препарат для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта "бактистатин"

Формула изобретения

1. Препарат для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, характеризующийся тем, что содержит стерилизованную культуральную жидкость, содержащую метаболиты Bacillus subtilis, питательную добавку - гидролизат соевой муки, цеолит и стеарат кальция при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Стерилизованная культуральная жидкость,
содержащая метаболиты Bacillus subtilis	0,1-2,0
Цеолит	68-85
Гидролизат соевой муки	15-30
Стеарат кальция	0,5-5,0

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что он содержит стерилизованную культуральную жидкость, содержащую метаболиты Bacillus subtilis - 1,0 мас.%, цеолит - 78 мас.%, гидролизат соевой муки - 20 мас.%, стеарат кальция - 1 мас.%.

3. Препарат по п.1, отличающийся тем, что он представляет собой порошок.

4. Препарат по п.1, отличающийся тем, что он заключен в кишечно-растворимую капсулу, покрытую кислотно-защитным слоем.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) на основе пробиотиков (живых микроорганизмов или веществ микробного происхождения, оказывающих при естественном способе введения позитивное воздействие на физиологические, биохимические и иммунные реакции хозяина через стабилизацию и оптимизацию функции его нормальной микрофлоры), и может быть использовано в прикладной биотехнологии, пищевой промышленности, ветеринарии и смежных отраслях.

В настоящее время для решения сходных задач предполагается вводить в организм перорально препараты, содержащие отдельные колонии микроорганизмов, в частности биопрепараты на основе молочнокислых микроорганизмов (ЕР 0097484, 1984, кл. А 23 С 1/05; ЕР 0043962, 1980, кл. А 23 С 19/086; US 4289888, 1979, кл. А 23 С 9/123).

Препараты, как правило, содержат клетки бактерий, остатки культуральной жидкости (КЖ), жиры, белки, лактозу, камедь и другие добавки. Состав композиций определяются особенностями используемых микроорганизмов и характером поставленной задачи.

Так, известны препараты на основе ацидофильных микроорганизмов (RU 2064269, кл. А 23 С 9/12,1994; SU 1227145, кл. А 23 С 9/123, 1983; RU 2080795, кл. А 23 С 9/12, 1997), содержащие клетки бактерий и остатки культуральной жидкости (КЖ) с некоторыми добавками, улучшающими его эксплуатационные характеристики (желатин, сахарозу, обезжиренное молоко), а также воду.

Недостатком таких препаратов является их относительно невысокая биологическая активность, связанная с процессом дезактивации живых микроорганизмов при их прохождении через верхние отделы ЖКТ (желудок, двенадцатиперстная кишка), а также отсутствие стабильности их биологических свойств при длительном хранении, что ведет к снижению эффективности лечебно-профилактических процедур.

Более стабильными при хранении являются пробиотики, содержащие в качестве активного начала спорообразующие бактерии. Широкое распространение, в частности, получили пробиотик Бактисубтил (фирма "Marion Merrell" /Франция/) и его аналог Флонивин БС (фирма "Galenika" /Югославия/), содержащие культуру штамма Bacillus cereus IP 5832 (коллекция Института Пастера (Париж)). Основой Энтерогермина (фирма "Sanofi Winthrop". Италия) является культура Вас.cereus. Известен также биопрепарат Цереобиоген ("Xing Jian", Китай), действующим началом которого является штамм Вас.cereus DM-423 (В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокулова, В.А.Вьюницкая. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных // Микро-биол. журн., 1992, т.54, №6, с.82-93).

Недостатком известных пробиотиков является ограниченность спектра действия, так как они направлены против узкой группы возбудителей заболеваний.

Известен лечебно-профилактический биопрепарат Бактиспорин для лечения широкого круга заболеваний, содержащий лиофильно высушенную биомассу штамма Bacillus subtilis ЗН и защитную среду на основе сахарозо-желатиновой смеси или лактозы (RU №2130316, А 61 К 35/66, 1999).

Однако биопрепарат Бактиспорин не эффективен против ряда возбудителей острых кишечных инфекций, например, вызываемых бактериями рода Pseudomonas spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp.

Известен препарат Биоспорин для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека, содержащий живые клетки штаммов Bacillus subtilis 3 (ВКПМ №В-2335) и Bacillus licheniformis 31 (ВКПМ №В-2336), а также наполнитель (RU №1722502, А 61 К 35/74, 1992).

Биоспорин характеризуется высокой антагонистической активностью к широкому спектру патогенных и условно патогенных микроорганизмов, однако входящие в его состав штаммы чувствительны к антибиотикам, поэтому препарат не рекомендуется применять при лечении совместно с антибиотиками.

Наиболее близким из аналогов по технической сущности и заявляемому эффекту является пробиотик «Ирилис» (RU №2264454, А 61 К 35/66, 2005), содержащий живые микроорганизмы Bacillus subtilis ВКПМ №В - 8611, Bacillus licheniformis ВКПМ №В - 8610, а также вспомогательные добавки - растворитель и наполнитель. В качестве наполнителя он используют протеин, органический полимер, молоко, сыворотку, альбумин, сахарозу, лактозу, стеарат кальция, глюкозу, гидрокарбонат натрия, гидроокись алюминия, метилцеллюлозу, тальк, кондитерский жир, парафин, ланолин, масло какао, гель гидроокиси алюминия, декстраны, полиглюкин, крахмал и/или поливинилпирролидон.

Недостатком препарата является использование в его составе живых микроорганизмов, что затрудняет или исключает его использование в комплексной терапии со многими антибиотиками, а также наличие негативного влияния на нормальную микрофлору ЖКТ.

Задачей, решаемой авторами, являлось создание более эффективного и стабильного препарата для лечения заболеваний ЖКТ путем введения в организм веществ, тормозящих развитие патогенной микрофлоры и стимулирующих развитие полезных микроорганизмов.

Технический результат изобретения заключается в повышении эффективности профилактики и лечения инфекционных болезней различной этиологии и дисбиоза, в том числе и в рамках комплексного лечения с использованием антибиотиков за счет замены живых микроорганизмов Bacillus subtilis на их метаболиты, введение в композицию комплекса цеолита с защитной средой, способных обеспечить защиту метаболитов от действию ферментов желудочно-кишечного тракта.

Указанная задача решалась путем создания препарата, в состав которого входят стерилизованная культуральная жидкость (СКЖ), содержащая метаболиты, полученные в результате культивирования и стерилизации штаммов Bacillus subtilis, при введении которых в ЖКТ происходит торможение патогенной микрофлоры, цеолит, питательная добавка - гидролизат соевой муки и стеарат кальция при следующем соотношении ингредиентов (мас.%):

СКЖ, содержащая метаболиты Bacillus subtilis	0,1-2,0
цеолит	68-85
гидролизат соевой муки (ГСМ)	15-30
стеарат кальция (СК)	0,5-5.

Действие препарата базируется на том, что при его транзитном прохождении по ЖКТ в заданной зоне происходит разрушение защитной капсулы и выделение в полость кишечника иммобилизованных на частицах цеолита компонентов пробиотика. При этом вокруг частиц цеолита формируются образования мицеллярной структуры, которые в процессе движения по ЖКТ постепенно высвобождаются с пористой поверхности цеолита. С одной стороны, это позволяет поддерживать в ЖКТ активность биологических компонентов пробиотика не менее суток, что необходимо для восстановления и стимуляции функциональной активности нормальной микрофлоры кишечника. С другой стороны, эффект постепенного высвобождения с поверхности цеолита компонентов препарата приводит к появлению открытых поверхностей его пористой структуры, что обеспечивает включение механизмов ионного обмена и избирательной сорбции токсичных соединений. Это особенно важно для общей детоксикации организма.

Роль и значение отдельных ингредиентов входящих в препарат, можно определить следующим образом.

Известно, что метаболиты некоторых микроорганизмов, в частности Escherichia coli (E.coli), полученные из клеток микроорганизмов, помещенных в дистиллированную воду на 5-9 суток (RU 1638156, 1991, кл. C 12 N 1/00), способны тормозить рост патогенной микрофлоры и стимулировать развитие нормальной микрофлоры желудка. Авторами было установлено, что подобным воздействием обладает и метаболиты Bacillus subtilis. Лучшие результаты были получены при использовании для этих целей метаболитов таких штаммов Bacillus subtilis, как Bacillus subtilis 534; ВКПМ №8-2335(3) ТПИ 13 - 07.06.21 - ДЕП/ВГНКИ; ВКПМ №В4759 (3); р ВМВ105, ТПИ 9; рВМВ 105. Полученные при этом результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1
Влияние природы метаболитов на развитие микроорганизмов (зона угнетения роста тест-штаммов), мм:
Тестируемая культура	Штамм-продуцент метаболитов
	В subt 534	ВКПМ №В-2335(3)	ТПИ 13 - 07.06.21 - ДЕП/ВГНКИ	ВКПМ №B-4759 (3) / рВМВ105	ТПИ9/ рВМВ105
Salmonella paratyphi 2606			18±2
Salmonella stenly 5266	15±2		16±1
Salmonella typhimurium	12±1	11±1	13±2	11±1	13±2
Staphylococcus aureus 1479	18±1	19±1	22±3	19±1	21±1
Shigella sonnei 659	12±2	11±1	13±1	11±1	13±1
Pseudomonas aeruginosa 32			7±1
Proteid vulgaris 491			25±2
Klebsiella pneumoniae 5055			16±3
Citrobacter freundii 381			22±2
Candida albicans 690	17±1	19±1	18±4	19±1	20±2.
Campilobacter jejuni 418			20±4

Одновременно с этим, как было установлено, штаммы ВКПМ №8-2335(3) ТПИ 13 - 07.06.21 - ДЕП/ВГНКИ; р ВМВ 105 ТПИ 9, В subt. 534 при попадании в организм способны продуцировать 2×10 ⁵ ME 2-интерферона. Таким образом, можно было ожидать, что при попадании в организм метаболиты этих штаммов окажутся способными способствовать оздоровлению микрофлоры в зоне их пребывания.

СКЖ Bacillus subtilis, получаемая при глубинном выращивании этого микроорганизма, содержит уникальный набор биологически активных компонентов, вырабатываемых в процессе жизнедеятельности. Среди них широко представлены различные природные антибактериальные субстанции (бактериоцины, лизоцим, каталазы), которые селективно подавляют рост и размножение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике, не влияя при этом на симбионтную микрофлору. Кроме того, микроорганизмы вырабатывают различные ферменты и коферменты, аминокислоты, полипептиды, пребиотические компоненты, способствующие улучшению микроэкологических условий в кишечнике, влияющие на обменные процессы и оказывающие иммуномодулирующее действие.

В таблице 2 представлены результаты хроматографического анализа по определению содержания некоторых веществ в культуральной жидкости после удаления биомассы на примере штамма Bacillus subtilis ВКПМ №В-2335(3)3.

Таблица 2
Состав стерилизованной культуральной жидкости В. subtilis ВКПМ №В-2335(3)
Наименование анализируемых показателей	СКЖ Bacillus subtilis ВКПМ №В-2335(3)3
Остаточная концентрация (ОБК) микроба - продуцента, КОЕ/мл	0
Содержание белка*, мкг/см-3	541,5
Протеолитическая активность (ПА), ед. ПА, дм-3	8,7
Амилолитическая активность (АА), ед. АА, дм-3	42,7
Суммарная концентрация общих аминокислот, мкг/см-3	568,8
Суммарная концентрация свободных аминокислот, мкг/см-3	60,8
Концентрация гексозаминов, мкг/см-3	104,9
Концентрация глюкозаминов, мкг/см -3	95,6
Концентрация диаминопимелиновой кислоты, мкг/см -3	19.6
Концентрация свободного глюкозамина, мкг/см-3	6,5
Концентрация аденина / Ха**, мкг/см-3	12,2/3,2
Концентрация гуанина / Хг**, мкг/см-3	0/ 16,3
Концентрация тимина / Хт**, мкг/см-3	8,2/0
Концентрация урацила / Ху**, мкг/см -3	11,4/8,6
Концентрация цитозина / Хц**, мкг/см-3	0/12,1
Примечания: *содержание белка определяли по методу Лоури; **Ха, Хг, Хт, Ху, Хц - неидентифицированные производные аденина, гуанина, тимина, урацила и цитозина в пересчете на основное вещество.

Результаты хроматографического анализа показывали значительное содержание в СКЖ азотистых оснований и их производных, которые обладают иммуномодулирующими свойствами и повышают функциональную активность единой макрофагальной системы организма при различных стадиях инфекционного процесса.

Использование СКЖ в концентрациях, меньших 0.1%, приводит к существенному снижению эффективности препарата (см. пример 3), увеличение ее концентрации более 2% технически трудно. Кроме того, при этом не весь метаболит оказывается сорбирован на поверхности цеолита, что не позволяет добиться существенных преимуществ, по-видимому, в связи с усилением процессов деградации метаболитов во время их транспортировки к месту воздействия.

В качестве цеолита использовали цеолит, приготовленный из природного минерала клиноптилолитового ряда Холинского месторождения (Бурятия), по ТУ 2163-12763074-97, разрешенный к применению без ограничений в пищевой и медицинской практике (Пылев Л.Н., Заключение Комиссии по канцерогенным факторам при МЗ РФ, 1998). Частицы цеолита имеют размеры порядка 100 мкм и овальную форму кристалла, что исключает образование микротравм кишечника и позволяет его использовать в качестве безопасного энтеросорбента и источника микроэлементов (Авраменко В.А., Василевский В.А. Новые сорбенты на основе модифицированных цеолитов и их применение в экологии, сельском хозяйстве и медицине // Цеолиты Приморья. Тезисы докладов научно-практической конференции. Владивосток, 1994, с.16-19; Паничев A.M., Гульков А.Н. Природные минералы и причинная медицина будущего. Владивосток, Издательство ДВГТУ, 2001, 216 с.; Пылев Л.Н., Васильева Л.А., Валамина И.Е. Анализ биологической агрессивности цеолитов различных месторождений РФ // Природные минералы на службе человека. Материалы научно-практической конференции. Новосибирск, 1999, с.68-70).

Цеолит обеспечивает транспортировку метаболитов в оптимальном режиме и постепенное высвобождение иммобилизованных на нем биологически активных веществ, что позволяет не менее суток поддерживать уровень активности препарата. Вместе с тем, он обеспечивает связывание и выведение низкомолекулярных токсинов (метан, сероводород, аммиак и др.), тяжелых металлов и радионуклидов. Кроме того, проходя через желудочно-кишечный тракт, цеолит участвует в селективном ионообмене (снимает или уменьшает негативное влияние на организм ионов алюминия, синергически взаимодействует с магнием и фтором, является дополнительным источником микроэлементов). Цеолит, как источник кремния, принимает участие в реакциях, обеспечивающих синтез коллагена, придает упругость волокнистым тканям; участвует в ингибировании сукцинатдегидрогеназы, эстеразы, гиалуронидазы, ускоряет синтез иролина, гликозаминокликанов; имеет особое значение для формирования структуры кожи, волос, ногтей.

Содержание в препарате цеолита должно обеспечивать сорбцию всего метаболита. Существенное понижение концентрации цеолита ведет к потере части метаболитов и снижению эффективности препарата. Содержание цеолита в концентрации более 85% приводит к разбавлению препарата малоактивным ингредиентом и также снижению эффективности препарата.

Гидролизат соевой муки (ГСМ) в данном случае является, с одной стороны, частью защитной среды метаболитов, во многом отвечающей за прочность их сорбции на поерхности цеолита, а с другой стороны, - источником аминокислот, обеспечивающим питательные потребности нормальной микрофлоры кишечника и клеток макроорганизма. Основным компонентом является соевый олигосахарид (SOE), обладающий бифидогенными свойствами. Он представляет собой смесь сахарозы (44%), стахилозы (23%), раффинозы (7%) и моносахаридов.

Применение его в концентрации менее 15% не обеспечивает полной защиты метаболитов, использование его в концентрации более 25% затрудняет десорбцию метаболитов с поверхности, что снижает эффективность препарата и может быть рекомендовано только в случае необходимости более длительного эффекта воздействия при несколько меньшей его эффективности.

Стеарат кальция (СК) выступает в качестве структурообразователя (аэросила). Одновременно он обладает антистрессовым, антиоксидантным эффектом, присутствие соли кальция обеспечивает улучшение состояния костной системы, улучшает деятельность нервной системы.

Лучшие результаты были получены при использовании композиции следующего состава: стерилизованной культуральной жидкости Bacillus subtilis, содержащей метаболиты, - 1 мас.%. Цеолит - 78 мас.%, гидролизат соевой муки - 20 мас.%, стеарат кальция - 1 мас.%, получившего условное наименование «Бактистатин».

Препарат может выпускаться в виде порошка, эмульсии, капсулы. Последняя форма является наиболее удобной для применения.

Эффективность использования препарата «Бактистатин» показана на фиг.1-5. На фиг.1 показана динамика изменения состава микрофлоры толстой кишки у больных целиакией до и после лечения «Бактистатином». На фиг.2 показана динамика изменения показателей личностной тревожности у больных целиакией до и после лечения «Бактистатином». На фиг.3 показана динамика изменения показателей ситуационной тревожности у больных целиакией до и после лечения «Бактистатином». На фиг.4 и 5 показана динамика изменения уровня депрессии у больных целиакией до (фиг.4) и после (фиг.5) лечения «Бактистатином».

Препарат получают следующим образом. Микроорганизмы Bacillus subtilis выращивают методом глубинного культивирования. Затем культуральную жидкость (КЖ) с микроорганизмами подвергают центрифугированию и стерилизации. Полученную СКЖ, содержащую метаболиты продуцента, смешивают с ГСМ, СК и цеолитом. (Как вариант, стерилизации подвергают смесь КЖ с цеолитом.) Образовавшуюся смесь подвергают лиофилизации, при которой происходит иммобилизация биологически активных компонентов препарата на частицах цеолита. Последующая фасовка композиции в желатиновые капсулы обеспечивает защиту компонентов препарата от воздействия факторов, вызывающих их деградацию.

Больным назначался препарат "Бактистатин" в дозе по 2 капсулы во время еды 2 раза в день в течение не менее 3 недель. Подбор дозы (от 2 до 3 капсул однократно) и длительность курса лечения могут осуществляться индивидуально в зависимости от степени выраженности клинических симптомов и тяжести дисбиотических нарушений. Показания и противопоказания к использованию препарата БАД «Бактистатин».

Показания: 1. Дисбактериоз различного генеза (при хронических заболеваниях пищеварительного тракта - синдром раздраженного кишечника, гастриты, дуодениты, язвенная болезнь, глютеновая энтеропатия, ферментопатии, дисфункции желчевыводящих путей); после перенесенных острых кишечных инфекций; после приема антибиотиков после проведения химиотерапии на фоне длительной гормональной терапии; на фоне хронических стрессовых состояний; на фоне нерациональной диетотерапии.

2. Иммунодефицитные состояния.

3. Профилактика бисбиотических расстройств при инфекционных и вирусных заболеваниях.

4. Неалкогольный и алкогольный стеатогепатоз, стеатогепатит.

5. Аллергические заболевания (попинозы, вазомоторный ринит, хроническая крапивница, отек Квинке).

6. Дерматологические заболевания (нейродермит, экзема, псориаз).

7. Профилактика осложнений после оперативных вмешательств в абдоминальной хирургии, травматологии, гинекологии.

При назначении антибиотиков "Бактистатин" применяют с первого дня антибиотикотерапии и не менее двух недель после ее завершения в целях профилактики развития антибиотикоассоциированной диареи и дисбиоза кишечника.

При пребывании в условиях эколого-профессионального напряжения (неблагоприятные природные и климатические условия) «Бактистатин» назначают на протяжении всего адаптационного периода.

«Бактистатин» полностью совместим со всеми компонентами эрадикационной антихеликобактерной терапии и способствует повышению ее эффективности и безопасности.

Противопоказаний к применению препарата не выявлено, однако "Бактистатин" не назначается при индивидуальной непереносимости компонентов.

Пример 1. Получение заявляемого препарата

Пробиотический препарат получают следующим образом. Микроорганизмы Bacillus subtilis выращивают методом глубинного культивирования в ферментере, имеющем объем 130 л. После окончания процесса культивирования проводят центрифугирование. Культуральную жидкость (КЖ) смешивают с цеолитом, предварительно измельченным до частиц размером 100 мкм, и стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин при 80°С. В полученную стерильную культуральную жидкость (СКЖ) вводят заранее заданные количества гидролизата соевой муки и стеарата кальция. Образовавшийся комплекс лиофилизируют. Выход получаемого продукта 200±5 кг. При необходимости полученный продукт фасуют в желатиновые капсулы по 0.5 или 1 г.

Пример 2. Изучение воздействия состава заявляемого препарата на ингибирование роста патогенной и условно-патогенной микрофлоры.

В таблице 3 приведены результаты влияния дозы 500 мг препарата, введенной в МПА, на ингибирование роста Sh.sonnei и S.aureus 1479.

Таблица 3
Ингибирование роста микроорганизмов на МПА, содержащем 500 мг пробиотика
Состав препарата, мас.%				Зина угнетения роста Sh.sonnei через 24 ч, мм	Зона угнетения роста S.aureus 1479 через 24 ч, мм
СКЖ	цеолит	ГСМ	СК
1	78	20	1	16,7	24,2
0.1	85	15	5	13,5	15,3
2	78	19.5	0.5	16,44	22,5
1	68	30	1	15,2	16,2

Представленные результаты показывают, что при введении в МПА 500 мг препарата в следующих соотношениях компонентов: СКЖ-1%, цеолита-78%, ГСМ-20% и СК-1%, обеспечивается максимальное ингибирование роста Sh.sonnei (16,7 мм), S.aureus 1479 (24.2 мм). При этом происходит более эффективный выход антибактериальных метаболитов из препарата, который способствует селективному ингибированию роста патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. В дальнейшем исследования проводились на препарате вышеуказанной рецептуры, получившей условное наименование «Бактистатин».

Пример 3. Изучение воздействия различных доз препарата «Бактистатин» на рост нормальной микрофлоры.

Влияние препарата на рост нормальной микрофлоры было исследовано на примере микроорганизмов Escherichia coli M-17. Суточную культуру E.coli М-17 в объеме 0,1 мл вносили в пробирки, содержащие 10 мл мясопептонного бульона (МПБ). Пробирки с МПБ содержали следующие концентрации заявляемого препарата - 0,1 мг/мл; 1,0 мг/мл; 500 мг/мл и 1000 мг/мл. В контрольный ряд пробирок с МПБ также вносили суточную культуру E.coli М-17, но в этих средах концентрация пробиотика отсутствовала. Посевы культивировали при +37,0°С в течение 24 ч. После культивирования по 0,1 мл МПБ высевали на мясопептонный агар (МПА), на котором через 24 ч проводили учет выросших колоний микроорганизмов и расчеты их концентраций (КОЕ/мл). Концентрации микроорганизмов выражали в виде натурального логарифма (Ln С, КОЕ/мл). Результаты исследования представлены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4
Концентрации Escherichia coli M-17 (КОЕ/мл) в жидкой питательной среде, содержащей различные дозы пробиотика «Бактистатин»
Время культивирования E.coli, M-17, час	Доза пробиотика «Бактистатин», мг/мл	Концентрация E.coli M-17, Ln С, КОЕ/мл, М±m,
0	0	4,91±0,07 ( =0,16)
24	0	10,3±0,13 ( =0,33)
0	0,1	4,91±0,07 ( =0,16)
24	0,1	11,09±0,07 ( =0,19)
0	1,0	4,91±0,07 ( -0,16)
24	1,0	11,42±0,08 ( =0,21)
0	500,0	4,91±0,07 ( =0,16)
24	500,0	13,70±0,24 ( =0,91)
0	1000,0	4,91±0,07 ( =0,16)
24	1000,0	10,65±10,14 ( =0,35)
Примечание: - Ln С - натуральный логарифм концентрации E.coli М-17; - М±m - среднее значение и ошибка натурального логарифма концентрации E.coli. М-17; - - стандартное отклонение.

Таблица 5
Достоверность различий между концентрациями Escherichia coli M-17, полученными при культивировании микроорганизмов на контрольной (*) и на опытных питательных средах (**), содержащих различные дозы пробиотика «Бактистатин»
Время культивирования E.coli M- 17, час	Доза пробиотика в жидкой питательной среде, мг/мл	Концентрации E.coli, M-17 в жидкой питательной среде, Ln С, М±m, КОЕ/мл	Критерии Фишера (F) и уровень значимости (Р)	Эффективность увеличения концентраций E.coli М-17 на опытных питательных средах относительно контрольной питательной среды, (%)
24	0,0	10,3±0,13*	-	-
24	0,1	11,09±0,07**	F=2,39 Р=0.15 (>0,05)	7,67
24	1,0	11,42±0,08**	F=1,96 Р=0,21 (>0,05)	10,87
24	500	13,70+0,24**	F=0,123 Р=0,01 (<0,05)	33,01
24	1000	10,65±0,14**	F=0,87 Р=0,43 (>0,05)	3,39

Примечание: эффективность увеличения (%) концентраций E.coli M-17 на опытных питательных средах относительно контрольной питательной среды определяли по формуле (1) где: С_о - опытные значения натурального логарифма концентрации E.coli M-17, полученные при культивировании микроорганизмов на жидкой питательной среде, содержащей различные дозы пробиотика «Бактистатин»; С_к - контрольные значения натурального логарифма концентрации микроорганизмов, полученные при культивировании микроорганизмов на жидкой питательной среде, не содержащей пробиотик «Бактистатин»; статистически значимые различия между опытными и контрольными значениями концентраций Е.coli M-17 подчеркнуты.

Представленные результаты свидетельствуют, что при внесении в МПБ дозы препарата 500 мг/мл происходит достоверная стимуляция роста Е.coli M-17. По сравнению с контрольными значениями концентраций микроорганизмов эффект увеличения их количества составляет 30%. Это позволяет считать, что для эффективной стимуляции и восстановления нормальной микрофлоры ЖКТ оптимальная доза заявляемой композиции пробиотика находится в диапазоне 400-600 мг.

Пример 4. Оценка эффективности применения биологической активной добавки «Бактистатин» на больных с эрозивным антральным гастритом после курса эрадикационной терапии.

В открытое исследование эффективности использования препарата «Бактистатин» было включено 30 больных с Н.pylori-ассоциированными кислотозависимыми заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки. Длительность анамнеза язвенной болезни составила 6±2 лет. У всех пациентов язвенная болезнь находилась в стадии обострения. Возраст больных варьировал от 20 до 50 лет, средний возраст составил 42±4 лет. Больные были разделены на две группы по 20 человек - испытуемая группа (больные получали препарат в дозе 2 капсулы 2 раза в день во время еды «Бактистатин» в схеме терапии) и 10 - контрольная группа (больные получали только базисную терапию).

Результаты исследований представлены в таблице 6. Как видно из данных таблицы, «Бактистатин» эффективен для купирования явлений желудочной и кишечной диспепсии у больных с кислотозависимыми заболеваниями верхних отделов ЖКТ. Применение данного препарата у больных с эрозивным антральным гастритом приводило к четкому положительному клиническому эффекту у большинства больных, проявляющемуся в виде уменьшения симптомов кишечной диспепсии, развивающемуся на фоне эрадикационной терапии.

В процессе лечения «Бактистатином» все больные отмечали хорошую переносимость препарата, побочных эффектов не выявлено. Некоторые из пациентов после проведенного курса лечения продолжают принимать данные препараты, отмечая значительное улучшение в субъективных ощущениях.

Таблица 6
Динамика выраженности клинических проявлений у больных эрозивным антральным гастритом в основной (испытуемой) и контрольной группах до и на фоне лечения.
Симптом	Больные испытуемой группы			Больные контрольной группы
	до лечения (%)	10 день лечения (%)	30 день лечения (%)	до лечения (%)	10 день лечения (%)	30 день лечения (%)
Боли в животе	90	60	0	90	60	0
Тяжесть и дискомфорт в животе	90**	50	10**	90**	60	40**
Тошнота	40	10	10	70	20	10
Изжога	60**	0**	10	90	50	20
Рвота	20	0	0	10	0	0
Отрыжка	90*	40*	20	40	40	40
Сухость во рту	40	30	20	0	0	0
Горечь во рту	60*	20*	0	20	20	0
Урчание в животе	90	50*	20*	90	90	70
Вздутие живота	90**	10**	0	20	90	50
Снижение аппетита	50*	10*	20	45	40	25
Частота стула (раз в день)	0,86*	1,06	1,13	0,86	2,06	1,7**
Характер стула по Бристольской шкале	2,56*	3*	3,67*	3,5	5,2**	4,01
Примечания: *р<0.05 (различия статистически незначимы) **р<0,01 (различия статистически достоверны)

Пример 5. Оценка эффективности использования «Бактистатина» для лечения больных с целиакией с дисбиотическими нарушениями толстой кишки различной степени выраженности.

Целиакия - хроническое прогрессирующее заболевание, характеризующееся диффузной атрофией слизистой оболочки тонкой кишки, которая развивается в результате непереносимости белка клейковины злаков. Тяжесть заболевания оценивается в зависимости от выраженности синдрома мальабсорбции и продолжительности болезни и степени изменения кишечного микробиоценоза.

Под наблюдением находилось 7 человек с целиакией. У всех пациентов был установлен клинический диагноз глютеновой энтеропатии ранее на основании данных клинического течения заболевания, морфометрического исследования слизистой оболочки 12-перстной кишки, иммунологического исследования крови (определение уровня антиглиадиновых антител и антител к трансглютаминазе). Препарат «Бактистатин» назначался в течение четырех недель по 2 капсулы 2 раза в день. Анализ кала на дисбактериоз проводили до лечения и на 25-31 дни после лечения. Результаты исследования изменений микробиоценоза у больных целиакией до и после лечения представлены в таблице 7 и на фиг.1 (Концентрация микрофлоры ЖКТ представлена в виде Lg КОЕ/г фекалий).

Изучение микробиоценоза у больных с целиакией позволило выявить выраженные изменения в составе микрофлоры толстой кишки, характеризующиеся значительным снижением показателей. У 71,4% больных количество бифидофлоры оказалось сниженным, у 28,6% пациентов количество бифидобактерий находились на уровне 10⁴-10⁵ кл/г (при норме 10⁸-10¹⁰ кл/г). У 14,3% пациентов до лечения бифидобактерий в испражнениях не определялись. Лактобактерии были ниже нормальных значений у 100% пациентов. У 42.9% больных наблюдалось снижение бактероидов в испражнениях, у 14,3% больных бактероиды не определялись. Выраженные изменения наблюдались в качественном и количественном составе E.coli: практически у 42,9% пациентов не определялась кишечная палочка с нормальными ферментативными свойствами, у 42,8% больных ее количество было снижено, только у 14,3% пациентов количество кишечной палочки было достаточным (10 кл/г). 42,9% от всего количества E.coli составили эширихии с измененными ферментативными свойствами (в норме не более 10%). У 14,3% больных в испражнениях были обнаружены дрожжеподобные грибы рода Candida. Отмечалось увеличение количества клостридий у 14.3% больных, количество которых достигало 10 ⁸.

Таблица 7
Изменение показателей состава микрофлоры толстой кишки после лечения препаратом «Бактистатин» у больных целиакней.
Название группы микроорганизмов	количество больных с измененным показателем до лечения	изменение показателя после лечения (количество больных (%) -Процент указан от количества измененных показателей)
		повышение количества	снижение количества	не изменился
Бифидумбактерии	5 (71,4%)	4 (57,1%)	1 (14,3%)	0
Лактобактерии	7 (100%)	4 (57,1%)	1 (14,3%)	2 (28,6%)
Бактероиды	3 (42,9%)	3 (42,9%)	0	0
Е.coli с нормальной ферментативной активностью	6 (85,7%)	6 (85,7%)	0	0
Е.coli со сниженной ферментативной активностью	4 (57,1%)	1 (14,3%)	3 (42,9%)	0
Энтерококки	5 (71,4%)	0	1 (14,3%)	3 (42,9%)
Гемолитические микроорганизмы	1 (14,3%)	0	1 (14,3%)	0
Условно-патогенные бактерии	3 (42,9%)	1 (14,3%)	1 (14,3%)	1 (14,3%)
Staph. aureus	0	0	0	0
Staph. saprophyticus, epidermidis	0	0	0	0
Грибы рода Candida	1 (14,3%)	0	1 (14,3%)	0
Клостридий	1 (14,3%)	0	1 (14,3%)	0

На фоне приема препарата «Бактистатин» отмечалось значительное улучшение показателей, как анаэробной флоры, так и аэробной составляющей. Отмечалось увеличение бифидобактерий и лактобактерий у 57,1% пациентов, бактероиды увеличились у 42,9%; улучшились показатели Е.coli - увеличение количества эшерихий с нормальной ферментативной активностью наблюдалось у 85,7% больных. У больных процент кишечной палочки с измененными свойствами снизился с 42,9% до 28,6%. После проведенной терапии на 14.3% уменьшилось количество гемолитических организмов, условно-патогенных бактерий, дрожжеподобных грибов Candida и клостридий.

Пример 6. Оценка изменений динамики психо-эмоциональной сферы у больных с целиакией до и после применения «Бактистатина»

На указанной группе больных с диагнозом целиакия (7 человек) была проведена оценка изменений психо-эмоционального статуса до и после применения «Бактистатина». При этом определяли уровни тревожности и депрессии.

До лечения было выявлено повышение уровней личностной (ИТТ (СТ-Л)) и ситуационной (ИТТ (СТ-С)) тревожности у 71,4% и 28,6% пациентов соответственно. На фоне терапии "Бактистатином" снизились показатели уровней общей личностной и ситуационной тревожности, эмоционального дискомфорта (ЭД), фобического компонента (ФОБ), социальной защиты (СЗ), астенического компонента (ACT) и оценка перспективы (ОП). Данные динамики показателей личностной и ситуационной тревожности и их составляющих представлены в таблице 8 и на фиг.2 (динамика показателей личностной тревожности у больных целиакией до и после лечения) и фиг.3 (динамика показателей ситуационной тревожности у больных целиакией до и после лечения).

Таблица 8
Динамика уровня повышенной личностной и ситуационной тревожности до и после лечения «Бактистатином»
Личностная тревожность:	до лечения, % больных	после лечения, % больных
Общая	71,4	42,9
Эмоциональный дискомфорт	85,7	71,4
Астенический компонент	85,7	57,1
Фобический компонент	57,1	42,9
Оценка перспективы	71,4	57,1
Социальная защита	42,9	28,6
Ситуационная тревожность:
Общая	28,6	14,3
Эмоциональный дискомфорт	20	0
Астенический компонент	60	54
Фобический компонент	34	20
Оценка перспективы	40	34
Социальная защита	20	7

Данные динамики уровня депрессии (УД) до и после лечения представлены на фиг.4 и 5.

Показатель уровня депрессии (УДС) у сольных целиакией до лечения «Бактистатином» был повышен у 71,4%, причем умеренная степень депрессии выявлялась у 28,6%, легкая - у 42,8%. После проведенной терапии - умеренная степень депрессии наблюдалась у 14,3%, легкая - у 14,3%. Это означает, что на фоне лечения препаратом «Бактистатин» отмечаются положительные изменения в виде снижения уровней показателей тревожности и депрессии. Кроме того, у пациентов, получавших «Бактистатин», на основании данных опросника SF-36, зарегистрировано существенное повышение качества жизни практически по всем шкалам, характеризующим их физическое, социальное и психологическое состояние, что свидетельствует о повышении их качества жизни.

Отсутствие побочных эффектов "Бактистатина" позволяет экстраполировать возможность его назначения всем больным с дисбиозом кишечника, а также здоровым лицам с профилактической целью.

Таким образом, «Бактистатин» проявил себя как средство с многогранной клинической эффективностью, в настоящее время рекомендован в схемах терапии при лечении больных, имеющих дисбактериоз кишечника различного генеза (при хронических заболеваниях пищеварительного тракта, после перенесенных острых кишечных инфекций, на фоне и после приема антибиотиков, после проведения химиотерапии, на фоне длительной гормональной терапии, в условиях хронических стрессовых состояний, при нерациональной диетотерапии).

Использование препарата значительно снижает выраженность диспептических расстройств, улучшает кишечное пищеварение, эффективно гармонизирует состав кишечного микробиоценоза, оказывает иммуномодулирующее действие, положительно влияет на психологический статус больных и способствует повышению их качества жизни.

«Бактистатин» не имеет противопоказаний и не вызывает побочных эффектов: «Бактистатин» не назначается при индивидуальной непереносимости компонентов. В большинстве случаев другие лечебные и оздоровительные средства (антибиотики, витамины, ферменты, микроэлементы и т.д.) при применении препарата не нужны, так как уже содержатся в их составе и (или) заменяются аналогичными по своему действию.

Представленные данные свидетельствуют о том, что новый пробиотик (синбиотик) «Бактистатин» обладает преимуществами перед известными пробиотиками, синбиотиками и пребиотиками по способности коррекции нарушений микробиоценоза кишечника. "Бактистатин", гармонизируя состояние кишечного микробиоценоза, способствует улучшению психологического статуса, обладает иммуномодулирующим действием, положительно влияет на клиническую картину заболевания и обеспечивает существенное повышение качества жизни больных

Основные преимущества и отличительные особенности «Бактистатина» по сравнению с другими средствами коррекции дисбиоза в общем виде могут быть представлены следующим образом:

- способствует улучшению микроэкологических параметров в кишечнике через различные механизмы, создавая тем самым условия для роста симбионтной микрофлоры;

- обладает выраженным селективным ингибирующим действием по отношению к условно-патогенной и патогенной флоре:

- обладает выраженным иммуномодулирующим эффектом;

- нормализует процессы пищеварения;

- оказывает антитоксическое действие;

- поддерживает свою активность на оптимальном уровне в течение суток, за счет постепенного высвобождения биологически активных компонентов;

- не содержит живых микробов;

- срок хранения препарата - 2 года.