способ получения фармацевтической композиции пептида-антагониста lhrh

Формула изобретения

1. Способ получения фармацевтической композиции для парентерального введения млекопитающим, отличающийся тем, что исходную легкорастворимую кислотно-аддитивную соль основного пептида-антагониста LHRH в присутствии подходящего разбавителя обрабатывают смешанным ионообменником или смесью кислотного и основного ионообменников с образованием свободного основного пептида, затем ионообменник удаляют и свободный основный пептид обрабатывают неорганической или органической кислотой с образованием конечного продукта, требуемой труднорастворимой кислотно-аддитивной соли пептида, далее добавляют подходящие фармацевтические носители и/или наполнители, а затем удаляют разбавитель.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве исходной соли пептида используют соль цетрореликса, тевереликса, абареликса, ганиреликса, азалина В, антида, А-75998, детиреликса, рамореликса, RS-68439.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве кислоты выбирают эмбоновую кислоту, стеариновую кислоту или салициловую кислоту.

4. Способ по одному из пп.1-3, отличающийся тем, что в качестве пептида используют цетрореликс, а в качестве кислоты - эмбоновую кислоту при мольном соотношении цетрореликса и эмбоновой кислоты 2:1.

5. Способ по одному из пп.1-4, отличающийся тем, что разбавитель удаляют посредством лиофилизации.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новому способу получения солей пептидов, прежде всего труднорастворимых солей пептидов, и к их применению для получения фармацевтических композиций.

Уровень техники

В международной заявке РСТ/ЕР94/03904 описано получение труднорастворимого пептида посредством взаимодействия основного пептида, растворенного в уксусной кислоте, с водным раствором соли кислоты с последующим осаждением труднорастворимой кислотно-аддитивной соли пептида. Например, описано получение эмбоната цетрореликса-антагониста LHRH.

В публикации немецкой заявки DE 4342092 А1 описано получение труднорастворимых солей пептидов-антагонистов LHRH, содержащих аминокислоты, в частности, эмбоната цетрореликса. Сущность изобретения

Задачей настоящего изобретения является разработка нового способа получения солей пептидов, в особенности труднорастворимых солей пептидов.

Объектом настоящего изобретения является способ получения солей пептидов, согласно которому исходную кислотно-аддитивную соль основного пептида обрабатывают в присутствии подходящего разбавителя смешанным ионообменником или смесью кислотного и основного ионообменников с образованием свободного основного пептида, а затем ионообменник удаляют и свободный основный пептид обрабатывают неорганической или органической кислотой с образованием конечного продукта, требуемой кислотно-аддитивной соли пептида, затем разбавитель удаляют.

Объектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая по крайней мере одну соль пептида, полученную с использованием способа по настоящему изобретению, фармацевтические вспомогательные вещества, носители и/или наполнители.

Предлагается способ получения фармацевтической композиции, соответствующей изобретению, согласно которому фармацевтические вспомогательные вещества, носители и/или наполнители добавляют полностью или частично перед удалением разбавителя.

Перечень фигур чертежей и иных материалов

На фигуре представлены результаты биологического эксперимента 3107, иллюстрирующие зависимость средней концентрации цетрореликса в плазме от времени после внутримышечного (в/м) введения 60 мг памоата (эмбоната) цетрореликса (СЕТ) добровольцам мужского пола.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Термин "основный пептид" в данном контексте означает поли(аминокислоты), а также часть структуры в составе большой общей структуры, в которой содержатся основные аминокислоты, такие как аргинин, пиридилаланин или лизин, или М-концевой фрагмент пептида, или по крайней мере одна основная группа.

Предпочтительными пептидами являются антагонисты LHRH, такие как антид, А-75998, ганиреликс, Nal-Glu-антагонист, цетрореликс, тевереликс (антареликс^®), а также антагонисты согласно патентам US 5942493 и DE 19911771.3, содержание которых включено в данное описание в качестве ссылок. Другими пептидами являются абареликс, азалин В, детиреликс, рамореликс (см. статью Stoeckemann и Sandow, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 1993, т.119, стр.457) и RS-68439. Структуры упомянутых пептидов представлены в следующих документах: Behre и соавт., обзор "Антагонисты GnRH", Материалы 2-ой всемирной конференции по индукции овуляции, (GnRH antagonists: an overview, Proceedings of the 2-nd World Conference on Ovulation Induction), The Parthenon Publishing Group Ltd.; Kutscher и соавт., Angew. Chem., 1997, т.109, стр.2240.

В качестве выделенных продуктов используемых кислотно-аддитивных солей пептидов предпочтительно используют соли в виде легкорастворимых солей, такие как ацетат, гидрохлорид, сульфат.

Согласно способу по настоящему изобретению исходную соль пептида полностью или частично растворяют или суспендируют в растворителе. Затем добавляют разбавитель. Растворитель и разбавитель могут быть одинаковыми или различными. В качестве растворителя или разбавителя используют, например, воду, этанол, метанол, пропанол, изопропанол, бутанол, ацетон, диметилкетон, метилэтилкетон, диметилацетамид, диметилформамид, N-метилпирролидон, ацетонитрил, пентан, гексан, гептан и их смеси.

Предпочтительными являются этанол, изопропанол или ацетон. Предпочтительным также является содержание воды, которое составляет от 1 до 60%, более предпочтительно от 5 до 50%.

К раствору или суспензии исходной пептидной соли добавляют смешанный ионообменник, а также смесь кислотного и основного ионообменников. В качестве ионообменника используют, например, Амберлит^®.

Количество ионообменника рассчитывают по числу основных групп в пептиде. Количество определяют при добавлении ионообменника до постоянной величины рН. Например, на 1 г цетрореликса требуется 10 г Амберлита МВ-3.

Величину рН раствора основания при получении оснований устанавливают в диапазоне от 7,5 до 13 либо в зависимости от используемой соли активного агента, прежде всего от соли пептида, содержащего основные реакционноспособные аминокислоты, прежде всего от солей антагонистов LHRH (например, цетрореликса, D-63153, абареликса, ганиреликса, рамореликса, которые могут существовать, например, в виде ацетата), либо в зависимости от используемого активного агента.

Температура не должна превышать 25-30°С, чтобы исключить разложение пептида. Продолжительность реакции при получении свободного основания обычно составляет несколько минут, например 20 мин в случае ацетата цетрореликса. Продолжительность реакции может быть увеличена, например, приблизительно до 1 ч в случае эмбоната цетрореликса. После достижения постоянной величины рН реакцию следует остановить, так как могут образоваться, например, продукты разложения в связи с основностью раствора.

В завершение из реакционной среды удаляют ионообменник. Удаление можно осуществлять путем отсеивания, фильтрования, центрифугирования или фильтрования через колонку.

Прозрачный или мутный раствор свободного основания пептида, которое является неустойчивым, следует по возможности быстро обработать кислотой с образованием требуемой кислотно-аддитивной соли. Добавление кислоты можно осуществлять в виде твердого вещества или в виде раствора или суспензии. Таким же образом раствор свободного пептида можно добавлять в кислоту.

Продолжительность реакции находится в диапазоне от нескольких минут до нескольких часов. Например, продолжительность реакции при образовании эмбоната цетрореликса составляет 1,5 ч. Затем реакционную смесь, которая обычно является прозрачной, стерилизуют фильтрованием. После этого растворитель может быть удален, при этом получают чистую соль пептида. В другом случае перед удалением растворителя в раствор добавляют вспомогательное вещество, добавку или носитель. Вспомогательные вещества можно добавлять в виде твердого вещества перед стерилизацией фильтрованием или после стерилизации фильтрованием в виде стерилизованного фильтрованием раствора.

В качестве вспомогательных веществ используют, например, маннит, сорбит, ксилит, растворимые крахмалы.

Согласно настоящему изобретению следующие соли могут быть получены путем добавления соответствующей кислоты: ацетат, адипат, аскорбат, альгинат, бензоат, бензолсульфонат, бромид, карбонат, цитрат, хлорид, дибутилфосфат, дигидроцитрат, диоктилфосфат, дигексадецилфосфат, фумарат, глюконат, глюкуронат, глютамат, гидрокарбонат, гидротартрат, гидрохлорид, гидроцитрат, иодид, лактат, альфа-липоевая кислота, малат, малеат, малонат, памоат (эмбонат), пальмитат, фосфат, салицилат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, таннат, олеат, октилфосфат.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующим примером, не ограничивающим объем притязаний изобретения.

Пример 1

46,47 г D-20761 порциями добавляют к 1193 г воды и растворяют при перемешивании (раствор 1). Затем раствор 1 при перемешивании разбавляют 3261 г 96%-ного этанола (раствор 2). Раствор 2 после разбавления фильтруют через стекловолоконный фильтр для предварительной очистки, и в фильтрат при перемешивании добавляют 390 г Амберлита МВ-3 (смешанный ионообменник, содержащий сильный кислотный катионо- и анионообменник) (смесь 1). 316,8 г маннита при перемешивании растворяют в 1267 г воды (раствор 3). Через 15 мин перемешивания измеряют величину рН полученного раствора смеси 1, а затем рН измеряют еще раз через 5 мин дополнительного перемешивания. Затем раствор после достижения рН 12,5 отделяют от Амберлита МВ-3 с помощью сита с малым размером отверстий (раствор 4).

4162 г раствора 4 обрабатывают при перемешивании 5,34 г эмбоновой кислоты. Полученную смесь интенсивно перемешивают в течение еще 1,5 ч и затем слегка мутный раствор фильтруют через стекловолоконный фильтр.

Значение рН такого раствора составляет 8,4 (раствор 5). Величину рН измеряют с использованием шлифованного электрода, заполненного вязкой электролитной жидкостью. Величины рН следует рассматривать как относительные, так как измеряемые растворы или суспензии содержат этанол и в связи с этим характеризуются кажущимися более высокими значениями рН.

3333 г раствора 5 стерилизуют фильтрованием в реакционный сосуд, в котором установлена комнатная температура, и 528 г раствора 3 стерилизуют фильтрованием при комнатной температуре в раствор 5 (раствор 6).

Раствор 6 нагревают до 40°С, затем смесь этанол/вода упаривают в вакууме до 1931 г (суспензия 1). Суспензию 1 эмбоната цетрореликса охлаждают до комнатной температуры и разбавляют добавлением при перемешивании 3000 г стерилизованной фильтрованием воды для инъекций (суспензия 2). Затем готовую суспензию, охлажденную до комнатной температуры, разливают во флаконы для инъекции объемом 10 мл (по 3,0 г в каждый флакон), снабженные насадками для лиофилизации, и переносят в установку для лиофилизации.

Флаконы для инъекции замораживают при температуре пластины, установленной приблизительно на -40°С. Высушивание осуществляют с использованием программы сушки, при которой температуру пластины увеличивают от приблизительно -40°С до 20°С. Установку для лиофилизации заполняют стерильным азотом, флаконы для инъекции, находящиеся в установке, закрывают резиновыми прокладками и затем закупоривают.

После высушивания закрытые флаконы для инъекции стерилизуют гамма-излучением при 12 кГр (минимальная величина) - 15 кГр. Последняя операция является необязательной.

Один флакон для инъекции содержит 140,07 мг материала, включая 34,07 мг эмбоната цетрореликса, что соответствует 30 мг цетрореликса, и 106 мг маннита. Содержимое растворяют в 2 мл воды для инъекции. Полученную суспензию можно вводить внутримышечным или подкожным способами.

Биологические испытания

Полученный согласно Примеру 1 лиофилизат (30 мг) эмбоната цетрореликса (2:1), ресуспендированный в 2 мл воды для инъекции, может быть затем введен парентерально, предпочтительно подкожным (п/к) или внутримышечным (в/м) способами.

Показано, что при п/к введении биодоступность эмбоната цетрореликса (2:1) составляет приблизительно 30-50% (за 100% принимают биодоступность при внутривенном введении ацетата цетрореликса). Основная часть лиофилизата эмбоната цетрореликса (2:1) вызывает незначительный так называемый эффект повышенной раздражительности или его отсутствие у пациентов. Продолжительность действия зависит от дозы и при дозе 30-150 мг составляет 2-8 недель или более. Лиофилизат эмбоната цетрореликса (2:1) по настоящему изобретению в настоящее время находится на стадии I клинических испытаний на людях.

На чертеже показана зависимость концентрации цетрореликса в плазме в зависимости от времени (ч) после в/м введения добровольцам 60 мг лиофилизата эмбоната цетрореликса (2:1), полученного согласно Примеру 1. Эффект повышенной раздражительности (приблизительно 100 нг/мл) не наблюдается. Продолжительность действия составляет более 700 ч. Через 150 ч после введения устанавливается постоянный уровень в плазме, равный приблизительно 2 нг/мл. Биодоступность составляет приблизительно 40%.

Областями использования солей пептидов по настоящему изобретению являются, например, доброкачественная гипертрофия простаты (ВРН), миома и эндометриоз.