штамм бактерий escherichia coli гиск № 281, обладающий способностью продуцировать термолабильный лт-энтеротоксин

Классы МПК:C12N1/00 Микроорганизмы, например простейшие; их композиции; способы размножения, содержания или консервирования микроорганизмов или их композиций; способы приготовления или выделения композиций, содержащих микроорганизмы; питательные среды
Автор(ы):, , , , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2006-01-26
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Esherichia coli №281 депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича. Штамм обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин и может быть использован для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Esherichia coli при производстве вакцин. 1 табл.

Формула изобретения

Штамм бактерий Esherichia coli ГИСК №281, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Escherichia coli при производстве вакцин.

Техническим результатом является штамм Escherichia coli ГИСК №281, выделен от больного с урологической инфекцией в Республиканском онкологическом диспансере г.Уфы, депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича и имеет регистрационный номер 281.

Штамм Escherichia coli ГИСК №281 характеризуется следующими признаками.

Культуральные признаки.

При выращивании на обычных питательных средах при температуре 37°С штамм на поверхности плотной питательной среды растет с образованием характерных полупрозрачных изолированных колоний в течение суток. При выращивании в бульоне Хоттингера (рН 7,2-7,4), при температуре 37°С в течение 24 часов вызывает равномерное помутнение и выпадением осадка.

Способы определения активности ЛТ-энтеротоксина:

Субплантарное введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20 часовой бульонной культуры вызывает отек лапки более 100 мг. Аксенова Е.В. 1980 г.

Интраназальное введение 0,05 мл 20-часовой бульонной культуры вызывает острую токсическую пневмонию у белых мышей-самцов весом 15-16 г (гибель в течение 4 часов). Войно-Ясенецкая Н.К. 1957 г.

Внутримышечное введение 300 млн микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 2,5 см.

В опыте петля тонкой кишки кролика при введении 80 млн м.т. 20-часовой бульонной культуры дает положительный результат (V/L=1,2).

Гретый при 56°С в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывая некроза кожи кролика. Гретая при 100°С 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L=0,3).

Условия хранения культуры после лиофильной сушки в ампуле или выращенной при 37°С на 0,3%-ном МПА (рН 7,2-7,4), залитым стерильным вазелиновым маслом, при температуре 4°С.

Среды для размножения - бульон Хоттингера (рН 7,2), мясопептонной агар, содержащий 5% эритроцитов кролика, при температуре 37°С в течение 24 часов.

Генетические особенности: Hly+, Ent+, MS+, MR+, LTh+.

Устойчив к пенициллину, ампициллину, олеандомицину, цефтазидину, цефазолину, ристомицину, линкомицину, фузидину, клиндамицину.

Пример 1.

0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хотингера (5 мл рН-7,2) инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 минут. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат) в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю левую лапку мышей-самцов весом 15-16 г. Через 24 часа животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голено-стопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах, при этом центрифугат штамма Escherichia coli ГИСК №281 давал разницу между левой и правой лапками не менее 100 мг, остальные 20 штаммов, способные продуцировать ЛТ-энтеротоксин от 65 до 90 мг. Контроли - нативный стерильный бульон Хоттингера (рН 7,2) и гретый при 56°С центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30-35 мг соответственно.

Результаты приведены в таблице.

Пример 2.

0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры сеют в бульон Хоттингера (рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 ч и 80 млн м.т. суспезию в объеме 1 мл вводят в сегмент изолированной петли тонкого кишечника кролика. Через 16 часов животных умерщвляют воздушной эмболией и рассчитывают соотношение объема экссудата к длине сегмента (V/L). При этом 20-часовая бульонная культура штамма Escherichia coli ГИСК №281 оказалась способной давать накопление жидкости в большом количестве и показатель V/L составил 1,2. У остальных 20 штаммов, способных продуцировать ЛТ-энтеротоксин, показатель V/L колебался в пределах 0,9-1,2. При введении стерильного бульона Хоттингера и гретой при 100°С 20-часовой бульонной культуры отношение объема накопленной жидкости к длине сегмента составило 0,25 и 0,3 соответственно.

Сравнительные показатели ЛТ-энтеропродуцирующей активности Escherichia.
Номер штамма ВидОтек лапок (мг) Изолированная петля тонкого кишечника (V/L)
281E.coli ГИСК №2811101,2
624-- 740,9
331 --76 0,9
144-- 801,0
702--85 1,0
1065-- 750,8
24--70 0,7
133-- 780,9
Контроль 30 0,25-0,3
Примечание: в таблице приведены средние данные из пяти отеков.

Класс C12N1/00 Микроорганизмы, например простейшие; их композиции; способы размножения, содержания или консервирования микроорганизмов или их композиций; способы приготовления или выделения композиций, содержащих микроорганизмы; питательные среды

штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5031 для производства хересных виноматериалов -  патент 2529838 (27.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5030 для производства белых столовых вин -  патент 2529834 (27.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5032 для производства красных столовых виноматериалов -  патент 2529833 (27.09.2014)
штамм дрожжей saccharomyces cerevisiae imb y-5029 для производства десертных вин -  патент 2529832 (27.09.2014)
способ культивирования дрожжей phaffia rhodozyma для получения кормовой добавки, содержащей астаксантин -  патент 2529715 (27.09.2014)
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
способ повышения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам -  патент 2529367 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
рекомбинантный штамм бактерий escherichia coli n41 (pbpun4/mr)-продуцент сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции bpun4i -  патент 2529362 (27.09.2014)
рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprf-eta, кодирующая синтез рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprf-eta - продуцент рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa и способ получения рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa -  патент 2529359 (27.09.2014)
Наверх