁₅ обозначает (низш.)алкил или перфторалкил и R₁₆ обозначает водород, (низш.)алкил или перфторалкил и R₃₀ отсутствует.

Особенно предпочтительно Х-2 выбирают из группы

, , , и

1.3. Следующим вариантом осуществления является соединение формулы I, где Х обозначает группу формулы

где Y, R₁₈, R₁₉ и R₂₀ имеют указанные выше значения, особенно предпочтительно R ₁₈ обозначает фенил, и особенно предпочтительно R₁₀ обозначает (низш.)алкил, который может быть незамещен или замещен пиридилом или фенилом, и особенно предпочтительно R₂₀ обозначает незамещенный или замещенный (низш.)алканоил.

Согласно особенно предпочтительным вариантам R₁₈ обозначает фенил, R₁₉ обозначает (низш.)алкил, который может быть незамещен или замещен пиридилом или фенилом, и R ₂₀ обозначает (низш.)алканоил или R₁₈ обозначает фенил, который может быть незамещен или замещен галогеном или (низш.)алкоксигруппой, R₁₉ обозначает фенил(низш.)алкил, который может быть незамещен или замещен (низш.)алкоксигруппой, пиридил(низш.)алкилом или (низш.)алкилом, и R₂₀ обозначает замещенный или незамещенный (низш.)алканоил; причем наиболее предпочтительно Х-3 выбирают из групп

, , ,

, , , , , ,

, ,

1.4. Еще одним вариантом осуществления является соединение формулы I, где Y обозначает группу формулы

и X, R₂₂, R₂₃ и R₂₄ имеют указанные выше значения, особенно предпочтительно R₃₀ обозначает водород, (низш.)алкил, трифторметил или галоген, R₂₃ обозначает (низш.)алкил, трифторметил или галоген, и R₂₄ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси или галоген; более предпочтительно R₂₂ и R₂₃ обозначают (низш.)алкил, трифторметил или галоген и R ₂₄ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси или галоген, особенно предпочтительно Y-1 выбирают из группы

, , , , , , , ,. , , , . , , и

1.5. Следующим вариантом осуществления является соединение формулы I, где Y обозначает группу формулы Y-2

где р, X, Het, R₃₀ и R₃₁ имеют указанные выше значения, особенно предпочтительно Het обозначает 6-членное гетероароматическое кольцо, особенно предпочтительно в котором гетероатом обозначает N. Наиболее предпочтительно Y-2 выбирают из группы

, , и .

1.6. Следующим вариантом осуществления является соединение формулы I, где Y обозначает группу формулы Y-3

где Y, R₂₅ и Q имеют указанные выше значения, и связь, обозначенная пунктирной линией, необязательно может быть гидрирована, особенно предпочтительно Y выбирают из группы формул:

, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , и

1.7. Согласно другим вариантам осуществления в соединениях формулы I, как это было указано ранее, Х обозначает группу формулы Х-1 и Y обозначает группу формулы Y-1, Y-2 или Y-3; или Х обозначает группу формулы Х-2 и Y обозначает группу формулы Y-1, Y-2 или Y-3; или Х обозначает группу формулы Х-3 и Y обозначает группу формулы Y-1, Y-2 или Y-3, где Х-1, Х-2, X-3, Y-1, Y-2 и Y-3 имеют значения, указанные в любом из перечисленных выше вариантов осуществления.

Согласно одному из вариантов осуществления предпочтительным является соединение формулы I, где Х обозначает группу формулы Х-1

где R₁₆ находится в орто-положении и обозначает водород, (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилтио, перфтор(низш.)алкил и R₁₅ обозначает (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилсульфонил, перфтор(низш.)алкил и Y обозначает группу формулы Y-1

где R₂₂ обозначает водород, галоген, трифторалкил или (низш.)алкил и R₂₃ обозначает галоген, трифторалкил или (низш.)алкил и R₂₄ обозначает водород или Y обозначает группу формулы

где Q имеет указанные выше значения и связь, обозначенная пунктирной линией, необязательно может быть гидрирована, R ₂₅ обозначает R₂₆-(CH₂)_e -; e обозначает 2-4 и R₂₆ обозначает азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор(низш.)алканоил, нитро или (низш.)алкилтио, или R₂₅ обозначает группу формулы -NHR₂₉, где R₂₉ обозначает (низш.)алканоил или (низш.)алкиламинокарбонил; особенно предпочтительно, где Х обозначает группу формулы Х-1

где R₁₆ находится в орто-положении и обозначает водород, (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилтио, перфтор(низш.)алкил и R₁₅ обозначает (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилсульфонил, перфтор(низш.)алкил; и Y обозначает группу формулы Y-1

где R₂₂ обозначает водород, галоген или (низш.)алкил и R₂₃ обозначает галоген или (низш.)алкил и R ₂₄ обозначает водород; особенно предпочтительно R₁₆ обозначает водород или галоген и R₁₅ обозначает галоген, R₂₂ обозначает водород, галоген, этил или метил и R₂₃ обозначает галоген этил или метил; наиболее предпочтительно R₁₅ находится в орто-положении и R ₁₅ и R₁₆ оба обозначают хлор, и R₂₂ обозначает метил, и R₂₃ обозначает хлор или этил; наиболее предпочтительным является такое соединение, как 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин;

или более предпочтительно, когда Х обозначает группу формулы Х-1

где R₂ находится в орто-положении и обозначает водород, (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилтио, перфтор(низш.)алкил и R₁₅ обозначает (низш.)алкил, нитро, циано, галоген, (низш.)алкилсульфонил, перфтор(низш.)алкил; и Y обозначает группу формулы Y-3

которая представляет собой 4-6-членное циклоалкильное кольцо, R₂₅ обозначает R₂₆-(CH₂ )_e-; е обозначает 2-4, и R₂₆ обозначает азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алканоил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил, перфтор (низш.)алканоил, нитро или (низш.)алкилтио, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована; особенно предпочтительно R₁₆ обозначает галоген и R₁₅ обозначает водород или галоген; Y-3 обозначает 5-6-членное кольцо и R ₂₆ обозначает (низш.)алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил или (низш.)алкилтио; более предпочтительно R₁₅ находится в орто-положении и R₁₅ и R₁₆ оба обозначают хлор, и R₂₆ обозначает (низш.)алкилсульфонил или (низш.)алкилтио; наиболее предпочтительным является такое соединение, как 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил] амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин;

или более предпочтительно, когда Х обозначает группу формулы Х-1

где R₁₆ обозначает водород или галоген и R ₁₅ обозначает галоген и Y обозначает группу формулы Y-1

где R₂₂ обозначает водород, галоген, этил или метил и R₂₃ обозначает галоген, этил или метил и R ₂₄ обозначает водород, или Y обозначает группу формулы Y-3

где Y-3 обозначает 4-5-членное кольцо и R₂₅ обозначает R₂₆-(CH₂)_e-; e обозначает 2-4, и R₂₆ обозначает (низш.)алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилсульфинил или (низш.)алкилтио, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована, особенно предпочтительно R ₁₅ находится в орто-положении и R₁₅ и R ₁₆ оба обозначают хлор, и когда Y обозначает Y-1, то R ₂₂ обозначает метил и R₂₃ обозначает хлор или этил, и когда Y обозначает Y-3, то Y-3 обозначает 4-5-членное кольцо и R₂₆ обозначает (низш.)алкилсульфонил или (низш.)алкилтио.

Согласно другому варианту осуществления соединений формулы I, Y имеет значения, указанные для формулы I, и Х обозначает Х-1

где R₁₅ находится в орто-положении и обозначает галоген, (низш.)алкил или перфторалкил и R₁₆ обозначает водород, галоген, (низш.)алкил или перфторалкил; особенно предпочтительно R₁₅ обозначает хлор и R₁₆ обозначает водород или хлор.

В этом варианте осуществления Y предпочтительно обозначает Y-1

где R₂₂ обозначает водород или (низш.)алкил, R₂₃ обозначает галоген, (низш.)алкил или перфторалкил и R₂₄ обозначает водород; особенно предпочтительно R₁₅ обозначает хлор и R₁₆ обозначает водород или хлор; наиболее предпочтительными являются такие соединение, как 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-бромфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин; 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил])-L-фенилаланин; 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-фторфенил)тиоксометил])-L-фенилаланин или 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил] -L-фенилаланин.

В альтернативном случае этого варианта осуществления Y обозначает группу формулы Y-3

которая представляет собой 4-6-членное циклоалкильное кольцо, R₂₅ обозначает R₂₆-(CH₂ )_e-; e обозначает 2-4 и R₂₆ обозначает алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилтио; предпочтительно R₂₆ обозначает метокси, метилсульфонил или метилтио, или NHR₂₉, где R₂₉ обозначает (низш.)алкоксикарбонил или (низш.)алкиламинокарбонил, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована; наиболее предпочтительными являются соединения, выбранные из ряда, включающего 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[2-(ацетиламино)этил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин; [[1-[2-[[(метиламино)карбонил]амино]этил]циклопентил]тиоксометил]-4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-L-фенилаланин; 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин; 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин; 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(3-метилтио)пропил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин или 4-[[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[[1-[(3-метилсульфонил)пропил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин.

Согласно следующему варианту осуществления соединения формулы I, Y имеет значения, указанные для формулы I, и Х обозначает Х-2

где Het обозначает пиридин или пиримидин и R₁₅ обозначает (низш.)алкил или перфторалкил и R₁₆, и R₂₀ обозначают водород, (низш.)алкил или перфторалкил.

Согласно этому варианту Y предпочтительно обозначает Y-1

где R₂₂ обозначает водород или (низш.)алкил, R₂₃ обозначает галоген, (низш.)алкил или перфторалкил и R₂₄ обозначает водород.

В альтернативном случае в этом варианте осуществления Y обозначает группу формулы Y-3

которая представляет собой 4-6-членное циклоалкильное кольцо, R₂₅ обозначает R₂₆-(CH-₂ )_e-; e обозначает 2-4 и R₂₆ обозначает алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилтио; предпочтительно метокси, метилсульфонил или метилтио, или NHR₂₉, где R₂₉ обозначает (низш.)алкоксикарбонил или или (низш.)алкиламинокарбонил, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована; наиболее предпочтительными являются соединения, выбранные из ряда, включающего 4-[(2,6-диметил-3-пиридинилкарбонил)амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин; 4-[[[4-(трифторметил)-5-пиримидинил]карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин или 4-[[(2,4-диметил)-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]амино]-N-[[1-[(4-метилсульфонил)бутил]циклобутил]тиоксометил]-L-фенилаланин.

Согласно еще одному варианту осуществления соединения формулы I Y имеет значения, указанные для формулы I, и Х обозначает Х-3

где R₁₉ обозначает пиридинил(низш.)алкил или фенил (низш.)алкил, R₂₀ обозначает (низш.)алканоил и R₁₈ обозначает фенил.

В частности, в этом варианте осуществления Y обозначает Y-1

где R₂₂ обозначает водород или (низш.)алкил, R₂₃ обозначает галоген, (низш.)алкил или перфторалкил и R₂₄ обозначает водород; наиболее предпочтительным является такое соединение, как 4-[(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-пиридинил) метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил]-N-[(2-этил-6-метилфенил) тиоксометил]-L-фенилаланин.

В альтернативном случае в этом варианте осуществления Y обозначает группу формулы Y-3

которая представляет собой 4-6-членное циклоалкильное кольцо, R₂₅ обозначает R₂₆-(CH-₂ )_e-; e обозначает 2-4 и R₂₆ обозначает алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилтио; предпочтительно метокси, метилсульфонил или метилтио, или R₂₅ обозначает NHR₂₉, где R₂₉ обозначает (низш.)алкоксикарбонил или (низш.)алкиламинокарбонил, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована; наиболее предпочтительными являются соединения, выбранные из ряда, включающего 4-[(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-фенил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил]-N-[[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин или 4-[(2R,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-фенил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил]-N-[[(4-метилсульфонил)бутил]циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланин.

Согласно следующему варианту осуществления соединения формулы I, X имеет значения, указанные для формулы I, и Y обозначает группу формулы Y-1

где R₂₂ обозначает водород или (низш.)алкил, R₂₃ обозначает галоген, (низш.)алкил или перфторалкил и R₂₄ обозначает водород, предпочтительно R₂₂ обозначает водород или метил и R₂₃ обозначает галоген, этил или трифторметил.

Другими предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых Х имеет значения, указанные для формулы I, и Y обозначает группу формулы Y-3

которая представляет собой 4-6-членное циклоалкильное кольцо, R₂₅ обозначает R₂₆-(CH-₂ )_e-; e обозначает 2-4 и R₂₆ обозначает алкокси, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алкилтио; предпочтительно метокси, метилсульфонил или метилтио, или R₂₅ обозначает NHR₂₉, где R₂₉ обозначает (низш.)алкоксикарбонил или (низш.)алкиламинокарбонил, и связь, обозначенная пунктирной линией, гидрирована.

Соединения по изобретению ингибируют связывание VCAM-1 и фибронектина с VLA-4 на поверхности находящихся в кровотоке лимфоцитов, эозинофилов, базофилов и моноцитов ("экспрессирующие VLA-4 клетки"). Известно, что связывание VCAM-1 и фибронектина с VLA-4 на таких клетках обусловливают определенные болезненные состояния, такие как ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, и в частности, к связыванию эозинофилов с эндотелием легких, что вызывает легочное воспаление, происходящее при астме. Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут применяться в качестве лекарственных средств для лечения ревматоидного артрита, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника и особенно астмы.

Поскольку соединения по изобретению обладают способностью ингибировать связывание VCAM-1 и фибронектина с VLA-4 на находящихся в кровотоке лимфоцитах, эозинофилах, базофилах и моноцитах, то соединения могут применяться в качестве лекарственных средств для лечения болезней, в отношении которых известно, что они опосредуются таким связыванием. Примерами таких болезней являются ревматоидный артрит, рассеянный склероз, астма и воспалительное заболевание кишечника. Соединения по изобретению предпочтительно используют для лечения болезней, которые сопровождаются легочным воспалением, таких как астма. Легочное воспаление, возникающее при астме, связано с инфильтрацией эозинофилов в легкие, при этом эозинофилы связываются с эндотелием, который был активирован определенными вызывающими астму условиями или веществом.

Кроме того, соединения по изобретению также ингибируют связывание VCAM-1 и MAdCAM с клеточным рецептором 4-7, также известным как LPAM, который экспрессируется на поверхности лимфоцитов, эозинофилов и Т-клеток. Хотя точная роль взаимодействия 4-7 с различными лигандами при воспалительных состояниях, таких как астма, не полностью выявлена, соединения по изобретению, которые ингибируют связывание как 4-1-, так и 4-7- рецепторов, оказываются особенно эффективными в отношении астмы при ее моделировании на животных. Кроме того, исследования, проведенные с моноклональными антителами к 4-7, позволили установить, что соединения, которые ингибируют связывание 4-7 с MAdCAM или VCAM, могут применяться для лечения воспалительного заболевания кишечника. Они также могут применяться для лечения других болезней, при которых такое связывание является причиной болезненного нарушения или симптомов болезни.

Соединения по изобретению могут вводиться перорально, ректально или парентерально, например, внутривенно, внутримышечно, подкожно, подоболочечно или трансдермально; или подъязычно, или в виде офтальмологических препаратов, или в виде аэрозоля для лечения легочного воспаления. Примерами форм, предназначенных для введения, являются капсулы, таблетки, суспензии или растворы для перорального введения, суппозитории, растворы для инъекций, глазные капли, мази или распыляемые растворы.

Предпочтительными формами введения являются внутривенное, внутримышечное, пероральное введение или введение путем ингаляции. Дозы, в которых следует вводить соединения по изобретению для обеспечения их эффективных количеств, зависят от природы конкретного действующего вещества, возраста и индивидуальных особенностей пациента и от пути введения. Дозы могут быть определены любыми общепринятыми методами, например, с помощью клинических испытаний по определению предельной дозы. Таким образом, под объем изобретения подпадает способ лечения хозяина, страдающего от болезни, при которой связывание VCAM-1 или фибронектина с клетками, экспрессирующими VLA-4, является фактором, обусловливающим появления симптомов болезни или нарушений, связанных с болезнью, путем введения количества соединения по изобретению, достаточного для ингибирования связывания VCAM-1 или фибронектина с клетками, экспрессирующими VLA-4, в такой степени, чтобы уменьшились эти симптомы или эти нарушения. В целом предпочтительными являются дозы, составляющие приблизительно 0,1-100 мг/кг веса тела в день, при этом дозы, составляющие 1-25 мг/кг веса тела в день, являются особенно предпочтительными, а дозы, составляющие 1-10 мг/кг веса тела в день, являются наиболее предпочтительными.

Кроме того, следующим объектом изобретения являются фармацевтические композиции, которые содержат фармацевтически эффективное количество соединения по изобретению, включая его соли и сложные эфиры, и фармацевтически приемлемый носитель. Такие композиции могут быть приготовлены любыми общепринятыми методами. В этой связи еще одним объектом настоящего изобретения является способ приготовления фармацевтической композиции, прежде всего, фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или профилактики ревматоидного артрита, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника и астмы, которая содержит одно или несколько соединений по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир и при необходимости одно или несколько других терапевтически ценных веществ в предназначенной для введения галеновой форме в сочетании с совместимым фармацевтическим носителем. Таблетки или гранулы могут содержать ряд связующих веществ, наполнителей, носителей или разбавителей. Жидкие композиции могут находиться, например, в форме стерильного смешивающегося с водой раствора. Капсулы в дополнение к действующему веществу могут содержать наполнитель или загуститель. Кроме того, также могут присутствовать добавки, улучшающие вкус, а также вещества, обычно применяемые в качестве консервантов, стабилизаторов, удерживающих влагу агентов и эмульгаторов, а также соли для изменения осмотического давления, буферы и другие добавки.

Указанные выше носители и разбавители могут представлять собой любые общепринятые фармацевтически приемлемые органические или неорганические вещества, например воду, желатин, лактозу, крахмал, стеарат магния, тальк, гуммиарабик, полиалкиленгликоли и т.п.

Стандартные дозируемые формы, предназначенные для перорального введения, такие как таблетки и капсулы, предпочтительно содержат от 25 мг, до 1000 мг соединения по изобретению.

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены любыми общепринятыми методами. Согласно реакционной схеме 1 4-нитро-L-фенилаланиновое производное формулы 1, в котором R₁ обозначает (низш.)алкил и которое представляет собой известное соединение или легко может быть получено известными методами, ацилируют с помощью производного бензойной кислоты формулы 2, в котором R₂ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, циклоалкил, арил, арилалкил, нитро, циано, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфинил, (низш.)алкилсульфонил, (низш.)алканоил, галоген или перфтор(низш.)алкил, R₃ обозначает водород, галоген или (низш.)алкил и R₄ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси, арил, нитро, циано, (низш.)алкилсульфонил или галоген, с использованием обычных методов образования амидной связи. Например, соединение формулы 2 может быть превращено в соответствующий хлорангидрид и сконденсировано с соединением формулы 1 в присутствии акцептора протонов, такого как третичный алкиламин. В альтернативном варианте соединение формулы 1 может быть подвергнуто сочетанию с карбоновой кислотой формулы 2 в стандартных условиях пептидного сочетания, например с использованием ГБТУ в присутствии ДИПЭА в полярном апротонном растворителе, таком как ДМФ, при температуре от 0°С до комнатной с получением соединения формулы 3.

Превращение соединения формулы 3 в соответствующий тиоамид формулы 4 может быть осуществлено обработкой реагентом Лавессона, т.е. [2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфидом]. Процедура является стандартной и подробно описана в литературе (см., например, Scheibey S., Pederson B.S., Lawwesson S.O., Bull. Soc. Chim. Belg. 87, 229, 1978 и Cava М.Р., Levinson M.I., Tetraherdon, 41, 5061, 1985). Нитрогруппа соединения формулы 4 может быть восстановлена с получением соответствующего амина с помощью любых общепринятых методов, пригодных для восстановления тиоамидов. В одном из общепринятых методов в качестве восстановителя применяется порошкообразный цинк в присутствии метанола, хлорида аммония и воды при температуре от 35 до 60°С с получением соединения формулы 5. Ацилирование этого соединения с помощью арил- или гетероарилкарбоновой кислоты формулы 6 в стандартных условиях пептидного сочетания, например с использованием ГБТУ в присутствии ДИПЭА в полярном апротонном растворителе, таком как ДМФ, при температуре от 0°С до комнатной, позволяет получить соединение формулы 7. В некоторых случаях, например, при использовании несвободных карбоновых кислот формулы 6, может оказаться целесообразным получать соответствующий ангидрид кислоты и подвергать его взаимодействию с амином формулы 5, как правило, в присутствии небольшого избытка основания, такого как третичный амин или 4-(диметиламино) пиридин. Карбоновая кислота формулы 6 может быть замещена галогеном, нитрогруппой, (низш.)алкилсульфонилом, цианогруппой, (низш.)алкилом, (низш.)алкоксигруппой, (низш.)алкоксикарбонилом, карбоксигруппой, (низш.)алкиламиносульфонилом, перфтор(низш.)алкилом, (низш.)алкилтиогруппой, гидрокси(низш.)алкилом, алкокси(низш.)алкилом, алкилтио(низш.)алкилом, алкилсульфинил(низш.)алкилом, алкилсульфонил(низш.)алкилом, (низш.)алкилсульфинилом, (низш.)алканоилом, ароилом, арилом, арилоксигруппой. При необходимости также могут быть включены соответствующим образом защищенные реакционноспособные функциональные группы, которые должны быть удалены при осуществлении окончательного превращения в соединения по изобретению. Выбор и применение таких групп хорошо известно специалистам в данной области. Рекомендации по выбору и применению защитных групп можно найти в таких известных руководствах, как, например: "T.W. Green и P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2-e изд., Wiley Interscience, New York, 1991". Сложноэфирный фрагмент соединения формулы 7, как правило, может быть расщеплен с получением соответствующей карбоновой кислоты обработкой гидроксидом щелочного металла, например гидроксидом лития, в водном метаноле при температуре от комнатной до 50°С. В зависимости от природы R₁ предпочтительными могут быть другие методы. Выбор условий расщепления сложноэфирной связи в присутствии функциональных групп, таких как тиоамиды, хорошо известен специалистам в данной области.

Орто-замещенные производные бензойной кислоты, которые не поступают в продажу, могут быть получены общепринятыми методами. Например, орто-замещенные арилйодиды или трифлаты могут быть карбонилированы в присутствии монооксида углерода и пригодного палладиевого катализатора. Получение таких йодидов или трифлатов в качестве промежуточных продуктов зависит от конкретной требуемой схемы замещения, и они могут быть получены непосредственным йодированием или диазотизацией анилина с последующей обработкой источником йодида, например йодида калия. Трифлаты могут быть получены из соответствующих фенолов общепринятыми методами, такими как обработка трифторметансульфоновым ангидридом в присутствии основания, такого как триэтиламин или диизопропилэтиламин, в инертном растворителе. Другие методы получения орто-замещенных бензойных кислот включают обработку 2-метоксифенилоксазолинового производного, такого как соединение формулы 9, алкилом реагента Гриньяра с последующим гидролизом оксазолинового кольца согласно общей процедуре, описанной у Meyers A.I., Gabel R., Mihelick E.D., в J. Org. Chem. 1978, 43, 1372-1379, с получением соединения формулы 10. 2- или 2,6-дизамещенные бензонитрилы также могут служить в качестве пригодных предшественников соответствующих бензойных кислот. В случае несвободных (трудно поддающихся обработке) нитрилов, например, 2-хлор-6-метилбензонитрила, обычный гидролиз в кислых или основных условиях затруднен и лучшие результаты получают с помощью восстановления с использованием ДИБАЛ до соответствующего бензальдегида с последующим окислением с использованием в качестве окислителя хлорита натрия/перекиси водорода.

Применение методов, в целом аналогичных описанным на схеме 1, с использованием гетероароматической карбоновой кислоты вместо соединения формулы 2 позволяет получить соединения формулы 11.

Для синтеза аналогов с разветвленной цепью или с циклоалкильным фрагментом может применяться метод, аналогичный описанному на схеме 1, с использованием в качестве исходного продукта соответствующей карбоновой кислоты с разветвленной цепью или циклоалкилкарбоновой кислоты формулы 12. В этом случае R₆ обозначает (низш.)алкил, незамещенный или замещенный фтором (низш.)алкенил или замещенную (низш.)алкильную группу, где заместители могут быть выбраны из ряда, включающего арил, гетероарил, азидо, циано, гидрокси, (низш.)алкокси, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алкилтио, (низш.)алкилсульфонил, перфтор(низш.)алканоил, нитро или защищенную аминогруппу. Должна быть выбрана аминозащитная группа, совместимая с реагентами, необходимыми для превращения карбоксамидов в тиоамиды. Приемлемыми являются карбаматы, например, трет-бутоксикарбонильный фрагмент. При необходимости эти защитные группы могут быть удалены общепринятыми методами на более поздних стадиях синтеза и в полученный в результате свободный амин с использованием стандартных методов могут быть введены другие функциональные группы. Например, амин может быть ацилирован обработкой соответствующим ангидридом, изоцианатом или хлорангидридом.

Синтез имидазолидинонов формулы 21 представлен на реакционной схеме 3.

Аминофенилаланиновое производное структурной формулы 13, в котором R₆ обозначает арил, гетероарил, разветвленную алкильную цепь или производное соединения 12, и R₇ обозначает (низш.)алкил, подвергают сочетанию с N-защищенной -аминокислотой формулы 14, в которой R₈ может представлять собой природную или синтетическую боковую цепь D- или L--аминокислоты, и R₉ обозначает N-защитную группу, обычно применяемую в химии пептидов, типа, например, Fmoc-группы, с помощью стандартных условий пептидного сочетания, например, с использованием ГБТУ в присутствии ДИПЭА в полярном апротонном растворителе, таком как ДМФ, при температуре от 0°С до комнатной, с получением соединения формулы 15. В зависимости от природы защитной группы R₉ для получения соединения формулы 16 применяют соответствующий метод удаления защитной группы. В случае, когда защитная группа R₉ представляет собой группу Fmoc, она может быть удалена из соединения формулы 15 с помощью обычной обработки основанием, хорошо известной специалисту в области химии пептидов, например, пиперидином в ДМФ, с получением амина формулы 16. Затем соединение формулы 16 подвергают взаимодействию с альдегидом формулы 17, в котором R₁₀ обозначает (низш.)алкил, арил или арил(низш.)алкил, в присутствии акцептора воды, такого как молекулярные сита размером в соответствующем растворителе, таком как дихлорметан или ТГФ, при температуре 25-60°С с получением имина формулы 18. Имин формулы 18 затем может быть обработан ацилирующим агентом, таким как ацилхлорид формулы 19, в котором R₁₁ может обозначать алкильную или арильную группу, в присутствии основания, такого как ДИПЭА или ДБУ, в соответстсвующем растворителе, таком как дихлорметан или ТГФ, при температуре 25-60°С с получением ацилимидазолидинона формулы 20. В альтернативном варианте в этой реакции могут использоваться другие реакционноспособные ацилирующие группы, такие как ангидриды кислот или смешанные ангидриды. Соединение формулы 20 может быть превращего в соединение по изобретению с помощью обычного метода гидролиза, например, гидролизом путем обработки гидроксидом щелочного металла, таким как гидроксид натрия, в водном растворе спирта с получением после подкисления карбоновой кислоты формулы 21.

Общие примечания. Температуры плавления определяли с помощью прибора Thomas-Hoover, и они являются нескорректированными. Оптические вращения определяли с помощью поляриметра, модель 241 фирмы Perkin-Elmer. ¹Н-ЯМР-спектры регистрировали с помощью спектрометров типа Varian XL-200 и Unityplus 400 МГц с использованием тетраметилсилана (ТМС) в качестве внутреннего стандарта. Масс-спектры с использованием электронного удара (ЭУ, 70 эВ) и бомбардировки ускоренными атомами (БУА) получали с помощью масс-спектрометров типа VG Autospec или VG 70E-HF. Используемый для хроматографии на колонках силикагель представлял собой силикагель для экспресс-хроматографии типа Mallinkrodt SiliCar с размером частиц 230-400 меш; погоны на колонках проводили при избыточном давлении азота 0-5 фунтов/кв. дюйм для улучшения потока. Тонкослойные хроматограммы получали на стеклянных пластинах для тонкослойной хроматографии, покрытих силикагелем, поставляемым Е. Мегск (Е. Мегск №1.05719), и визуализировали в УФ-свете с длиной волны 254 нм в камере для визуализации путем выдерживания в атмосфере паров I₂ или путем опрыскивания либо фосфомолибденовой кислотой (ФМК) в водном растворе этанола, либо 4,4'-тетраметилдиаминдифенилметановым реагентом после обработки Сl₂ согласно методу, описанному Е. Von Arx, M. Faupel и М. Brugger в J. Chromatography, 1976, 120, 224-228.

Жидкостную хроматографию высокого давления с обращенной фазой (ОФ-ЖХВД) осуществляли либо с помощью хроматографа типа Waters Delta Prep 4000, снабженного С-18-колонкой 3×30 см с сорбентом типа Waters Delta Pak, 15 мкМ, при скорости потока 40 мл/мин с использованием градиента ацетонитрил:вода (каждый компонент содержал 0,75% ТФК), как правило, с повышением концентрации ацетонитрила с 5 до 95% в течение 35-40 мин, либо с помощью хроматографа типа Rainin HPLC, снабженного С-18-колонкой 41,4×300 мм с сорбентом типа Dynamax, 8 мкМ, при скорости потока 49 мл/мин с использованием такого же градиента ацетонитрил:вода, что и указанный выше.

Условия проведения ЖХВР обычно указывают в формате типа (5-95-35-214); это означает линейный градиент от 5% до 95% ацетонитрила в воде в течение 35 мин, при этом элюент анализируется с помощью УФ-детектора при длине волны 214 нм.

Метиленхлорид (дихлорметан), 2-пропанол, ДМФ, ТГФ, толуол, гексан, диэтиловый эфир и метанол имели чистоту, соответствующую необходимой для реактивов чистоте по Фишеру, и их, если не указано иное, использовали без дополнительной очистки, ацетонитрил имел чистоту, соответствующую чистоте по Фишеру, необходимой ЖХВД, и применялся без дополнительной очистки.

Определения:

ТГФ означает тетрагидрофуран,

ДМФ означает N,N-диметилформамид,

ГОБТ означает 1-гидроксибензотриазол,

БОФ означает [(бензотриазол-1-ил)окси]трис(диметиламино)фосфонийгексафторфосфат,

ГАТУ означает О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуронийгексафторфосфат,

ГБТУ означает O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилуронийгексафторфосфат,

ДИПЭА означает диизопропилэтиламин,

ДМАП означает 4-(N,N-диметиламино)пиридин,

ДФФА означает дифенилфосфорилазид,

ДФФП означает 1,3-бис(дифенилфосфино)пропан,

ДБУ означает 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен,

NaH означает гидрид натрия, рассол представляет собой насыщенный водный раствор хлорида натрия,

ТСХ означает тонкослойную хроматографию,

ДАЛ означает диизопропиламид лития,

БОФ-С1 означает хлорид бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфина,

N-МП означает N-метилпирролидон,

реактив Ловесона представляет собой 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид.

Примеры

Пример 1. Метиловый эфир N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

В раствор 4,30 г (11,4 ммоля) метилового эфира {[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в 20 мл толуола вводили 2,60 г (6,27 ммоля) реактива Ловесона. Образовавшуюся смесь нагревали до 50°С и перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через воронку с фильтром из спеченного стекла и под вакуумом концентрировали фильтрат. В результате очистки экспресс-хроматографией в колонке с элюированием гексаном/этилацетатом (в соотношении 9/1, затем 8/1) в виде светло-желтого масла получали 2,44 г (выход: 54% и 70% в пересчете на выделенный исходный материал) метилового эфира N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 395,1639; рассч.масса - 395,1640 (М+Н).

Пример 2. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-метоксиэтил) циклопентил] тиоксометил} -L-фенилаланина

В суспензию 4,58 г (11,6 ммоля) метилового эфира N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина, 7,50 г (116 молей) цинковой пыли и 9,20 г (174 ммоля) хлорида аммония в 200 мл метанола медленно, в течение 5 мин вводили 100 мл Н₂О. После перемешивания в течение 20 мин реакционную смесь разбавляли 400 мл этилацетата и 150 мл насыщенного раствора хлорида аммония и отделяли органический слой. Водный слой подвергали обратной экстракции 3 порциями по 100 мл этилацетата и органические слои объединяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали. Продукт в виде масла в течение 2 ч сушили под высоким вакуумом с получением 4,5 г сырого метилового эфира 4-амино-N-{[1(2-метоксиэтил)циклопентил] тиоксометил}-L-фенилаланина.

В раствор 3,40 г (~8,77 ммоля в пересчете на 94%-ную степень чистоты) сырого амина, полученного по вышеизложенному, и 1,70 мл (9,65 ммоля) диизопропилэтиламина в 15 мл СН₂Сl ₂ вводили раствор 1,9 мл (9,21 ммоля) 2,6-дихлорбензоилхлорида в 5 мл CH₂Cl₂. Образовавшуюся смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь под вакуумом концентрировали и переносили в делительную воронку, содержавшую 150 мл этилацетата и 40 мл воды. Водный слой отделяли и подвергали обратной экстракции 1 порцией в 50 мл этилацетата. Объединенный органический слой промывали насыщенным раствором Na₂CO₃, а затем насыщенным рассолом, сушили над MgSO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали. В результате очистки экспресс-хроматографией в колонке на силикагеле с элюированием гексаном/этилацетатом (в соотношении 3/1) получали 4,50 г (выход: 95%) метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 559,1201; рассч.масса - 559,1201 (M+Na).

Пример 3. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил] тиоксометил}-L-фенилаланин

В раствор 4,00 г (7,44 ммоля) метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил]-L-фенилаланина в 18 мл МеОН вводили раствор 421 мг (10,5 ммоля) NaOH в 3 мл воды. Смесь перемешивали в течение 2 ч, а затем подкисляли 0,5 М НСl (до рН ~ от 1 до 2). Реакционную смесь выливали в делительную воронку, содержавшую 150 мл этилацетата и 25 мл воды. Водный слой отделяли и подвергали обратной экстракции 2 порциями по 50 мл этилацетата. Объединенный органический слой промывали насыщенным рассолом, сушили над MgSO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали. В результате очистки ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) с обращенной фазой с использованием ацетонитрила в воде при градиенте концентрации от 15 до 95% в течение 25 мин получали 3,05 г (выход: 78%) 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-метоксиэтил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж. масса - 545,1043; рассч.масса - 545,1045 (M+Na).

Пример 4. 1-(2-азидоэтил)циклопентанкарбоновая кислота

В охлажденный льдом раствор 56 мл (0,396 моля) диизопропиламина в 85 мл ТГФ в течение 20 мин вводили 240 мл 1,6 М (0,393 моля) раствора н-бутиллития в гексане. При 0°С смесь перемешивали в течение 30 мин, охлаждали до температуры бани -65°С и в течение 20 мин добавляли 37,4 г (0,263 моля) этилциклопентанкарбоксилата в 50 мл ТГФ. По прошествии 1 ч добавляли раствор 47 мл (0,545 моля) 1,2-бромэтана в 50 мл ТГФ, смесь выдерживали при -65°С в течение 3 ч и в течение ночи давали ей нагреться до комнатной температуры. Реакцию гасили добавлением 200 мл насыщенного раствора хлорида аммония, слои разделяли и водный слой экстрагировали 100 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали 250 мл рассола/воды в соотношении 1/1 и сушили (Na₂SO₄). Раствор фильтровали и концентрировали, разбавляли 100 мл толуола и концентрировали. Разбавление и концентрирование повторяли дважды с получением 52,5 г этил-1-(2-бромэтил)циклопентанкарбоксилата.

Раствор 52,5 г (0,211 моля) вышеупомянутого бромида и 54 г (0,831 моля) азида натрия в 200 мл ДМФ перемешивали в азотной атмосфере при 50°С в течение 5 ч и фильтровали. Фильтрат концентрировали почти досуха, разбавляли 500 мл этилацетата, фильтровали и концентрировали с получением в виде коричневого масла 40,9 г сырого этил-1-(2-азидоэтил)циклопентанкарбоксилата. Этот материал объединяли с продуктом, полученным в предыдущем эксперименте (всего 63,5 г), и очищали хроматографией на 250 г силикагеля, элюируя 5% этилацетата в гексане, с получением в виде светло-коричневого масла 50,3 г продукта.

50,3 г (0,238 моля) продукта в виде масла с вышеописанной стадии растворяли в 750 мл ТГФ и 375 мл метанола и добавляли раствор 15 г (0,357 моля) гидрата LiOH в 300 мл воды. Образовавшийся раствор перемешивали при 40°С в течение ночи и концентрировали. Остаток растворяли в 2 л воды, содержавшей 40 мл 1 н. NaOH, и промывали 1 л гексана. Водный слой подкисляли 375 мл 1 н. НСl и экстрагировали 2 порциями по 1 л диэтилового эфира. Объединенные экстракты сушили (Na ₂SO₄) и концентрировали, получая в виде жидкости янтарного цвета 37,5 г 1-(2-азидоэтил)циклопентанкарбоновой кислоты.

Пример 5. Метиловый эфир N-{[1-(2-азидоэтил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина

Раствор 3,0 г (11,5 ммоля) гидрохлорида метилового эфира 4-нитро-L-фенилаланина, 2,3 г (12,7 ммоля) 1-(2-азидоэтил)циклопентанкарбоновой кислоты и 5,34 г (12,1 ммоля) БОФ в 6 мл дихлорметана и 4 мл ДМФ обрабатывали 4,2 мл (24,2 ммоля) диизопропилэтиламина. Смесь перемешивали в течение ночи, по прошествии которой данные анализа ТСХ (гексан/этилацетат в соотношении 1/1) не показывали больше наличия исходного материала. Смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Экстракты промывали водой и насыщенным рассолом и сушили над сульфатом натрия. В результате фильтрования и выпаривания получали остаток, который очищали хроматографией на силикагеле, элюируя гексаном/этилацетатом в соотношении 3/1, с получением 4,26 г метилового эфира N-{[1-(2-азидоэтил)циклопентил]-карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина.

Пример 6. Метиловый эфир N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-амино}этил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина

а. Раствор 1,92 г (4,93 ммоля) метилового эфира N-{[1-(2-азидоэтил) циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в 20 мл ТГФ обрабатывали добавлением по капля 1 М раствора триметилфосфина в ТГФ. После завершения операции добавления смесь перемешивали в течение 20 мин и добавляли 0,17 мл воды. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 2 ч, добавляли немного ТФК (трифторуксусная кислота) и смесь сушили над сульфатом натрия и концентрировали.

Воc - бензилоксикарбонил

б. В раствор 2,35 г (4,93 ммоля) соли трифторуксусной кислоты метилового эфира N-{[1-(2-аминоэтил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в 25 мл диоксана вводили 0,860 мл (4,93 ммоля) диизопропилэтиламина и 1,08 г (4,93 ммоля) дитрет-бутилдикарбоната. Образовавшуюся смесь перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через воронку с фильтром из спеченного стекла и под вакуумом концентрировали фильтрат. В результате очистки экспресс-хроматографией в колонке на силикагеле с элюированием гексаном/этилацетатом (в соотношении 3/1) получали 2,20 г (выход: 95%) метилового эфира N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино}этил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж. масса - 464,2397; рассч.масса - 464,2397 (М+Н).

Пример 7. Метиловый эфир N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино}этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

В раствор 1,00 г (2,16 ммоля) метилового эфира N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино}этил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в 10 мл толуола/диоксана в соотношении 1/1 вводили 0,524 г (1,29 ммоля) реактива Ловесона. Образовавшуюся смесь нагревали до 50°С и перемешивали в течение 24 ч. Реакционную смесь фильтровали через воронку с фильтром из спеченного стекла и под вакуумом концентрировали фильтрат. В результате очистки экспресс-хроматографией в колонке на силикагеле с элюированием гексаном/этилацетатом (в соотношении 6/1, затем 4/1) в виде светло-желтого масла получали 460 мг (выход: 44% и 65% в пересчете на выделенный исходный материал) метилового эфира N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино}этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 478,2014; рассч. масса - 478,2012 (М-Н).

Пример 8. Метиловый эфир N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

В раствор 1,26 г (2,63 ммоля) метилового эфира N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина в 15 мл метиленхлорида по каплям вводили 7 мл ТФК и образовавшуюся смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом с получением в виде желтого масла 1,4 г сырой соли ТФК метилового эфира N-{[1-(2-аминоэтил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина.

В раствор 1,4 г (~2,63 ммоля) полученной на предыдущей стадии соли в 10 мл метиленхлорида вводили 1,37 мл (7,88 ммоля) диизопропилэтиламина и 0,250 мл (2,63 ммоля) уксусного ангидрида. Образовавшуюся смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и переносили в делительную воронку, содержавшую 100 мл этилацетата и 40 мл воды. Водный слой отделяли и подвергали обратной экстракции 1 порцией в 50 мл этилацетата. Объединенный органический слой промывали насыщенным рассолом, сушили над MgSO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали. В результате очистки экспресс-хроматографией в колонке с элюированием метиленхлоридом/ацетоном (в соотношении 5/1) получали 743 мг (выход: 67%) метилового эфира N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 422,1744; рассч.масса - 422,1750 (М+Н).

Пример 9. Метиловый эфир 4-амино-N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина

В суспензию 740 мг (1,75 ммоля) метилового эфира N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина, 1,14 г (17,5 ммоля) цинковой пыли и 1,41 г (26,3 ммоля) хлорида аммония в 20 мл метанола медленно в течение 5 мин вводили 10 мл Н₂О. После перемешивания в течение 20 мин реакционную смесь разбавляли 80 мл этилацетата и 25 мл насыщенного раствора хлорида аммония и отделяли органический слой. Водный слой подвергали обратной экстракции 3 порциями по 25 мл этилацетата и органические слои объединяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали. Продукт в виде масла в течение 2 ч сушили под высоким вакуумом с получением 750 мг сырого аминового соединения. В результате очистки экспресс-хроматографией в колонке на силикагеле с элюированием метиленхлоридом/ацетоном (в соотношении 2/1) получали 650 мг (выход: 95%) метилового эфира 4-aмино-N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 392,2016; рассч. масса - 392,2008 (М+Н).

Пример 10. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-(ацетил -амино)этил)циклопентил] тиоксометил}-L-фенилаланин

В раствор 195 мг (0,498 ммоля)метилового эфира 4-амино-N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина и 0,0950 мл (0,548 ммоля) диизопропилэтиламина в 1 мл CH ₂Cl₂ вводили раствор 110 мг (0,523 ммоля) 2,6-дихлорбензоилхлорида в 1 мл СН₂Сl₂. Образовавшуюся смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и переносили в делительную воронку, содержавшую 50 мл этилацетата и 10 мл воды. Водный слой отделяли и подвергали обратной экстракции 1 порцией в 25 мл этилацетата. Объединенный органический слой промывали насыщенным раствором Nа₂СО₃, а затем насыщенным рассолом, сушили над MgSO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали с получением 300 мг сырого метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина.

В раствор 300 мг (~0,498 ммоля) упомянутого метилового эфира в 1 мл МеОН добавляли раствор 64 мг (14,9 ммоля) NaOH в 1 мл воды. Смесь перемешивали в течение 2 ч, а затем подкисляли 0,5 М НСl (до рН ~ от 1 до 2). Реакционную смесь выливали в делительную воронку, содержавшую 50 мл этилацетата и 10 мл воды. Водный слой отделяли и подвергали обратной экстракции 2 порциями по 25 мл этилацетата. Объединенный органический слой промывали насыщенным рассолом, сушили над MgSO₄, фильтровали и под вакуумом концентрировали. В результате очистки ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием ацетонитрила/воды при градиенте от 15 до 95% в течение 25 мин и лиофилизации содержавших продукт фракций в виде белого твердого вещества получали 126 мг (выход: 46%) 4-{[2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-(2-(ацетиламино)этил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 550,1330; рассч. масса - 550,1334 (М+Н).

Пример 11.

{[1-(2-{[(метиламино)карбонил]амино}этил)циклопентил]тиоксометил}-4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-L-фенилаланин

В соответствии с общим методом, описанным в примерах с 8 по 10, из метилового эфира N-{[1-(2-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино}этил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина и метилизоцианата получали {[1-(2-{[(метиламино)карбонил]амино}этил)циклопентил]тиоксометил}-4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж. масса - 565,1436; рассч.масса - 565,1443 (М+Н).

Пример 12. 2-хлор-6-метилбензальдегид

В 500-миллилитровую трехгорлую круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой, термометром, капельной воронкой и впускным приспособлением для аргона, загружали 75 г (494 ммоля) 2-хлор-6-метилбензонитрила и 400 мл толуола (хранили над -ыми молекулярными ситами). Смесь охлаждали до -2°С (лед + ацетон) и по каплям в течение 30 мин добавляли 593 мл 1,0 н. (593 ммоля) раствора ДИБАЛ-Г (диизобутилалюминийгидрид) в гексанах, одновременно поддерживая температуру ниже 0°С. После завершения операции добавления реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С, а затем ей давали нагреться до комнатной температуры. По завершении 2-часовой выдержки при комнатной температуре данные ТСХ анализа указывали на отсутствие исходного материала (гексан/диэтиловый эфир в соотношении 4/1, результаты распыления фосфомолибденовой кислоты как средства для УФ-флуоресцентного анализа оказывались обманчивыми). Реакционную смесь выливали в 2000 г льда и 50 мл концентрированной серной кислоты и перемешивали в течение ночи. Выпадавшие в осадок твердые частицы собирали фильтрованием и фильтрат экстрагировали 2 порциями по 200 мл диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали раствором рассола и сушили над MgSO₄. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования раствора получали сырой альдегид, который объединяли с вышеупомянутым твердым веществом с получением 71,31 г (выход: 93%) светло-желтого твердого вещества, приемлемого для использования на следующей стадии.

Пример 13. 2-хлор-6-метилбензойная кислота

В 1000-миллилитровую трехгорлую круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой, термометром, капельной воронкой и впускным приспособлением для аргона, загружали 71,31 г (461 ммоль, сырой продукт, полученный в вышеописанном эксперименте) 2-хлор-6-метилбензальдегида и 750 мл ацетонитрила. В эту суспензию при комнатной температуре добавляли раствор 15,9 г (115 ммолей, 0,25 экв.) первичного кислого фосфата натрия в 240 мл воды, а затем 50 мл 30%-ного пероксида водорода. Далее при 0°С по каплям добавляли раствор 73,5 г (811 ммолей, 1,76 экв.) хлорита натрия в 700 мл воды, одновременно поддерживая температуру ниже 3°С. После добавления желтую суспензию перемешивали при температуре от 0°С до комнатной в течение 15 ч и по завершении этого периода времени данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие альдегида. Далее по каплям при 0°С раствор 73 г (701 ммоль, 1,52 экв.) бисульфита натрия в 200 мл воды добавляли до исчезновения желтой окраски (положительная реакция KI-бумажки). Для регулирования этой экзотермической реакции имело значение охлаждение. Под вакуумом удаляли растворитель, получая белое твердое вещество. Фильтрованием собирали твердое вещество и фильтрат экстрагировали 200 мл диэтилового эфира. В этом эфирном растворе растворяли также упомянутое твердое вещество и раствор промывали 2 порциями по 200 мл 10%-ного раствора NaOH. Основный водный раствор нейтрализовали 10%-ной НСl до рН ~1. Выпадавшее в осадок белое твердое вещество собирали фильтрованием и сушили на воздухе, получая в виде белого твердого вещества 54,88 г (в общей сложности на двух стадиях выход: 65%) 2-хлор-6-метилбензойной кислоты.

Пример 14. Метиловый эфир N-(2-хлор-6-метилфенилкарбонил)-4-нитpo-L-фенилаланина

В раствор 1,94 г (7,44 ммоля) гидрохлоридной соли метилового эфира 4-нитро-L-фенилаланина, 1,4 г (8,2 ммоля) 2-хлор-6-метилбензойной кислоты и 3,11 г (8,2 ммоля) ГБТУ в 27 мл ДМФ при комнатной температуре вводили 3,24 мл (18,6 ммоля) диизопропилэтиламина. Прозрачный раствор при комнатной температуре перемешивали в течение 48 ч и разбавляли 100 мл этилацетата. Этилацетатный слой последовательно промывали 2 порциями по 50 мл 0,5 н. соляной кислоты, 2 порциями по 50 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 100 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования удалением растворителя в виде белого твердого вещества получали 2,67 г (выход: 95%) метилового эфира N-(2-хлор-6-метилбензоил)-4-нитро-L-фенилаланина с t_пл 120-123°С. МСВР: обнаруж. масса – 376,4274; рассч.масса - 376,4238 (М+Н).

Пример 15. Метиловый эфир N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина

В смесь 3,64 г (9,66 ммоля) метилового эфира N-(2-хлор-6-метилфенилкарбонил)-4-нитро-L-фенилаланина и 2,46 г (6,0 ммоля, 0,62 экв.) реактива Ловесона при комнатной температуре вводили 15 мл толуола (который хранили над -ыми молекулярными ситами). Суспензию нагревали до температуры от 90 до 100°С и перемешивали в течение 24 ч (за это время образовывался прозрачный раствор), по прошествии которых данные ТСХ анализа этой смеси указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь разбавляли 50 мл этилацетата и промывали 50 мл воды, 50 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 50 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования удалением растворителя получали сырое соединение, которое очищали аккуратной хроматографией на силикагеле в колонке, элюируя гексаном/этилацетатом (в соотношениях от 4/1 до 2/1), с получением в виде желтого твердого вещества 1,52 г (выход: 40%) метилового эфира N-[(2-xлop-6-метилфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина с t_пл 150-153°С (растирали в порошок в диэтиловом эфире и гексане в соотношении 3/1). МСВР: обнаруж.масса - 393,0685; рассч.масса - 393,0677 (М+Н).

Пример 16. Метиловый эфир 4-амино-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

В смесь 1,52 г (3,86 ммоля) метилового эфира N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина, 2,55 г (39,0 ммоля, 10 экв.) цинковой пыли (с размерами частиц ~325 меш) и 3,09 г (58,0 ммоля, 15 экв.) хлорида аммония при комнатной температуре вводили 50 мл метанола и 25 мл воды. После добавления воды протекала экзотермическая реакция, и температура повышалась до уровня от 45 до 50°С. Суспензию перемешивали в течение 2 ч при температуре бани от 50 до 60°С, после чего данные ТСХ анализа этой смеси указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь фильтровали через слой броунмиллерита и фильтровальный пирог промывали 50 мл метанола и 40 мл воды. Фильтрат концентрировали под вакуумом с целью удалить метанол и продукт экстрагировали 2 порциями по 50 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали 50 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования в виде аморфного желтого твердого вещества получали 1,3 г (выход: 92%) метилового эфира 4-амино-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина, который непосредственно использовали на следующей стадии. МСВР: обнаруж.масса - 363,0932; рассч.масса - 363,0934 (М+Н).

Пример 17. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

В раствор 1,296 г (3,57 ммоля) метилового эфира 4-амино-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина и 0,785 г (3,75 ммоля) 2,6-дихлорбензоилхлорида в 20 мл дихлорметана при комнатной температуре вводили 0,93 мл (5,35 ммоля) диизопропилэтиламина. Раствор перемешивали в течение 15 ч, по прошествии этого периода времени данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Далее раствор разбавляли 30 мл воды и два слоя разделяли. Водную фазу экстрагировали 20 мл дихлорметана и объединенные экстракты промывали 50 мл раствора рассола. После сушки над безводным сульфатом магния раствор под вакуумом концентрировали и остаток очищали хроматографией на силикагеле в колонке, элюируя гексаном/этилацетатом (в соотношениях от 4/1 до 1/1) с получением в виде аморфного белого твердого вещества 1,91 г (выход: 83%) метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 535,0399; рассч.масса - 535,0416 (М+Н).

Пример 18. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин

В суспензию 1,55 г (2,89 ммоля) метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина в 8 мл этанола при комнатной температуре вводили 5 мл 1,0 н. водного гидроксида натрия. Смесь нагревали до температуры от 50 до 55°С и образовавшийся прозрачный раствор перемешивали в течение от 3 до 4 ч; по завершении этого периода времени данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Смесь концентрировали для удаления этанола, разбавляли 15 мл воды и экстрагировали 25 мл диэтилового эфира для удаления всех нейтральных примесей. Водный слой подкисляли 1 н. НСl, а выпадавшее в осадок белое твердое вещество экстрагировали 2 порциями по 30 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали раствором рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования раствора в виде аморфного белого твердого вещества получали 1,45 г (выход: 96%) 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 521,0241; рассч.масса - 521,0260 (М+Н).

Пример 19. Натриевая соль 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

1,45 г (2,77 ммоля) 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-хлор-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина при комнатной температуре растворяли в 10 мл воды, содержавшей 4,2 мл (1,5 экв.) водного 1,0 н. гидроксида натрия. Раствор вводили в колонку (с размерами: длина - 8 дюймов, диаметр - 1,5 дюйма) для хроматографии с обращенной фазой, содержавшую силикагель С-18, и элюировали водой для удаления избытка основания. Продукт элюировали метанолом в воде в концентрации от 5 до 20%. Объединенные фракции концентрировали, остаток растворяли в 50 мл воды и лиофилизировали с получением в виде белого аморфного твердого вещества 1,3 г натриевой соли. МСВР: обнаруж.масса - 543,0076; рассч.масса - 543,0079 (М+Н).

Пример 20. 2-этил-6-метилбензойная кислота

ч) В 250-миллилитровую толстостенную склянку загружали 7,4 г (30,07 ммоля) 2-этил-6-метилиодбензола, 334 мг (1,43 ммоля) Pd(OAc)₂ и 620 мг (1,43 ммоля) ДФФП. Колбу закрывали мембраной, три раза в ней создавали вакуум и затем ее заполняли аргоном. Далее с помощью шприца последовательно добавляли 96 мл ацетонитрила, 19,0 г (26,25 мл, 189 ммолей) триэтиламина и 19,1 мл воды. После этого резиновую мембрану заменяли плакированной тефлоном крышкой, соединенной с источником монооксида углерода. Затем монооксидом углерода в колбе создавали повышенное давление (40 фунтов/кв.дюйм) и избыточное давление сбрасывали. Эту операцию повторяли три раза и, наконец, под давлением монооксида углерода 40 фунтов/кв.дюйм смесь перемешивали в течение 5 мин. Далее колбу от баллона с монооксидом углерода отсоединяли и погружали в предварительно нагретую (до температуры от 83 до 85°С) масляную баню. В течение 1 ч реакционная смесь становилась черной, и при этой температуре ее перемешивали в течение еще 14 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и давление сбрасывали. Полученную смесь разбавляли 200 мл диэтилового эфира и 20 мл 1,0 н. NaOH. Образовавшуюся кислоту экстрагировали 2 порциями по 100 мл воды. Объединенные водные экстракты нейтрализовали 1,0 н. НСl и кислоту экстрагировали 3 порциями по 100 мл дихлорметана. Объединенные дихлорметановые экстракты промывали раствором рассола и сушили над MgSO₄. В результате отфильтровывания осушителя и удаления под вакуумом растворителя в виде вязкого коричневого масла получали 3,58 г (выход: 72,5%) продукта, который в течение ночи затвердевал. МСВР: обнаруж.масса - 164,0833; рассч.масса - 164,0837 (М+).

Пример 21. Метиловый эфир N-[(2-этил-6-метилфенил)карбонил]-4-нитpo-L-фенилаланина

Аналогично примеру 14 в виде белого твердого вещества с выходом 72% получали метиловый эфир N-[(2-этил-6-метилфенил)карбонил]-4-нитро-L-фенилаланина с t_пл 119-121°С. МСВР: обнаруж.масса - 371,1610; рассч.масса - 371,1607 (М+Н).

Пример 22. Метиловый эфир N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 15 в виде аморфного белого твердого вещества с выходом 47% получали метиловый эфир N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 387,1383; рассч.масса - 387,1378 (М+Н).

Пример 23. Метиловый эфир 4-амино-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

Аналогично примеру 16 в виде аморфного белого твердого вещества с выходом 94% получали метиловый эфир 4-амино-N[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 357,1640; рассч.масса - 357,1638 (М+Н).

Пример 24. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино} -N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

Аналогично примеру 17 в виде аморфного белого твердого вещества с выходом 70% получали метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]-амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил] -L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 529,1094; рассч.масса - 529,1119 (М+Н).

Пример 25. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин

Аналогично примеру 18 в виде аморфного белого твердого вещества с выходом 77% получали 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил) тиоксометил]-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 515,0942; рассч.масса - 515,0963 (М+Н).

Пример 26. Метиловый эфир 4-{[(2R)-(2-ФМОК-амино)-3-(3-пиридил)-1-оксопропил]амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина (ФМОК означает флуоренилметилоксикарбонил)

Аналогично примеру 1 в виде аморфного белого твердого вещества с выходом 72% получали метиловый эфир 4-{[(2R)-(2ФМОК-амино)-3-(3-пиридил)-1-оксопропил]амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 727,2973; рассч.масса - 727,2954 (М+Н).

Пример 27. Метиловый эфир 4-{[(2R)-2-амино-3-(3-пиридил)-1-оксопропил]амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

224 мг (0,308 ммоля) продукта примера 26 обрабатывали 3 мл 25%-ного пиперидина в N-МП и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, по прошествии которого данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Смесь разбавляли 25 мл гексана и разделяли два слоя. Нижний, желтый слой разбавляли гексаном и разделяли. Затем нижний, желтый слой разбавляли водой и экстрагировали 3 порциями по 25 мл этилацетата/ТГФ в соотношении 2/1. Объединенные экстракты промывали 50 мл воды, 50 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. Отфильтровыванием осушителя и концентрированием путем удаления растворителя получали продукт, который сушили под высоким вакуумом с получением в виде аморфного белого твердого вещества 126 мг (выход: 81%) метилового эфира 4-{[(2R)-2-амино-3-(3-пиридил)-1-оксопропил]амино}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 505,2270; рассч.масса - 505,2274 (М+Н).

Пример 28. Метиловый эфир 4-{(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-[4-(3-пиридинил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

В раствор 113 мг (0,224 ммоля) метилового эфира 4-{[(2R)-2-амино-3-(3-пиридил)-1-оксопропил]амино}-N-[(2этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина в 0,75 мл дихлорметана и 0,75 мл СН(ОМе)₃ вводили 27,5 мг (0,25 ммоля) бензальдегида. Образовавшийся светло-желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней и реакционную смесь нагревали до 90°С (температура масляной бани). Затем с помощью шприца вводили избыточное количество уксусного ангидрида (0,21 мл, 2,0 ммоля) и раствор перемешивали при 110-120°С (температура масляной бани) в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и под вакуумом удаляли растворитель. Сырой остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с получением в виде аморфного белого твердого вещества 95 мг (выход: 67%) метилового эфира 4-{(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-пиридинил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 635,2672; рассч.масса - 635,2692 (М+Н). Другой изомер получали в очень небольшом количестве (<5% по ВЭЖХ), и попытки его выделить не предпринимали.

Пример 29. 4-{(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-пиридинил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин

Аналогично примеру 18 проводили гидролиз и продукт очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, используя градиент концентрации ацетонитрила в воде от 5 до 95%, в течение 30 мин, и собирали требуемую фракцию. Под вакуумом удаляли ацетонитрил и продукт экстрагировали 2 порциями по 25 мл этилацетата/ТГФ в соотношении 3/1. Объединенные фракции промывали раствором рассола и сушили над безводным сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя раствор концентрировали и остаток сушили под высоким вакуумом с получением 4-{(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-пиридинил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил}-N-[(2-этил-6-метилфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества (с выходом 30%). МСВР: обнаруж.масса - 621,2520; рассч.масса - 621,2535 (М+Н).

Пример 30. Метиловый эфир N-[(2-фторфенил)карбонил]-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 14 с использованием в качестве исходного вещества 2-фторбензойной кислоты в виде белого твердого вещества с 99%-ным выходом получали метиловый эфир N-[(2-фторфенил)карбонил]-4-нитро-L-фенилаланина с t_пл 137-139°С. МСВР: обнаруж.масса - 346,0977; рассч.масса - 346,0980, М+.

Пример 31. Метиловый эфир N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 15 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира N-[(2-фторфенил)карбонил]-4-нитро-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 99%-ным выходом получали метиловый эфир N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж. масса - 363,0816; рассч.масса - 363,0815, (М+Н).

Пример 32. Метиловый эфир 4-амино-N-[(2-фторфенил)тиоксометил] -L-фенилаланина

Аналогично примеру 16 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-4-нитро-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 87%-ным выходом получали метиловый эфир 4-амино-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 332,1042; рассч.масса - 332,1046, (М+Н).

Пример 33. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина

Аналогично примеру 17 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира 4-амино-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 74%-ным выходом получали метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино} -N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 505,0561; рассч.масса - 505,0555, (М+Н).

Пример 34. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин

Аналогично примеру 18 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 89%-ным выходом получали 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино]-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 491,0407; рассч.масса - 491,0399, (М+Н).

Пример 35. Метиловый эфир 4-нитро-N-{[2-(трифторметил)фенил]карбонил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 14 с использованием в качестве исходного вещества 2-трифторметилбензойной кислоты в виде белого твердого вещества с t_пл 152-154°С и 69%-ным выходом получали метиловый эфир 4-нитро-N-{[2-(трифторметил)фенил]карбонил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 397,1017; рассч.масса - 397,1011, (М+Н).

Пример 36. Метиловый эфир 4-нитро-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 15 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира 4-нитро-N-{[2-(трифторметил)фенил]карбонил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 67%-ным выходом получали метиловый эфир 4-нитро-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 412,0752; рассч.масса - 412,0757, (М+Н).

Пример 37. Метиловый эфир 4-амино-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 16 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира 4-нитро-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 98%-ным выходом получали метиловый эфир 4-амино-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 382,1072; рассч.масса - 382,1078, (М+Н).

Пример 38. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 17 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира 4-амино-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 98%-ным выходом получали метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 555,0511; рассч.масса - 555,0524, (М+Н).

Пример 39. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланин

Аналогично примеру 18 с использованием в качестве исходного вещества метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 99%-ным выходом получали 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[2-(трифторметил)фенил]тиоксометил}-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 541,0358; рассч.масса - 541,0367, (М+Н).

Пример 40. Метиловый эфир 1-(4-бромбутил)циклопентанкарбоновой кислоты

В раствор 21 мл (150 ммолей) диизопропиламина в 100 мл ТГФ при -10°С по каплям вводили 58 мл 2,5 М (145 ммолей) раствора н-бутиллития в гексанах, одновременно поддерживая температуру ниже 0°С. После завершения операции добавления раствор перемешивали в течение 30 мин при 0°С. При -70°С в него по каплям добавляли раствор 13,1 г (100 ммолей) метилциклопентанкарбоксилата в 20 мл ТГФ, поддерживая температуру массы в пределах от -60 до -70°С. После добавления реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре от -50 до -60°С. Далее по каплям добавляли раствор 21,59 г (100 ммолей) 1,4-дибромбутана в 20 мл ТГФ и светло-коричневую суспензию перемешивали в течение 1 ч при температуре от -60 до -70°С. Затем ей давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали в 200 мл насыщенного раствора хлорида аммония и органическое соединение экстрагировали 2 порциями по 100 мл диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали 150 мл насыщенного раствора хлорида натрия и сушили над безводным сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя раствор концентрировали под вакуумом и полученный остаток перегоняли при 120-133°С/2,5 мм рт.ст. с получением в виде бесцветного масла 12,8 г (выход: 48%) метилового эфира 1-(4-бромбутил)циклопентанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 262,0565; рассч.масса - 262,0568, (М+).

Пример 41. Метиловый эфир 1-[4-(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты

В раствор 10 г (38 ммолей) метилового эфира 1-(4-бромбутил)циклопентанкарбоновой кислоты в 100 мл ДМФ вводили 5,09 г (72,6 ммоля) тиометоксида натрия. После добавления протекала экзотермическая реакция и смесь превращалась в светло-коричневый мутный раствор. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч и выливали в 200 мл воды. Органическое соединение экстрагировали 2 порциями по 150 мл диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали 150 мл насыщенного раствора хлорида натрия и сушили над безводным сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя раствор концентрировали под вакуумом и остаток очищали хроматографией на силикагеле в колонке с получением в виде бесцветного масла 4,43 г (выход: 51%) метилового эфира 1-[4-(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 230,1343; рассч.масса - 230,1341, (М+).

Пример 42. Метиловый эфир 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты

В раствор 4,43 г (19,2 ммоля) метилового эфира 1-[4(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты в 20 мл АсОН вводили 10 мл 30%-ного пероксида водорода. Реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 15 ч. По истечении этого времени данные ТСХ смеси указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и под вакуумом концентрировали. Остаток выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия и экстрагировали 3 порциями по 100 мл диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали 200 мл насыщенного раствора хлорида натрия и сушили над безводным сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя под вакуумом удаляли растворитель, а полученный осадок очищали хроматографией на силикагеле в колонке с получением 4,94 г (выход: 98%) продукта в виде бесцветного масла. МСНР (C₁₂H ₂₂O₄S); 263 (М+Н).

Пример 43. 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклопентанкарбоновая кислота

В раствор 4,94 г (18,8 ммоля) метилового эфира 1-[4(метилсульфонил)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты в смеси 38 мл ТГФ с 38 мл метанола вводили 38 мл 1 н. гидроксида натрия. Смесь выдерживали при температуре от 50 до 55°С в течение 15 ч, после чего данные ТСХ анализа этой реакционной смеси указывали на отсутствие исходного материала, и смеси давали остыть до комнатной температуры. Под вакуумом удаляли растворитель, остаток разбавляли 100 мл воды и для удаления всех нейтральных примесей экстрагировали 2 порциями по 50 мл диэтилового эфира. Далее основный водный слой подкисляли 1 н. соляной кислотой и продукт экстрагировали 2 порциями по 75 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали раствором рассола и сушили над безводным сульфатом натрия. После отфильтровывания осушителя раствор концентрировали под вакуумом и остаток сушили под высоким вакуумом с получением в виде низкоплавкого белого твердого вещества 4,31 г (выход: 92%) указанного в заглавии соединения. МСНР (C₁₁H₂₀O₄S); 249 (М+Н).

Пример 44. 1-[4-(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновая кислота

В раствор 4,94 г (18,8 ммоля) метилового эфира 1-[4(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты в смеси 38 мл ТГФ с 38 мл метанола вводили 38 мл 1 н. гидроксида натрия. Смесь выдерживали при температуре от 50 до 55°С в течение 15 ч, после чего данные ТСХ анализа этой реакционной смеси указывали на отсутствие исходного материала. После охлаждения до комнатной температуры под вакуумом удаляли растворитель, остаток разбавляли 100 мл воды и для удаления всех нейтральных примесей экстрагировали 2 порциями по 50 мл диэтилового эфира. Далее основный водный слой подкисляли 1 н. соляной кислотой и продукт экстрагировали 2 порциями по 75 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали раствором рассола и сушили над безводным сульфатом натрия. После отфильтровывания осушителя раствор концентрировали под вакуумом и остаток сушили под высоким вакуумом с получением в виде низкоплавкого белого твердого вещества 4,31 г (выход: 92%) 1-[4-(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 216,1181; рассч.масса - 216,1184, (М+).

Пример 45. Метиловый эфир N-{[1-((4-метилтио)бутил)циклопентил}карбонил]-4-нитро-L-фенилаланина

В суспензию 47,41 г (181,84 ммоля) гидрохлоридной соли метилового эфира 4-нитро-L-фенилаланина и 38,33 г (177,17 ммоля) 1-[4-(метилтио)бутил]циклопентанкарбоновой кислоты в 470 мл ДМФ при комнатной температуре вводили 67,2 г (177,17 ммоля) ГБТУ и 77 мл (443 ммоля) диизопропилэтиламина. Прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч и по прошествии этого времени данные ТСХ анализа этой смеси указывали на отсутствие исходных материалов. Реакционную смесь разбавляли 600 мл этилацетата. Этилацетатный слой последовательно промывали 2 порциями по 250 мл 0,5 н. соляной кислоты, 2 порциями по 250 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 300 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования удалением растворителя получали сырой продукт, который очищали хроматографией на силикагеле в колонке с получением в виде аморфного белого твердого вещества 58,5 г (выход: 78%) метилового эфира N-{[1-((4-метилтио)бутил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 423,1940; рассч.масса - 423,1953, (М+Н).

Пример 46. Метиловый эфир 4-нитро-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]карбонил}-L-фенилаланина

В раствор 58,5 г (138,4 ммоля) метилового эфира N-{[1-((4-метилтио)бутил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в 1,2 л CH₂Cl₂ при -5°С (баня из смеси соли со льдом) вводили 71,7 г (415 ммолей) м-хлорпербензойной кислоты (мХПБК). Суспензию перемешивали в течение 30 мин при 0°С, давали ей нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 5 ч, по прошествии этого времени данные ТСХ анализа этой смеси указывали на отсутствие исходного материала. Твердое вещество отфильтровывали и фильтрат концентрировали под вакуумом с получением белого остатка. Этот белый остаток растворяли в 600 мл этилацетата и промывали 3 порциями по 300 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Данные ТСХ анализа указывали на присутствие м-хлорпербензойной кислоты. Поэтому этилацетатный слой промывали насыщенным раствором бисульфита натрия (20 г в 150 мл воды), 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 300 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования фильтрата получали сырой продукт, который растворяли в этилацетате. Добавляли диэтилового эфира и гексана с целью осаждения маслянистого остатка. Под пониженным давлением удаляли некоторое количество растворителя с получением белой суспензии. Эту суспензию дополнительно разбавляли диэтиловым эфиром, твердый материал собирали фильтрованием и промывали гексаном. После сушки в виде белого низкоплавкого (с t_пл от 40 до 44°С) твердого вещества получали 53,9 г (выход: 86%) метилового эфира 4-нитро-N-{[1((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]карбонил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 455,1854; рассч.масса - 455,1852, (М+Н).

Пример 47. Метиловый эфир N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

В раствор 15 г (33 ммоля) метилового эфира N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в 100 мл толуола (хранили над -ыми молекулярными ситами) и 50 мл свежеперегнанного ТГФ при комнатной температуре вводили 13,35 г (33 ммоля, 1,0 экв.) реактива Ловесона. Раствор нагревали до температуры от 60 до 65°С и перемешивали в течение 48 ч. По прошествии этого времени данные ТСХ анализа реакционной смеси указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали 3 порциями по 150 мл этилацетата. В водном слое образовывалось вещество в виде масла, которое отделяли, разбавляли водой и экстрагировали 2 порциями по 50 мл этилацетата. Объединенные этилацетатные экстракты промывали 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 300 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования удалением растворителя получали массу в виде светло-коричневого сиропа, которую очищали хроматографией на силикагеле в колонке, элюируя гексаном/этилацетатом (в соотношении 1/1), с получением в виде рыхлого желтого твердого вещества 6,87 г (выход: 44%) метилового эфира N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 493,1438; рассч.масса - 493,1443, (M+Na).

Пример 48. Метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина

9,07 г (19,3 ммоля) плохо растворимого метилового эфира N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина умеренным нагреванием с помощью фена растворяли в 150 мл метанола и 20 мл ТГФ. В полученный раствор при комнатной температуре добавляли 12,62 г (193 ммоля, 10 экв.) цинковой пыли (с размерами частиц ~325 меш) и 15,5 г (289,5 ммоля, 15 экв.) хлорида аммония, а затем 75 мл воды. После добавления воды протекала экзотермическая реакция, и температура повышалась до уровня от 45 до 50°С. Суспензию перемешивали в течение 1 ч, по прошествии которого данные ТСХ анализа этой смеси указывали на отсутствие исходного материала. Реакционную смесь фильтровали и фильтровальный пирог промывали 200 мл метанола и 100 мл ТГФ. Метанол и ТГФ под вакуумом удаляли, а органический остаток экстрагировали 2 порциями по 200 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали 250 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. В результате отфильтровывания осушителя и концентрирования в виде белого смолоподобного вещества получали 8,37 г (выход: 98%) метилового эфира 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина, который непосредственно использовали на следующей стадии. МСВР: обнаруж.масса - 441,1884; рассч.масса - 441,1882 (М+Н).

Пример 49. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино} -N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина

В раствор 8,37 г (19,0 ммоля) метилового эфира 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина и 4,4 г (21 ммоль) 2,6-дихлорбензоилхлорида в 90 мл дихлорметана при комнатной температуре вводили 5,6 мл (32,3 ммоля) диизопропилэтиламина. Раствор перемешивали в течение 15 ч, по прошествии этого времени данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Затем ее разбавляли 100 мл воды и два слоя разделяли. Водную фазу экстрагировали 100 мл дихлорметана и объединенные экстракты промывали 200 мл раствора рассола. После сушки над безводным сульфатом магния раствор под вакуумом концентрировали и остаток очищали хроматографией на силикагеле в колонке, элюируя гексаном/этилацетатом/СН ₂Сl₂ (в соотношении 1/1/1) с получением в виде белого твердого вещества с t_пл 200-202°С 11,54 г (выход: 99%) метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 613,1367; рассч.масса - 613,1363 (М+Н).

Пример 50. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланин

В раствор 15,87 г (25,86 ммоля) метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина в 75 мл этанола при 50°С добавляли 60 мл 1,0н. водного гидроксида натрия. Смесь нагревали до температуры от 50 до 55°С и образовавшийся прозрачный светло-коричневый раствор перемешивали в течение 22 ч. По прошествии этого времени данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Смесь разбавляли водой, давали остыть до комнатной температуры и фильтровали для удаления небольшого количества твердого материала. Фильтрат концентрировали и остаточный водный раствор промывали 2 порциями по 75 мл диэтилового эфира. Основный водный слой подкисляли 3,0 н. НСl, получая мутную суспензию, и экстрагировали 3 порциями по 100 мл этилацетата. Объединенные экстракты промывали 200 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя фильтрат концентрировали. Остаток растворяли в дихлорметане и разбавляли диэтиловым эфиром/гексаном в соотношении 1/1 с получением твердого вещества, которое собирали фильтрованием. Это твердое вещество растирали в порошок в ~100 мл горячего этилацетата, получая суспензию, которую разбавляли ~50 мл диэтилового эфира. Твердый материал собирали фильтрованием. Вышеописанный процесс повторяли с получением в виде белого твердого вещества 10,89 г (выход: 70%) 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил] тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 599,1193; рассч.масса - 599,1208 (М+Н).

Пример 51. Натриевая соль 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Суспензию 9,89 г (16,49 ммоля) 4-(2,6-дихлорфенилкарбониламино)-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина в 100 мл воды при комнатной температуре обрабатывали 16,4 мл (16,4 ммоля) 1,0 н. гидроксида натрия. Смесь нагревали до температуры от 40 до 45°С и добавляли некоторое количество (~15 мл) ацетонитрила с целью получить прозрачный раствор, содержащий небольшое количество суспендированного твердого вещества. Раствор фильтровали и фильтрат лиофилизировали с получением в виде белого твердого вещества 10,1 г натриевой соли. МСВР: обнаруж.масса - 621,1023; рассч.масса - 621,1027 (М+Н).

Пример 52. Метиловый эфир 4-{[(2,4-диметил-3-пиридинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина

В охлажденный льдом раствор 45 мг (0,3 ммоля) 2,4-диметил-3-пиридинкарбоновой кислоты в 2 мл дихлорметана и одной капле ДМФ при 0°С добавляли 49,5 мг (0,39 ммоля) оксалилхлорида. При этой температуре реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, давали ей нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 2 ч. Раствор концентрировали и остаток сушили под высоким вакуумом. В смесь упомянутого хлорангидрида кислоты и 88 мг (0,2 ммоля) метилового эфира 4-aмино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина в 3 мл дихлорметана при комнатной температуре добавляли 0,175 мл (1 ммоль) диизопропилэтиламина. Раствор перемешивали в течение 15 ч. По прошествии этого времени данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Ее разбавляли 20 мл воды и 20 мл дихлорметана и два слоя разделяли. Водную фазу экстрагировали 10 мл дихлорметана и объединенные экстракты промывали 20 мл раствора рассола. После сушки над безводным сульфатом магния раствор концентрировали под вакуумом и остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с получением в виде белого аморфного твердого вещества 74 мг (выход: 65%) чистого метилового эфира 4-{[(2,4-диметил-3-пиридинил) карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 574,2389; рассч.масса - 574,2409 (М+Н).

Пример 53. Соль ТФК 4-[(2,4-диметил-3-пиридилкарбонил)амино)-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина

В раствор 68 мг (0,118 ммоля) метилового эфира 4-{[(2,4-диметил-3-пиридинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланина в 4 мл этанола при комнатной температуре вводили 3 мл 1,0 н. водного гидроксида натрия. Смесь нагревали до температуры от 45 до 50°С и образовавшийся прозрачный раствор перемешивали в течение 3 ч, по прошествии которых данные ТСХ анализа смеси указывали на отсутствие исходного материала. Смесь концентрировали и сырой материал очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с получением в виде белого аморфного твердого вещества 54,5 мг (выход: 82%) соли ТФК 4-[(2,4-диметил-3-пиридилкарбонил)амино]-N-[(2-фторфенил)тиоксометил]-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 560,2240; рассч.масса - 560,2253 (М+Н).

Пример 54. Этил-1-(4-бромбутил)циклобутанкарбоксилат

Аналогично примеру 40 с использованием в качестве исходного материала этилового эфира циклобутанкарбоновой кислоты в виде бесцветного масла с 58%-ным выходом получали этиловый эфир 1-(4-бромбутил)циклобутанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 263,0563; рассч.масса - 263,0568 (М+).

Пример 55. Этиловый эфир 1-[4-(метилтио)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты

Аналогично примеру 41 с использованием в качестве исходного материала этилового эфира 1-(4-бромбутил)циклобутанкарбоновой кислоты в виде бесцветного масла с 87%-ным выходом получали этиловый эфир 1-[4-(метилтио)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 230,1339; рассч.масса - 230,1340 (М+).

Пример 56. Этиловый эфир 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты

Аналогично примеру 46 с использованием в качестве исходного материала этилового эфира 1-[4-(метилтио)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты в виде бесцветного масла с 92%-ным выходом получали этиловый эфир 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 262,1231; рассч.масса - 262,1238 (М+).

Пример 57. 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклобутанкарбоновая кислота

Аналогично примеру 43 с использованием в качестве исходного материала этилового эфира 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты в виде низкоплавкого белого твердого вещества с 92%-ным выходом получали 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклобутанкарбоновую кислоту. МСВР: обнаруж.масса - 234,0921; рассч.масса - 234,0918 (М+).

Пример 58. Метиловый эфир N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 45 с использованием в качестве исходного материала 1-[4-(метилсульфонил)бутил]циклобутанкарбоновой кислоты в виде желтой смолы с 89%-ным выходом получали метиловый эфир N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 441,1700; рассч.масса - 441,1696 (М+Н).

Пример 59. Метиловый эфир N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 47 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-нитро-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]карбонил}-L-фенилаланина в виде белого твердого вещества с 80%-ным выходом получали метиловый эфир N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина с t_пл 150-152°С. МСВР: обнаруж.масса - 457,1464; рассч.масса - 457,1467 (М+Н).

Пример 60. Метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)-циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 48 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина в виде гигроскопического твердого вещества с 94%-ным выходом получали метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж. масса - 427,1720; рассч.масса - 427,1725 (М+Н).

Пример 61. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 49 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 92%-ным выходом получали метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 599,1207; рассч.масса - 599,1208 (М+Н).

Пример 62. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин

Аналогично примеру 50 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 99%-ным выходом получали 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 585,1038; рассч.масса - 585,1051 (М+Н).

Пример 63. Метиловый эфир 4-{[(4-(трифторметил)-5-пиримидинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 45 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 32%-ным выходом получали метиловый эфир 4-{[(4-(трифторметил)-5-пиримидинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 601,1766; рассч.масса - 601,1766 (М+Н).

Пример 64. 4-{[(4-(трифторметил)-5-пиримидинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 50 с использованием в качестве исходного материала продукта примера 63 в виде аморфного белого твердого вещества с 22%-ным выходом получали 4-{[(4(трифторметил)-5-пиримидинил)карбонил]амино}N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 587,1619; рассч.масса - 587,1609 (М+Н).

Пример 65. Этил-1-(3-бромпропил)циклобутанкарбоксилат

Аналогично примеру 40 с использованием в качестве исходного материала этилового эфира циклобутанкарбоновой кислоты в виде бесцветного масла с 33%-ным выходом получали этиловый эфир 1-(3-бромпропил)циклобутанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 248,0416; рассч.масса - 248,0412 (М+).

Пример 66. Этил-1-[3-(метилтио)пропил]циклобутанкарбоксилат (Ro 28-1367/000, 29156-271-3) и 1-[3-(метилтио) пропил] циклобутанкарбоновая кислота

Аналогично примеру 41 с использованием в качестве исходного материала этилового эфира 1-(3-бромпропил)циклобутанкарбоновой кислоты в виде бесцветного масла с 58%-ным выходом получали этиловый эфир 1-[3-(метилтио)пропил]циклобутанкарбоновой кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 216,1182; рассч.масса - 216,1184 (М+). Также в виде бесцветного масла с 16%-ным выходом получали 1-[3-(метилтио)пропил]циклобутанкарбоновую кислоту. МСВР: обнаруж.масса - 188,0872; рассч.масса - 188,0871 (М+).

Пример 67. Метиловый эфир N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 45 с использованием в качестве исходного материала гидрохлоридной соли метилового эфира 4-нитро-L-фенилаланина в виде желтого вязкого масла с 92%-ным выходом получали метиловый эфир N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 395,1638; рассч.масса - 395,1640 (М+Н).

Пример 68. Метиловый эфир N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 47 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-нитро-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в виде бесцветного вязкого масла с 95%-ным выходом получали метиловый эфир N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 411,1408; рассч.масса - 411,1412 (М+Н).

Пример 69. Метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 48 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина в виде гигроскопического желтого твердого вещества с 97%-ным выходом получали метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж. масса - 381,1660; рассч.масса - 381,1671 (М+Н).

Пример 70. Метиловый эфир 4-[(2,6-дихлорфенилкарбонил)амино]-N{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 49 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-амино-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде белого твердого вещества с 83%-ным выходом получали метиловый эфир 4-[(2,6-дихлорфенилкарбонил)амино]-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина; t_пл: 184-186°С. МСВР: обнаруж.масса - 553,1139; рассч.масса - 553,1153 (М+Н).

Пример 71. 4-[(2,6-дихлорфенилкарбонил)амино]-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин

Аналогично примеру 50 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-[(2,6-дихлорфенилкарбонил)амино]-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде белого твердого вещества с 97%-ным выходом получали 4-[(2,6-дихлорфенилкарбонил)амино]-N-{[1-((3-метилтио)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин; t_пл: 186-188°С. МСВР: обнаруж.масса - 539,0986; рассч.масса - 539,0996 (М+Н).

Пример 72. Этиловый эфир 1-[3-(метилсульфонил)пропил]циклобутанкарбоновой кислоты

Аналогично примеру 46 с использованием в качестве исходного материала этил-1-[3-(метилтио)пропил]циклобутанкарбоксилата в виде бесцветного масла с 87%-ным выходом получали этил-1-[3-(метилсульфонил)пропил]циклобутанкарбоксилат. МСВР: обнаруж.масса - 248,1084; рассч.масса - 248,1082 (М+).

Пример 73. 1-[3-(метилсульфонил)пропил]циклобутанкарбоновая кислота

Аналогично примеру 43 с использованием в качестве исходного материала этил-1-[3-(метилсульфонил)пропил]циклобутанкарбоксилата в виде белого твердого вещества с 76%-ным выходом получали 1-[3-(метилсульфонил)пропил]циклобутанкарбоновую кислоту; t_пл: 113-116°С. МСВР: обнаруж.масса - 220,0770; рассч.масса - 220,0769 (М+).

Пример 74. Метиловый эфир 4-нитро-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]карбонил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 45 метиловый эфир N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина получали в виде белого аморфного твердого вещества с 76%-ным выходом. МСВР: обнаруж.масса - 427,1526; рассч.масса - 427,1539 (М+Н).

Пример 75. Метиловый эфир N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 47 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]карбонил}-4-нитро-L-фенилаланина в виде желтого клейкого твердого вещества с 88%-ным выходом получали метиловый эфир N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж. масса - 443,1309; рассч.масса - 443,1310 (М+Н).

Пример 76. Метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина

Аналогично примеру 48 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-4-нитро-L-фенилаланина в виде гигроскопического желтого твердого вещества с 97%-ным выходом получали метиловый эфир 4-амино-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 413,1556; рассч.масса - 413,1570 (М+Н).

Пример 77. Метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 49 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-амино-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде белого аморфного твердого вещества с 82%-ным выходом получали метиловый эфир 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 585,1056; рассч.масса - 585,1051 (М+Н).

Пример 78. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин

Аналогично примеру 50 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде аморфного белого твердого вещества с 87%-ным выходом получали 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-{[1-((3-метилсульфонил)пропил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 571,0894; рассч.масса - 571,0895 (М+Н).

Пример 79. 2-хлор-5-(трифторметил)фенолтрифлат

В раствор 4,8 г (24,4 ммоля) 2-хлор-5-(трифторметил)фенола в 160 мл CH₂Cl₂ при -70°С вводили 6,7 г (54,0 ммоля) ДМАП, а затем при -70°С 10,32 г (6,16 мл, 36,6 ммоля) ангидрида трифторметансульфокислоты. После такого добавления суспензию перемешивали в течение 30 мин при этой температуре с последующими нагревом до комнатной температуры и перемешиванием в течение еще 3 ч, по прошествии которых данные ТСХ реакционной смеси указывали на отсутствие исходного материала. Смесь разбавляли 100 мл Н₂О и два слоя разделяли. Водный слой экстрагировали 100 мл CH₂Cl₂. Объединенные дихлорэтановые экстракты промывали раствором рассола и сушили над MgSO₄ . В результате отфильтровывания осушителя и удаления под вакуумом растворителя получали белую суспензию, которую очищали хроматографией на силикагеле в колонке, элюируя гексаном/диэтиловым эфиром в соотношении 4/1, с получением 6,8 г (выход: 75%) продукта в виде бесцветного масла. МСВР: обнаруж.масса - 327,9388; рассч.масса - 327,9392 (М+).

Пример 80. 2-хлор-5-(трифторметил)бензойная кислота

В 250-миллилитровую толстостенную склянку загружали 6,76 г (20,6 ммоля) 2-хлор-5-(трифторметил)фенолтрифлата, 384 мг (1,71 ммоля) Pd(OAc)₂ и 701 мг (1,71 ммоля) ДФФП. Колбу закрывали мембраной и в ней три раза создавали вакуум и ее заполняли аргоном. Далее с помощью шприца последовательно добавляли 114 мл ацетонитрила, 30,7 мл (225,3 ммоля) триэтиламина и 22,2 мл воды. После этого резиновую мембрану заменяли плакированной тефлоном крышкой. Монооксидом углерода в колбе создавали повышенное давление (40 фунтов/кв.дюйм) и газ выпускали. Эту операцию повторяли три раза и, наконец, под повышенным давлением смесь перемешивали в течение 5 мин. Далее колбу от баллона с газом отсоединяли, погружали в предварительно нагретую (до температуры от 83 до 85°С) масляную баню и перемешивали в течение 2 ч. С помощью монооксида углерода в колбе вновь создавали повышенное давление и смесь перемешивали в течение еще 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, давление сбрасывали и смесь разбавляли 250 мл диэтилового эфира и 25 мл 1,0 н. NaOH. Кислоту экстрагировали 2 порциями по 100 мл воды. Объединенные водные экстракты нейтрализовали 1,0 н. НСl и кислоту вновь экстрагировали 3 порциями по 100 мл диэтилового эфира. Объединенные эфирные экстракты промывали раствором рассола и сушили над MgSO₄ . В результате отфильтровывания осушителя и удаления под вакуумом растворителя получали сырое светло-желтое твердое вещество. Это твердое вещество растворяли в 100 мл диэтилового эфира и экстрагировали 2 порциями по 50 мл 1,0 н. раствора NaOH. Далее водный слой подкисляли и экстрагировали 2 порциями по 100 мл диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали 100 мл раствора рассола и сушили над MgSO₄. После фильтрования и концентрирования раствора в виде белого твердого вещества получали 1,6 г (выход: 35%) 2-хлор-5-(трифторметил)бензойной кислоты; t_пл : 82-83,5°С. МСВР: обнаруж.масса - 223,9852; рассч.масса - 223,9851 (М+).

Пример 81. Метиловый эфир 4-{[(2-хлор-5-(трифторметил)фенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

Аналогично примеру 52 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде белого аморфного твердого вещества с 97%-ным выходом получали метиловый эфир 4-{[(2-хлор-5-(трифторметил)фенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 633,1477; рассч.масса - 633,1471 (М+Н).

Пример 82. 4-{[(2-хлор-5-(трифторметил)фенил)карбонил]амино}-N{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин

Аналогично примеру 50 с использованием в качестве исходного материала метилового эфира 4-{[(2-хлор-5-(трифторметил)фенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в виде белого аморфного твердого вещества с 75%-ным выходом получали 4-{[(2-хлор-5-(трифторметил)фенил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин. МСВР: обнаруж.масса - 619,1315; рассч.масса - 619,1318 (М+Н).

Пример 83. Метиловый эфир 4-{[(2,4-диметил-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина

В суспензию 184 мг (0,84 ммоля) 2,4-диметил-6-трифторметил-3-пиридинкарбоновой кислоты в 10 мл дихлорметана и 3 каплях ДМФ при 0°С по каплям, в течение от 2 до 3 мин вводили 146 мг (0,1 мл, 1,14 ммоля) оксалилхлорида. После этого добавления суспензию перемешивали в течение 30 мин при 0°С, а затем ей давали нагреться до комнатной температуры. Прозрачный раствор перемешивали в течение еще 2 ч при комнатной температуре. Под вакуумом удаляли растворитель и остаток сушили под высоким вакуумом в течение 1 ч. В 4-горлой колбе вышеупомянутый полученный хлорангидрид кислоты в 6 мл этилацетата добавляли в смесь 298 мг (0,7 ммоля) метилового эфира 4-амино-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина с 900 мг (1,4 ммоля) продукта Amberlyst А-21 в 10 мл этилацетата (хранили над 4 -ыми молекулярными ситами). Смесь подвергали ультразвуковой обработке в течение 30 мин, разбавляли 100 мл воды и 100 мл этилацетата и два слоя разделяли. Водный слой экстрагировали 50 мл этилацетата и объединенные экстракты промывали 100 мл раствора рассола и сушили над безводным сульфатом магния. После отфильтровывания осушителя раствор концентрировали под пониженным давлением и остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с получением в виде белого аморфного твердого вещества 139 мг (выход: 32%) метилового эфира 4-{[(2,4-диметил-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 628,2122; рассч.масса - 628,2127 (М+Н).

Пример 84. 4-{[(2,4-диметил-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланин

В суспензию 125 мг (0,2 ммоля) метилового эфира 4-{[(2,4-диметил-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина в 7 мл этанола при комнатной температуре вводили 5,0 мл 1,0 М раствора гидроксида натрия. В течение нескольких минут образовывался прозрачный раствор, который нагревали до температуры от 45 до 50°С и перемешивали в течение 4 ч, по прошествии которых данные ТСХ анализа этой смеси указывали на отсутствие исходного материала. Далее смесь охлаждали до комнатной температуры и под вакуумом удаляли этанол. Остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, получая в виде аморфного белого твердого вещества 67,5 мг (выход: 55%) 4-{[(2,4-диметил-6-трифторметил-3-пиридинил)карбонил]-амино}-N-{[1-((4-метилсульфонил)-бутил)циклобутил]тиоксометил}-L-фенилаланина. МСВР: обнаруж.масса - 614,1970; рассч.масса - 614,1970 (М+Н).

Пример 85. 4-{[(2,6-дихлорфенил)карбонил]амино}-N-[(2-бромфенил)тиоксометил]-L-фенилаланин

Указанное в заглавии соединение получали аналогично примерам с 35 по 39 с использованием в качестве исходного материала 2-бромбензойной кислоты. МСВР: обнаруж.масса - 550,9593; рассч.масса - 550,9598 (М+Н).

Пример 86. 4-{(2S,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-фенил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил}-N-{[((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланин и 4-{(2R,4R)-3-ацетил-2-фенил-4-[(3-фенил)метил]-5-оксоимидазолидин-1-ил}-N-{[((4-метилсульфонил)бутил)циклопентил]тиоксометил}-L-фенилаланин

Указанные в заглавии соединения получали аналогично примерам с 26 по 29. Изомеры разделяли хроматографией на стадии метилового эфира. Для 2S,4R-изомера МСВР: обнаруж. масса - 650,2670; рассч.масса - 650,2665 (M+Na). Для 2R,4R-изомера МСВР: обнаруж.масса - 650,2679; рассч.масса - 650,2665 (M+Na).

Анализы:

1. Скрининг в отношении связывания VLA-4/VCAM-1

Антагонистическую активность в отношении VLA-4, которую определяют по способности конкурировать за связывание с иммобилизованным VCAM-1, оценивали количественно с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием двойного антитела. Связанный с VCAM-1 VLA-4 (а₄b ₁ интегрин) может быть выявлен по образованию следующего комплекса: антитело b1 к интегрину/конъюгированный с пероксидазой из хрена (HRP) антимышиный IgG/хромогенный субстрат (K-Blue). Для этого сначала покрывали (сенсибилизировали) 96-луночные планшеты (фирма Nunc Maxisorp) рекомбинанатным человеческим VCAM-1 (0,4 мкг в 100 мкл ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор)), запечатывали каждый планшет и давали планшетам выстояться при 4°С в течение 18 ч. Далее покрытые VCAM планшеты блокировали с помощью 250 мкл смеси 1% БСА (бычий сывороточный альбумин)/0,02% NaN₃ с целью снижения неспецифического связывания. В день проведения анализа все планшеты дважды промывали буфером для определения VCAM (200 мкл/лунку буфера, содержащего 50 мМ Трис-HCl, 100 мМ NaCl, 1 мМ МnСl₂, 0,05% Твин 20; рН 7,4). Тестируемые соединения растворяли в 100%-ном ДМСО и затем разводили из расчета 1:20 в буфере для определения VCAM, дополненном 1 мг/мл БСА (т.е., конечная концентрация ДМСО составляла 5%). Для того чтобы для каждого тестируемого соединения получить диапазон концентраций от 0,005 нМ до 1,563 мкМ использовали разведения 1:4. В каждую лунку покрытых VCAM планшетов добавляли по 100 мкл каждого разведения, а затем 10 мкл VLA-4, полученного из клеток линии Ramos. Эти планшеты далее встряхивали на шейкере с платформой в течение 1 мин, инкубировали в течение 2 мин при 37°С и затем промывали четыре раза, используя 200 мкл буфера для определения VCAM/лунку. В каждую лунку добавляли 100 мкл мышиного антитела к человеческому интегрину 1 (0,6 мкг/мл в буфере для определения VCAM + 1 мг/мл БСА), и инкубировали в течение 1 ч при 37°С. После завершения этого периода инкубации все планшеты промывали четыре раза буфером для определения VCAM (200 мкл/лунку). Затем в каждую лунку добавляли соответствующее второе антитело, т.е. конъюгированный с HRP козлиный антимышиный IgG (100 мкл/лунку, разведение 1:800 в буфере для определения VCAM+1 мг/мл БСА), после чего инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и процесс завершали трехкратной промывкой (200 мкл/лунку) буфером для определения VCAM. Появление окраски инициировали путем добавления 100 мкл K-Blue на лунку (инкубация в течение 15 мин, комнатная температура) и этот процесс прекращали, добавляя по 100 мкл на лунку буфера типа Red Stop. Затем все планшеты исследовали в УФ/Vis-спектрофотометре при 650 нм. Результаты выражали в виде % ингибирования общего связывания (т.е. VLA-4+VCAM-1 в отсутствие тестируемого соединения). Ниже в таблице представлены некоторые данные, полученные с использованием соединений по изобретению.

2. Протокол проведения скрининга на клеточном уровне по определению связывания Ramos (VLA-4)/VCAM-1

Материалы:

Растворимый рекомбинантный человеческий VCAM-1 (смесь 5- и 7-Ig доменов) очищали из среды для культуры клеток яичника китайского хомячка (СНО) с помощью иммуноафинной хроматографии и поддерживали в растворе, содержащем 0,1 М Трис-глицин (рН 7,5), 0,1 М NaCl, 5 мМ ЭДТК, 1 мМ фенилметилсульфонилфторида (МФСФ), 0,02% NaN ₃ и 10 мкг/мл леупептина. Кальцеин-АМ получали от фирмы Molecular Probes Inc.

Методы:

Антагонистическую активность соединений в отношении VLA-4 (a₄b₁ интегрин), которую определяют по способности конкурировать с локализованном на клеточной поверхности VLA-4 за связывание с иммобилизованным VCAM-1, оценивали количественно путем анализа клеточной адгезии с использованием Ramos-VCAM-1. Клетки линии Ramos, несущие локализованный на клеточной поверхности VLA-4, метили с помощью флуоресцентного красителя (кальцеин-АМ) и давали связываться с VCAM-1 в присутствии тестируемого соединения или без него. Уменьшение интенсивности флуоресценции, связанное с прикреплением клеток (% ингибирования) отражает конкурентное ингибирование тестируемым соединением опосредуемой VLA-4 клеточной адгезии.

Для этого сначала покрывали 96-луночные планшеты (фирма Nunc Maxisorp) рекомбинанатным человеческим VCAM-1 (100 нг в 100 мкл ЗФР), запечатывали каждый планшет и давали планшетам выстояться при 4°С в течение 18 ч. Далее покрытые VCAM планшеты дважды промывали 0,05%-ным Твин 20 в ЗФР и затем блокировали в течение 1 ч (комнатная температура) с помощью 200 мкл блокирующего буфера (1% БСА/0,02% тимеросала) с цель снижения неспецифического связывания. После инкубации с блокирующим буфером планшеты переворачивали, промокали и оставшийся буфер отсасывали. Затем каждый планшет промывали 300 мкл ЗФР, переворачивали и оставшийся ЗФР отсасывали.

Тестируемые соединения растворяли в 100%-ном ДМСО и затем разводили из расчета 1:25 в буфере для определения клеточной адгезии VCAM (4 мМ СаСl₂, 4 мМ MgCl₂ в 50 мМ Трис-HCl, рН 7,5) (конечная концентрация ДМСО составляла 4%). Для каждого тестируемого соединения готовили по 8 серийных разведений 1:4 (в целом диапазон концентраций составлял от 1 нМ до 12500 нМ). В покрытые VCAM планшеты добавляли по 100 мкл каждого разведения, а затем 100 мкл клеток линии Ramos (200000 клеток/лунку в 1%-ном БСА/ЗФР). Планшеты, содержащие тестируемые соединения и клетки линии Ramos, давали инкубироваться в течение 45 мин при комнатной температуре, после чего добавляли 165 мкл ЗФР/лунку. Планшеты переворачивали для того, чтобы удалить неприкрепившиеся клетки, промокали и добавляли 300 мкл ЗФР/лунку. Планшеты вновь переворачивали, промокали и оставшийся буфер осторожно отсасывали. В каждую лунку добавляли 100 мкл буфера для лизиса (0,1% ДСП в 50 мМ Трис-HCl, рН 8,5) и перемешивали в течение 2 мин на роторном шейкере с платформой. Затем интенсивность флуоресценции планшетов оценивали с помощью системы для измерения флуоресценции Cytofluor 2300 (фирма Millipore) (длина волны возбуждения 485 нм, длина волы испускания 530 нм).

3. Анализ MadCAM с использованием клеток линии PRMI 8866

Активность в отношении связывания с MadCAM оценивали количественно с помощью анализа, основанного на использовании клеток линии PRMI 8866. Клетки линии PRMI 8866, несущие на клеточной поверхности MadCAM, метили с помощью флуоресцентного красителя (кальцеин-АМ) и давали связываться с MadCAM в присутствии тестируемого соединения или без него. Уменьшение интенсивности флуоресценции, связанное с прикреплением клеток (% ингибирования), отражает конкурентное ингибирование тестируемым соединением опосредуемой MadCAM клеточной адгезии.

Для этого сначала покрывали 96-луночные планшеты (фирма Nunc Maxisorp) 25 нг/лунку MadCAM (100 мкл/лунку в буфере для сенсибилизации: 10 мМ карбонатный/бикарбонатный буфер, 0,8 г/л карбоната натрия, 1,55 г/л бикарбоната натрия, значение рН доведо до 9,6 с помощью 1 н. НСl), запечатывали и заворачивали в оболочку каждый планшет и выдерживали планшеты в холодильнике в течение по меньшей мере 24 ч. Далее покрытые MadCAM планшеты дважды промывали 0,05%-ным Твин 20 в ЗФР и затем блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре с помощью блокирующего буфера (1% обезжиренного сухого молока в ЗФР) с целью снижения неспецифического связывания. После инкубации с блокирующим буфером планшеты промывали ЗФР, промокали вручную и оставшийся буфер отсасывали.

Клетки линии PRMI 8866 (2×10 ⁶ клеток/мл × 10 мл/планшет × количество планшетов) переносили в центрифужные пробирки объемом 50 мл, заполненные ЗФР, и центрифугировали при 200×g в течение 8 мин, после чего ЗФР сливали и дебрис ресуспендировали в ЗФР до получения плотности 10×10⁶ клеток/мл. Кальцеин (разбавленный с помощью 200 мкл ДМСО из замороженного маточного раствора с концентрацией 5 мг/мл) добавляли к клеткам в концентрации 5 мкл/мл ЗФР. После инкубации при 37°С в течение 30 мин в темноте клетки промывали в ЗФР и ресуспендировали из расчета 2×10⁶ клеток /мл в буфере для клеток (среда для PRMI 8866 (без добавок)).

Тестируемые соединения растворяли в 100%-ном ДМСО и затем разводили из расчета 1:25 в буфере для связывания (1,5 мМ СаСl₂, 0,5 мМ MnCl₂ в 50 мМ Трис-HCl, значение рН доведено до 7,5 с помощью NaOH). Остальные разведения сделаны с использованием буфера для разведения (4% ДМСО в буфере для связывания - конечная концентарция ДМСО 2% после разбавления в лунках 1:2). Для каждого тестируемого соединения готовили серии разведений. В первый ряд покрытых MadCAM планшетов добавляли 129 мкл буфера для связывания. В остальные лунки добавляли по 100 мкл/лунку буфера для разведения, а затем по 5,4 мкл соответствующего разведения каждого тестирумого соединения (в трех повторностях). Добавляли 100 мкл клеток (200000 клеток/лунку). Контрольные лунки содержали по 100 мкл буфера для разведения + 100 мкл буфера для клеток и 100 мкл буфера для разведения + 100 мкл буфера для клеток. Планшеты инкубировали в течение 45 мин при комнатной температуре, после чего добавляли ЗФР из расчета 150 мкл/лунку. Планшеты переворачивали для того, чтобы удалить неприкрепившиеся клетки, промокали и добавляли 200 мкл ЗФР/лунку. Планшеты вновь переворачивали, промокали и оставшийся буфер осторожно отсасывали. В каждую лунку добавляли 100 мкл ЗФР. Затем интенсивность флуоресценции планшетов оценивали с помощью системы для измерения флуоресценции (длина волны возбуждения 485 нм, длина волны испускания 530 нм, чувствительность равна 2). Для получения значений IC ₅₀ для каждого соединения применяли линейный регрессионный анализ.

Результаты приведены в следующей таблице:

Пример	IС50 (нМ), ELISA	IC50, Ramos	IC50, RPMI
3	4,0	66,5
10	1,5	33
11	5,6	42,5
18	0,47	60
25	6,0	101
29		220
34		4,180
39		784
50		30
53		148
62		8	8,7
64		87
71		926
78		341
82
84		3,5	8,3

Пример 4. Острое воспаление дыхательных путей у атонических приматов.

Воспаление дыхательных путей у обезьяны определяли, используя модификацию протокола, описанного у Turner с соавторами (Turner и др., 1994). Для этих исследований использовали взрослых самцов обезьян-cynomolgus (Масаса fascicularis (яванский макак) Hazelton Labs, Денвер, штат Пенсильвания) весом 3,6-5,8 кг. Все животные давали положительную кожную реакцию и реакцию дыхательных путей на антиген Ascaris suum и у них обнаружено по меньшей мере 3-кратное повышение чувствительности к метахолину (MCh) в ответ на аэрозольную обработку экстрактами аскарид.

В день проведения каждого эксперимента животных подвергали анестезии гидрохлоридом кетамина (12 мг/кг) и ксилазином (0,5 мг/кг), интубировали с помощью интубационной трубки с надувной манжеткой (3 мм, Mallinckrodt Medical, Сент-Луис, штат Миссури), затем помещали в вертикальном положении на специально сконструированный плексигласовый стул (Plas-Labs, Лансинг, штат Мичиган). Интубационную трубку соединяли с нагретым пневмотахографом типа Fleisch. Скорость потока воздуха оценивали с помощью дифференциального датчика давления типа Validyn (DP 45-24), который присоединяли к пневмотахографу. Транслегочное давление оценивали с помощью второго датчика Validyn (DP 45-24), который помещали между боковым плечом трахеометрической канюли и внутритрахеальной иглой 18 размера, введенной во внутриреберное пространство, расположенное ниже левого соска. Регистрацию давления и параметров потока и расчет R_L осуществляли с помощью системы сбора и обработки данных Modular Instruments, как описано выше. Базовый уровень R_L оценивали для всех животных в день каждого эксперимента, и его среднее значение составляло примерно 0,04 см Н₂О/мл/с.

Протокол

Воспаление дыхательных путей индуцировали аэрозольной обработкой животного экстрактом аскарид A. suum в течение 60 с. Аэрозоль вводили с помощью распылителя (De Vilbiss, модель 5000, Healt Inc., Сомерсет, штат Пенсильвания), который присоединяли к интубационной трубке. Для каждого животного предварительно определяли концентрацию экстракта (от 500 до 50000 единиц белкового азота (PNU)), которая должна вызывать по меньшей мере двукратное повышение устойчивости дыхательных путей. Через 24 ч после контрольного заражения антигеном животных подвергали анестезии, как описано выше, и помещали на стол из нержавеющей стали. Воспаление дыхательных путей оценивали путем введения педиатрического бронхоскопа в полость дыхательных путей на глубину примерно до 4 или 5 уровня бронхов и осторожно промывали аликвотами по 3×2 мл стерильного сбалансированного солевого раствора Хэнкса. Полученную лаважную жидкость затем анализировали в отношении общего количества клеток и количества дифференцированных клеток с помощью стандартных гематологических процедур.

Обработка лекарственным средством

Животным вводили лекарственное средство или носитель перорально за 2 ч до контрольного заражения антигеном. Соединение из примера 1 вызывало значительное снижение количества и процента воспалительных клеток, присутствующих в лаважной жидкости, по сравнению с контрольными животными, обработанными носителем.

Дозируемая форма для орального применения

№	Ингредиенты	мг/таблетка
1	Активное соединение согласно изобретению	25	100	250	500
2	Безводная лактоза	83	35	19	38
3	Натрийкроскарамелоза	6	8	16	32
4	Повидон К30	5	6	12	24
5	Стеарат магния	1	1	3	6
	Общий вес (мг)	120	150	300	600

Способ приготовления:

1. В подходящем смесителе в течение 15 минут перемешивали компоненты 1, 2 и 3.

2. Смесь, полученную на стадии 1 в виде порошка, гранулируют с использованием 20%-ного раствора PVP K30 (поливинилпирролидон).

3. Гранулят, полученный на стадии 2, сушат при температуре 50°С.

4. Гранулят, полученный на стадии 3, измельчают в специально предназначенном для этого устройстве.

5. К измельченному грануляту со стадии 4 добавляют компонент 5 и перемешивают в течение 3 минут.

6. Гранулят, полученный на стадии 5, прессуют в прессующем устройстве в таблетки.

Композиция для применения в виде аэрозоля.

Компоненты	Количество/мл
Активное соединение согласно изобретению	3-150 мг*
Хлорид натрия	8,0 мг
Фосфатный буфер (20 мМ) рН 7,0** (в достаточном количестве)	1,0мл
* В зависимости от степени активности соединения ** Значение рН регулируют добавлением раствора гидроксида натрия (1 н.) или раствора соляной кислоты (10% мас./об.)

Способ приготовления:

1. Активное вещество растворяют в буфере.

2. Полученный раствор фильтруют через фильтр с размерами пор 0,22 мк.

После распыления полученного раствора распределение частиц по размерам находится в диапазоне 1-6 мк.