способ комплексной переработки крови сельскохозяйственных животных для получения биологически активного вещества с противоанемическими свойствами на основе гемоглобина, биологически активное вещество с противоанемическими свойствами (варианты) и продукт, его содержащий (варианты).

Формула изобретения

1. Способ комплексной переработки крови сельскохозяйственных животных для получения биологически активного вещества с противоанемическими свойствами на основе гемоглобина, предусматривающий использование сырья - эритроцитарной массы из группы: стабилизированной цельной крови, форменных элементов крови, нестабилизированной свернувшейся цельной крови, предварительно тонкоизмельченной до размера частиц 1-5 мм, которое (сырье) после предварительного разрушения эритроцитов физическим или химическим способом помещают в экстрактор, где проводят осмотический гемолиз путем последовательной трехкратной экстракции эритроцитарной массы, причем в процессе первой экстракции сырье разбавляют дистиллированной водой в соотношении 3:(1-2) с добавлением 1-3% хлорида натрия в соотношении (0,1-2):1 от объема сырья с поддержанием рН раствора 5,5-8, полученную реакционную смесь перемешивают и экстрагируют в течение 0,5 мин - 2 ч при температуре 4-10°С с получением на поверхности реакционной смеси слоя из проэкстрагированной эритроцитарной массы, представляющей собой смесь из эритроцитов, эритроцитарных мембран, стромы и фибрина, а под ним - жидкого раствора гемоглобина, который затем сливают из экстрактора и подвергают дальнейшей очистке путем последовательной мембранной макро-, микро- и ультрафильтрации, стабилизируют и высушивают путем низкотемпературной распылительной или сублимационной сушки с получением первого целевого продукта - биологически активного вещества с содержанием гемоглобина не менее 60% и с массовой долей железа не менее 0,16%, а оставшуюся после первой экстракции проэкстрагированную эритроцитарную массу измельчают в экстракторе и подвергают водой экстракции с таким же количеством дистиллированной воды, содержащей 1-4% хлорида натрия, в аналогичных условиях, что и первую экстракцию, а далее проводят аналогичную очистку, стабилизацию и сушку раствора гемоглобина с получением второго целевого продукта - биологически активного вещества с 70-80%-ным содержанием гемоглобина и с массовой долей железа 0,18-0,2%, а оставшуюся после второй экстракции обедненную эритроцитарную массу измельчают и подвергают третьей экстракции с таким же количеством дистиллированной воды, содержащей 1-5% хлорида натрия, в аналогичных условиях, что и первую и вторую экстракции, затем проводят аналогичную очистку, стабилизацию раствора гемоглобина и сушку с получением третьего целевого продукта - биологически активного вещества с содержанием гемоглобина не менее 80% и с массовой долей железа не менее 0,2%, а оставшийся после третьей экстракции осадок - смесь эритроцитарных мембран, стромы и фибрина разделяют, при этом эритроцитарные мембраны и строму направляют на дальнейшую обработку для производства белковых кормовых добавок, а фибрин - на обработку для медицинских целей.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно целевые продукты перед сушкой подвергают диссоциации в присутствии концентрированного раствора из стабилизатора - аскорбиновой кислоты и органической кислоты, выбранной из ряда лимонная, яблочная, фумаровая, янтарная или их смеси, с понижением рН раствора до 3÷5 в течение 1-3 ч при температуре 4-10°С и при постоянном перемешивании.

3. Биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с 60%-ным содержанием гемоглобина и с массовой долей железа не менее 0,16%, характеризующееся тем, что оно получено по способу по любому из пп.1 и 2.

4. Биологически активная добавка к пище, характеризующаяся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.3.

5. Функциональный пищевой продукт, характеризующийся тем, что содержит в своем составе биологически активное вещество по п.3.

6. Продукт по п.5, отличающийся тем, что представляет собой мясной продукт.

7. Продукт по п.5, отличающийся тем, что представляет собой молочный продукт.

8. Продукт по п.5, отличающийся тем, что представляет собой кондитерское изделие.

9. Продукт по п.5, отличающийся тем, что представляет собой хлебобулочное изделие.

10. Кормовая добавка, характеризующаяся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.3.

11. Биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 80% и с массовой долей железа не менее 0,2%, характеризующееся тем, что оно получено по способу по любому из пп.1 и 2.

12. Биологически активная добавка к пище, характеризующаяся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.11.

13. Функциональный пищевой продукт, характеризующийся тем, что содержит в своем составе биологически активное вещество по п.11.

14. Продукт по п.13, отличающийся тем, что представляет собой мясной продукт.

15. Продукт по п.13, отличающийся тем, что представляет собой молочный продукт.

16. Продукт по п.13, отличающийся тем, что представляет собой кондитерское изделие.

17. Продукт по п.13, отличающийся тем, что представляет собой хлебобулочное изделие.

18. Ветеринарный препарат, характеризующийся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.11.

19. Лекарственный препарат, характеризующийся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.11.

20. Биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 90% и с массовой долей железа не менее 0,25%, характеризующееся тем, что оно получено по способу по любому из пп.1 и 2 путем объединения стабилизированных растворов гемоглобина после второй и третьей экстракций, дополнительной очистки с помощью анионообменной хроматографии и сушки указанными ранее способами.

21. Ветеринарный препарат, характеризующийся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.20.

22. Лекарственный препарат, характеризующийся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.20.

23. Биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 99% и с массовой долей железа не менее 0,3%, характеризующееся тем, что оно получено по способу по любому из пп.1 и 2 путем объединения стабилизированных растворов гемоглобина после второй и третьей экстракций, дополнительной очистки с помощью анионообменной хроматографии и катионообменной хроматографии, а затем сушки указанными ранее способами.

24. Ветеринарный препарат, характеризующийся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.23.

22. Лекарственный препарат, характеризующийся тем, что содержит в своей композиции биологически активное вещество по п.23.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к технологии получения биологически активных соединений из животного сырья, а именно к промышленному способу выделения железосодержащего белка - гемоглобина из крови сельскохозяйственных животных. Гемоглобин различной степени чистоты может применяться в качестве концентрированного природного источника биологически доступного железа при производстве пищевых продуктов, биологически активных добавок к пище (БАД к пище), кормов, ветеринарных и лекарственных препаратов с целью профилактики и лечения железодефицитных состояний человека и животных.

Железодефицитная анемия или малокровие - широко распространенное в мире патологическое состояние человека, возникающее при недостаточном поступлении железа в организм или его потерях. В настоящее время от железодефицита страдает более 2 млрд. человек в мире. Особенно серьезные нарушения происходят в деятельности сердечно-сосудистой, дыхательной, иммунной и нервной систем.

Анемия при беременности может стать причиной множества серьезных осложнений: выкидышей, преждевременных родов, слабости родовых сил, внутриутробных пороков развития и даже смерти плода.

Множеству "здоровых" людей тоже знакомы симптомы анемии: слабость, повышенная утомляемость, одышка, учащенное сердцебиение, бледность и шелушение кожи, головокружение, депрессия, нарушения памяти. Подобные симптомы обычно приписывают стрессу, не принимая никаких мер. Но опыт показывает, что практически никакое заболевание детей и взрослых невозможно излечить, не устранив железодефицит в организме.

В современной лечебной практике для лечения малокровия широко применяют различные препараты на основе неорганических и органических соединений железа. Больным приходится принимать очень большие, не физиологичные дозы железа (сотни мг в сутки), чтобы хоть малая доля (не более 1-2%) чуждого организму химического соединения была усвоена. Но при этом в клетки кишечника путем пассивной диффузии, то есть разрушая клеточные стенки, поступает избыточное количество железа. Это ведет к многочисленным побочным эффектам (изжога, боли в области желудка, диспепсия, запоры, головная боль, головокружение, аллергические реакции, потемнение эмали зубов и т.д.), что практически сводит на нет положительное действие препарата. Одновременно угнетаются механизмы естественного всасывания железа с помощью белков - переносчиков из обычной пищи. Поэтому после окончания курса лечения анемия вскоре возвращается вновь.

Известно, что железо из продуктов животного происхождения усваивается в 6-10 раз эффективнее, чем из растительных продуктов и химических соединений железа. В них оно находится в составе миоглобина мышц и гемоглобина крови в виде "полуфабриката" - гема, структура которого у человека и у высших животных идентична. Следовательно, наиболее оптимальным средством для профилактики и лечения дефицита железа в организме является использование самого гемоглобина в форме БАД к пище, лекарственных и ветеринарных препаратов, кормовых добавок и в составе функциональных продуктов питания.

К наиболее распространенным способам выделения гемоглобина относятся следующие: кристаллизация, осаждение, хроматография, ультрафильтрация.

Существующие многочисленные способы кристаллизации и осаждения гемоглобина (1-5) основаны на его низкой растворимости в органических (ацетон, толуол) и неорганических (сульфат аммония, хлорид натрия) растворителях. Однако большие потери, связанные с денатурацией гемоглобина, невозможность очистки конечного продукта от применяемых химических реагентов и значительные трудности при масштабировании процесса не позволяют использовать данный метод для получения гемоглобина в промышленных объемах.

Описаны способы получения очищенных препаратов гемоглобина с помощью гель- и ионообменной хроматографии (6-7). Сложность масштабирования данных способов, необходимость применения дорогостоящего оборудования, длительность процесса, а также большие потери конечного продукта существенно ограничивают их широкое применение для производства препаратов из крови.

Известен способ очистки гемоглобина в коммерческом масштабе для использования в медицине (патент RU №2145873, А 61 К 38/42, 27.02.2000). Выделение гемоглобина из водного раствора заключается в пропускании раствора в концентрации 0,1-20% на первой хроматографической стадии и проведение хроматографии либо в условиях анионообмена, либо в условиях катионообмена, при этом непрерывное пропускание осуществляют до почти полного насыщения колонки гемоглобинами и компонентами с более высоким сродством и производят дальнейшее непрерывное пропускание раствора до сверхнагрузки колонки с последующим замещением на ней молекул гемоглобина. Способ имеет также вторую хроматографическую стадию.

Однако, хотя данный способ в основном нацелен на медицинскую промышленность, в частности производство кровезаменителей, он не может обеспечить многотоннажное производство конечного продукта, содержащего 80% и более гемоглобина.

Известен способ получения гемоглобина (8), включающий гемолиз эритроцитов, а также микро- и ультрафильтрацию.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения железосодержащей пищевой добавки на основе гемоглобина крови сельскохозяйственных животных (9) путем разделения крови на плазму и эритроциты, получения гемолизата, очистки от балластных веществ фильтрованием, концентрирования с помощью ультрафильтрации с последующей стерилизующей фильтрацией и лиофилизации конечного продукта.

Однако данные способы требуют значительных трудовых и временных затрат и не позволяют получать гемоглобин с чистотой боле 80%.

Известен модифицированный глобиновый белковый продукт, полученный из крови или гемоглобина и имеющий изоэлектрическую точку при рН 4-5, содержит железо - менее 1000 млн^-1, гистидин: лизин в соотношении 0,6-1,5 мас.%, тирозин 0,8-2,5 мас.%, метионин 0,6-0,9 мас.%, лизин - 6,5-9,0 мас.% (RU 2188560, A 23 J 1/06, 3/12, 10.09.2002). Способ его получения включает щелочную обработку исходного материала при рН более 12 и кислотную обработку при рН ниже 2 с одновременным поддержанием температуры ниже 50°С. Продукт имеет свойства и характеристики, аналогичные казеинатам и соевым изолятам, при его использовании в пищевых продуктах не создается нежелательного запаха и вкуса. Однако данный способ предусматривает удаление жизненно необходимых железосодержащих компонентов.

Широко известно, что молоко в среднем содержит 0,1-0,2 мг железа в виде соединений сидерофилина и лактоферрина на 100 г продукта, а всасываемость такого железа в организме составляет лишь 3%. В связи с этим молоко, йогурты и другие молочные продукты дополнительно обогащают препаратами железа.

Из уровня техники также известны кондитерские и хлебобулочные изделия, содержащие препараты железа. Однако попытки ввести неорганическую форму - сульфат железа в хлебобулочные изделия не увенчались успехом.

Из патента RU №2183408, 20.06.2002, A 23 G 3/00, A 23 L 1/30 известно кондитерское изделие - конфета с добавкой гемоглобина, которая и является наиболее близким аналогом к заявленному кондитерскому изделию. Добавка представляет собой порошкообразный состав, включающий белки крови сельскохозяйственных животных, в том числе гемоглобин - 30-80% от общей массы добавки. При этом гемоглобин содержит железо в количестве 0,05-0,3% от массы содержащегося в добавке гемоглобина. Однако кондитерские изделия, обогащенные этой добавкой, обладают неприятными органолептическими свойствами, в том числе железистым привкусом крови.

Известны мясные и колбасные изделия с добавкой на основе гемоглобина в качестве красителя (патент RU 2031596, A 23 J 1/06, 27.03.1995). Добавку рекомендуется использовать также для красного окрашивания и обогащения легкоусвояемым железом Fe²⁺ сладких пищевых продуктов на желирующих основах (мармелад в кондитерской промышленности, желе в общественном питании и др.), которые могут быть использованы в рационах лечебного и лечебно-профилактического питания при заболеваниях, сопровождающихся железодефицитным состоянием (пониженной секреторной функции желудка, нарушениях функции кроветворения, последствиях радиоактивного облучения и др.). Согласно этому изобретению обработку крови проводят ультразвуком частотой 22 кГц перед насыщением ее оксидом углерода в течение 10-15 мин, а перед тепловой обработкой насыщенную кровь расфасовывают в емкости. Тепловую обработку ведут путем погружения емкостей в воду, нагретую до 72-74°С, на 90-95 мин, при этом в качестве емкостей используют полиэтиленовые пакеты, после расфасовки насыщенной крови пакеты герметизируют, а после тепловой обработки краситель охлаждают до 2-4°С. Однако данный способ сложен и дорог в аппаратурном оформлении, и в первую очередь направлен на получение пищевого красителя.

Широко известен гематоген детский, содержащий пищевой альбумин, цельное сгущенное молоко, патоку, сахар и ванилин (М.Д.Машковский. Лекарственные средства. Пособие по фармакотерапии для врачей. - М.: Медицина, 1977, том 2, с.114), который применяют как лечебно-питательный продукт.

Известен гематоген (заявка РФ 97122364/13, А 61 К 35/14, 22.12.1997), содержащий следующие компоненты, мас.%: железо сернокислое семиводное 0,1-0,5; витамин С 0,09-0,12; альбумин черный пищевой 4,0-5,0; патока крахмальная 21,0-25,0; ванилин 0,01-0,015; молоко цельное сгущенное с сахаром 33,0-36,0; сахар песок - остальное до 100%.

Известен гематоген, содержащий кровь или форменные элементы крови пятнистого оленя в период пантовки, этиловый спирт, сахарный сироп и ароматизатор (авторское свидетельство СССР №1752393, А 61 К 35/14, 07.08.1992).

Известно биологически активное вещество с противоанемическими свойствами и БАД к пище, содержащие железо (патент RU №2079307, А 61 К 38/42, А 61 К 35/14, А 61 К 35/78, 20.05.1997), которые являются наиболее близкими аналогами для заявляемых БАВ и БАД к пище. БАВ представляет собой неденатурированный кристаллический гемоглобин крови сельскохозяйственных животных в количестве 20-40 мас.%, в состав которого входит 0,3 мас.% двухвалентного железа в высокодоступной геминовой форме и комплекс незаменимых аминокислот. Для повышения эффективности железосодержащей БАД к пище в ее состав вводят следующие компоненты, мас.%: аскорбиновую или лимонную кислоту - 10-40, сахар или глюкозу (фруктозу) - 20-60, а также дополнительно сублимационно высушенный свекольный сок в количестве 30-70 мас.%. БАД также может использоваться в медицине и ветеринарии, а именно для лечения и профилактики железодефицитных состояний у человека и животных.

Однако не один из указанных источников не решает задачи, поставленной в заявляемом изобретении.

Известен фармацевтический препарат, включающий тромбин, полученный из крови убойных животных, желатин, альбумин или глицин и в качестве носителя сахарозу (Европейская заявка №0444692, А 61 К 35/16, 04.09.1991).

Также известен лекарственный препарат из органов животных, включающий эритроциты крови 0,1-10,0%; альбумин из сыворотки крови 0,2-1,0%; лактозу 5,0-30,0% и сахарозу - остальное до 100% (патент ФРГ 2025718, А 61 К 35/18, 19.10.1978), который является наиболее близким аналогом для заявляемого лекарственного препарата.

Однако перечисленные лекарственные препараты содержат в небольшом количестве неочищенный гемоглобин, характеризующийся плохой усвояемостью, выраженным железистым привкусом и аллергенными свойствами.

Наиболее близким аналогом для заявляемой кормовой добавки является композиция, содержащая железо, в том числе в виде гидролизата гемоглобина, включающая 0,1-25 весовых процентов железа и 1-99 весовых процентов ингредиента, содержащего аминокислоту (заявка RU 94037555, 27.05.1997). Данная порошкообразная композиция применяется в качестве профилактической кормовой добавки для поросят-сосунов, однако обладает рядом недостатков, а именно сложностью производства, недостаточным содержанием железа и наличием побочных эффектов.

Из уровня техники известно противоанемическое средство, включающее гемин - 1,7-2,0 мас.%, наполнитель - карбоксиметилцеллюлозу 15-20 мас.% и белки плазмы крови - остальное (патент RU 2108102, А 61 К 33/26, А 61 К 35/18, 04.10.1998). Средство используется в пищевой промышленности, медицине и ветеринарии для лечения и профилактики при заболеваниях, связанных с кроветворением. Данное средство является наиболее близким аналогом для заявляемого ветеринарного препарата.

Все перечисленные изобретения не решают задачи, поставленной в заявляемом изобретении.

Задачей предлагаемой группы изобретений является упрощение и удешевление процесса промышленного получения биологически активных веществ (БАВ) на основе гемоглобина из крови сельскохозяйственных животных различной степени чистоты с одновременным улучшением качества и увеличением его выхода для применения в качестве железосодержащих белковых добавок при производстве пищевых продуктов, БАД к пище, кормов, ветеринарных и лекарственных препаратов для профилактики и лечения железодефицитных состояний человека и животных.

Поставленная задача решается тем, что способ комплексной переработки крови сельскохозяйственных животных для получения биологически активного вещества с противоанемическими свойствами на основе гемоглобина предусматривает использование сырья - эритроцитарной массы из группы: стабилизированной цельной крови, форменных элементов крови, нестабилизированной свернувшейся цельной крови, предварительно тонкоизмельченной до размера частиц 1-5 мм, которое (сырье) после предварительного разрушения эритроцитов физическим или химическим способом помещают в экстрактор, где проводят осмотический гемолиз путем последовательной трехкратной экстракции эритроцитарной массы, причем в процессе первой экстракции сырье разбавляют дистиллированной водой в соотношении 3:(1-2) с добавлением 1-3% хлорида натрия в соотношении (0,1-2):1 от объема сырья с поддержанием рН раствора 5,5-8, полученную реакционную смесь перемешивают и экстрагируют в течение 0,5 мин - 2 часов при температуре 4-10°С с получением на поверхности реакционной смеси слоя из проэкстрагированной эритроцитарной массы, представляющей собой смесь из эритроцитов, эритроцитарных мембран, стромы и фибрина, а под ним - жидкого раствора гемоглобина, который затем сливают из экстрактора и подвергают дальнейшей очистке путем последовательной мембранной макро-, микро- и ультрафильтрации, стабилизируют и высушивают путем низкотемпературной распылительной или сублимационной сушки с получением первого целевого продукта - биологически активного вещества с содержанием гемоглобина не менее 60% и с массовой долей железа не менее 0,16%, а оставшуюся после первой экстракции проэкстрагированную эритроцитарную массу измельчают в экстракторе и подвергают второй экстракции с таким же количеством дистиллированной воды, содержащей 1-4% хлорида натрия, в аналогичных условиях, что и первую экстракцию, а далее проводят аналогичную очистку, стабилизацию и сушку раствора гемоглобина с получением второго целевого продукта - биологически активного вещества с 70-80% содержанием гемоглобина и с массовой долей железа 0,18-0,2%, а оставшуюся после второй экстракции обедненную эритроцитарную массу измельчают и подвергают третьей экстракции с таким же количеством дистиллированной воды, содержащей 1-5% хлорида натрия, в аналогичных условиях, что и первую, и вторую экстракцию, затем проводят аналогичную очистку, стабилизацию раствора гемоглобина и сушку с получением третьего целевого продукта - биологически активного вещества с содержанием гемоглобина не менее 80% и с массовой долей железа не менее 0,2%, а оставшийся после третьей экстракции осадок - смесь эритроцитарных мембран, стромы и фибрина разделяют, при этом эритроцитарные мембраны и строму направляют на дальнейшую обработку для производства белковых кормовых добавок, а фибрин - на обработку для медицинских целей.

Все целевые продукты перед сушкой могут быть дополнительно подвергнуты диссоциации в присутствии концентрированного раствора из стабилизатора - аскорбиновой кислоты и органической кислоты, выбранной из ряда: лимонная, яблочная, фумаровая, янтарная или их смеси; с понижением рН раствора до 3-5 в течение 1-3 часов при температуре 4-10°С и при постоянном перемешивании.

Согласно этому способу получают биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 60% и с массовой долей железа не менее 0,16%, которое является предметом заявляемого изобретения.

Такое БАВ используют для производства БАД к пище и функциональных пищевых продуктов с противоанемическими свойствами: мясного продукта, молочного продукта, кондитерского и хлебобулочного изделий, а также кормовой добавки, которая содержит в своей композиции указанное биологически активное вещество.

Согласно заявленному способу также получают биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 80% и с массовой долей железа не менее 0,2%, которое является одним из объектов изобретения. Такое БАВ также используют для производства БАД к пище и функциональных пищевых продуктов с противоанемическими свойствами: мясного продукта, молочного продукта, кондитерского и хлебобулочного изделий. Ветеринарный и лекарственный препараты также могут содержать это биологически активное вещество в составе своей композиции.

Еще одним объектом изобретения является биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 90% и с массовой долей железа не менее 0,25%, которое получено по заявляемому способу, а также путем объединения стабилизированных растворов гемоглобина после второй и третьей экстракции, дополнительной очистки с помощью анионообменной хроматографии и сушки, указанными ранее способами. Ветеринарный и лекарственный препараты могут содержать в своей композиции это биологически активное вещество.

Кроме того, по одному и тому же способу можно получить также биологически активное вещество с противоанемическими свойствами с содержанием гемоглобина не менее 99% и с массовой долей железа не менее 0,3%, путем объединения стабилизированных растворов гемоглобина после второй и третьей экстракции, дополнительной очистки с помощью анионо- и катионообменной хроматографии, а затем сушки указанными ранее способами. Ветеринарный препарат и лекарственный препарат могут содержать в составе своей композиции такое биологически активное вещество.

Все заявляемые объекты изобретения объединены единым изобретательским замыслом, поскольку получены на основе одного способа комплексной переработки крови сельскохозяйственных животных для получения сразу нескольких биологически активных веществ с противоанемическими свойствами на основе гемоглобина с различной степенью очистки, которые, в свою очередь, могут быть использованы для производства различных целевых продуктов с противоанемическими свойствами для людей и животных.

Пища, состоящая из продуктов животного происхождения, содержит железо преимущественно в гемовой форме (около 40%), тогда как растительная пища - в виде ионов Fe²⁺ и Fe³⁺ и их труднорастворимых солей. При этом всасывается главным образом железо, входящее в состав гема и находящееся в форме Fe²⁺.

Механизм всасывания гемового и негемового железа различен: абсорбция гемового железа не зависит от состава диеты, кислотности и пептической активности желудочного сока, в то время как на всасывание негемового железа существенное влияние оказывают вариации диетических субстанций и состав желудочного сока. Это обусловлено тем, что гемовое железо всасывается за счет активного транспорта с помощью специальных белков-переносчиков. При этом значительная часть железа поступает в виде целого гема внутрь энтероцита, где происходит его расщепление под влиянием фермента гемоксидазы и высвобождение железа.

Традиционно в качестве лекарственных и ветеринарных средств, БАД к пище и кормовых добавок для обогащения применяют химические препараты двух- или трехвалентного железа. Их всасывание из желудочно-кишечного тракта происходит в ионизированной форме, причем лучше всасываются и усваиваются препараты двухвалентного (закисного) железа, хуже - трехвалентного (окисного), но в целом усвоение не превышает 1-2% от поступившего количества. Кроме того, для всасывания неорганического железа необходимо наличие в желудке достаточного количества свободной соляной кислоты для растворения и диссоциации принятых препаратов. Восстановители, в том числе аскорбиновая, фумаровая, яблочная, янтарная и лимонная кислота или их смеси способствуют переходу трехвалентного железа в двухвалентное, что улучшает всасывание.

Длительная коррекция дефицита железа с помощью традиционных железосодержащих препаратов затруднена из-за низкой усвояемости железа. Больным назначаются очень большие (нефизиологические) дозы железа - сотни мг в сутки, а поступление избыточного его количества в клетки кишечника путем пассивной диффузии ведет к многочисленным побочным эффектам (в том числе смертельным случаям), особенно у детей и беременных женщин.

Следует подчеркнуть, что химические соединения железа, являясь прооксидантами, усиливают процессы перекисного окисления липидов и белков, что может увеличивать повреждающий эффект различных негативных влияний на организм человека - радиационного излучения, СВЧ, стрессов, химических и других воздействий.

Учитывая недостатки препаратов железа из предшествующего уровня техники, авторами настоящего изобретения был разработан недорогой и эффективный способ комплексной переработки крови с целью получения железосодержащего белка гемоглобина.

Согласно настоящему способу сырьем для получения гемоглобина является эритроцитарная масса из стабилизированной цельной крови, форменных элементов крови или нестабилизированной свернувшейся цельной крови, предварительно тонкоизмельченной до размера частиц 1-5 мм. После предварительного разрушения эритроцитов в эритроцитарной массе, которое проводят с помощью различных физико-химических методов обработки: прессованием, центрифугированием, экструзией, кавитацией, дефростацией, ультразвуком, с использованием поверхностно-активных веществ, сырье последовательно разбавляют дистиллированной водой для экстракции гемоглобина и облегчения отделения эритроцитарных мембран, фибрина и стромы. Раствор гемоглобина получают с помощью двухфазной системы разделения гемолизата эритроцитарной массы, полученного путем последовательного разбавления его дистиллированной водой с добавлением 1-5% хлорида натрия в соотношении (0,1-2):1 от объема сырья с поддержанием рН раствора 5,5-8 при температуре 4-10°С. После последовательного проведения первой, второй и третьей экстракции и дальнейшей очистки с помощью мембранной макро-, микро- и ультрафильтрации и ионообменной хроматографии, стабилизации и высушивании при помощи низкотемпературной распылительной или сублимационной сушки получают целевые продукты с увеличенным выходом гемоглобина до 98%, содержащий от 60 до 99% гемоглобина с содержанием железа от 0,16 до 0,3% в восстановленной форме.

Только применение вышеуказанных приемов с указанными режимами позволяет получать железосодержащий белок крови - гемоглобин различной степени чистоты в промышленных масштабах с сохранением и улучшением его исходных биологических, пищевых и технологических свойств. Основные физико-химические и санитарно-эпидемиологические показатели гемоглобина приведены в таблицах 1-3. Данные электрофореза в полиакриламидном геле на фиг.1 подтверждают степень чистоты получаемого гемоглобина, а также факт диссоциации его молекул на субъединицы. Определение массовой доли железа в гемоглобине с помощью атомно-абсорбционного анализа и данные УФ-спектрофотометрии свидетельствуют о минимальных потерях железа при получении гемоглобина, а также о том, что большая часть железа в конечном продукте сохраняет двухвалентную гемовую форму (фиг.2).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Промышленное получение гемоглобина с различной степенью чистоты. 1000 л форменных элементов крови крупного рогатого скота или свиней измельчают и приливают 300 л дистиллированной воды, содержащей 3 кг хлористого натрия (рН - 7,0+0,5). После перемешивания полученного раствора проводят экстракцию гемоглобина в течение 1,5 часов при температуре 4-10°С. После разделения реакционной смеси сливают 700-900 л жидкого раствора гемоглобина, отделяя его таким образом от остатков сырья (проэкстрагированной эритроцитарной массы), и подвергают дальнейшей очистке с помощью мембранной макро-, микро- и ультрафильтрации. После стабилизации и последующей низкотемпературной сушки раствора получают от 50 до 70 кг целевого продукта, содержащего не менее 60% гемоглобина с массовой долей железа не менее 0,16%, который можно использовать для производства БАД к пище, а также для обогащения продуктов питания и кормовых добавок для животных.

После измельчения и перемешивания оставшегося сырья (400-600 л) с таким же количеством дистиллированной воды, содержащей 5 кг хлористого натрия (рН - 7,0+0,5), реакционную смесь выдерживают 1 час при температуре 4-10°С, сливают 500-700 л жидкого раствора гемоглобина, отделяя его таким образом от остатков сырья, и подвергают дальнейшей очистке с помощью мембранной макро-, микро- и ультрафильтрации. После стабилизации и последующей низкотемпературной сушки раствора получают 40-50 кг второго целевого продукта, содержащего не менее 70-80% гемоглобина с массовой долей железа не менее 0,18-0,2%.

Далее для более полного извлечения гемоглобина проводят по вышеописанной схеме третью экстракцию и очистку. После стабилизации и последующей низкотемпературной сушки раствора получают от 10 до 20 кг третьего целевого продукта, содержащего не менее 80% гемоглобина с массовой долей железа не менее 0,2%, который можно использовать для получения БАД к пище и функциональных пищевых продуктов, ветеринарных и лекарственных препаратов.

Для последующего получения гемоглобина с чистотой выше 80% проводят дополнительную очистку стабилизированного раствора жидкого гемоглобина после 2-ой и 3-ей экстракции с помощью ионообменной хроматографии. После очистки такого раствора на анионитах получают гемоглобин с чистотой не менее 90% и с массовой долей железа не менее 0,25% (четвертый целевой продукт), а после дальнейшей катионообменной хроматографии - гемоглобин с чистотой не менее 99% и массовой долей железа не менее 0,3% (пятый целевой продукт), которые можно использовать при производстве ветеринарных и медицинских лекарственных препаратов.

Осадок после третьей экстракции представляет собой смесь эритроцитарных мембран, стромы и фибрина. Данную смесь разделяют: фибрин направляют на обработку для медицинских целей, а остаток - эритроцитарные мембраны и строму (25-40 кг сухого порошка с содержанием белка более 90%) после дополнительной обработки используют для производства белковых кормовых добавок.

Пример 2. Промышленное получение диссоциированного гемоглобина.

Дополнительные приемы специальной обработки целевых продуктов перед сушкой в присутствии концентрированного раствора стабилизатора - аскорбиновой кислоты и органической кислоты, выбранной из ряда: лимонная, яблочная, фумаровая, янтарная или их смеси, с понижением рН раствора до 3-5 в течение 1-3 часов при температуре 4-10°С и при постоянном перемешивании обеспечивают достижение дополнительного технического результата - получение диссоциированного гемоглобина, содержащего гемовое железо в дополнительно стабилизированной двухвалентной форме.

В результате вышеописанной обработки гемоглобин диссоциирует на четыре субъединицы, в которых гемовое железо для сохранения двухвалентной формы дополнительно стабилизируется органическими кислотами. Вышеперечисленные технологические приемы позволяют: достичь максимально возможной биологической доступности железа; обеспечить гипоаллергенность субстанции гемоглобина; усилить кооперативный эффект диссоциированного и стабилизированного гемоглобина, проявляющийся в дополнительном усвоении негемового железа из пищи.

После поступления внутрь организма диссоциированный гемоглобин быстро растворяется в желудке, где значительная часть субъединиц распадается на глобин и гем. Далее в двенадцатиперстной кишке происходит связывание гема с белком-переносчиком апоферритином и перенос его в энтероцит, где происходит отщепление железа с помощью гемоксидаз, поступление его в кровь и дальнейшая транспортировка белком-переносчиком трансферрином к местам синтеза железосодержащих белков организма.

Кроме того, быстрый протеолиз глобина в двенадцатиперстной кишке до аминокислот позволяет максимально проявиться "кооперативному" эффекту, т.е. осуществить дополнительное хелатирование ими (прежде всего гистидином) негемового железа и его всасывание из любых находящихся в желудочно-кишечном тракте компонентов пищи и воды.

Более того, такая специальная обработка гемоглобина позволяет избавиться от характерного железистого привкуса крови у конечных продуктов, что, в свою очередь, позволяет расширить спектр применения диссоциированного гемоглобина для детского, диетического, диабетического, гериатрического и специального питания. Подобная диссоциированная и стабилизированная форма гемоглобина не обладает прооксидантными свойствами, что позволяет успешно добавлять ее в любые пищевые продукты, не провоцируя процессы перекисного окисления, приводящие к их порче (прогорканию). Электрофоретические и спектрофотометрические исследования (фиг.1, фиг.2) подтверждают, что гемоглобин, полученный заявляемым способом, находится в стабилизированной восстановленной форме (Fe²⁺ ) с разной степенью диссоциации молекул.

Низкая эффективность усвоения железа из мяса, продуктов питания на основе пищевой крови и черного пищевого альбумина и других по сравнению с диссоциированным и нативным гемоглобином (табл.5) объясняется тем, что полный протеолиз (расщепление) этих продуктов происходит в проксимальном отделе тонкого кишечника. А всасывание железа, в том числе и гемовой формы, более чем на 90% происходит в двенадцатиперстной кишке, имеющей длину всего 26 см. Поэтому большая часть гемового железа из непереваренных мясопродуктов, особенно из плотной массы высушенной при высокой температуре цельной крови (черного пищевого альбумина), просто не успевает отсоединиться от глобина и усвоиться.

Таблица 4 Усвоение железа из гемоглобина и пищевых продуктов
Название продукта	Содержание железа, мг/100 г	Основное соединение железа	% усвоения
Гемоглобин диссоцииров.	300-340	гем	80-100
Гемоглобин нативный	300-340	гем	40-50
Кровь	25-40	гемоглобин	11-25
Мясо	1,5-3,8	гемоглобин, миоглобин	10-15
Печень	8-12	гемоглобин, ферритин	7
Рыба	0,4-1	ферменты	8
Яйца	2,5	кональбумин	2
Молоко	0,1-0,2	сидерофилин, лактоферрин	3
Вино	1,5-3	комплексы с органическими кислотами	3-6
Хлеб	1-2	неорганические и органические комплексы	2-5
Шпинат, яблоки, айва	1,5-2,5	неорганические и органические комплексы	1-3

Таким образом, чтобы обеспечить среднефизиологическую потребность человека в железе (при условии потребления только одного продукта и без питьевой воды), составляющую для мужчин 1,5-2 мг, а для женщин 2-4 мг в сутки, нужно потреблять мяса 1-2 кг в сутки, печени - 300-600 г, рыбы - 5-10 кг, молока - 55-100 литров, хлеба - 5-10 кг, яблок - 6-12 кг. Диссоциированный гемоглобин, полученный по предлагаемому способу, позволяет обеспечить эту потребность при потреблении 1-2 г в сутки. В условиях обычного питания, обеспечивающего поступление железа с пищей и водой, при условии усвоения 5-10% от поступающих 10-20 мг, а также с учетом кооперативного эффекта, для гарантированного обеспечения нормальной физиологической потребности среднестатистического человека достаточно дополнительного потребления 0,2-0,4 г гемоглобина в сутки, что составляет от 0,6 до 1,2 мг гемового железа.

Гипоаллергенность гемоглобина подтверждена многолетними клиническими исследованиями, в том числе на младенцах и беременных женщинах, и объясняется:

- высокой степенью очистки гемоглобина и жесткими требованиями к его санитарно-гигиеническим показателям (отсутствием микробиальной микрофлоры, тяжелых металлов, гормонов, антибиотиков, антикоагулянтов, особенно пищевых полифосфатов, и т.п.);

- наличием естественных физиолого-биохимических механизмов утилизации эндогенного и экзогенного гемоглобина, которые еще более эффективны при диссоциированной на субъединицы форме белка.

Факты аллергии, выявленные при потреблении неочищенной пищевой крови и продуктов ее переработки (высушенного гемолизата эритроцитарной массы, иначе называемого черным пищевым альбумином, который используется при изготовлении плиток гематогена), объясняются прежде всего наличием в них поверхностных антигенов эритроцитарных мембран, стромальных элементов, липо- и гликопротеидов, фосфолипидов и прочих компонентов эритроцитарных клеток и других форменных элементов.

Для уменьшения дефицита железа рекомендуется использовать лекарственные препараты, биологически активные добавки к пище и функциональные продукты питания, обогащенные гемоглобином крови сельскохозяйственных животных, согласно изобретению.

Пример 3.

Клинические испытания противоанемического препарата на основе гемоглобина.

Созданная природой натуральная гемовая форма железа (Fe²⁺) и имеющиеся в организме человека физиолого-биохимические механизмы усвоения экзогенного и реутилизации эндогенного железа определяют высокую биологическую доступность железа из гемоглобина с чистотой не менее 80%, быстрый и выраженный противоанемический эффект при приеме препарата на его основе. По этой же причине невозможна передозировка гемового железа.

Дополнительные всесторонние токсикологические исследования, проведенные на лабораторных животных и поросятах-сосунах, подтвердили безвредность и высокую биологическую ценность очищенного гемоглобина.

Препараты на основе гемоглобина прошли испытания в ведущих клиниках, НИИ, а также во многих лечебно-профилактических учреждениях страны.

Ниже приводятся данные, иллюстрирующие клиническую эффективность применения препарата у детей и беременных женщин.

Исследования проведены на группе из 32 детей первого года жизни с железодефицитной анемией (ЖДА) легкой и средней степени тяжести.

Первоначальная доза составляла 1 г гемоглобина в таблетированной форме или 2 мг гемового железа в сутки. Отсутствие побочных эффектов применения препарата в течение 3-х суток явилось основанием для увеличения дозы до 4,5 мг железа в сутки. Основные результаты исследования представлены в таблице 5.

Таблица 5 Динамика показателей периферической крови детей на фоне 30-дневного приема гемоглобина
Показатели	До лечения	После лечения
Гемоглобин (г/л)	95,0±3,4	110,0±5,5
Эритроциты (10 12/л)	3,5±0,8	3,9±0,4
Цветной показатель	0,5±0,3	0,9±0,2
Тромбоциты (10 9/л)	282,0±9,0	295,0±12,0
Ретикулоциты (%)	6,9±0,2	7,1±0,3
Сывороточное железо (мкмоль/л)	5,9±0,3	6,7±0,5

Из таблицы 5 следует, что у амбулаторных пациентов с ЖДА легкой и средней степенью тяжести выявлены положительные изменения клинико-лабораторных показателей, прежде всего характеризующих уровень гемоглобина и сывороточного железа. Кроме того, наблюдения за больными показали, что у 65% детей уже на второй неделе приема препарата отмечалось улучшение аппетита и исчезновение сонливости.

Необходимо отметить, что отрицательные реакции со стороны желудочно-кишечного тракта, которые наблюдались у этих детей на применение традиционных железосодержащих препаратов, при приеме гемоглобина не обнаруживались.

Также проводились клинические исследования эффективности применения железосодержащего препарата на основе гемоглобина у беременных женщин. Исследование проведено на 102-х пациентках, имеющих диагноз: железодефицитное состояние. Препарат получали 50 беременных женщин (I группа), в том числе 5 пациенток, получавших лечение в амбулаторных условиях (II группа) и 52 родильницы (III группа). При уровне гемоглобина свыше 105 г/л препарат назначали в дозе 0,9 г гемоглобина в сутки или 2 мг гемового железа, при выраженном дефиците железа - до 1,8 г гемоглобина или 4 мг гемового железа в сутки.

Таблица 6 Динамика показателей периферической крови у беременных женщин и родильниц на фоне 30-дневного приема гемоглобина
Показатели	До лечения			После лечения
	I гр.	II гр.	III гр.	I гр.	II гр.	III гр.
Гемоглобин (г/л)	93,7±0,8	100,2±0,7	93,3±0,4	98,1±0,4	115,6±0,9	96,9±0,5
Эритроциты (1012/л)	2,5±0,8	3,7±0,1	2,4±0,7	3,4±0,5	5,0±0,3	2,9±0,3

Из таблицы 6 следует, что во всех трех группах после приема наблюдалось увеличение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов.

У большей части пациенток отмечалось улучшение общего самочувствия (91%) и улучшение аппетита (95%). Переносимость препарата была хорошей, при этом ни в одном из наблюдений не отмечено диспептических или аллергических реакций.

Пример 4. Применение противоанемических БАД к пище и функциональных продуктов питания, обогащенных гемоглобином, для профилактики железодефицитных состояний.

Известно, что при лечении железодефицитной анемии и для ее профилактики необходимо обогащать рацион человека продуктами животного происхождения, которые являются основным источником железа. За рубежом и в России широко практикуется, например, введение в состав колбасных изделий различных продуктов из крови сельскохозяйственных животных (черного и светлого пищевого альбумина, гемолизатов и т.д.). Основной причиной, сдерживающей более широкое использование цельной крови и ее неочищенных компонентов в пищевой промышленности, кроме упомянутых выше недостатков, является прежде всего свойственный крови железистый привкус, который сохраняется в конечных продуктах.

Предлагаемый способ позволяет получить в промышленных масштабах диссоциированный и стабилизированный гемоглобин, не имеющий подобного привкуса, который содержит не менее 1,6 г двухвалентного железа в 1 кг продукта. Таким образом, потребление 100 г любых продуктов, обогащенных 0,5% такого гемоглобина, позволяет обеспечить от 50 до 100% суточной потребности среднестатистического человека в железе. Рекомендуется добавлять гемоглобин в предварительно растворенном виде, тщательно перемешивая до гомогенного состояния на подходящем этапе приготовления теста, начинок, колбасного фарша и т.п. Например, в случае производства мясопродуктов, в том числе кровяной или колбасы другой рецептуры, сосисок, сарделек, паштетов, гемоглобин вводят в куттер в процессе приготовления фарша вместо или дополнительно к традиционным компонентам. При этом необходимо отметить, что используемый гемоглобин может использоваться в качестве натурального красителя, так как дает стойкий красящий эффект.

Разработаны рецептуры введения гемоглобина в хлебобулочные, мясные, молочные и кондитерские изделия. Эти продукты могут быть использованы для профилактики железодефицитных состояний у населения, в том числе в районах, подвергшихся радиационному, химическому и другим загрязнениям.

Ниже приводятся результаты клинической апробации кондитерского батончика, обогащенного гемоглобином с чистотой не менее 60%.

Апробация данного продукта проводилась на 25 первичных донорах. При этом каждый донор одновременно являлся и контролем, поскольку исследования выполняли в динамике. Кровь исследовали исходно, до кроводачи, через 2 недели и через 1 месяц после кроводачи.

Батончики, содержащие 4% гемоглобина (не менее 6 мг гемового железа на 100 г продукта), давали донорам по 1 штуке (50 г) в день в течение 15 дней после кроводачи.

Все доноры сдавали цельную кровь в количестве 450 мл. Повторное исследование крови через 2 недели обнаруживало (табл.7) уменьшение числа эритроцитов и уровня гемоглобина. Употребление обогащенных гемоглобином батончиков позволило поддерживать у доноров стабильный уровень железа сыворотки крови и сохранять тканевые запасы железа (уровень ферритина), а также возвращать к исходному уровень гемоглобина и количество эритроцитов в крови.

Таблица 7 Динамика показателей периферической крови первичных доноров на фоне 15- дневного приема батончиков, обогащенных гемоглобином
Периоды	Концентрация гемоглобина, г/л	Количество эритроцитов, млн/мм 3	Железо сыворотки, мкмоль/л	Ферритин, нг/мл
Исходный	135,8±0,9	4,4±0,8	19,6±0,7	80,3±2,9
Через 2 недели	130,4±0,8	4,2±0,3	20,4±0,8	81,3±3,1
Через 1 месяц	138,6±0,9	4,3±0,3	20,6±0,7	88,6±2,7

Результаты введения тех же батончиков в рацион детей из загрязненных радионуклидами районов (более 1000 человек) подтвердили эффективность использования этих продуктов для коррекции железодефицитных состояний. При этом содержание гемоглобина у них в крови к концу оздоровительного цикла (через 24 дня) увеличилось в среднем на 14 единиц.

Пример 5. Изучение противоанемического эффекта гемоглобина в виде кормовой добавки для молодняка свиней.

Результаты произведенной апробации (табл.8) подтвердили эффективность использования недиссоциированного гемоглобина в престартерных кормах для растущих поросят из расчета потребления ими 32 г гемоглобина за период подсоса (с 10-го по 35-й день жизни). В контрольной группе для профилактики анемии у поросят применялись инъекции ферроглюкина по общепринятой схеме.

Таблица 8 Показатели продуктивности поросят
Показатели	Группы
	Контрольная	Опытная
Количество голов	150	153
Живая масса в начале опыта, кг	2,68±0,09	2,68±0,12
Живая масса на 35 день, кг	8,11±0,95	8,39±0,16
Прирост живой массы, кг	5,43±0,20	5,74±0,25
Среднесуточный прирост, г	217±18	229±23
Потреблено корма на 1 голову, кг	3,91	3,93
Сохранность, %	97,3	99,4

В конце опыта поросята опытной группы имели живую массу на 3,4% выше, чем у поросят контрольной группы. При этом потребление корма свиньями было практически одинаковым. Сохранность молодняка за этот период в опытной группе была на 2,1% выше, чем в контрольной. Биохимические показатели крови (табл.9) у животных опытной группы подтверждают противоанемическое действие изучаемой кормовой добавки.

Таблица 9 Гематологические и биохимические показатели крови поросят на 35 день жизни
№ п/п	Показатели	Группы
		Контрольная	Опытная
1.	Эритроциты, 106/мкл	4,00±0,05	5,05±0,07*
2.	Лейкоциты, 103/мкл	14,5±0,80	16,1±0,70
3.	Гематокрит, %	27,8±0,30	34,8±0,40*
4.	Гемоглобин, г/л	76±14,0	96±9,0*
5.	Среднее содержание гемоглобина в эритроцитах, пг	19±2,0	19±3,0
6.	Средний объем эритроцита, фл	61±2,0	68±2,0
7.	Сывороточное железо, мкг %	71±7,0	110±8,0***
8.	Общий белок, г/л	66±5,0	70±7,0
* - различия между опытом и контролем достоверны при р<0,05; ** - при р<0,01; *** - при р<0,001, где р - достоверность.

Таким образом, техническим результатом заявленной группы изобретений является следующее: комплексное безотходное производство в промышленных масштабах, получение в одном технологическом процессе нескольких целевых продуктов без использования химических реагентов, очистка без химического осаждения, увеличенный выход гемоглобина до 98% (с чистотой от 60 до 99%), улучшение его исходных биологических, пищевых и технологических свойств, получение целевых продуктов, обладающих высокоэффективными функциональными - противоанемическими свойствами, высокой растворимостью и переваримостью, гипоаллергенностью и полным отсутствием побочных эффектов при потреблении.

Список литературы

1. Ферменты в экспериментальной и клинической онкологии и радиологии. Вып. XX, ч.1, с.26, Ленинград, 1967.

2. Авторское свидетельство СССР №174326, 1965.

3. Grathzer W.В., Allison A.C. Multiple haemoglobins. Biol. Rev., 1960, 35, №21, р.44-68.

4.Drabkin D.L. Spectrophotometric studies. 14. The crystallographic and optical properties of the hemoglobin of man in comparison with other species. J. Biol. Chem. 1946, 164, №5, p.703-723.

5. Дворникова П.Д., Володина Т.Т. Сравнительное изучение некоторых физико-химических и биологических свойств кристаллического гемоглобина кролика, свиньи и крупного рогатого скота. Молекулярные основы жизненных процессов. Киев: Наук. думка, 1966, с.227-237.

6. Rat haemoglobin heterogeneity. Two structural distinct - chains and functional behaviour of selected components. L.Garric, V.S.Sharma, M.J.McDonald, H. M. Ranney. Biochem. J., 1975, 149, №8, р.245-258.

7. Авторское свидетельство СССР №940066, 1982.

8. Патент РФ №2080865, 1997.

Таблица 1 Физико-химические показатели гемоглобина различной степени очистки
Наименование показателей качества	Гемоглобин 60%	Гемоглобин 80%	Гемоглобин 90%
Массовая доля влаги, %, не более	7	6	5
Массовая доля золы, %	3-5	2-4	1-3
Массовая доля белка, %, не менее	88	90	92
Массовая доля гемоглобина, %, не менее	60	80	90
Содержание железа, мг в 1 кг продукта, не менее	1600	2000	2300
Растворимость 1 г продукта в 50 мл дистиллированной воды, мин, не более	20	15	10

Таблица 3 Микробиологические показатели гемоглобина
Наименование показателя	Значение показателя
Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), КОЕ/г, не более	2,5·104
Бактерии группы кишечных палочек (колиформы) (БГКП), в 0,1 г	не допускаются
Сульфитредуцирующие клостридии, в 1 г	не допускаются
Е. coli, в 1 г	не допускаются
S.aureus (коагулазоположительные стафилококки) и Proteus, в 1 г	не допускаются
Патогенные, в т.ч. сальмонеллы, в 25 г	не допускаются