способ прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных от матерей с эндемическим зобом

Формула изобретения

Способ прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных от матерей с эндемическим зобом путем исследования периферической венозной крови новорожденного на 5-й день жизни, отличающийся тем, что в крови определяют показатель содержания CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов и при значении первого показателя, равном или менее 6,9%, и второго показателя, равном или менее 16,5%, прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в течение неонатального периода.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и неонатологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний у детей от матерей с эндемическим зобом в течение неонатального периода.

Актуальность заявляемого способа определяется высокой частотой (по данным разных авторов от 6 до 53%) инфекционной патологии в структуре заболеваемости новорожденных [1, 2, 3] и, в особенности, детей от матерей с эндемическим зобом, которые в течение неонатального периода в 1,5 раза чаще, чем дети, рожденные женщинами без тиреоидной патологии, болеют гнойно-септическими заболеваниями [4, 5] и в 4 раза чаще острыми респираторными заболеваниями [6].

Известен способ прогнозирования инфекционно-воспалительной патологии у недоношенных новорожденных путем определения содержания иммуноглобулинов Е (IgE) в периферической крови ребенка на 3 сутки жизни, и при уровне IgE выше 3,5 МЕ/мл прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительной патологии [А.С. №1778706 Россия. Способ прогнозирования инфекционно-воспалительной патологии у доношенных новорожденных / А.М.Петрова, Г.А.Емельянов, Н.А.Жерносек // Изобретения. - 1992. - №44. - С.148].

Недостатки способа:

1. Неонатальные инфекции прогнозируются только у недоношенных новорожденных, у которых всегда присутствуют иммунологические нарушения [7];

2. Повышение уровня IgE может наблюдаться при ряде состояний иммунной системы (миеломной болезни, синдроме Вискотта-Олдрича и др.) и не быть связанным с инфекционным процессом, что снижает специфичность и точность способа;

3. IgE могут связываться с поверхностью реагируемых клеток и при этом его уровень в крови не повышается, в связи с чем возможен большой процент ложноотрицательных результатов;

4. Не указывается точность способа.

Известен способ прогнозирования инфекционных заболеваний у новорожденных путем исследования в периферической крови беременных женщин в 36-40 недель гестации относительного содержания CD71-позитивных лимфоцитов, и при его уровне равном или большем 7%, прогнозируют с точностью 77,4% инфекционные заболевания у доношенных новорожденных в течение первых 7-10 дней жизни [Патент №2237897. Способ прогнозирования инфекционных заболеваний новорожденных / Панова И.А., Посисеева Л.В., Царькова Р.Х., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В., Любимцева Т.В., Астраух Н.В. (Россия) // Изобретения. Полезные модели. - 2004. - №28, ч.2. - С.408].

Недостатки способа:

1. Для прогнозирования инфекционных заболеваний у ребенка необходимо обследовать мать во время беременности, что организационно не всегда возможно;

2. Прогнозируют инфекционные заболевания только у доношенных новорожденных;

3. Срок прогноза ограничен первыми 7-10 днями жизни новорожденного;

4. Недостаточно высокая точность.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования локальных форм инфекционно-воспалительной патологии у доношенных новорожденных путем определения содержания CD4+CD95+ лимфоцитов в периферической крови новорожденного на 5-7 день жизни и при его значении равном 4,5% и более прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в неонатальном периоде с точностью 90% [Патент №2225008 Способ прогнозирования неонатальной инфекционно-воспалительной патологии / Беликова М.Э., Чаша Т.В., Сотникова Н.Ю., Кулагина Т.Г., Троицкая Е.А., Куликова Н.Ю. // Изобретения. Полезные модели. - 2004. - №6, ч.3. - С.813].

Недостатки способа:

1. Способ позволяет прогнозировать инфекционно-воспалительные заболевания только у доношенных новорожденных;

2. Способ не является адекватным для прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных от матерей с эндемическим зобом, т.к. известно, что готовность клеток к апоптозу, о чем свидетельствует усиление экспрессии FaS АГ (CD95+) на их поверхности, повышается при активации клеток, а у новорожденных от матерей с зобом параметры активации лимфоцитов снижены по сравнению с детьми от матерей без зоба [8], при возникновении же инфекционно-воспалительных заболеваний это снижение, по нашим данным, еще более усугубляется;

3. Способ невозможно применить для прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных от матерей с эндемическим зобом, т.к. уровень CD4+ лимфоцитов (Т-хелперов) в данной группе детей изначально снижен [8].

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в венозной периферической крови новорожденных от матерей с эндемическим зобом на 5-е сутки жизни определяют содержание CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов, и при значении первого показателя, равном или менее 6,9%, и второго показателя, равном или менее 16,5%, прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в течение неонатального периода с точностью 92,0%, чувствительностью 77,8%, специфичностью 96,5%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозирование инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных от матерей с эндемическим зобом в течение неонатального периода по определению у них на 5-е сутки жизни в венозной периферической крови показателей содержания CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов.

Известно, что молекула CD25 является рецептором к ИЛ-2 (интерлейкину-2) и экспрессируется на Т- и В-лимфоцитах. Через этот рецептор ИЛ-2 осуществляет свои функции как стимулятор гемопоэза, дифференцировки Т-хелперов и цитотоксических лимфоцитов, регулятор синтеза IgM, IgG, IgA В-лимфоцитами и продукции цитокинов [9]. HLA-DR молекулы определяются на поверхности В-лимфоцитов и активированных Т-хелперов, помогая осуществлять функцию представления антигена. В литературе уровень CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов предлагается рассматривать как показатели содержания активированных лимфоцитов. Ранее было установлено, что в периферической крови доношенных детей с постгипоксическим поражением ЦНС средней степени тяжести, с инфекционно-воспалительными заболеваниями, развившимися на 1-м месяце жизни, на 5 день жизни отсутствовали различия в показателях содержания CD25+ и HLA-DR+ в общей популяции лимфоцитов. При тяжелых формах неонатальных инфекций в периферической венозной крови новорожденных 5-10 дня жизни отмечалось снижение содержания CD8+HLA-DR+ лимфоцитов [10].

Одновременно снижение содержания CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов в венозной периферической крови у новорожденных с впоследствии развившимися инфекционно-воспалительными заболеваниями отмечено впервые. Вероятно, выявленные нами отклонения в содержании CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов у новорожденных от матерей с эндемическим зобом являются признаками развивающейся внутриутробно иммунологической недостаточности и определяют неадекватный иммунный ответ на инфекционные агенты в раннем неонатальном периоде. При этом нарушаются процессы презентации антигенов, дифференцировки специфических клонов и продукции антител.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1. У новорожденных от матерей с эндемическим зобом на 5-е сутки жизни из вены берут 1 мл крови.

2. Выделение лимфоцитов из периферической крови осуществляется стандартным методом в градиенте плотности фикол-верографина [11].

3. В две пробирки вносят по 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл. В 1 пробирку добавляют 20 мкл моноклональных анти-CD25 антител меченных флюоресцеином, во вторую 20 мкл моноклональных анти-HLA-DR антител меченных флюоресцеином. Обе пробирки инкубируют 30 минут при комнатной температуре, в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции в обеих пробирках проводят на проточном цитомере, определяя содержание CD25+ и HLA-DR+ клеток в лимфоцитарном гейте.

Отличительными признаками заявляемого способа являются:

Определение в венозной периферической крови новорожденных от матерей с эндемическим зобом показателей содержания CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов, и при значении первого показателя, равном или менее 6,9%, и второго показателя, равном или менее 16,5%, прогнозируют инфекционно-воспалительные заболевания у новорожденных в течение неонатального периода.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок А., от матери 21 года, страдающей эндемическим зобом I степени, артериальной гипертензией I степени. Беременность осложнилась поздним гестозом (водянкой II степени), а с 30 недель - угрозой преждевременных родов. Роды в 38 недель. При рождении масса тела 3200 г, оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. В ранний неонатальный период отмечалась затянувшаяся конъюгационная желтуха, снижение мышечного тонуса. При исследовании тиреоидного статуса была выявлена гипофункция щитовидной железы.

При обследовании новорожденного на 5-е сутки жизни заявляемым способом было установлено: показатель содержания CD25+ лимфоцитов - 4,1%, что ниже заявляемого уровня (6,9%), показатель содержания HLA-DR+ лимфоцитов - 8,4%, что ниже заявляемого уровня (16,5%). Прогнозировалось возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в течение неонатального периода.

В раннем неонатальном периоде у ребенка был диагностирован острый пиелонефрит, проведена антибактериальная терапия, выписан на 21 сутки.

Заключение: прогноз развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденного по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Ребенок С. от матери 29 лет, страдающей эндемическим зобом I степени, артериальной гипертензией I степени, хроническим вазомоторным ринитом. Беременность протекала на фоне анемии I, позднего гестоза (водянка I степени). Роды в 40 недель. При рождении масса 3650 г, оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. В ранний неонатальный период отмечалось снижение мышечного тонуса, токсическая эритема.

При обследовании новорожденного на 5-е сутки жизни заявляемым способом было установлено: показатель содержания CD25+ лимфоциов в венозной крови - 6,9% (соответствовал заявляемому уровню), показатель содержания HLA-DR+ лимфоцитов - 15,2%, что ниже заявляемого уровня (16,5%).

Прогнозировалось возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденного.

В раннем неонатальном периоде был диагностирован гнойный конъюнктивит, а в возрасте 14 дней - острое респираторное заболевание.

Заключение. Прогноз возникновения инфекционно-воспалительных заболеваний по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Ребенок М. от матери 25 лет, страдающей эндемическим зобом I степени, хроническим тонзиллитом, вегето-сосудистой дистонией. Беременность осложнилась в I триместре угрозой прерывания, а во II триместре - поздним гестозом (нефропатией I степени). Роды в 35 недель. При рождении масса тела - 2000 г, оценка по шкале Апгар - 7-8 баллов. В ранний неонатальный период отмечалась патологическая убыль (более чем на 10%) первоначальной массы и медленное ее восстановление.

При обследовании новорожденного на 5-е сутки жизни заявляемым способом было установлено: показатель содержания CD25+ лимфоцитов - 7,1%, что выше заявляемого уровня (6,9%), показатель содержания HLA-DR+ лимфоцитов - 19,5%, что выше заявляемого уровня (16,5%). Возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденного не прогнозировалось.

В течение периода новорожденности ребенок был здоров.

Заключение. Прогноз отсутствия инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденного по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 75 новорожденных от матерей с эндемическим зобом. Результаты обследования представлены в таблице 1.

Таблица 1.
Показатели	Количество обследованных по заявляемому способу.
Всего новорожденных	75
Истинно-положительный результат	14
Ложно-положительный результат	2
Истинно-отрицательный результат	55
Ложно-отрицательный результат	4

Итого:

- Точность заявляемого способа: 92,0%.

- Чувствительность заявляемого способа: 77,8%.

- Специфичность заявляемого способа: 96,5%.

Преимущества заявляемого способа:

1. Повышает точность прогноза до 92,0%.

2. Дает возможность уже на 5-е сутки жизни ребенка прогнозировать возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в течение всего неонатального периода до появления клинических признаков заболевания.

3. Может быть использован для прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний как у доношенных, так и у недоношенных новорожденных.

4. Может быть использован для прогнозирования инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных от матерей с эндемическим зобом.

5. При отсутствии благоприятного прогноза служит основанием для своевременных профилактических мероприятий, что способствует снижению частоты инфекционно-воспалительной патологии новорожденных, уменьшает затраты на их лечение, предупреждает нарушение состояния здоровья ребенка в дальнейшем.

Литература

1. Шабанов Н.П. Неонатология. Т.1. - СПб.: Специальная литература, 1995. - 494 с.

2. Яцык Г.В. Руководство по неонатологии. - М., 1998. - 400 с.

3. Сидорова И.С., Черниенко И.Н. Внутриутробные инфекции: хламидиоз, микоплазмоз, герпес, цитомегалия // Росс. Вестник перинатол. и педиатр. - 1998. - Т.43. - №3. - С.7-13.

4. Нестеренко О.С. Особенности развития детей от женщин с тиреоидной патологией // Росс. педиатр. журн. - 2001. - №6. - С.29-30.

5. Щеплягина Л.А., Нестеренко О.С., Курмачева Н.А. Тиреоидная патология: беременность и состояние здоровья детей // Росс. педиатр. журн. - 2001. - №2. - С.38-40.

6. Зернова Л.Ю., Коваленко Т.В. Особенности развития детей, родившихся от матерей с эутиреоидной гиперплазией щитовидной железы // Росс. педиатр. журн. - 1998. - №5. - С.19-22.

7. Торубарова Н.А., Кошель И.В., Яцык Г.В. Кроветворение плода и новорожденного // М.: Медицина. - 1993. - С.95-117.

8. Жмойдик Е.В. Особенности иммунного статуса и способы антенатальной профилактики иммунологических нарушений у детей от матерей с эндемическим зобом / Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Иваново, 2004. - 15 с.

9. Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Клетки иммунной системы. - СПб.: Наука, 2001. - 390 с.

10. Сотникова А.В., Сотникова Н.Ю., Кудряшова А.В. и др. Дифференцированный анализ состояния иммунной системы новорожденных с внутриутробной инфекцией (ВУИ) // Мед. иммунология. - 2004. - Т.46, №3-5. - С.390-391

11. Boyum A. Isolation of mononuclear cell and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 1968. - Vol.21, №97. - P.77.