биологически активная добавка для предотвращения подавления первичного и вторичного иммунного ответа

Формула изобретения

1. Средство для предотвращения подавления первичного и вторичного иммунного ответа, обусловленного стрессом, содержащее настой соцветий ромашки, отличающееся тем, что дополнительно содержит витамин С и -каротин в качестве антиоксидантов и экстракт элеутерококка или экстракт пантокрина в качестве адаптогена при следующем содержании компонентов на 100 мл настоя:

Соцветия ромашки	0,5-2,3 г
Витамин С	0,1-0,3 г
-Каротин	2-8 мг
Экстракт элеутерококка или
экстракт пантокрина	5-15 капель

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит 0,5-1,5 мл 96%-ного спирта.

3. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит 0,5-1,5 г сахара.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к иммунологии, в частности к составам биологически активных добавок для профилактики стрессорных повреждений иммунной системы, связанных с частыми стрессовыми ситуациями и др.

В настоящее время существенно изменилось течение многих инфекционных заболеваний. Отмечается частый переход их в затяжные и хронические формы, бактерио- и вирусоносительство. Неуклонно растут число и тяжесть заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами.

У переживших тяжелый психоэмоциональный стресс животных повышается восприимчивость к стафилококку и сальмонеллам. В состоянии хронического стресса животные становятся восприимчивы к апатогенным штаммам туберкулеза. При заражении авирулентными туберкулезными микобактериями возникает генерализованная инфекция с тяжелыми поражениями легких, сердца, почек. Под воздействием стресса у животных повышается чувствительность к вирусам Herpes simplex, полиомиелита, вазикулярного стоматита и т.п. Снижается первичный и вторичный иммунный ответ на бактериальные антигены.

Очевидно, что профилактика повреждений, наносимых иммунной системе гормонами стресса и иммунотоксическими веществами окружающей среды, снизит риск развития многих патологических состояний, обусловленных инфекционными агентами.

Известно использование для повышения активности иммунной системы препаратов, способных усиливать иммунный ответ у лиц перенесших стресс - иммуностимуляторов или иммуномодуляторов (патенты RU 2246962, RU 2228190, RU 2228175 и др.).

Однако при их использовании отмечается ряд неприятных побочных эффектов.

К наиболее часто встречающимся осложнениям можно отнести повышение температуры, обострение хронических инфекционных заболеваний, усиление воспаления. Можно полагать, что такие побочные эффекты применения иммуностимуляторов, как повышение температуры, усиление воспаления, являются проявлениями стимуляции иммунной системы.

Пирогенное и провоспалительное действие иммуностимуляторов объясняется тем, что при стимуляции иммунитета они активируют синтез провоспалительных цитокинов, являющихся и эндогенными пирогенами, к которым в настоящее время относят интерлейкин (ИЛ)-1 (ИЛ-1 и ИЛ-1 ), фактор некроза опухолей (ФНО ), ИЛ-6. Поэтому для профилактики стрессорных повреждений иммунной системы лучше использовать препараты, которые не стимулируют иммунную систему, но предупреждают неблагоприятное воздействие на нее стрессов.

В качестве основы для создания такого иммунопатронажного средства был избран настой соцветий ромашки. Было известно, что настой соцветий ромашки аптечной в дозе 5 г/кг массы тела при внутрижелудочном 5-10 кратном введении вызывает стимуляцию иммунного ответа у нормальных крыс и нормализацию иммунного ответа у крыс, подвергшихся стрессовому воздействию (Ермакова А.Е. Иммуномодулирующая активность соединений ромашки аптечной и софоры японской в покое и при физических нагрузках. Автореф. канд. диссертации. Курск 1995 г.).

Из приведенного в данной работе видно, что настой ромашки нормализует иммунный ответ у животных, подвергшихся стрессовому воздействию.

Однако настой ромашки обладает иммуностимулирующим действием, что, как отмечено выше, нежелательно. Действие одного настоя ромашки недостаточно для предохранения иммунной системы от угнетающего действия стресса.

Задачей изобретения является устранение вышеописанных недостатков и создание биологической добавки, не усиливающей иммунный ответ, но позволяющей предотвратить подавление первичного и вторичного иммунного ответа, обусловленного стрессом.

Поставленная задача решается средством для предотвращения подавления первичного и вторичного иммунного ответа, обусловленного стрессом, содержащим настой соцветий ромашки, которое дополнительно содержит витамин С и -каротин в качестве антиоксидантов и экстракт элеутерококка или экстракт пантокрина в качестве адаптогена при следующем содержании компонентов, на 100 мл настоя:

Соцветия ромашки	0,5-2,3 г
Витамин С	0,1-0,3 г
-каротин	2-8 мг
Экстракт элеутерококка или
Экстракт пантокрина	5-15 капель

В частных воплощениях изобретения поставленная задача решается тем, что биологически активная добавка дополнительно содержит 0,5-1,5 мл 96% спирта.

Биологически активная добавка также может дополнительно содержать 0,5-1,5 г сахара.

Сущность изобретения состоит в следующем.

Для усиления предохраняющей способности настоя ромашки добавляли витамин С и -каротин, обладающие антиоксидантной активностью. Это было обусловлено тем, что под влиянием любых стрессовых факторов происходит увеличение перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран, а также резкое повышение активности фосфолипазы А2, приводящее к высвобождению из клеточных мембран значительного количества арахидоновой кислоты с дальнейшим превращением ее по циклооксигеназному и липооксигеназ-ному путям. Образовавшиеся в ходе ПОЛ продукты повреждают ДНК, оказывают влияние на кинетику деления клеток, образуют сшивки между крупными молекулами и увеличивают вязкость внешнего слоя биомембран, угнетают активность аденилатциклазы и других мембранно-связанных ферментов. Продукты циклооксигеназного пути превращения арахидоновой кислоты, так же как и стрессовые гормоны, способны подавлять пролиферацию Т-лимфоцитов, выработку ИЛ-2.

Применение антиоксидантов позволяет снизить повреждающее действие ПОЛ на мембраны клеток. Положительное влияние на функции мембран клеток, в т.ч. иммунокомпетентных, оптимизация метаболизма позволяет получить от препаратов антиоксидантного действия выраженный иммунопатронажный эффект. При исследовании влияния сочетания -каротина и аскорбиновой кислоты на синтез IgE выяснилось, что совместное введение -каротина и аскорбиновой кислоты восстанавливает нарушенную циклофосфаном регуляцию IgE-ответа. Иными словами, предупреждает нарушение функции ТН1-клеток, ответственных за клеточный иммунитет, т.е. иммунитет против внутриклеточных паразитов, т.е. предохраняет именно то звено иммунитета, которое в первую очередь страдает при стрессовых воздействиях.

Кроме того, в состав препарата для усиления его действия входил один из адаптогенов, выбранный из экстрактов элеутерококка и пантокрина.

Предлагаемое средство приготовляли следующим образом.

Настой соцветий ромашки 1 фильтр-пакет заливали 100 мл кипятка на 20 минут. После остывания до комнатной температуры добавляли антиоксиданты и адаптоген - витамин С 0,1-0,3 г, -каротин 2-8 мг, экстракт элеутерококка или экстракт пантокрина 5-15 капель, а также при желании 96%-ный этиловый спирт 0,5-1,5 мл и сахар 0,5-1,5 г.

Испытывались следующие составы:

1. 100 мл настоя 1,5 г ромашки; 0,2 г витамина С, 5 мг -каротина, 10 капель экстракта элеутерококка, 1 мл этилового спирта 96%-ного.

2. 100 мл настоя 2,3 г ромашки; 0,1 г витамина С, 2 мг -каротина, 5 капель экстракта пантокрина, 1 г сахара.

3. 100 мл настоя 0,5 г ромашки; 0,3 г витамина С, 8 мг -каротина, 15 капель экстракта элеутерококка, 0,5 мл этилового спирта, 0,5 г сахара.

4. 100 мл настоя 1,5 г ромашки; 0,2 г витамина С, 5 мг -каротина, 10 капель экстракта пантокрина.

Для изучения способности предлагаемого средства отменять подавляющее иммунный ответ действие стресса использовали мышей СВА массой 16-18 г.

Все мыши были разбиты на 7 групп по 5 в каждой отдельной клетке.

ТАБЛИЦА 1
№ группы	Воздействие БАД	Стресс	Циклофосфан
1	-	-	-
2	+	-	-
3	-	+	-
4	+	+	-
5	+	-	-
6	+	-	+
7	-	-	-

Первая иммунизация животных из 2, 3, 4, 5, 6, 7 групп в объеме 200 мкл внутрибрюшинно по 1 Lf анатоксина дифтерийно-столбнячного очищенного, адсорбированного, изготовленного НПО "Иммунопрепарат г.Уфа.

С первого дня эксперимента мыши 3 и 4 групп, подвергались стрессовому воздействию - плавание в воде при 27°С по 30 мин в течение 5 дней.

Животным 5 и 6 групп одновременно с первой иммунизацией внутримышечно вводили по 1 мг циклофосфана (производство ЗАО «Брынцалов А»).

Через 7 дней после иммунизации у мышей отбирали по 50 мкл крови из ретробульбарного сплетения, получали сыворотки, для чего пробы крови помещали в термостат при 37°С на 20 мин, обводили сгусток и выдерживали 1 ч при 4°С, центрифугировали и отделяли сыворотку. На 7 сутки повторно иммунизировали мышей в той же дозе. На 14 день повторно брали кровь и получали сыворотку.

Исследование сывороток проводили иммуноферментным анализом (ИФА). Для этого на полистероловые планшеты (Greiner) сорбировали дифтерийный анатоксин (ДАТ), производства НПО «Биомед» г.Пермь, в концентрации 0,5 Lf на мл. Затем вносили исследуемые сыворотки в разведении 1:50 и титровали двукратным шагом. Реакцию проявляли пероксидазным конъюгатом антител кролика к иммуноглобулинам мыши (ИМ-ТЕК) с последующим внесением раствора тетраметилбензидина. Реакцию останавливали внесением 5% раствора серной кислоты. Учет проводили на спектрофотометре при 450 нм в единицах оптической плотности (ед. ОП.).

Полученные данные были статистически обработаны: рассчитаны средние величины (х) и стандартные отклонения ( ). Результаты представлены в виде графиков и таблиц.

ТАБЛИЦА 2. Сравнительный анализ сывороток, полученных на 7 день иммунизации.
Разведение сывороток	1 группа Контроль	7 группа антиген	2 группа антиген + БАД	3 группа антиген + стресс	4 группа антиген + стресс + БАД	5 группа антиген + циклофосфан	5 группа антиген + циклофосфан + БАД
1:100	Х=0,22±0,05	Х=0,61±0,12	Х=0,42±0,08	Х=0,36±0,05	Х=0,53±0,08	Х=0,24±0,03	Х=0,22±0,03

Как видно из представленных данных, сыворотки, полученные на 7 день от начала иммунизации, имели невысокий титры и низкие показатели оптической плотности.

Из таблицы 2 видно, что добавление в рацион мышей БАД приводит к незначительному снижению первичного иммунного ответа (группа 2). Стрессовое воздействие приводит к существенному статистически достоверному снижению первичного иммунного ответа у мышей (группа 3) У животных, подвергшихся стрессовому воздействию, в рацион которых был включен БАД, иммунный ответ восстанавливается до нормальных величин (группа 4). У животных, получивших инъекцию циклофосфана, первичный ответ не выявлен.

Сыворотки, полученные на 7 сутки после вторичной иммунизации, имели существенно более высокие титры и показатели оптической плотности по сравнению с сыворотками после первой иммунизации (таблица 3).

ТАБЛИЦА 3 Сравнительный анализ сывороток, полученных на 7 день после вторичной иммунизации.
Разведение сывороток	1 группа Контроль	7 группа антиген	2 группа антиген + БАД	3 группа антиген + стресс	4 группа антиген + стресс + БАД	5 группа антиген + циклофосфан	6 группа антиген + циклофосфан + БАД
1:3200	0,18±0,01	1,11±0,1	0,91±0,11	0,69±0,09	1,0±0,1	0,67±0,05	0,76±0,1

Из таблицы 3 видно, что добавление в рацион мышей БАД не приводит к изменению вторичного иммунного ответа (группа 2). Стрессовое воздействие приводит к существенному статистически достоверному снижению вторичного иммунного ответа у мышей (группа 3). У животных, подвергшихся стрессовому воздействию, в рацион которых был включен БАД, иммунный ответ восстанавливается до нормальных величин (группа 4). У животных, получивших инъекцию циклофосфана, в рацион которых был включен БАД, вторичный ответ не отличается статистически достоверно от нормального ответа (группа 6). У животных, получивших инъекцию циклофосфана, в рацион которых не был включен БАД, вторичный иммунный ответ ниже, чем нормальный.

Таким образом, описанная комбинация не стимулирует первичный и вторичный иммунный ответ, но предупреждает его подавление, обусловленное стрессом. Благодаря отсутствию иммуностимулирующего действия описанная комбинация лишена побочных эффектов и осложнений, свойственных иммуностимуляторам/иммуномодуляторам. Отсюда следует, что по показателям безопасности смесь превосходит все известные препараты, используемые для профилактики иммунной недостаточности, обусловленной стрессом.