способ иммунобиохимической коррекции организма крупного рогатого скота

Формула изобретения

Способ иммунобиохимической коррекции организма крупного рогатого скота, включающий введение инъекционного препарата, отличающийся тем, что в качестве инъекционного препарата используют препарат на основе яда гадюки обыкновенной - випраксин, при этом основная доза введения составляет 4-6 мл/гол., перед введением основной дозы проводят сенсибилизацию животных этим же препаратом, причем сенсибилизирующая доза составляет 0,5-1 мл/гол.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно способу применения биологически активных препаратов для коррекции показателей иммунобиохимической системы крупного рогатого скота.

Известен препарат "Випраксин", приготовленный на основе яда гадюки обыкновенной (vipera berus berus), который применяется в качестве болеутоляющего и противовоспалительного средства при невралгиях, артритах, миозитах у человека и животных (Машковский М.Д. Лекарственные средства. ч.II. Вильнюс, 1993; Червяков Д.К. и соавт. Лекарственные средства в ветеринарии. М., 1977).

Однако недостатком способа применения данного препарата является отсутствие данных о возможном применении его для коррекции иммунобиохимической системы крупного рогатого скота.

Наиболее близким по технической сущности способом, взятым за прототип, является применение аминофталазиндионовых соединений для коррекции иммунной системы живого организма (патент РФ №2167659, кл. А 61 К 31/502, А 61 Р 37/02, 27.05.2001.).

Недостатком прототипа является то, что препараты на основе аминофталазиндионовых соединений представляют собой химические вещества, достаточно токсичные для организма животных.

Техническим результатом данного изобретения является повышение функциональной активности иммунной системы, улучшение биохимических показателей и повышение устойчивости организма крупного рогатого скота к заболеваниям за счет применения препарата на основе яда гадюки обыкновенной - випраксина.

Сущность изобретения состоит в том, что в известном способе иммунобиохимической коррекции организма крупного рогатого скота, включающем введение инъекционного препарата, согласно изобретению в качестве инъекционного препарата используют препарат на основе яда гадюки обыкновенной - випраксин, при этом основная доза введения составляет 4-6 мл/гол., перед введением основной дозы проводят сенсибилизацию животных этим же препаратом, причем сенсибилизирующая доза составляет 0,5-1 мл/гол.

Изобретение подтверждено результатами проведенных комплексных биохимических и иммунологических исследований крови и сыворотки крови животных до и после применения данного препарата.

Пример 1. Для опыта были подобраны одновозрастные телята в количестве 5 голов. Телятам внутримышечно ввели випраксин по следующей схеме: вначале ввели сенсибилизирующую дозу препарата (0,5-1 мл/гол.), а через неделю - основную (4-6 мл/гол.).

Контролем служили иммунобиохимические показатели сыворотки крови этих же телят до первого введения препарата. Результаты оценивались в динамике. В таблице 1 представлены данные.

Таблица 1
Показатели	Контроль (до инъекции)	Через 7 дней после сенсибилизирующей дозы	Через 7 дней после основной дозы
общий белок, г/л	69,38±1,51	77,87±2,32*	83,35±2,04**
кальций, ммоль/л	2,08±0,06	2,13±0,03	2,47±0,06*
фосфор, ммоль/л	1,94±0,04	2,00±0,05	2,07±0,02
щелочной резерв, %	36,90±0,21	37,07±0,52	40,42±0,8*
вит. А, мкг %	43,49±0,18	43,67±0,03	47,64±0,87*
вит. Е, мкг %	0,14±0,01	0,16±0,003	0,21±0,027
железо, ммоль/л	19,48±1,66	20,13±1,45	26,70±1,37*
медь, ммоль/л	49,00±1,39	52,12±3,69	67,19±3,09*
альбумины, %	36,81±0,54	37,19±0,49	34,92±0,36
алфа-глобулины, %	20,20±0,28	19,64±0,32	20,01±0,59
бета-глобулины, %	21,94±0,15	20,90±0,18	19,45±0,36
гамма-глобулины, %	21,05±0,26	22,26±0,07	25,62±0,59**
ЛАСК, %	9,3±0,05	10,38±0,21*	12,98±0,32**
БАСК, %	33,92±4,32	41,43±0,49	51,04±1,16*
Примечание * - Р<0,05; ** - Р<0,01.

По результатам исследования у животных после введения сенсибилизирующей дозы препарата выявлено достоверное повышение уровня лизоцимной активности сыворотки крови и концентрации общего белка. После введения основной дозы препарата произошло увеличение содержания общего белка, кальция, витамина А, уровня щелочного резерва, что является признаком изменения состояния гормональной системы, работы почек, печени и других органов. Ионы кальция повышают защитные функции организма, понижая мембранную проницаемость для вредных веществ и усиливая фагоцитарную функцию лейкоцитов.

Увеличение содержания железа и меди говорит об усилении работы кроветворных органов и печени.

Увеличение концентрации гамма-глобулинов свидетельствует о повышении уровня нормальных антител и так же как и изменения, происходящие с концентрацией лизоцимной и бактерицидной активностью, указывает на изменения в гуморальном звене иммунитета.

Пример 2. Для оценки уровня спонтанной и клеточно-индуцированной пролиферативной активности спленоцитов были обработаны випраскином три группы мышей, четвертая служила контролем.

Для определения возможного эффекта дозозависимости показателей пролиферативной активности спленоцитов до и после применения випраксина использовали минимальные (6 мкг/л) и максимальные (600 мкг/л) дозы (табл.2).

Таблица 2
Уровень пролиферативной активности спленоцитов in vitro до и после обработки випраксином (значения средних по триплету и ошибка средних, имп./мин)
Группа животных (n=16)	Спонтанная пролиферация	LPS-стимулированная пролиферация	PWM-стимулированная пролиферация	ConA-стимулированная пролиферация
Контроль	1002,5±78,7	17673,3±463,4	5041,7±318,2	13922,5±575,2
6 мкг/л	935,0±79,4	16692,5±444,6	5455,0±188,8	11190,0±961,8*
60 мкг/л	1077,5±50,5	12505,0±476,2*	5210,8±135,9	11658,3±1058,1*
600 мкг/л	1539,2±469,6	10733,3±160,4*	4480,8±392,4	9569,2±993,7*
* - Р<0,05.

Оценку результатов опыта определяли по двум показателям: числу импульсов в минуту (имп./мин) и индексу стимуляции спонтанной и клеточно-индуцированной пролиферации. Индекс стимуляции расчитывали по формуле:

ИС=О:К;

где О - радиоактивность в лунках с митогеном;

К - радиоактивность в лунках без митогена;

Процент подавления активности пролиферации определяли по индивидуальным показателям триплетов.

По результатам исследования установлено, что уровень пролиферативной активности по включению метки 3Н-тимидина уменьшается в LPS стимулированных спленоцитах при дозе випраксина 60 и 600 мкг/л - 12505,0 и 10733,3 имп./мин при контроле - 17673 имп./мин.

Установлено понижение уровня ConA стимулированной пролиферации клеток в сопоставлении с контролем при использовании випраксина в дозе 6,60 и 600 мкг/л.

Не выражена тенденция понижения пролиферативной активности PWM-стимулированных спленоцитов, равно как и уровень спонтанной пролиферации.

Расчет индекса стимуляции показал (табл.3), что индекс спонтанной пролиферации при использовании випраксина в дозе 60 и 600 мкг/л увеличился от 0,9 до 1,0.

Таблица 3
Индекс стимуляции спонтанной и клеточно-индуцированной пролиферации спленоцитов до и после применения випраксина условные единицы (у.е.)
Группы Животных (n=16)	Спонтанная пролиферация	LPS-стимулированная пролиферация	PWM-стимулированная пролиферация	ConA-стимулированная пролиферация
Контроль	-	-	-	-
6 мкг/л	0,9	0,8	0,9	0,8
60 мкг/л	1,0	0,8	0,8	0,8
600 мкг/л	1,0	0,6	0,7	0,6

Индекс LPS стимулированной пролиферации уменьшался в зависимости от дозы препарата от 0,8 до 0,6 у.е. Индекс ConA стимулированной пролиферации также уменьшался от 0,8 до 0,5 у.е., т.е. был более выражен. Индекс стимуляции PWM стимулированной пролиферации были несколько выше, однако также понижался от 0,9 до 0,7 у.е. в зависимости от дозы препарата.

По результатам исследования установлено, что уровень пролиферативной активности по включению метки 3Н-тимидина уменьшается в LPS ConA стимулированных спленоцитах.

Не выражена тенденция понижения пролиферативной активности PWM-стимулированных спленоцитов и уровень спонтанной пролиферации.

Расчет индекса стимуляции показал, что индекс спонтанной пролиферации при использовании випраксина в дозе 60 и 600 мкг/л увеличился, тогда как индекс LPS, ConA и PWM стимулированной пролиферации уменьшался в зависимости от дозы препарата.

Таким образом, випраксин обладает практически равным супрессивным эффектом относительно LPS, ConA и PWM клеточно-индуцированной пролиферативной активности. Эффект возрастает с увеличением дозы вводимого препарата и является, таким образом, дозозависимым.

Не установлен супрессивный эффект випраксина относительно уровня спонтанной пролиферации и индекса стимуляции спленоцитов. Более того, индекс спонтанной пролиферативной активности возрастал при увеличении дозы вводимого препарата.

Пример 3. По результатам выполненных экспериментальных исследований установлено, что випраксин в дозах 0,0075, 0,075 и 0,75 мкг/мл не проявляет цитотоксического эффекта относительно клеточной культуры MDBK (табл.4). Внесение препарата в дозе 7,5 мкг/мл вызывает токсичность культур клеток. Таким образом, цитотоксическая доза випраксина составляет 7,5 мкг/мл, а имеющий место цитотоксический эффект является дозозависимым. Контролем в исследованиях служили клетки без добавления изучаемого препарата.

Результаты исследований по определению интерферониндуцирующей активности препарата представлены в таблице 5.

Таблица 4
Цитотоксичность випраксина в зависимости от используемой дозы
№№	Концентрация препарата (мкг/мл)	Токсичность для культур клеток
1	75	+
2	7,5	+
3	0,75	-
4	0,075	-
5	0,0075	-

Таблица 5
Результаты оценки интерферониндуцирующей активности випраксина
Доза препарата мкг/мл	Время контакта препарата с клетками, час	Титр интерферона, ед./мл
75	4	9,3±1,89
7,5		4,67±2,49
0,75		3,33±0,94
75	24	53,33±15,08
7,5		18,67±9,97
0,75		9,33±4,99

Контакт препарата с клетками в течение 4 часов приводит к незначительной индукции интерферонообразования (от 3,33 до 9,33 ед./мл). С увеличением контакта до 24 часов интерфероногенный эффект возрастает (от 9,33 до 53,33 ед./мл).

Таким образом, установлено, что випраксин индуцирует выработку интерферона в лейкоцитах крупного рогатого скота. Максимальная индукция интерферона отмечена в концентрации препарата 75 мкг /мл - 53,33±15,08 ед./мл, в то время как активность реаферона в данной биосистеме составила 128 ед./мл.

Из вышеприведенных данных следует, что изобретение позволяет достигнуть коррекции иммунологических и биохимических показателей животных, что способствует последующему росту функциональной активности иммунной системы и повышению устойчивости организма крупного рогатого скота к заболеваниям.