способ прогнозирования исхода тяжелых форм неонатальных инфекций

Формула изобретения

Способ прогнозирования исхода тяжелых неонатальных инфекций у новорожденных путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что в возрасте 5-10 дней жизни определяют относительное содержание CD8+HLA-DR+ лимфоцитов и при его значении менее 2,4% прогнозируют выздоровление.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования исхода тяжелых форм неонатальных инфекций у новорожденных.

Актуальность разработки способа определяется высокой частотой летальности и инвалидизации детей при тяжелых формах неонатальных инфекций (пневмония, менингоэнцефалит, сепсис и др.) [2, 4, 8]. Это содает необходимость поиска объективных подходов к прогнозированию их исхода, что позволит назначить адекватную терапию и предотвратить тяжелые последствия.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования течения и исхода тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных путем исследования на 1-3 сутки жизни содержания в крови белков острой фазы воспаления (С-реактивного белка, гаптоглобина, антитрипсина, макроглобина и 1-кислого гликопротеина) и активности ферментов АЛТ, ACT, ЩФ, ГДГ, ЛДГ, КК, КК-МВ и при снижении содержания С-реактивного белка, при повышении уровня гаптоглобина, антитрипсина, макроглобина и 1-кислого гликопротеина и повышении активности ферментов прогнозируют тяжелое течение и возможность летального исхода [3]. Недостатки способа:

1. уровень белков острой фазы и активность ферментов не имеют прямой связи с развитием тяжелых неонатальных инфекций, так как данные показатели не являются специфичными и их изменения могут происходить при различных патологических состояниях, в т.ч. при гипоксии [8];

2. для осуществления прогноза требуется определение большого количества показателей - 12;

3. для выполнения анализа требуется большое количество (1,5-2 мл) крови, учитывая, что забор крови проводится у новорожденных;

4. сложность методики, ее дороговизна (242,55 руб.).

Указанный способ избран нами в качестве ближайшего аналога (прототипа). Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является прогнозирование исхода тяжелых неонатальных инфекций у новорожденных путем определения в периферической венозной крови на 5-10 день жизни относительного содержания CD8+HLA-DR+ лимфоцитов и при значениях показателя менее 2,4% прогнозируют выздоровление с точностью 91,67%.

Новизна способа

Взаимосвязь содержания CD8+HLA-DR+ лимфоцитов в периферической венозной крови новорожденных 5-10 дня жизни с исходом тяжелых форм неонатальных инфекций прослежена впервые.

Известно, что при инфекционно-воспалительных заболеваниях наблюдается экспрессия HLA-DR молекул на поверхности CD4+ клеток [9]. Экспрессия HLA-DR молекул на поверхности CD8+ клеток не установлена.

По нашему мнению, экспрессия HLA-DR молекул на поверхности CD8+ лимфоцитов является свидетельством активации цитотоксических Т-клеток и наблюдается при развитии повреждающего аутоиммунного процесса в ответ на инфекционный агент. При содержании CD8+HLA-DR+ в периферической крови более 2,4%, по-видимому, развивается аутоиммунная реакция, поддерживающая воспалительный процесс с длительным и тяжелым течением и способствующая формированию инвалидизирующих последствий. При содержании же CD8+HLA-DR+ в периферической крови менее 2,4% иммунный ответ на инфекционные антигены можно считать адекватным, с чем связано выздоровление ребенка. Отличительные признаки способа

Определение в периферической венозной крови новорожденного с тяжелыми формами неонатальных инфекций в возрасте 5-10 дней жизни относительного содержания CD8+HLA-DR+ лимфоцитов и установление их прогностического параметра в переделах менее 2,4%, при котором прогнозируется благоприятный исход - выздоровление ребенка.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом.

1. Выделение лимфоцитов из периферической венозной крови [10].

2. В пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-CD8, меченных FITC, и 20 мкл моноклональных анти-HLA-DR, меченных РЕ. Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирке ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора [11].

3. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное (относительное) содержание CD8+HLA-DR+ клеток.

4. При значениях показателя CD8+HLA-DR+, меньших 2,4%, прогнозируют выздоровление с точностью 91,67%.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Ребенок А. родился от II беременности, протекавшей на фоне хронического пиелонефрита, осложнившейся угрозой невынашивания. Роды в 39 недель. Оценка по шкале Апгар 6-8 баллов. К концу первых суток жизни состояние ребенка ухудшилось до тяжелого, ребенок угнетен, отмечается разлитой цианоз, появилась одышка до 80 в минуту, участие вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, при аускультации дыхание в легких ослаблено, выслушиваются мелкопузырчатые влажные хрипы. Клинико-рентгенологически поставлен диагноз: Пневмония. На 5 сутки по заявляемому способу в периферической крови определялось содержание CD8+HLA-DR+ клеток, которое составило 0,2%, что ниже заявляемого (2,4%) уровня на выздоровление. Дан прогноз благоприятного течения и выздоровления. Общепринятая терапия оказалась эффективной, в возрасте одного месяца ребенок клинически здоров, выздоровление подтверждено рентгенологически. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Ребенок В. родился от I беременности, протекавшей на хронического тонзиллита, хронического пиелонефрита, осложнившейся поздним гестозом, многоводием. Роды в 39 недель. Оценка по шкале Апгар 6-7 баллов. На третьи сутки жизни состояние ухудшилось до крайне тяжелого, ребенок угнетен, не реагирует на осмотр, повысилась температура тела до фебрильных цифр, появились генирализованные клонико-тонические судороги и проявления дыхательной недостаточности - одышка до 68 в минуту, участие вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, разлитой цианоз. С учетом клинической картины и данных дополнительного исследования поставлен диагноз: менингоэнцефалит, пневмония. Назначена общепринятая терапия. На 5 сутки в периферической крови по заявляемому способу определялось содержание CD8+HLA-DR+ клеток, которое составило 6,5%, что выше заявляемого параметра на отсутствие выздоровления. Дан прогноз неблагоприятного исхода. К концу неонатального периода у ребенка сохраняются клинические проявления неонатальной инфекции. В возрасте 12 месяцев поставлен диагноз: Детский церебральный паралич. Выздоровления ребенка не было.

Пример 3. Ребенок К. родился от II беременности, протекавшей на фоне вегетососудистой дистонии по гипотоничскому типу, хронического пиелонефрита, осложнившейся угрозой невынашивания. Роды в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 6-7 баллов. На вторые сутки жизни состояние ухудшилось до тяжелого, появились клонико-тонические судороги и проявления дыхательной недостаточности (одышка до 76 в минуту, участие вспомогательной мускулатуры и западение нижней трети грудины во время акта дыхания). С учетом клинической картины и данных дополнительного исследования поставлен диагноз: Менингоэнцефалит, пневмония. Назначена общепринятая терапия. На 5 сутки в периферической крови по заявляемому способу определялось содержание CD8+HLA-DR+ клеток, которое составило 2,2%, что ниже заявляемого параметра на выздоровление. К концу 5 суток жизни появились признаки сердечной недостаточности - отеки, генерализованный цианоз, тахикардия, появился систолический шум во всех точках аускультации. При ультразвуком исследовании выявлен врожденный порок сердца - транспозиция магистральный сосудов. Пневмония у данного ребенка имела затяжное течение, нарастали признаки недостаточности кровообращения. Воспалительные изменения в ликворе и неврологическая симптоматика купировались. На фоне нарастания сердечной недостаточности и гипоксемии ребенок погиб в возрасте одного месяца от врожденного порока сердца, несовместимого с жизнью, - транспозиции магистральных сосудов. Прогноз по заявляемому способу не подтвердился по объективным причинам.

Преимущества способа

1. Возможность прогнозирования исхода тяжелых неонатальных инфекций.

2. Позволяет своевременно провести лечебные мероприятия и улучшить исходы тяжелых неонатальных инфекций (в т.ч. предотвратить инвалидизацию, гибель ребенка).

3. Заявляемый способ не требует больших временных затрат и осуществляется 1 час 10 мин.

4. Предлагаемый способ имеет высокую точность 91,67%.

Указанным способом обследовано 36 новорожденных детей на 5-10 дни жизни с тяжелой инфекционно-воспалительной патологией: пневмонией, менингоэнцефалитом, сепсисом.

Результаты исследования представлены в таблице.

ЛИТЕРАТУРА

1. Дегтярева М.В. Комплексные исследования провоспалительных иммуноцитокинов и функционального состояния лимфоцитов у новорожденных детей в норме и при патологии. Дисс.канд.мед.наук. М., 1995.

2. Дмитриева Н.В., Дмитриев А.В., Гузюкина Е.П., Шатская Е.Е. Особенности пневмонии у детей в раннем неонатальном периоде/ Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины - Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного, Москва, 2000, С.216.

3. Касихина С.А., Кривоножко А.В., Рослый И.М. Определение активности ферментов и белков острой фазы воспаления у новорожденных детей с внутриутробной инфекцией в раннем неонатальном периоде/ Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины - Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного, Москва, 2000, С.113.

4. Лаврова Д.Б., Самсыгина Г.А., Михайлов А.В., Гасанова Т.А. Формирование отдаленной патологии при внутриутробном инфицировании/ Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины - Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного, Москва, 2000, С.279.

5. Назаров П.Г. Реактанты острой фазы воспаления. - СПб.: Наука, 2001.-423с.

6. Торубарова Н.А., Кошель И.В., Яцык Г.В. Кроветворение плода и новорожденного. - М.: Медицина, 1993.- 208 с.

7. Сорокина М.Н., Иова А.С., Злотникова Т.В. Бактериальные менингиты у детей в неонатальном периоде/ Материалы III съезда Российской ассоции специалистов перинатальной медицины - Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного, Москва, 2000, С.205.

8. Шабалов Н.П., Любименко В.А., Пальчик А.Б., Ярославский В.К. Асфиксия новорожденных, М.: МЕДпресс, 1999, С.410.

9. Ярилин А.А. Основы иммунологии. - М.: Медицина, 1999.- 608 с.

10. Boum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow// Scand. J. Clin. Invest.- 1968.- v.21.- N97.-p.77.

11. Ohta G., Fujiwara K., Nishi Т., Oka H. Normal values of peripheral lymphocyte populatuon and Т cell subsets at a fixed time of day: A flow cytometric analysis with monoclonal antibodies in 210 healthy adults// Clin. Exp. Immunol.-1986.-v.64.-p.146-149.