препарат для лечения бактериального вагиноза, способ его получения и способ лечения бактериального вагиноза

Формула изобретения

1. Препарат для лечения бактериального вагиноза, содержащий в качестве активного начала микробную массу живых бактерий, защитную среду, жировую основу, отличающийся тем, что в качестве микробной массы содержит лактобациллы и один или несколько родов эубиотических бактерий, выбранных из группы: бифидобактерии, стрептококки и лактококки в количестве 10⁵-10⁹ МК на одну дозу, дополнительно содержит приемлемый сорбент при его массовом соотношении к микробной массе бактерий (9-1):(1-9), биологически активную добавку в количестве 0,05-3,0 маc.% относительно массы получаемого препарата, а в качестве жировой основы - любую приемлемую основу, содержащую не более 5 маc.% воды и имеющую рН 4,5-7,0.

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что приемлемый сорбент имеет размер частиц не более 100 мкм и обладает иммобилизующей активностью к МК от 10 до 100% своей поверхности.

3. Препарат по п.1 или 2, отличающийся тем, что биологическая добавка содержит один или несколько ингредиентов, обладающих фунгицидным и/или антимикробным действием, и/или действием, повышающим активность вводимых в препарат микроорганизмов.

4. Препарат по п.1, отличающийся тем, что он представляет собой суппозиторий или мазь.

5. Способ получения препарата для лечения бактериального вагиноза, отличающийся тем, что сначала получают микробную массу лактобацилл и одного или нескольких родов эубиотических бактерий, выбранных из группы: бифидобактерий, стрептококков и лактококков, причем их содержание в 1 г микробной массы составляет 10 ¹⁰-10¹¹ клеток, затем полученную микробную массу бактерий иммобилизуют на приемлемом в медицине сорбенте при его соотношении к микробной массе бактерий (9-1):(1-9), после чего в образовавшуюся массу вводят защитную среду в необходимом количестве и биологически активную добавку в количестве 0,05-3,0% относительно массы получаемого препарата, образовавшийся продукт подвергают лиофильной сушке в режиме, соответствующем роду используемых микроорганизмов, затем высушенную массу смешивают с приемлемой жировой основой, содержащей менее 5% воды и имеющей рН 4,5-7,0 и взятой в количестве, соответствующем содержанию 10⁵ -10⁹ МК в одной дозе препарата.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют сорбент с размером частиц не более 100 мкм.

7. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что используют биологически активную добавку, содержащую один или несколько ингредиентов, обладающих фунгицидным и/или антимикробным действием, и/или действием, повышающим активность вводимых в препарат микроорганизмов.

8. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют жировую основу, пригодную для получения крема.

9. Способ по п.5, отличающийся тем, что используют жировую основу, пригодную для получения суппозитория.

10. Способ профилактики и лечения бактериального вагиноза, отличающийся тем, что интравагинально вводят препарат по пп.1-4, содержащий лактобациллы и один или несколько родов эубиотических бактерий, выбранных из группы: бифидобактерий, стрептококков и лактококков в количестве 10⁵-10⁹ живых клеток на одну дозу, причем препарат вводят 1-3 раза в сутки в количестве 1-3 доз, а курс лечения определяют индивидуально в зависимости от степени поражения слизистой влагалища.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что предварительно орошают влагалище физиологическим раствором или отваром трав.

12. Способ по п.10 или 11, отличающийся тем, что предварительно во влагалище вводят суспензию приемлемого сорбента.

13. Способ по п.10, или 11, или 12, отличающийся тем, что предварительно во влагалище вводят антифунгицидные лекарственные средства.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармакологии, в частности к препаратам для лечения бактериального вагиноза, и может быть использовано в фармацевтической промышленности и акушерско-гинекологической практике.

В настоящее время болезни, вызываемые генитальными инфекциями, относятся к числу наиболее частых гинекологических заболеваний. В последние годы наметилась тенденция роста заболеваний, сопровождающихся нарушением нормальной микрофлоры влагалища, в частности бактериального вагиноза.

В медицинской практике для лечения таких заболеваний широко применяются антимикробные препараты, например антибиотики. Однако они обычна токсичны, не всегда эффективны, кроме того, вызывают появление микроорганизмов, устойчивых к действию используемых антибактериальных средств. Как следствие лечения указанными препаратами требуется дополнительное восстановление микробиоценоза слизистой влагалища.

В связи с вышеизложенным весьма важная роль отводится поиску новых безопасных и не имеющих противопоказаний лекарственных препаратов для лечения заболеваний влагалища, сопровождающихся нарушением микробиоценоза.

Наиболее близким к заявляемому решению является препарат для лечения бактериального вагиноза “Лактобактерин в суппозиториях” (Инструкция по применению лактобактерина в суппозиториях. Нижегородское государственное предприятие по производству бактериальных препаратов. Утверждено Министерством здравохраиения СССР, 29 ноября 1992 г.).

“Лактобактерин в суппозиториях” представляет собой микробную массу живых лактобактерий, леофильно высушенную в среде культивирования. Кроме того, он содержит сахарозо-желатиномолочный ингредиент, являющийся защитной средой, необходимой для сохранения жизнеспособности бактерий, и приемлемую жировую основу.

Живые микробные клетки (МК) лактобацилл обладают антагонистической активностью в отношении тест-штаммов патогенных и условно-патогенных микробов, включая шигеллы, энтеропатогенную кишечную палочку, стафилококк, протей, что и определяет действие известного препарата при нарушениях нормального бактериоценоза. Препарат-прототип имеет срок годности 1 год при условии его хранения при температуре (4±2)°С.

Однако недостатком “Лактобактерина в суппозиториях” является недостаточно высокие фармакологические свойства, поскольку они не обеспечивают должный антагонистический, противоинфекционный эффекты и необходимый уровень приживляемости микроорганизмов на слизистой влагалища. И, кроме того, препарат не обладает необходимой биодоступностью. Указанные недостатки являются причиной относительно низкой лечебной эффективности препарата.

Еще одним существенным недостатком известного препарата является отсутствие сохраняемости МК при обычных условиях вне холодовой цепи.

Задачей настоящего изобретения является создание препарата для лечения бактериального вагиноза путем сочетания ингредиентов, входящих в его состав, в результате чего достигается высокая жизнеспособность живых МК и как следствие повышение лечебной эффективности и увеличение срока хранения препарата.

Поставленная задача решается тем, что препарат для лечения бактериального вагиноза, содержащий в качестве активного начала микробную массу живых бактерий, защитную среду, жировую основу, согласно изобретению в качестве микробной массы содержит лактобациллы и один или несколько родов эубиотических бактерий, выбранных из группы: бифидобактерии, стрептококки и лактококки в количестве 10⁵-10⁹ МК на одну дозу, дополнительно содержит приемлемый сорбент при соотношении его к микробной массе бактерий (9-1):(1-9), биологически активную добавку в количестве 0,05-3,0 мас.% относительно массы получаемого препарата, а в качестве жировой основы - любую приемлемую основу, содержащую не более 5 мас.% воды и имеющую рН 4,5-7,0.

Предложенные авторами микроорганизмы, входящие в состав заявляемого препарата, являются представителями нормальной микрофлоры слизистой влагалища и охватывают спектр бактерий, при нарушении количества которых возникают определенные патологии, в частности бактериальный вагиноз.

Обязательным условием является наличие в препарате лактобацилл, поскольку они в подавляющем своем большинстве определяют микрофлору слизистой влагалища. Что касается других микроорганизмов, то их наличие в препарате предназначено для усиления биологической активности лактобацилл.

Необходимая биологическая активность и эффективность лечения определяется жизнеспособностью МК, их адгезивной способностью и способностью к колонизации. Авторами настоящего изобретения предложено содержание 10⁵-10 ⁹ МК в одной дозе, что, с одной стороны, связано с эффективностью препарата, а с другой - экономической целесообразностью.

На модели белых крыс, которым через 24 часа после приема препаратов делали соскоб со слизистой влагалища, при введении 0,1 мл суспензии препарата, состоящего из иммобилизованных лактобацилл и неиммобилизованных лактобацилл в тех же концентрациях (от 10 мк/см³ до 10¹⁰ мк/см³), было показано, что адгезивная активность лактобацилл в составе препарата достигает максимального уровня 9,1·10⁷ мк/мм ² при введении препарата, содержащего 10⁹ МК. Дальнейшее же увеличение концентрации МК не приводит к повышению уровня адгезии.

Данные таблицы 1 подтверждают, что наиболее клинически эффективным является препарат, содержащий от 10 ⁵ до 10⁹ МК в одной дозе.

Для сравнения показано, что неиммобилизованные бактерии уступают в уровне адгезии к поверхности слизистой, не превышая 3,5·10⁴ мк/мм².

Таблица 1 Адгезивная активность лактобацилл в заявляемом препарате и лактобацилл в суспензии
Лактобациллы	Исходные концентрации вводимых МК в 1 см3 суспензии
	102	104	10 5	106	108	10 9	1010
Иммобилизованные на сорбенте в составе заявляемого препарата	Адгезивная активность к эпителию
	1,2·10	2,6·102	2,8,0·103	3,8·104	6,6·10 6	9,1·10 7	9,2·107
Не иммобилизованные в составе суспензии	Нет	1,7·10 2	1,7·102	1,7·102	2,8·103	3,5·104	4,1·10 4

Защитная среда в соответствии с данным изобретением должна быть такой, которая способна сохранить на необходимом уровне жизнеспособность сорбированных бактерий после лиофильной сушки.

Количественное содержание защитной среды, например сахаро-желатиномолочной среды, обычно определяется условиями хранения микроорганизмов в препарате и составляет 0,01-0,02% от массы.

К приемлемым сорбентам, используемым в заявляемом препарате, относятся любые сорбенты, разрешенные Министерством здравоохранения, например производные целлюлозы, глиноземы, в частности смектит натрия и др.

Для достижения лечебной эффективности заявляемого препарата на требуемом уровне необходимо создание микроколоний, состоящих из частицы сорбента, на которой сорбировано 10-40 МК. Это условие, как определено в настоящем изобретении, удовлетворяется при массовом соотношении сорбента к микробной массе (9-1):(1-9). При этих условиях образование микроколоний бактерий будет максимальным.

Размер частиц сорбента может быть любым пригодным для препарата такого назначения, однако наиболее приемлемым является размер не более 100 мкм, в противном случае возможно механическое раздражение слизистой.

Что касается биологически активной добавки, то она может иметь различные функции.

Количественное содержание добавки от 0,05 до 3,0 мас.% от микробной массы бактерий обусловлено тем, что при содержании меньшем, чем 0,05 мас.%, резко падает ее эффективность, т.е. воздействие на жизнеспособность, колонизацию и адгезию на слизистой МК.

При большем, чем 3,0 мас.% содержании биологически активной добавки, возникает опасность лизиса вводимых бактерий и, кроме того, возможны ее побочные действия, например раздражения слизистой от ее избытка, в частности, при использовании эфирных масел растений.

Выбор ингредиентов биологически активной добавки весьма широк и обусловлен особенностями конкретного применения заявляемого препарата, например могут быть использованы фунгицидные ингредиенты либо, в случае необходимости, - ингредиенты, обладающие антимикробным действием, и др. Введение в препарат, например, фитоингредиентов ускоряет процесс колонизации слизистой и приводит к нормализации микробиоценоза по этому показателю уже через 48 часов.

Авторами предложено в качестве жировой основы использовать любую основу, пригодную для получения крема или суппозитория. Однако к жировой основе предъявляются некоторые требования - она не должна содержать более 5% воды и должна обеспечивать для препарата рН 4,5-7,0, в противном случае жизнеспособность бактерий резко падает, что сказывается на эффективности препарата.

Кроме того, совокупность всех ингредиентов заявляемого препарата направлена на увеличение сроков его хранения и на упрощение условий хранений. Результаты соответствующих исследований приведены в таблице 2.

Для исследования взяты заявляемые препараты, отличающиеся используемым сорбентом и величиной рН жировой основы. Исследования проводились через год их хранения при температуре 22°С.

Таблица 2 Зависимость жизнеспособности бактерий от величины рН жировой основы
Заявляемый препарат, отличающийся сорбентом	Исходное кол-во МК в 1 г препарата	Жизнеспособность бактерий, кол-во МК в 1 г препарата (один год хранения)
		РН жировой основы
		3,0	4,5	6,5	7,0	7,5
Производные целлюлозы	1,0·109	1,0·10 7	8,0·10 7	4,0·108	4,0·108	5,0·107
Полиметилсилоксан	1,0·10 9	1,0·10 6	4,0·107	2,0·107	3,0·107	7,0·107
Смектит натрия	1,0·10 9	2,0·106	3,0·107	3,0·108	5,0·108	1,0·10 7

Данные таблицы 2 свидетельствуют о том, что жизнеспособность бактерий наиболее высокая при рН 4,5-7,0, при значениях ниже 4,5 она недостаточна для достижения необходимых результатов, а при значениях рН выше 7,0 жизнеспособность бактерий заметно падает.

Зависимость жизнеспособности бактерий и рН жировой основы, полученная после года хранения при температуре 22°С, свидетельствует об увеличении сроков хранения с одновременным упрощением условий хранения.

Для доказательства клинической эффективности заявляемого препарата были проведены исследования, результаты которых приведены в таблице 3.

В качестве исследуемых препаратов был использован препарат (1), соответствующий заявляемому. В качестве бактерий для наглядности были взяты лактобациллы. Добавление в соответствии с заявляемым решением к ним бифидобактерий, и/или стрептоккоков, и/или лактококков пропорционально усиливает получаемый результат.

Кроме того, исследовали препарат (2) без фитодобавки и, наконец, препарат (3), соответствующий прототипу.

Указанные выше препараты вводили во влагалище женщинам - добровольцам, страдающим бактериальным вагинозом, выраженным снижением лактофлоры.

Таблица 3 Сравнительная характеристика лечебного действия заявляемого препарата и препарата-прототипа
Препарат	Содержание лактобацилл в секрете влагалища, МК/см3
	До лечения	Через 24 часа	Через 48 часов
1. Препарат, содержащий иммобилизованные на глиноземе лактобациллы и фитодобавки	1,2·10 3	2,5·106	3,6·107
2. Препарат, содержащий иммобилизованные на глиноземе лактобациллы	1,2·10 3	3,1·106	7.1·106
3. Неиммобилизованные лактобациллы (прототип)	1,2·103	5,0·106	4,0·104

Как показывают результаты таблицы 3, лучшие клинические показатели получены для препарата (1), соответствующему заявляемому.

Еще одной задачей заявляемого изобретения является создание способа получения препарата для лечения бактериального вагиноза путем такого сочетания действий и режимов их осуществления, которое позволяет получить препарат, обладающий высокой лечебной эффективностью и стойкостью к хранению при обычных условиях.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения препарата для лечения бактериального вагиноза, согласно изобретению сначала получают микробную массу лактобацилл и одного или нескольких родов эубиотических бактерий, выбранных из группы бифидобактерий, стрептококков и лактококков, причем их содержание в 1 г микробной массы составляет 10¹⁰-10¹¹ клеток. Затем полученную микробную массу бактерий иммобилизуют на приемлемом в медицине сорбенте при его соотношении к микробной массе бактерий (9-1):(1-9), после чего в образовавшуюся массу водят защитную среду в необходимом количестве и биологически активную добавку в количестве 0,05-3,0% относительно массы получаемого препарата. Образовавшийся продукт подвергают лиофильной сушке в режиме, соответствующем роду используемых микроорганизмов, затем высушенную массу смешивают с приемлемой жировой основой, содержащей менее 5% воды и имеющей рН 4,5-7,0 и взятой в количестве, соответствующем содержанию 10⁵ -10⁹ МК в одной дозе препарата.

Авторами предусмотрено, что 1 г микробной массы должен содержать лактобациллы и бифидобактерии, и/или стрептококки, и/или лактококки в количестве 10¹⁰ -10¹¹ клеток.

Это обусловлено тем, что при указанных условиях на 1 частице сорбента должно разместиться 10-40 МК, или должен образоваться конгломерат, включающий соразмерные частицы сорбента и бактерии, что соответствует получению препарата с максимально полезными свойствами. Или, другими словами, из указанной микробной массы возможно получить препарат с 10⁵-10 ⁹ МК в одной дозе, что, как показано выше, в сочетании с другими ингредиентами препарата отвечает наибольшей его клинической эффективности.

Остальные условия осуществления способа получения препарата для лечения бактериального вагиноза сводятся к такой последовательности смешивания компонентов, которая обеспечивает высокую жизнеспособность бактерий, достаточную их колонизацию на слизистой влагалища, адгезию и в целом высокую биологическую активность.

Что касается соотношения сорбента к микробной массе, то оно обусловлено рентабельностью получения эффективной лечебной дозы.

Способ получения препарата для лечения бактериального вагиноза подтверждается примером конкретного выполнения.

Пример 1

Заявляемый препарат получают в несколько этапов. Сначала получают микробную массу лактобацилл, бифидобактерий, и/или стрептококков, и/или лактококков, причем содержание их в 1 г микробной массы составляет 10¹⁰-10¹¹ клеток.

Затем полученную микробную массу иммобилизуют на сорбенте, в частности на смектите натрия, с размером частиц, не превышающем 100 мкм. Этот процесс выполняют посредством тщательного перемешивания.

Соотношение микробной массы к смектиту натрия составляет 9:1.

Затем образовавшуюся массу смешивают с сахарозо-желатиномолочной средой, взятой в количестве 0,02% относительно получаемой массы препарата, и с 2,5% эфирного масла шалфея относительно получаемой массы препарата.

После этого полученный продукт подвергают лиофильной сушке в поддонах.

Высушенный продукт смешивают с жировой основой, например, содержащей 90 мас.% масла какао и 10 мас.% ланолина, при этом в жировую основу вводят, например, лимонную кислоту до рН 6,5. Жировая основа имеет влажность менее 5%.

Из полученной массы формируют суппозитории весом от 1 г до 1,5 г.

Мазь получают по описанной выше методике с той разницей, что в качестве жировой основы используют любую приемлемую мазевую основу.

Следующей задачей заявляемого изобретения является создание способа лечения и профилактики бактериального вагиноза путем использования препарата, описанного выше, в результате чего достигается высокая клиническая эффективность лечения.

Поставленная задача решается тем, что в способе профилактики и лечения бактериального вагиноза согласно изобретению, интравагинально вводят препарат по пп.1-7, содержащий лактобациллы и один или несколько родов эубиотических бактерий, выбранных из группы: бифидобактерии, стрептококки и лактококки в количестве 10⁵-10⁹ живых клеток на одну дозу, причем препарат вводят 1-3 раза в сутки в количестве 1-3 доз, а курс лечения определяют индивидуально в зависимости от степени поражения слизистой влагалища.

В настоящем способе лечения бактериального вагиноза с использованием препарата, содержащего 10⁵ -10⁹ МК в 1 дозе и остальные соответствующие компоненты, определен суточный прием, составляющий 1-3 дозы в зависимости от тяжести заболевания. В случае профилактического использования суточный прием препарата может составлять 1 дозу.

Курс лечения определяют в каждом случае индивидуально в зависимости от объективных показателей тяжести заболевания и полученных результатов лечения.

Эффект лечения может быть усилен предварительным орошением влагалища, например, физиологическим раствором или отваром лечебных трав при рН 4,5-5,5. Такая процедура является целесообразной, поскольку направлена на механическое выведение слизи и условно патогенных микробов. После проведения такой очистки доступ заявляемого препарата в виде суппозитория или крема к пораженной слизистой облегчается.

Кроме того, дополнительный положительный результат наблюдается при предварительной обработке влагалища суспензией приемлемого сорбента, роль которой состоит в усилении очищающего эффекта и подготовки слизистой для колонизации вводимых бактерий.

В тех случаях, когда наряду с бактериальным вагинозом имеются сопутствующие заболевания, возможно предварительно проводить лечение, например, антифунгицидными или другими лекарственными средствами.

Были проведены исследования, направленные на определения микробиологической эффективности коррекции микробиоценоза влагалища женщин с симптомами бактериального вагиноза.

Под наблюдением находились 19 женщин с симптоматикой бактериального вагиноза, выраженного в снижении или отсутствии лактобацилл, в наличии ключевых клеток (более 10 в поле зрения), в количестве гарднерелл в 1 г выделений более 10⁶, в зуде.

Больные были разделены на три рандомизированные группы. Перед введением препаратов влагалища предварительно очищали физиологическим раствором, доведенным посредством добавления сока лимона до рН 5,0.

Первой группе женщин интравагинально вводили заявляемый препарат в виде мази в количестве 1 г 2 раза в сутки в течение 5 суток.

Второй группе женщин вводили суспензию лактобацилл в физиологическом растворе при рН 5,0 в течение 5 дней.

И, наконец, третья группа женщин была контрольной - им вводили мазевую основу препарата также в течение 5 суток.

Критериями положительного действия лечения считали:

- доведение лактобацилл до нормальной концентрации (10⁷ на 1 г выделений);

- отсутствие или снижение количества ключевых клеток;

- снижение популяции гарнерелл до 10^2-3;

- прекращение зуда.

В таблице 4 представлены полученные результаты.

Таблица 4 Результаты лечения больных бактериальным вагинозом
Метод лечения	Колич-во женщин в группе	Критерии выздоровления
		Зуд	Колич-во ключевых клеток	Колич-во гарднерелл	Колич-во лактобацилл
Заявляемый препарат	4	Нет	Нет	10 2	>107
Лактобациллы в суспензии	4	+	6-9	>103	<10 7
Мазевая основа	4	++	10-12	>107	<10 3
До лечения	12	+++	>10	>107	<10 3

Полученные результаты (табл.4) свидетельствуют о том, что при применении лечения с помощью заявляемого препарата через 5 дней нормализуется влагалищный микробиоценоз, что подтверждается микробиологическими показателями и одним из элементов клинической характеристики.

Для сравнения - при лечении суспензией лактобацилл отмечено некоторое улучшение по изучаемым критериям, однако нормализации микробиоценоза не произошло.

Мазевая основа, по сравнению с исходным состоянием больных, улучшения не дала.

Таким образом, предложенный препарат для лечения бактериального вагиноза проявил высокие клинические характеристики, способ его получения направлен на обеспечение высокой эффективности лечения. И, кроме того, состав препарата и особенности его получения обеспечивают упрощенные условия его хранения с одновременным увеличением сроков хранения.

Способ лечения бактериального вагиноза доказал высокие клинические результаты препарата, что подтверждено объективными критериями выздоровления больных.