пористый губчатый целлюлозный материал для лечения ран

Формула изобретения

1. Пористый губчатый целлюлозный материал для использования при лечении ран и/или ожогов, причем целлюлозный материал включает цинк, медь, селен и/или железо, связанные с материалом матрицы и/или абсорбированные им, в количествах, достаточных для поддержания грануляции и реваскуляризации основания раны, причем количество цинка, меди, селена и железа составляет по меньшей мере 0,1 мкг/г сухого материала.

2. Пористый губчатый целлюлозный материал по п.1, отличающийся тем, что целлюлозный материал дополнительно содержит другие микроэлементы.

3. Пористый губчатый целлюлозный материал по п.1, отличающийся тем, что концентрация железа составляет 5-28 мкг/г сухого материала, предпочтительно 10-14 мкг/г сухого материала.

4. Пористый губчатый целлюлозный материал по п.1, отличающийся тем, что концентрация цинка составляет 2-20 мкг/г сухого материала, предпочтительно 7-10 мкг/г сухого материала.

5. Пористый губчатый целлюлозный материал по п.1, отличающийся тем, что концентрация меди составляет 4-24 мкг/г сухого материала, предпочтительно 6-10 мкг/г сухого материала.

6. Пористый губчатый целлюлозный материал по п.1, отличающийся тем, что концентрация селена - 0,5-3,0 мкг/г сухого материала, предпочтительно 0,8-1,2 мкг/г сухого материала.

7. Пористый губчатый целлюлозный материал по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит полупроницаемую пленку, через которую может проникать водяной пар, но которая задерживает белки с молекулярной массой >5000 в материале, прикрепленную с одной стороны целлюлозного материала.

8. Применение пористого губчатого целлюлозного материала по любому из пп.1-6 для изготовления устройства для лечения повреждений и/или ожогов.

9. Применение по п.8, отличающееся тем, что повреждением, подлежащим лечению, является острая рана.

10. Применение по п.8, отличающееся тем, что повреждением, подлежащим лечению, является хроническая язва.

11. Применение по п.8, отличающееся тем, что повреждением, подлежащим лечению, является хроническая инфекция.

12. Применение по п.8 для лечения ожогов.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к пористому губчатому целлюлозному материалу для лечения ран и/или ожогов и к применению указанного материала, определенного в преамбулах независимых пунктов формулы изобретения.

Существует необходимость в дешевом и простом в использовании материале, который можно было бы использовать при лечении ран и/или ожогов перед трансплантациями кожи. Обычно пациенты с ранами, такими как обширные ожоги третьей степени или большими раневыми областями, нуждаются в трансплантатах кожи. Однако не всегда возможно провести трансплантацию кожи непосредственной после травмы ввиду недостаточного кровообращения или тяжелого загрязнения основания раны. Если площадь поврежденной ткани слишком велика, у пациента может не быть достаточного количества кожи для аутотрансплантатов, или у пациента может быть настолько тяжелая травма, что операции необходимо отложить до тех пор, пока здоровье пациента в достаточной степени не восстановится. Перед трансплантацией кожи необходимо удалить мертвые и безжизненные ткани и поврежденные ткани нужно временно покрыть для минимизации потерь жидкости, электролитов и белков из поврежденных тканей для поддержания адекватной температуры тела и для содействия грануляции основания раны и реваскуляризации поврежденных тканей. Такие повреждения, как открытые раны и ожоги крайне восприимчивы к инфекциям, если они не покрыты.

Покрытия, которые используют в настоящее время, включают различные искусственные заменители кожи и традиционные временные покрытия, такие как раневые повязки. Заменители кожи, так называемые искусственные кожи или эквиваленты живой кожи, обычно содержат тканеобразующие или входящие в состав ткани продукты, такие как коллаген. Они могут также содержать живые клетки кожи, такие как культивированные человеческие фибробласты, и белки, такие как гликозаминогликан. Недостатком данного типа заменителей кожи является их стоимость, поскольку они крайне дороги: затраты на одного пациента с тяжелыми 50% ожогами может достигать 150000-200000 финских марок. В дополнение к затратам, с ними связаны определенные сомнения и риски для здоровья. Еще неизвестно, могут ли заменители кожи, содержащие белки, действовать в качестве возможного источника заболеваний, вызванных прионами, например, болезни Кройцфелда-Якоба. Матрицы на основе полимеров могут содержать небольшие количества мономеров или остатков катализатора полимеризации, которые могут оказывать повреждающее или даже токсическое действие на ткани. Указанные заменители кожи также не могут эффективно подготовить основание раны для трансплантации. Человеческую кожу, полученную от трупов, можно использовать в качестве аллотрансплантатов кожи. Трупы исследуют на наличие инфекционных заболеваний, таких как гепатит В и С и ВИЧ, но особенно в случае ВИЧ инфекции, которая имеет относительно длительный инкубационный период, свежие инфекции могут пройти скрининг незамеченными.

Целлюлозно-вискозную губку также использовали в качестве временного покрытия для обожженных областей (Viljanto, J. et Jäskeläinen, A. "Stimulation of Granulation Tissue Growth in Burns", Annales Chirurgiae et Gynaecologiae Fenniae 62 1973). Результаты, полученные при использовании целлюлозно-вискозной губки, были перспективными, но для улучшения грануляции и реваскуляризации основания ран было необходимо постоянно смачивать губку смесью различных аминокислот и витаминов (Viljanto, J. et Raekallio, J. "Local Hyperalimentation of Open Wounds"' The British Journal of Surgery 6:63, 1976). Постоянное смачивание трудно выполнять и в достаточной степени контролировать. Кроме того, аминокислоты чувствительны, и их смесь нельзя хранить дольше нескольких дней. Это вызывало необходимость в регулярном приготовлении свежей смеси аминокислот, поскольку требовалось постоянное смачивание губки. Вполне естественно, что сложная процедура, с помощью которой получали улучшенные результаты грануляции и реваскуляризации основания ран, уменьшала интерес к использованию целлюлозно-вискозной губки при лечении ран и/или ожогов в течение следующих десятилетий.

Краткое описание изобретения

Целью настоящего изобретения является создание эффективного по затратам и легко используемого губчатого целлюлозного материала для лечения ран и/или ожогов.

Таким образом, целью является создание усовершенствованной альтернативы существующим целлюлозным губчатым материалам.

Еще одной целью изобретения является применение нового губчатого целлюлозного материала при лечении ран, таких как ожоги или острые или хронические раны. Для достижения указанных выше целей настоящее изобретение отличается тем, что определено в представленных здесь ниже отличительных частях независимых пунктов формулы изобретения.

Типичный пористый губчатый целлюлозный материал, который предполагается использовать при лечении ран и/или ожогов, включает цинк, медь, селен и/или железо, связанные с материалом матрицы и/или абсорбированный им, в количествах, достаточных для поддержания грануляции и реваскуляризации основания раны. Количество цинка, меди, селена и железа составляет по меньшей мере 0,1 мкг/г сухого материала.

Подробное описание изобретения

В настоящее время неожиданно было обнаружено, что включением неорганических микроэлементов, которые существенны при грануляции и реваскуляризации основания раны, можно получить результаты, аналогичные тем, которые получают при использовании целлюлозно-вискозной губки, смоченной сложными смесями аминокислот и витаминов. Настоящее изобретение предоставляет простую и дешевую альтернативу, с помощью которой достигаются улучшенные результаты лечения ран и/или ожогов перед трансплантацией кожи.

Термин «губчатый целлюлозный материал» при использовании в контексте настоящего изобретения относится к материалу, который изготовлен из целлюлозы и который содержит микро- и макропоры в контакте друг с другом. Материал имеет подобные губке, т.е. губчатые физические характеристики: он мягкий, легкий, пористый, сжимаемый, эластичный и способен впитывать жидкости.

Термин «микроэлемент» при использовании в контексте настоящего изобретения относится к неорганическим химическим элементам и веществам, которые необходимы в следовых количествах для обеспечения специфических функций организма человека, таких как развитие и рост ткани. Такими элементами являются, например, железо, медь, цинк, селен, магний и марганец.

В соответствии с изобретением подходящие микроэлементы, которые способствуют грануляции и реваскуляризации основания раны, включают в материал матрицы пористого губчатого целлюлозного материала. Микроэлементы можно включить в материал матрицы любым подходящим способом, который известен в данной области. Их можно включить в матрицу, например, абсорбцией, адсорбцией, пропиткой, или они могут быть химически связаны с матрицей. Элементы могут захватываться в материал матрицы различными физическими или химическими способами. Микроэлементы можно, например, наносить на материал матрицы в процессе производства губчатого целлюлозного материала, причем микроэлементы затем формируют часть структуры материала. Поскольку сам материал матрицы изготовлен из целлюлозы, он лишен проблем химических остатков, связанных с материалами на полимерной основе.

Например, губчатый целлюлозный материал в соответствии с настоящим изобретением можно получить путем изготовления целлюлозной губки способом, известным в данной области. Губчатый целлюлозный материал может быть повторно промыт дистиллированной водой. Полученный таким образом чистый губчатый целлюлозный материал может быть промыт раствором, содержащим требуемые микроэлементы. Во время промывания микроэлементы осаждаются на материале матрицы и количество осажденных элементов можно легко рассчитать по концентрации, остающейся в промывной жидкости. После осаждения микроэлементов губчатый целлюлозный материал может быть высушен, разрезан в желаемую форму и упакован.

В соответствии с одним предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения губчатый целлюлозный материал включает по меньшей мере цинк, медь, селен и/или железо. Материал может включать только один из указанных микроэлементов или два или более. В дополнение к данным элементам, материал может также включать другие микроэлементы, если они считаются благоприятными для грануляции и реваскуляризации основания ран. Общее количество цинка, меди, селена и железа обычно составляет по меньшей мере 0,1 мкг/г сухого материала. В одном варианте осуществления настоящего изобретения общее количество цинка, меди, селена и железа обычно составляет по меньшей мере 0,3 мкг/г сухого материала, иногда по меньшей мере 0,5 мкг/г сухого материала.

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения концентрация цинка может составлять 2-20 мкг/г сухого материала, предпочтительно 7-10 мкг/г сухого материала, концентрация железа 5-28 мкг/г сухого материала, предпочтительно 10-14 мкг/г сухого материала, концентрация меди 4-24 мкг/г сухого материала, предпочтительно 6,0-10 мкг/г сухого материала, и/или концентрация селена 0,5-3,0 мкг/г сухого материала, предпочтительно 0,8-1,2 мкг/г сухого материала. В соответствии с изобретением концентрацию цинка, меди, селена и железа можно выбрать независимо от друг друга, и нет необходимости иметь их все одновременно в материале матрицы.

В одном варианте осуществления изобретения концентрация меди составляет 9,5-12 мкг/г сухого материала и/или концентрация селена 1,1-1,4 мкг/г сухого материала.

В дополнение к указанным выше микроэлементам, целлюлозные губки можно также использовать для доставки кальция и фосфата местно в клетки. Это в значительной степени усилит клеточную пролиферацию и синтез клеточных и/или внеклеточных компонентов. Аналогичный принцип использовали в течение двухсот лет в сельском хозяйстве для усиления клеточного роста путем внесения удобрения.

Материал в соответствии с изобретением способствует эффективной регенерации соединительной ткани и грануляции основания ран, он легок в использовании и имеет низкую стоимость. Материал нужно только смочить физиологическим солевым раствором или им подобным перед помещением его на поврежденную ткань. Нет необходимости во вливании сложных растворов аминокислот для получения успешной грануляции и реваскуляризации основания ран. Простота применения и дешевизна делает материал в соответствии с настоящим изобретением подходящим для применения также в трудных и неадекватных условиях, например в развивающихся странах или полевых госпиталях.

При использовании при лечении повреждений материал в соответствии с изобретением разрезают, придавая ему подходящую форму, и помещают на очищенную поврежденную ткань. Губчатый целлюлозный материал может привлечь трансформирующий фактор роста бета 1 (TGF- 1), который представляет собой ингибитор роста эпителиальных клеток, в материал и к поверхности раздела между материалом и тканью. Таким образом, материал может эффективно ингибировать рост кератиноцитов в основании раны и предотвратить нежелательное ороговение основания раны. Аналогичным образом, материал в соответствии с настоящим изобретением может способствовать исчезновению небольших областей кожи, если такие области имеются в основании раны. Удаление ороговевшей ткани и ингибирование ороговения важно, поскольку это улучшит успех последующей трансплантации кожи.

При помещении на основание раны материал в соответствии с изобретением функционирует в качестве адсорбента белка и в качестве хорошего гемостатического средства. Материал плотно прилипает к основанию раны и способствует также росту капилляров в материал. Когда материал удаляют с основания раны, капилляры, которые вросли внутрь губчатого материала, разрываются, что делает основание раны пригодным для трансплантации.

В соответствии с изобретением пористый губчатый целлюлозный материал, включающий микроэлементы, предпочтительно применяют при лечении повреждений, таких как глубокие ожоги и различные типы острых и хронических ран. Использование изобретения предотвращает истощение запасов существенных микроэлементов в поврежденной ткани и гарантирует доступность, например, железа (II), меди, цинка, селена, магния и/или марганца, которые необходимы для оптимальной грануляции основания раны. Указанные микроэлементы обычно обеспечиваются внутривенным питанием, но они могут достичь пораженной ткани только, если она хорошо снабжается сосудами. Например, при глубоких ожогах третьей степени пораженная ткань практически безжизненна: эпидермис полностью разрушен, и дерма частично или полностью разрушена, а снабжение сосудами пораженной ткани отсутствует. В таких случаях местное истощение запасов существенных микроэлементов происходит, даже если раствор, содержащий микроэлементы, вводят пациенту внутривенно. В результате регенеративная способность пациента оказывается превышенной, что приводит к появлению плохо гранулирующих и легко инфицируемых поверхностей. Указанного истощения запасов существенных микроэлементов можно избежать, когда материал в соответствии с настоящим изобретением используют при лечении таких повреждений. Поэтому настоящее изобретение удовлетворяет давно существующую потребность в материале, который эффективен при содействии грануляции и реваскуляризации основания ран и в то же самое время его легко применять и он характеризуется невысокой стоимостью.

В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения пористый губчатый целлюлозный материал, включающий микроэлементы, можно также использовать, например, в качестве средства первой помощи при острых ранах, таких как в случае дорожно-транспортных происшествий или несчастных случаев на производстве. Возможности лечения указанных травм в местных медицинских центрах или небольших больницах часто ограничены, и пациентов необходимо переводить в более крупные специализированные лечебные учреждения. Во время транспортировки необработанную поверхность поврежденной области просто покрывают материалом в соответствии с изобретением, предотвращая, таким образом, диффузное кровотечение, потерю жидкости и загрязнение поврежденной ткани.

Материал в соответствии с изобретением можно использовать при лечении поврежденных тканей, где не только эпидермальная, но также и дермальная часть кожи частично или полностью разрушена. Такие повреждения представляют собой, например:

- тяжелые ожоги,

- острые травмы, вызванные, например, дорожно-транспортными происшествиями или несчастными случаями на производстве,

- хронические язвы, например диабетические, варикозные и трофические язвы,

- пролежни и

- хронические инфекции, например проказа.

Поэтому один аспект настоящего изобретения представляет собой применение пористого губчатого целлюлозного материала, включающего микроэлементы, для изготовления устройства для лечения острых ран, ожогов, хронических язв или хронических инфекций.

В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения губчатый целлюлозный материал, включающий микроэлементы, можно также использовать при лечении инфицированных ран. Было отмечено, что при смачивании и помещении на необработанную поверхность поврежденной ткани материал в соответствии с изобретением «привлекает» мононуклеарные фагоциты, такие как моноциты и макрофаги, к поверхности раздела между материалом и инфицированной тканью. Поскольку указанные фагоциты эффективно разрушают бактерии, посторонние вещества и мертвые клетки, вызывающие инфекцию, инфекцию можно устранить из основания раны заменой губчатого целлюлозного материала, включающего микроэлементы, так часто, как необходимо, до тех пор пока поверхность ткани не будет готова для трансплантации.

Материал в соответствии с изобретением можно, в частности, использовать при лечении инфицированных тканевых полостей, которые трудно лечить другими способами. Орально вводимые антибиотики не достигают указанных тканей через циркуляцию крови, если ткани плохо снабжены сосудами. Губчатый целлюлозный материал, включающий микроэлементы, можно просто смочить физиологическим раствором или раствором Рингера, поместить в полость и менять по мере необходимости. Как описано выше, материал будет содействовать собственным механизмам организма в преодолении инфекции в ткани. В то же самое время, по мере того как применение материала будет улучшать реваскуляризацию ткани, орально вводимые антибиотики также начнут достигать ее.

В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения полупроницаемую пленку прикрепляют с одной стороны пористого губчатого целлюлозного материала, включающего микроэлементы. Предпочтительно водяной пар может проникать через пленку, но она может задерживать в материале белки с молекулярной массой >5000. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления полупроницаемая пленка задерживает белки большего размера, чем альбумин и фибриноген, или аналогичного им размера. Когда пленку прикрепляют на материал в соответствии с изобретением, его легче использовать, и путем регулирования свойств прикрепленной пленки, например, размера пор и толщины пленки, потерю жидкости через пленку можно регулировать точнее. Полупроницаемость пленки может также изменяться в зависимости от температуры. При более высоких температурах проницаемость пленки предпочтительно ниже, чем при более низких температурах, поскольку секреция жидкости из поврежденной ткани обычно увеличивается при повышенных температурах. Значение задержки влаги в материале особенно выражено в случаях, когда пациентов, получающих лечение материалом в соответствии с изобретением, держат под лампами, генерирующими тепло, при повышенной температуре до 27-28°С.

Пористый и губчатый целлюлозный материал, включающий микроэлементы, можно легко спрофилировать в различные формы и размеры. Такие устройства, как листки, кусочки, длинные узкие полоски, тонкие слои и другие изделия, можно легко изготовить для лечения ожогов, острых ран, хронических язв и хронических инфекций. В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения можно также получить готовый к применению продукт смачиванием стерилизованного заранее отрезанного целлюлозного материала, включающего микроэлементы, физиологическим солевым раствором и упаковкой его в герметично запаянные упаковки. Материал в соответствии с настоящим изобретением можно сформировать в виде листков, которые легко использовать при первой помощи, например, при несчастном случае на производстве или дорожно-транспортном происшествии.

Описание чертежей

Изобретение далее иллюстрируется в следующих чертежах, которые показывают некоторые варианты осуществления изобретения.

Фиг.1а-1с схематически иллюстрируют кусок губчатого целлюлозного материала, включающего микроэлементы, помещенный на необработанную поверхность поврежденной ткани.

Фиг.2а-2b демонстрируют быстрое и количественное связывание трансформирующего ростового фактора бета 1 (TGF- 1) в целлюлозные губки in vitro.

Фиг.1а показывает кусок 1 губчатого целлюлозного материала в соответствии с настоящим изобретением, включающего микроэлементы. Кусок 1 был помещен на необработанную инфицированную поверхность 9' поврежденной ткани 9. К куску 1 был прикреплен кусок 1 полупроницаемой пленки 2. Пленка 2 обеспечивает возможность испарения водяного пара из куска 1. Испарение воды было показано стрелками 4, 4'. Обычно испаряется приблизительно 5 мг Н₂О/см³ /ч. Фагоциты 5, 5' притягиваются к поверхностной области инфицированной поверхности 9', а также к куску 1, где они разрушают бактерии 6, показанные в виде звездочек, и остатки органических веществ 7 в ране, показанные в виде точек. Кровеносные сосуды 3, 3' не достигают поверхности 9' поврежденной ткани 9.

На фиг.1b кровеносные сосуды 3, 3' частично вросли в кусок 1 губчатого материала, и началась реваскуляризация основания раны. Фагоциты разрушили бактерии и остатки органических веществ в ране, и поверхность 9' поврежденной ткани 9 больше не инфицирована. Когда кусок 1 губчатого материала удален из поврежденной ткани 9, выявляется чистая поверхность 8 грануляционной ткани 10. Видно, что грануляционная ткань 10' также частично вросла внутрь куска 1 губчатого материала.

На фиг.1 показана ситуация после трансплантации кожи. Расщепленный кожный аллотрансплантат 11 был помещен на чистую поверхность 8 грануляционной ткани 10. Можно также использовать сверхтонкий аллотрансплантат. В грануляционной ткани 10 видны несколько фагоцитарных клеток 12. Кровеносные сосуды 3, 3' доросли до аллотрансплантата 11.

Один способ получения губчатого целлюлозного материала, включающего микроэлементы, описан в примере 1. В примере 2 приводится иллюстративное применение губчатого целлюлозного материала, включающего микроэлементы, в соответствии с изобретением при лечении ожогов. Пример 3 демонстрирует быстрое и количественное связывание трансформирующего ростового фактора бета 1 (TGF- 1) в целлюлозные губки in vitro. Все примеры следует рассматривать как не ограничивающие объем охраны.

Пример 1

Получение губчатого целлюлозного материала в соответствии с изобретением

Целлюлозно-вискозный раствор, содержащий 5% целлюлозы, готовили в соответствии с известными способами. Хлопковые волокна из расчета 20 мас.% целлюлозы, разрезанные на отрезки длиной 8-10 мм, смешивали с вискозным раствором. Использовали образующий поры материал, в данном случае глауберову соль (Na₂SO₄ ·H₂O) с размером частиц <1,0 мм. Глауберову соль добавляли в количестве, в 80 раз превышающем исходную массу целлюлозы. Полученный материал помещали в форму и целлюлозу регенерировали нагреванием в водяной бане. Необработанный губчатый целлюлозный материал, извлеченный из водяной бани, промывали для обессоливания горячей водой, обрабатывали разбавленной кислотой, отбеливающим раствором и наконец повторно промывали дистиллированной водой. Чистый губчатый целлюлозный материал затем промывали повторно раствором, приготовленным в дистиллированной воде и содержащим такие количества желательных микроэлементов, что были получены целевые концентрации микроэлементов в высушенном материале. Микроэлементы легко растворяются в растворе, если используются соответствующие хлоридные соединения. Количество осажденных микроэлементов рассчитывали сравнением концентраций микроэлементов в промывающем растворе до и после промывания губчатого целлюлозного материала. Когда достигались целевые концентрации, осажденные на материале, материал сушили, разрезали на куски желательного размера и упаковывали.

Пример 2

Лечение глубоких ожогов с использованием материала в соответствии с изобретением

Проводили ревизию обожженной области кожи удалением некротизированных и лишенных жизнеспособности частей ткани. Указанную хирургическую обработку обожженной ткани проводили осторожно срез за срезом на такую глубину, чтобы на ткани наблюдалось минимальное кровотечение. Это указывало на границу живой ткани. Один (1) литр несжатого губчатого целлюлозного материала, содержащего микроэлементы, осторожно смачивали пропитыванием максимум 580-600 мл физиологического солевого раствора (0,9% NaCl). Материал разрезали в форму и размер обожженной области. После удаления нежизнеспособных тканей увлажненный материал в соответствии с изобретением помещали на необработанную поверхность обожженной ткани и покрывали целлофановой пленкой. Если ткань не была инфицирована, материал меняли один раз в три дня. Если ткань инфицирована, в начале лечения материал меняют каждый день. Основание раны обследуют визуально во время замены, и, по мере того как инфекция уменьшается, интервалы между заменами удлиняются. Общее время лечения при достаточной грануляции основания раны обычно составляет 5-10 дней, а число замен варьирует от 2 до 5. Реваскуляризация обожженной области обычно происходит в пределах 5 дней от начала лечения.

Пример 3

Демонстрация быстрого и количественного связывания трансформирующего фактора роста бета 1 (TGF- 1) в целлюлозные губки in vitro

С помощью анализа вестерн-блоттингом анализировали быстрое и количественное связывание трансформирующего фактора роста бета 1 (TGF- 1) в губчатый целлюлозный материал в соответствии с настоящим изобретением in vitro. Целлюлозный материал разрезали на тестируемые кусочки размером 5х5х5 мм. Затем тестируемые кусочки инкубировали с 20 нг очищенного TGF- 1 в солевом растворе с фосфатным буфером (PBS). Объем раствора в 5 раз превышал объем кусочка. Время инкубации в различных тестах составляло 10 и 30 мин и 1, 2, 4, 6, 22 и 48 ч. После инкубации тестируемые кусочки промывали солевым раствором и TGF- 1, связанный с кусочками, экстрагировали в электрофоретический буфер. Экстрагированный TGF- 1 прогоняли через полиакриламидный гель и переносили на нитроцеллюлозную мембрану Hybond ECL (Amersham Life Sciences, UK). Специфическое связывание антитела против TGF- 1 (1,5 мкг/мл, RDI, UK) выявляли набором Vectastain ABC (Vector Laboratories, USA) и визуализировали устройством выявления усиленной хемолюминесценции (ECL) (Amersham, UK). На фиг.2а показано быстрое и постоянное связывание TGF- 1 с губчатым целлюлозным материалом в соответствии с настоящим изобретением.

Быстрое и количественное связывание трансформирующего фактора роста бета 1 (TGF- 1) в губчатый целлюлозный материал в соответствии с настоящим изобретением in vitro также анализировали иммуногистологическим анализом. Аналогичные губки инкубировали, как описано выше, с TGF бета и без него. После споласкивания среза солевым раствором с трис-буфером (TBS) связанные первичные антитела визуализировали с помощью методики авидин-биотин-пероксидазного комплекса (набор Vectastain ABC, Vector Laboratories, Inc., USA) с использованием диаминобензидина в качестве хромогена. Проводили противоокрашивание тканей гематоксилиновым красителем Mayer. Слева на фиг.2b показан контрольный образец, а справа - окрашивание губки, обработанной TGF- 1. На фиг.2b продемонстрировано прочное связывание TGF- 1 со структурой губчатого целлюлозного материала в соответствии с настоящим изобретением.

Следует понимать, что сущность настоящего изобретения может быть реализована в виде множества различных вариантов осуществления, из которых здесь раскрыты лишь некоторые. Для специалиста в данной области очевидно, что существуют другие варианты осуществления, и они не отходят от сущности изобретения. Таким образом, описанные варианты осуществления являются иллюстративными и не должны рассматриваться как ограничивающие объем охраны.